甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量

氨基酸总量测定蛋白质经水解或酶解可由大分子变成小的蛋白质成分，如水解后的产物经月示、陈、肽等最后变成为氨基酸，氨基酸是构成蛋白质最基本的物质。

水解后的蛋白质和水解前的蛋白质在物理特性、化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的，其差别与水解的程度有密切关系，分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度，也就可以评价食品的营养价值。

氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸（仪器价格昂贵，不能普便使用），很多氨基酸可以同时存在于一种食品中，所以需要测定总的氨基酸量。

它们不能以氨基酸的百分率来表示，只能以氨基酸中所含的氨（氨基酸态氮）的百分率来表示。

当然，如果食品中只含有一种氨基酸，如味精中的谷氨酸，就可以从氮量计算出氨基酸的含量。

在评价蛋白质的营养价值时，除了测定蛋白质的含量，氨基酸氮量，还需要对各种氨基酸进行分离、鉴定，尤其对8种人体必需氨基酸进行定性定量分析。

1.1单指示剂甲醛滴定法原理氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有一CooH基显示酸性，又含有一NH2基显示碱性。

由于这两个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。

当加入甲醛溶液时，一NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就用碱来滴定一COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。

反应式以下而三种形式存在:试剂40%中性甲醛溶液，以麝香草酚醐为指示剂，以mo1/1NaOH 溶液中和0.1%麝香草酚酸乙醇溶液；0.100mo1∕1氢氧化钠标准溶液。

操作步骤称取一定量样品（约含20毫克左右的氨基酸）于烧杯中（如为固体加水50毫升）,加2〜3滴指示剂，用O.1OOmo1/1NaOH液滴定至淡蓝色。

加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。

再用0.10OmC）I/1NaOH溶液滴定至淡蓝色，记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算氨基酸氮的含量。

计算氨基酸态氮（％）=MVX0.014><100/W式中：M一氢氧化钠标准溶液摩尔浓度V一氢氧化内标准溶液消耗的总量（毫升）W一样品溶液相当样品重量（克）0.014一氮的毫摩尔质量g/mmo11.2双指示剂甲醛滴定法原理与单色法相同，只是在此法中使用两种指示剂。

中华人民共和国国家标准甲醛值法1 主题内容与适用范围本标准规定了用甲醛值滴定法测定果蔬汁饮料中氨基态氮含量的方法。

本标准适用于浓缩果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁饮料及果蔬汁固体饮料。

2 引用标准GB 601 化学试剂标准溶液制备方法GB 604 化学试剂指示剂pH变色域制定法GB 685 化学试剂甲醛溶液HG 3-1082 30%过氧化氢3 原理氨基酸为两性电解质。

在接近中性的水溶液中,全部解离为双极离子。

当甲醛溶液加入后,与中性的氨基酸中的非解离型氨基反应,生成单羟甲基和二羟甲基诱导体,此反应完全定量进行。

此时放出氢离子可用标准碱液滴定,根据碱液的消耗量,计算出氨基态氮的含量。

其离子反应式如下：NH2NH2│ │R─CH─COO→←R─CH─COO-+H+ (1)NH2 NHCH2OH│ │R─CH─COO-+HCHO R─CH─COO- (2)NHCH2OH HOH2CNCH2OH│ │R─CH─COO-+HCHO→←R─CH─COO- (3)4 试剂所用试剂均为分析纯,使用的水为蒸馏水或同等纯度的水。

4.1 0.1mol/L氢氧化钠标准溶液：按GB 601配制与标定。

4.2 0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液当天稀释。

4.3 中性甲醛溶液：量取200mL甲醛溶液(GB 685)于400mL烧杯中,置于电磁搅拌器上, 边搅拌边用0.05mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.1.4.4 30%过氧化氢(HG 3-1082).4.5 pH 6.8缓冲溶液：按GB 604中“缓冲溶液的制备”配制。

5 仪器设备实验室常用玻璃仪器及下列各项：5.1 酸度计：直接读数,测量范围0～14pH,精度±0.1pH.5.2 电磁搅拌器。

5.3 玻璃电极和甘汞电极。

6 试样的制备6.1 浓缩果蔬汁在浓缩果蔬汁中,加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水,使其成为果汁,并充分混匀,供测试用。

• 吸取该溶液25.0 mL于碘量瓶中,加溴液 50.00 mL ,加盐酸10 mL ,立即加盖,摇匀， 于暗处放置10 min
• 再在冰浴中冷却3 min 以上,加碘化钾5mL , 立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡 黄色,加入淀粉溶液2 mL ,继续滴定至蓝色 消失为终点,同时做空白试验。
x(v1 v2)c0.02403100 m 25 100
有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是 经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮 混合,经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫 色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两 种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测, 检测波长分别为570nm 和436nm。
C OH
C
C
OH
O
茚三酮
O
C OH
C
C
OH
O
COOH
H 3N
C
关于氨基酸的定量分析
氨基酸的分析方法
化学分析法——甲醛滴定法 甲醛滴定法用于氨基氮的
测定, 可以测出样品中总氨基酸 的含量,其原理是在中性或弱碱 性水溶液中,氨基酸的α—氨基与醛类反应生成
Schiff碱:α—氨基酸与甲醛反应生成亚 甲基亚氨基衍生物
H
R C C O O
N H 3
H C H O
O H
H
பைடு நூலகம்
R
O
C OH
C
C
H
NH3
CO2
O
O
C OH C
C OH
O
O C
C C O
O
C
NC
H
C
O
紫色化合物
RCHO
H
O C
CN C O
亮黄色化合物

文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA 647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。

主要研究方向:分析检验。

氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘　要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。

关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q 503 文献标识码:ADete rmination Methods of Amino Acids AnalysisDAI Hong ,ZHANG Zong -cai ,ZHANG X in -shen(Key Laboratory of Leather Chemistry and Engineering(Sichuan University ),Ministry of Education ,Chengdu 610065,China )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec -tric -chemistry determination ,spectrophotometer determination and co nductivity detectionmethod w ere review ed fo r the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy .The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualy tic methods .Key words :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。

1.原理： 强离子交换树脂－二乙烯苯树脂： 交联度大，8-12％。 树脂的结构紧密，孔隙度小，适用于分子较小的氨 基酸的分离。选用Na型的树脂。

吸附：一般在pH2.2溶解样品，由于pH比较低，氨 基酸的H＋解离被抑制，氨基酸带正电荷，可以与阳 离子交换树脂发生交换。
样品 液
分离 柱
M
Na+

pK1
COOCH2(CH2)4+NH3
+NH 3
pK2 9.0
COO CH2(CH2)4+NH3 NNH2 NH2
赖氨酸的等当电＝（ pK1＋pK2）/ 2 = 9.75
洗脱：当pH2.2，3.3，4.9等缓冲液相继流经树脂时， 随着pH逐渐升高，氨基酸失去正电荷，与树脂结合 减弱，从树脂上脱落下来。由于氨基酸的氨基不同， 因此与柱子的结合能力不同。 酸性氨基酸带的正电荷少，等电点比较低，碱性氨 基酸带的正电荷多，被置换下来的pH比较高。
吹数分钟(或置于70～80℃烘
箱中烘干)即可观察到紫红色
的氨基酸斑点，脯氨酸例外，
为黄色斑点。
用铅笔圈出氨基酸斑点，量出溶剂前沿的距离及 各斑点中心与起点之间的距离，并计算各氨基酸 的Rf值。
原点到层析点中心的距离
Rf＝ 原点到溶剂前沿的距离
标准氨基酸薄层层析色谱
氨基酸的性质与Rf之间的关系
层析的分离是基于氨基酸的非极性性质。 物质的极性越小（即非极性越大）,在有机溶剂中分 配就越多，迁移率Rf就越大；

混合样
加样
洗脱剂
分离结果
影响电离的基团：氨基、羧基、胍基、咪唑基、酚基。
洗脱顺序： 酸性氨基酸，中性氨基酸，芳香族氨基 酸，碱性氨基酸 日立832型氨基酸分析仪的洗脱顺序： 天门冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，半胱，缬，蛋， 异亮，亮，酪，苯丙，赖，氨，组，精

甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。

甲醛可与氨基酸上的一N%3结合，形成一NH —CH Q OH、一N （CH2—0H）2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。

若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。

脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。

三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称Ig酚酞溶于IOOmI 95%酒精中。

2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。

3、氨基酸溶液4、标准0.100mol∕L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml ,加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol∕L NaoH 溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和 （二）实验器具 1、锥形瓶 3、移液管洗耳球 5、容量瓶 7、量筒 四、操作步骤1、取3只50ml 锥形瓶，按下表加入试剂(pH8.7~9.0)2、碱式滴定管 4、天平 6、试剂瓶 8玻棒与烧杯3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为式中：C=（V1-V2）× C0×氨基酸分子量/（10× V样）C:总酸含量（g∕100ml）V i为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）; V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；C o :标准氢氧化钠准确浓度（mol∕L）V样：样品体积（ml）4、氢氧化钠标准溶液的标定4 1 κm标准is定落液4.1.1配制⅛⅛ no g⅛S'⅛钠需于IOQmL无二敦化晞⅛水中滞匀琏人聚乙烯容界中•密闭放置至溶液清氐按表1倾定佣酬管量取上翩孰用无二輸斛水解至IQ伽L,齣.表1标定按表2的规定称取于105Γ-110t电烘箱中十煥至国重的工作基准试剂命苯二屮酸爼銅厠无二水溶絹加2⅛≡ao示椒10 XLh用吃制⅛τ⅛s¾⅛⅛溶發滴定至酒液呈粉虹色供保痔30S4同时做零白试蜃。

甲醛滴定法测定氨基酸的原理嘿，你知道吗？甲醛滴定法测定氨基酸，那可真是个神奇的事儿！咱先说说啥是氨基酸。

氨基酸就像是生命的小砖块，构建起了我们身体的各种重要物质。

没有氨基酸，咱可就没法正常运转啦！那怎么才能准确地测定氨基酸呢？这时候甲醛滴定法就闪亮登场了。

甲醛滴定法到底是咋回事呢？简单来说，就是利用甲醛和氨基酸的特殊反应来进行测定。

这就好比一场奇妙的化学反应舞会，甲醛和氨基酸在这个舞池中相遇，然后发生一系列的变化。

甲醛就像是一个神秘的魔术师，它能和氨基酸发生一些特别的反应。

当甲醛加入到含有氨基酸的溶液中时，会发生什么呢？氨基酸的氨基会和甲醛结合，形成一种新的化合物。

这就像是两个小伙伴手拉手，组成了一个新的团队。

这种新的化合物有啥特点呢？它的碱性会增强。

为啥会增强呢？这就像是给一个原本不太起眼的人穿上了一件闪亮的外套，一下子变得更加引人注目了。

碱性增强后，我们就可以用碱来滴定它了。

滴定的过程就像是一场精准的游戏。

我们小心地滴加碱液，看着溶液的变化。

就好像是在小心翼翼地走钢丝，一步一步都要非常谨慎。

当溶液的酸碱度达到一定的值时，我们就知道了氨基酸的含量。

你想想，这多神奇啊！通过这么一个看似简单的方法，就能准确地测定出氨基酸的含量。

这对于科学家们来说，可真是个了不起的工具。

在实际应用中，甲醛滴定法有很多优点呢。

它操作相对简单，不需要特别复杂的仪器。

这就好比是一个实用的小工具，随时都能拿出来用。

而且，它的准确性也比较高，可以为我们提供可靠的数据。

但是，就像任何方法都不是完美的一样，甲醛滴定法也有一些局限性。

比如说，它可能会受到其他物质的干扰。

这就像是在一场音乐会上，突然出现了一些噪音，会影响我们欣赏音乐的效果。

不过，这并不妨碍甲醛滴定法在很多领域的应用。

在食品工业中，我们可以用它来检测食品中的氨基酸含量，确保食品的质量和营养价值。

在医药领域，它也能帮助我们研究药物的成分和作用。

总的来说，甲醛滴定法测定氨基酸是一个非常有趣且实用的方法。

甲醛滴定法 （以测定氨杞精口服液中的氨基酸含量为例）
计算： 氨基酸态氮=〔 c×（V2-V1）
×0.014×100） 〕/W×100 V1——用中性红为指示剂
时，碱液所消耗的体积 V2——用百里酚酞乙醇液
为指示剂时标液消耗量
应用： 氨杞精口服液是由天然原料提
取的氨基酸粉(含20多种氨基酸)， 加上构祀子、黄精煎煮液配制而 成的口服液。其中氨基酸为主要 有效成份， 采用甲醛滴定法测定 氨基酸的总量做为质量控制方法， 操作简便 。
仪器 附磁力搅拌器的酸度计;25mL酸式 滴定管; 10mL胖肚吸管。
双语例句
电位滴定法 （以测定酱油中的氨基酸含量为例）
操作方法：
（1）样品处理：先测出待测酱油的比重，然后吸取酱油5.00mL于
100mL容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL于250mL烧杯中,
加水60mL，放入磁力转子，开动磁力搅拌器使转速适当。用
个别氨基酸的定量测定
a)赖氨酸 b)色氨酸 c)苯丙氨酸 d)酪氨酸 e)脯氨酸 f)羟脯氨酸 g)胱氨酸 h)谷氨酸
氨基酸的分离及测定
a)薄层色谱法 b)氨基酸自动分析仪法 c)气相色谱法 d)高效液相色谱法
茚三酮法 （以测定蜂蜜及果葡糖浆中的氨基酸含量为例）
反应原理
氨基酸在一定pH条件下与茚三酮起反应，生成蓝紫色化合物，可 比色(570nm)定量。 注意：茚三酮受阳光、温度、湿度、空气等影响易被氧化呈淡红或深 红色，使用前要进行纯化,方法如下：
结论
1)采用茚三酮显色法测定的 蜂蜜及果葡糖浆的氨基酸含 量在0~150 μg/mL范围，该 法具有线性好、准确性及精 密度高等特点。
2)蜂蜜与果葡糖浆混合物中 的氨基酸含量和果葡糖浆掺 入量呈良好的负线性关系。 采用茚三酮显色法测定蜂蜜 样品的氨基酸含量，可以快 速判断蜂蜜中是否掺入了果 葡糖浆。

甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌控甲醛滴定法测量氨基酸含量的原理和操作方式要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。

甲醛可与氨基酸上的―n+h3结合，形成―nh―ch2oh、―n(ch2―oh)2等羟甲基衍生物，使n+h3上的h+游离出来，这样就可以用碱滴定n+h3放出h+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

若样品中只所含单一的未知氨基酸，则可以由此法电解的结果算是出来氨基酸的含量。

若样品中所含多种氨基酸（例如蛋白质水解液），测无法由此法求出氨基酸的含量。

脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。

三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称1g酚酞溶于100ml95%酒精中。

2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液挑0.5溴麝香草酚蓝溶100ml20%乙醇溶液中。

3、氨基酸溶液4、标准0.100mol/l氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol/lnaoh溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。

（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管3、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、挑3只50ml锥形瓶，按下表中重新加入试剂。

锥形瓶编号试剂氨基酸溶液或样品（ml）蒸馏水（ml）中性甲醛溶液（ml）0.05%溴麝香草酚蓝溶液（几滴）1%酚酞乙醇溶液（几滴）1.05.05.0221.05.05.022―6.05.022样品1样品2空白2、搅匀后用标准0.100mol/l氢氧化钠溶液电解至紫色（ph8.7~9.0）3、结果计算氨基酸溶液中不含氨基酸的百分比浓度为c=（v1-v2）×c0×氨基酸分子量/（10×v样）式中：c：总酸含量（g/100ml）v1为电解样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）；v2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；c0：标准氢氧化钠精确浓度(mol/l)v样：样品体积(ml)4、氢氧化钠标准溶液的标定五、注意事项（1）利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。

V1——测定用试样稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升（ml）
V2——试剂空白试验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（ml）
V3——试样稀释液取用量，单位为毫升（ml）
C——氢氧化钠标准溶液的Байду номын сангаас度，单位为莫尔每升（mol/l）
0.014——与1.00ml氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=1.000mol/l]相当的氮的质量，单位为克（g）
计算结果保留两位有效数字。
6精密度
在重复性条件下获得得到两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
吸取10.0ml，置于200ml烧杯中，加60ml水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=0.050mol/l]滴定至酸度计指示pH8.2，记下消耗氢氧化钠标准溶液的毫升数，可计算总酸含量。
加入10.0ml甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至PH9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。
氨基酸态氮测定甲醛值法
1原理
利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点。
2试剂
甲醛（36%）：应不含聚合物、氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=0.050mol/l]
3仪器
酸度计、磁力搅拌器、10ml微量滴定管
4分析步骤
称取约5.0g已研磨均匀的试样置于100ml烧杯中，加入蒸馏水50ml充分搅拌（必要时加热），移入100ml容量瓶中，用少量水分次洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中，并加水至刻度，混匀。
同时取80ml水，先用氢氧化钠标准溶液调节至PH为8.2，在加入10.0ml甲醛溶液，用氢氧化钠标准溶液滴定至PH9.2，同时做试剂空白试验。

• 水溶液中的氨基酸并不是以游离的羧基或 氨基形式存在，而是兼性离子，既是质子 供体（酸），也是质子受体（碱）。
COOH
COO-
COO-
H3N+ C H
H3N+ C H
H2N C H
R
2p左K右1
R
9p左K右2
R
甲醛可与氨基酸上的NH3+结合，生成羟甲基衍生物，释放出H+ R-NH2＋2HCHO→R-N（CH2OH）2
• 为何两种显色剂？
• 6-7.6 溴酚兰变色范围（黄 蓝）
• 7.4-10 酚酞变色范围（无色 粉红）
• 酚酞终点淡红，不易观察，现在变色范 围是从黄色变为紫色，终点为紫色，易 观察。
• 用标准碱液滴定羧基，按标准碱的消耗 量求出氨基酸的含量。碱完全中和羧基 时的pH值约为8.5～9.5。
滴定注意事项：
• 沙伦逊甲醛滴定法(Sorensenformaltitration) 一种测定氨基或氨基氮的方法。氨基酸 分子中含有碱性氨基和酸性羧基，在固 态或水溶液中以双性离子（内盐）存在， 因此不能直接用酸滴定氨基，也不能用 碱滴定羧基。
• 沙伦逊提出了将氨基酸（水溶液）用中 性甲醛水溶液处理，将氨基“隐蔽”后 滴定羧基的方法。
三、大肠杆菌发酵种子的制备
菌种
接种量1-2环
接种量1%
斜面 一级种子 二级种子
30℃，18h ， 4℃长期保存
14h，32℃，
8h，32℃
按学号，4人一组，3组共用一支斜面种子 摇瓶装液量50ml 一级种子种龄在14h±2h内，二级种子7-8h内
时间安排
每一格必须由操作人签名！
一级种子
二级种子
• 甲醛有毒，滴定要快，必要时可戴口罩。 • 现配现滴，滴完盖紧瓶盖。 • 中性甲醛若长时间放置会变酸,滴定前要

试剂和器材
1．试剂： （1）0.1mol/L 标准甘氨酸溶液 准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。 （2）0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液 （3）0.5%酚酞指示剂 称0.5g酚酞溶于100mL50%乙醇。 （4）中性甲醛溶液 甲醛溶液（36～37％，分析纯） 50mL，加入0.5％ 酚酞指示剂1 mL ，用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液滴定至 微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。
பைடு நூலகம்
2、氨基氮计算：
( V V ) 1 . 4008 对 未 氨基氮含量（ mg / mL ） 2
公式中： V 未 为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 V 对 为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平 均毫升数。
※1.4008
为1mL 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液相当于氮的毫克数。
试剂和器材 1．试剂：
（5）待测样品 未知浓度的甘氨酸溶液。
2．器材 ：
100mL锥形瓶、25mL微量滴定管 、吸量管。
实验四甲醛滴定法测定氨基氮含量甲醛滴定法测定氨基氮甲醛滴定法测定氨基酸氨基氮的测定氨基态氮的测定氨基氮测定氨基氮的测定方法氨基态氮测定甲醛滴定法甲醛滴定法测水解度
实验八 甲醛滴定法测定氨基氮含量
一、目的
掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和方法
二、原理
水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直 接用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基酸, 甲醛与氨基结合,可形成羟甲基衍生物，使 NH3+上的H+游离出来，这样就可用碱滴定 NH3+放出的H+，从而计算出氨基氮含量。
四、结果计算
1、回收率计算：
实际测得量 甘氨酸氨基氮回收率 % 100 理论加入量

3.2 发酵液中氮含量测定（甲醛法）3.2.1 原理：利用甲醛法测定，测定结果是发酵液中氨基氮和氨氮量的总和。

氨氮：一分子铵盐与甲醛作用，生成环六次甲基四胺及二分子无机酸，后者以标准碱滴定，以此算出氨氮的含量。

氨基氮：氨基酸之氨基与甲醛结合后，使氨基酸之碱性消失，再用标准碱液来滴定羧基，算出氨氮的含量。

化学反应及副反应式如下：2(NH4)2SO4 + 6HCHO (CH2)N4 + 2H2SO4 + 6H2OH2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2OR-CHNH2CHOOH + HCHO RCN-N=CH2CHOOH + H2ON=CH2 N=CH2R C H + NaOH R C H + H2OCOOH COOH3.2.2 仪器和设备25ml滴定管、5ml吸量管、1000ml容量瓶、250ml三角瓶、100ml量筒。

3.2.3 试剂和溶液3.2.3.1 0.03569mol/L氢氧化钠标准溶液：取0.3569mol/L NaOH标准液100ml于1000ml 容量瓶中，加纯化水稀释至刻度摇匀即可。

3.2.3.2中性甲醛：40%甲醛加二倍水稀释，临用前0.03569mol/L NaOH调至微红色，用酚酞作指示剂。

3.2.3.3 0.5%酚酞指示剂：称2.5g酚酞溶于500ml 95%乙醇中，摇匀即可。

3.2.3.4 0.1%甲基红指示剂：称0.1g甲基红溶于100ml 95%乙醇中，摇匀即可。

3.2.4 操作步骤：吸取发酵液滤液(或离心上清液)2.5ml于250ml三角瓶中，加纯化水约50ml，加0.1%甲基红指示剂2-3滴，加1mol/L盐酸1-2滴。

使其成红色，放置3分钟，然后再以0.03569mol/L的NaOH标准溶液调至橙黄色，加入中性甲醛5-10ml，放置10分钟，再加0.5%酚酞指示剂3-5滴。

用0.03569mol/L 的NaOH标准溶液滴定至微红色半分钟不褪色为终点。

氨基酸总量测定方法咱今儿就来讲讲氨基酸总量测定方法，这可是个很有意思的事儿呢！你想想啊，氨基酸就像是我们身体里的小宝贝，它们的数量和状态对我们可重要啦！要说测定氨基酸总量，那方法可不少呢。

就好像我们要去一个地方，有好多条路可以走。

比如说茚三酮比色法，这就像是走一条大家都比较熟悉的大道，可靠又实用。

把样品和茚三酮试剂一混合，经过一系列反应，就能通过颜色的变化来大致知道氨基酸的量啦。

这多神奇呀！还有甲醛滴定法，这就好比是找到了一个特别的窍门。

利用甲醛和氨基酸的反应，然后通过滴定来确定数量。

是不是感觉很有意思呢？就像解开一个小小的谜题。

再说说电位滴定法吧，这就像是有个特别精准的仪器在帮我们把关，能非常准确地测量出氨基酸的量呢。

那我们在实际操作的时候可得注意一些小细节哦！就像做饭要掌握好火候一样，不能马虎。

比如试剂的选择，一定要挑质量好的呀，不然怎么能得出准确的结果呢？还有操作步骤，一步都不能错哦，不然就像走在路上迷路了一样。

你说，要是我们不认真对待这些方法，那不是就像闭着眼睛走路吗？能走到目的地才怪呢！所以呀，我们得好好琢磨这些方法，就像对待宝贝一样。

在测定的过程中，每一个环节都很关键呢。

从样品的处理到最后的数据分析，都需要我们细心再细心。

这可不是闹着玩的事儿呀！而且呀，不同的样品可能需要不同的方法来测定氨基酸总量呢。

这就好像不同的人穿不同的衣服才合适一样。

你总不能给一个大人穿小孩的衣服吧？总之呢，氨基酸总量测定方法是个很有学问的事儿，我们可得好好研究研究。

只有这样，我们才能真正了解氨基酸的奥秘，才能更好地为我们的健康服务呀！这可不是开玩笑的哦！。

总氨基酸含量测定方法咱今儿就来说说这总氨基酸含量测定方法。

你可别小瞧了这个，它就像是解开食物营养密码的一把钥匙呢！想象一下，氨基酸就像是一群小精灵，在各种食物里蹦跶。

我们要测定它们的含量，就得有巧妙的办法。

先来说说茚三酮比色法，这就好像是个神奇的魔法，能让氨基酸现形。

把样品处理好后，加上茚三酮试剂，然后就等着颜色变化。

这颜色一变，就好像小精灵们穿上了特定颜色的衣服，我们就能知道它们有多少啦！这多有趣呀，就跟变魔术似的。

还有个方法叫甲醛滴定法，这就像是一场和氨基酸的小游戏。

加入甲醛，然后通过滴定来确定氨基酸的量。

就好像我们在和氨基酸捉迷藏，一点点找到它们的踪迹。

咱再说说高效液相色谱法，这可是个厉害的角色呢！它就像是个超级侦探，能把不同的氨基酸一个一个地分辨出来，准确又可靠。

把样品放进去，它就能把各种氨基酸都给揪出来，让它们无所遁形。

那我们为啥要这么费劲去测定总氨基酸含量呢？这可重要啦！你想想，知道了食物里有多少氨基酸，我们就能更好地搭配饮食呀，让身体更健康。

就好比我们知道了前方的路该怎么走，才能走得更稳当。

而且呀，这对食品行业也很重要呢！厂家可以根据测定的结果来改进产品，让我们吃到更好的东西。

这不是很棒吗？测定总氨基酸含量的过程也不是一帆风顺的哟，有时候也会遇到些小麻烦。

比如样品处理不好啦，或者操作的时候不小心出了点差错。

但咱可不能被这些小困难打倒呀，要像勇士一样去克服它们！总之呢，总氨基酸含量测定方法是个很有意思又很有用的东西。

我们要好好去了解它，掌握它，让它为我们的生活服务。

咱可不能小瞧了这些方法，它们就像是隐藏在科学世界里的宝藏，等着我们去挖掘呢！你说是不是？。

氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。

由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。

当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。

（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。

(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。

加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。

再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。

记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。

V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。

0.014：氮的毫克当量。

三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。

从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。

PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。

(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。

(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。

(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。