IPTG-X-gal 平板制作-l蓝白斑筛选

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IPTG-X-gal 平板制作

IPTG储液配置:一般将IPTG配成20%(m/V)(约0.84M)的母液。称取0.5克IPTG粉末,用2 ml蒸馏水将其完全溶解后,补加蒸馏水至2.5ml,用孔径0.22 μm的小型注射型过滤器(预先装好滤膜灭菌备用)过滤除菌,-20 ℃冻存。

X-gal储液配置:用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。称取0.2克X-gal,加入10ml二甲基甲酰胺(DMF),溶解后保存于一小血清瓶内,装有X-gal溶液的血清瓶须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。

IPTG-X-gal平板制备:在含氨苄或卡那抗生素平板上,滴加40 µL的X-gal储液及5 µL的IPTG储液(怕体积过小影响涂布均匀,可适当稀释后再涂布),涂布均匀后晾干后使用。在临使用前提前1h制备。

注:也可以将X-gal储液(40 µL)及IPTG储液(5 µL)加入到将要用于涂板的100 µL的细菌悬液里,混匀后直接涂平板可以。

当长出菌落后,如果蓝白斑还不够明显,可以放置于4度冰箱里一段时间,待蓝白斑明显后,再挑去白色菌落进行PCR检测。

个人整理

Kevin