1.连翘提取物的体外抗菌试验

中药连翘药理作用的研究近况连翘为中医常用的清热解毒药，现代药理研究表明，连翘具有广谱抗病原微生物作用、抗炎、解热、镇吐、利尿和等作用。

现对其最新研究进展进综述如下。

1 药源分布连翘分布于我国辽宁、河北、山东、江苏、山西、河南、湖北、四川、陕西、甘肃等省。

作为中药材，其主产于我国山西、河南、陕西、山东等地[1]。

2 药理作用2．1 抗菌作用：连翘为广谱抗菌药，对多种革兰阳性及阴性细菌有抑制作用。

如连翘果实煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、溶血性链球菌（甲型、乙型）、志贺氏痢疾杆菌、史氏痢疾杆菌、鼠疫杆菌、人型结核杆菌、伤寒杆菌、霍乱孤菌、副伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、白喉杆菌均有抑制作用。

青翘作用大于老翘。

连翘酚（forsythol）有抗菌作用。

苯乙醇苷类具有较强抗菌活性。

连翘酯苷对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌均有极强的抑制作用，体外试验发现连翘有很强的摧毁细菌内毒素作用，连翘挥发油对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌有明显的抑制作用，连翘对结核杆菌也有抑制作用。

大量的试验已证实，咖啡酰糖苷类成份连翘酯苷、suspensaside、β-Hydroxyacteoside 和forsythoside B有很强的抗菌活性，并且是连翘煎剂抗菌的主要有效成分，连翘酯苷和suspensaside还能抗真菌[2]。

2．2 抗炎作用：大鼠巴豆油性肉芽囊实验证明，连翘醇提取物的水溶液腹腔注射有非常明显的抗渗出作用，能够降低炎性部位血管壁脆性作用而对炎性屏障的形成无抑制作用。

用32P标记红细胞实验也观察到其渗入已注射连翘提取物水溶液的大鼠，巴豆油性肉芽囊内的数量明显减少，表明连翘尚能促进炎性屏障的形成[3]。

2．3 解热作用：冯淑怡等[4]制备了小鼠三种细菌(绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡菌球菌)感染模型，观察动物的死亡数，计算死亡率；复制酵母致大鼠发热模型与内毒素致家兔发热模型，现察不同时间动物体温的变化。

连翘提取物质量标准连翘，又名金银花，是一种常见的中药材，具有清热解毒、泻火解毒、散风清热等功效。

连翘提取物作为一种常见的中药材提取物，在医药、保健品等领域有着广泛的应用。

为了确保连翘提取物的质量安全和有效性，制定了一系列的质量标准，以保障连翘提取物的质量。

一、外观特征。

连翘提取物应为呈黄色至棕黄色的粉末状物质，具有特有的花香气味，无异味。

其外观应干燥，无结块、霉变等现象。

二、理化指标。

1. 含量测定。

连翘提取物中有效成分金银花苷的含量应符合国家标准规定，一般在20%~40%之间。

2. 溶剂残留。

连翘提取物中溶剂残留量应符合国家标准规定，一般不得超过10ppm。

3. 水分含量。

连翘提取物中水分含量应符合国家标准规定，一般不得超过5%。

4. 灰分含量。

连翘提取物中灰分含量应符合国家标准规定，一般不得超过5%。

三、微生物指标。

1. 细菌总数。

连翘提取物中细菌总数应符合国家标准规定，一般不得超过1000CFU/g。

2. 酵母菌和霉菌总数。

连翘提取物中酵母菌和霉菌总数应符合国家标准规定，一般不得超过100CFU/g。

3. 大肠菌群。

连翘提取物中大肠菌群应符合国家标准规定，一般不得检出。

四、重金属指标。

连翘提取物中重金属含量应符合国家标准规定，一般不得超过国家规定的限量标准。

五、农药残留。

连翘提取物中农药残留量应符合国家标准规定，一般不得超过国家规定的限量标准。

六、贮存。

连翘提取物应贮存在阴凉干燥处，远离阳光直射，避免潮湿。

七、包装。

连翘提取物的包装应符合国家标准规定，包装完好，密封良好，防潮防尘。

综上所述，连翘提取物作为一种常见的中药材提取物，在应用过程中需要严格遵守相关的质量标准，以确保其质量安全和有效性。

只有通过严格的质量控制，才能更好地发挥连翘提取物的药用价值，为人们的健康提供保障。

连翘叶中连翘苷的提取分离实验原理引言：连翘（学名：Lonicera japonica Thunb.）是一种常见的中药材，被广泛用于中医药领域。

其中，连翘苷是连翘叶中一种重要的活性成分，具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种药理作用。

因此，提取和分离连翘苷对于深入研究连翘叶的药效成分具有重要意义。

一、实验目的本实验旨在通过提取和分离的方法，获得高纯度的连翘苷，并探究其提取分离原理。

二、实验原理连翘苷是一种苷类化合物，属于蒸馏提取的目标物。

蒸馏提取是一种将物质从混合物中分离出来的方法，基于目标物的挥发性较高，在蒸馏过程中会被蒸发出来，而其他杂质则留在残渣中的原理。

1. 提取方法：连翘叶经过研磨后，可与适量的乙醇进行浸泡，使连翘苷溶于乙醇溶剂中。

浸泡时间通常为12-24小时，以确保连翘苷充分溶解。

2. 分离方法：将浸泡后的连翘叶提取液进行蒸馏，利用其挥发性较高的特性，将连翘苷蒸发出来。

通过控制蒸馏条件，如温度、压力等参数，可以实现连翘苷的高效分离。

三、实验步骤1. 准备工作：将连翘叶研磨成粉末，待用。

2. 提取连翘苷：取适量的连翘叶粉末，加入乙醇溶剂中，浸泡12-24小时。

3. 分离连翘苷：将浸泡后的连翘叶提取液进行蒸馏，通过控制温度和压力，使连翘苷蒸发出来。

4. 结晶连翘苷：将蒸发得到的连翘苷溶液冷却，使其结晶。

可以通过冷却结晶、浓缩结晶等方法得到高纯度的连翘苷。

四、实验注意事项1. 连翘叶的研磨应尽量细致，以增加连翘苷的溶解度。

2. 乙醇溶剂的选择要适当，以提高连翘苷的溶解度。

3. 蒸馏过程中，温度和压力的控制要准确，避免连翘苷的分解或挥发不完全。

4. 结晶过程中，温度的控制要适宜，以获得高纯度的连翘苷结晶。

五、实验结果与讨论通过提取和分离的方法，我们可以获得高纯度的连翘苷。

连翘苷的结晶形态、溶解性等性质可以通过实验观察和测试进行分析。

同时，可以利用色谱等分析方法对连翘苷的纯度进行检测。

连翘苷的提取分离实验原理，为我们深入了解连翘叶中的活性成分提供了一种有效的手段。

连翘研究报告
连翘（学名：Lonicera japonica）是忍冬科忍冬属植物，为蔓
生灌木或攀援状灌木，起源于中国，现已广泛分布于世界各地。

连翘具有多种药用和观赏价值，在中医药中被广泛应用。

近年来，对连翘的研究逐渐增多，以下是对连翘的一些研究成果的总结：
1. 化学成分研究：连翘含有多种生物活性化学成分，如黄酮类、咖啡酸类、苯酸类等。

其中，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗病毒等作用的成分备受关注。

研究发现，连翘中的黄酮类化合物能够抑制炎症反应、减轻氧化应激、抗肿瘤和抗病毒。

2. 药理作用研究：连翘具有广泛的药理作用，包括抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、解热镇痛、降血糖等。

研究表明，连翘提取物和化合物对多种疾病具有预防和治疗的作用，如呼吸系统感染、心血管疾病、肝脏疾病等。

3. 肿瘤抑制作用研究：连翘中的化学成分被发现具有抗肿瘤活性，可以抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，并引发肿瘤细胞凋亡。

此外，连翘中的黄酮类化合物还能够促使肿瘤细胞与免疫系统的相互作用，增强免疫细胞对肿瘤的识别和攻击能力，对肿瘤具有显著的免疫调节作用。

4. 抗菌作用研究：连翘具有广谱的抗菌活性，特别是对常见的细菌和真菌感染具有一定的抑制作用。

研究发现，连翘的提取物对多种致病菌，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等，具有明显
的抗菌效果。

总结起来，连翘是一种具有多种药用价值的植物，其化学成分具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种作用机制。

虽然已有一些研究结果，但对连翘的研究仍处于起步阶段，还需要进一步的研究来揭示其其他潜在的药理作用和临床应用前景。

XXXXXXXXXXX有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：连翘提取物1.2 汉语拼音：LianqiaoTiquwu2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：中国药典（2020年版一部）。

6 质量标准：检查水分不得过5.0%（通则0832第二法）。

重金属取本品1g，依法检查（通则0821第二法），不得过20mg/kg。

砷盐取本品5g，置坩埚中，取氧化镁1g覆盖其上，加入硝酸镁溶液（取硝酸镁15g，溶于100ml水中）10ml，浸泡4小时，置水浴上蒸干，缓缓炽灼至完全炭化，逐渐升高温度至500-600℃，使完全灰化，放冷，加水5ml使湿润，加6mol/l盐酸溶液10ml，转移至50 ml量瓶中，坩埚用6mol/l盐酸溶液洗涤3次，每次5ml，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，取10ml，加盐酸3.5ml与水12.5 ml，依法检查（通则0822第一法），不得过2mg/kg同法定标准特征图谱照高效液相色谱（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为235nm。

理论板数按连翘酯苷A峰计算应不低于4000。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0～1010～4040～6010～2525～4040～6090～7575～6060～40参照物溶液的制备取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含连翘苷30µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品25mg，精密称定，至5ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品特征图中应有4个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。

中药连翘药理作用研究进展连翘为中医临床常用中药，其具有重要的药理作用。

国内外学者对其药理作用进行了深入研究，本文以此为基础对连翘的药理作用进行综述。

标签：连翘；药理作用；研究进展连翘，味苦微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒、消肿散结等功效，主治痈疽、乳痈、丹毒、风热感冒、湿病初起、起病较急、透表清热、高热烦渴、神昏发斑、热淋尿闭[1]等症。

连翘具有广泛的药理作用，其既能清心头之火，清除疮毒，又能发散气血汇聚的源流，并兼有消痈散结等功效，因此被称为“疮家圣药”。

本文对目前关于连翘药理作用的研究进展进行了总结。

1 抗炎作用刘悦等[2]人，运用大鼠豆油性肉芽囊实验证明，连翘提取物，有较明显的抗渗出作用及降低炎灶微血管壁脆性作用，而对炎性屏障的形成没有抑制。

连翘注射液对醋酸所引起的毛细血管通透性有很明显的抑制作用，而且对烟雾刺激引起的大鼠呼吸道炎具有保护作用[3]。

2 保肝作用王文生等[4]通过研究表明连翘水煎液能够明显抑制血清谷丙转氨酶活性增高，同时减轻肝脏变性和坏死。

连翘中齐墩果酸、熊果酸是连翘抗肝损伤的有效成分。

3 利尿作用简永耀等人[5]，通过连翘注射液对麻醉犬进行静注，结果表明连翘注射液有明显的利尿作用，连翘中的齐墩果酸有轻微的强心利尿作用。

4 对心血管系统的作用刘悦等人[2]对连翘注射液的药理作用进行研究，发现连翘注射液具有一定的降压作用。

5 镇吐作用通过动物实验研究证明，连翘具有明显的止呕作用，聂克等[6]人，采用阿朴吗啡、硫酸铜经典催吐剂建立了大鼠异食癖模型，实验结果表明连翘对不同催吐剂导致的大鼠异食癖均具有显著的抑制作用。

曲欢欢等[7]人，采用连翘水煎剂对家鸽进行灌胃，实验表明能够明显减少家鸽翼静呕吐次数，并延长呕吐的潜伏时期。

6 抗内毒素作用刘悦等[2]人在连翘液中加入内毒素，经过相互作用后测得残余内毒素活性均低于所加入的内毒素。

实验结果表明，连翘具有较好的抗内毒素作用。

7 抗氧化作用涂秋云等[8]人经过研究发現，连翘的乙醇提取物可以有效地清除过氧化物和羟基自由基，而且不同浓度的连翘提取物对过氧化物和羟基自由基的清除效果不同，其清除率与连翘提取物质量浓度呈正比的关系。

中国畜牧兽医 2024,51(4):1490-1499C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i ci n e 蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能㊁血清抗氧化及免疫指标的影响张腾龙,郭晨阳,钟华晨,刘嘉琳,宋 洁,王丽芳(内蒙古自治区农牧业科学院,农业农村部草食家畜健康养殖与畜产品品质调控重点实验室(省部共建)/农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(呼和浩特),呼和浩特010031)摘 要:ʌ目的ɔ探究蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能以及血清抗氧化㊁免疫指标的影响,以期为植物提取物绿色饲料添加剂的开发应用提供理论依据㊂ʌ方法ɔ试验选取18头体况㊁泌乳期㊁泌乳量相近,且4个乳区混合乳样中体细胞数(S C C )>5ˑ105/m L 的经产荷斯坦奶牛,根据乳样中S C C 相近原则,分为对照组(C O N 组)㊁蒲公英组(D A N 组)和连翘组(F O R 组)㊂对照组饲喂全混合型饲粮(T M R ),蒲公英组饲喂T M R+蒲公英提取物,连翘组饲喂T M R +连翘提取物,蒲公英和连翘提取物添加剂量均为60g /d㊂试验开始前1周内,奶牛均未进行过药物治疗,试验期45d ㊂试验期间每7d 采集1次乳样,测定乳成分和S C C ;试验结束后采集乳样并测定牛髓过氧化物酶(M P O )㊁乳酸脱氢酶(L D H )和N -乙酰-β-D -氨基葡萄糖苷酶(N A G )活性;采集血液样品并测定血清抗氧化和免疫指标㊂ʌ结果ɔ与对照组相比,①饲粮中添加蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛产奶量和乳成分均无显著影响(P >0.05)㊂②蒲公英和连翘组牛乳中L D H 活性均显著降低(P <0.05);蒲公英组牛乳中N A G 活性显著降低(P <0.05)㊂③蒲公英组隐性乳房炎奶牛血清中过氧化氢酶(C A T )活性显著升高(P <0.05),连翘组血清中总抗氧化能力(T -A O C )显著升高(P <0.05),两种中草药提取物组隐性乳房炎奶牛血清中丙二醛(M D A )含量均显著降低(P <0.05)㊂④蒲公英和连翘组隐性乳房炎奶牛血清中免疫球蛋白A (I g A )㊁I g G 和I g M 含量均显著升高(P <0.05),血清中白细胞介素-1β(I L -1β)含量显著降低(P <0.05)㊂ʌ结论ɔ饲粮中添加蒲公英和连翘提取物均能够调控隐性乳房炎奶牛的炎症反应,增强其免疫及抗氧化能力,进而达到防控奶牛隐性乳房炎的效果㊂关键词:奶牛;隐性乳房炎;蒲公英;连翘;生产性能;抗氧化中图分类号:S 816.7文献标识码:AD o i :10.16431/j .c n k i .1671-7236.2024.04.017 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-09-18基金项目:内蒙古自治区科技计划项目(2021G G 0029㊁2023Y F D Z 0008);内蒙古自然科学基金项目(2021L HM S 03014);内蒙古农牧业科技转移转化资金项目(2022T G 16-1)联系方式:张腾龙,E -m a i l :z t l j a m e s @126.c o m ㊂通信作者王丽芳,E -m a i l :w a n g l i f a n g100008@163.c o m E f f e c t s o fD a n d e l i o na n d F o r s yt h i a E x t r a c t s o nP r o d u c t i o nP e r f o r m a n c e ,S e r u m A n t i o x i d a n t a n d I m m u n e I n d e x e s o fD a i r y Co w sW i t hS u b c l i n i c a lM a s t i t i s Z H A N G T e n g l o n g ,G U OC h e n y a n g,Z H O N G H u a c h e n ,L I UJ i a l i n ,S O N GJ i e ,WA N GL i f a n g(K e y L a b o r a t o r y o f G r a s s -F e e d i n g L i v e s t o c kH e a l t h y B r e e d i n g an dL i v e s t o c kP r o d u c t Q u a l i t y C o n t r o l (C o -c o n s t r u c t i o nb y M i n i s t r y a n dP r o v i n c e )o f M i n i s t r y o f A gr i c u l t u r e a n dR u r a lA f f a i r s /A g r i c u l t u r a l P r o d u c tQ u a l i t y a n dS a f e t y R i s kA s s e s s m e n tL a b o r a t o r y o ft h eM i n i s t r y o f A g r i c u l t u r e a n dR u r a lA f f a i r s (H o h h o t ),I n n e rM o n g o l i aA c a d e m y o fA g r i c u l t u r a l&A n i m a lH u s b a n d r y Sc i e n c e s ,H o h h o t 010031,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b j e c t i v e ɔT h e p u r p o s eo ft h i ss t ud y w a st oe x pl o r et h ee f f e c t so fd a n d e l i o na n d4期张腾龙等:蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能㊁血清抗氧化及免疫指标的影响F o r s y t h i a e x t r a c t so n p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e,s e r u m a n t i o x i d a n ta n di m m u n e i n d e x e so fd a i r y c o w sw i t hs u b c l i n i c a l m a s t i t i s,i n o r d e rt o p r o v i d et h e o r e t i c a lb a s i sf o rt h ed e v e l o p m e n ta n d a p p l i c a t i o no f g r e e n f e e d a d d i t i v e s b a s e d o n p l a n t e x t r a c t.ʌM e t h o dɔ18m u l t i p a r o u sH o l s t e i n c o w s w i t hs i m i l a rb o d y c o n d i t i o n,l a c t a t i o n p e r i o d,m i l k p r o d u c t i o n,a n dt h e m i x e d m i l ks a m p l e w i t h s o m a t i c c e l l c o u n t(S C C)i nm i l k>5ˑ105/m Lw e r e s e l e c t e d.A c c o r d i n g t o t h e p r i n c i p l e o f s i m i l a r S C C,m i l ks a m p l e sw e r e d i v i d e d i n t o c o n t r o l g r o u p(C O N g r o u p),d a n d e l i o n g r o u p(D A N g r o u p) a n d F o r s y t h i a g r o u p(F O R g r o u p).T h e c o w s i nC O N g r o u p w e r e f e d a t o t a lm i x e dd i e t(T M R), t h e c o w s i nD A N g r o u p w e r e f e dT M R+d a n d e l i o ne x t r a c t,a n d t h e c o w s i nF O R g r o u p w e r e f e d T M R+F o r s y t h i a e x t r a c t.N o n e o f t h e c o w s r e c e i v e d a n y d r u g t r e a t m e n tw i t h i n1w e e kb e f o r e t h e e x p e r i m e n t a n d t h ee x p e r 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i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P<0.05).N AG a c t i v i t y i n D A N g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P<0.05).③T h ec a t a l a s e(C A T)a c t i v i t y i nt h es e r u m o f d a i r y c o w sw i t h s u b c l i n i c a lm a s t i t i s i nD A N g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),a n d t h e t o t a l a n t i o x i d a n t c a p a c i t y(T-A O C)i nF O R g r o u p w a ss i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05).B o t h h e r b a l e x t r a c t sc o u l ds i g n i f i c a n t l y r e d u c et h es e r u m m a l o n d i a l d e h y d e(M D A)c o n t e n to fd a i r y c o w sw i t h s u b c l i n i c a lm a s t i t i s(P<0.05).④T h e c o n t e n t s o f I g A,I g Ga n d I g Mi n s e r u mo f d a i r y c o w sw i t hs u b c l i n i c a lm a s t i t i s i nD A Na n dF O R g r o u p sw e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05), a n d t h eI L-1βc o n t e n ti ns e r u m w a ss i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05).ʌC o n c l u s i o nɔD i e t a r y s u p p l e m e n t a t i o no f d a n d e l i o na n d F o r s y t h i a e x t r a c t sc o u l dr e g u l a t e t h e i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e, e n h a n c e t h e i m m u n ea n da n t i o x i d a n tc a p a c i t y o fd a i r y c o w sw i t hs u b c l i n i c a lm a s t i t i s,a n dt h u s a c h i e v e t h e p r e v e n t i o na n d c o n t r o l e f f e c t o f s u b c l i n i c a lm a s t i t i s i nd a i r y c o w s.K e y w o r d s:d a i r y c o w s;s u b c l i n i c a l m a s t i t i s;d a n d e l i o n;F o r s y t h i a;p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e;a n t i o x i d a n t乳房炎是奶牛养殖领域中最普遍的疾病之一,会引起奶牛产奶量㊁乳品质量的下降,药用成本上升,严重时会导致奶牛死亡,进而造成奶牛养殖经济效益的显著下降[1]㊂奶牛乳房炎主要分为临床型乳房炎和亚临床型乳房炎(隐性乳房炎),其中临床型乳房炎奶牛乳汁有变色㊁凝块等现象,同时伴有乳腺红肿㊁胀痛㊁发热等现象[2],兽医可及时发现并采取相应诊疗措施,因此临床型乳房炎发病率已大幅下降㊂然而,隐性乳房炎(s u b c l i n i c a lm a s t i t i s,S C M)奶牛在外观上无明显变化,主要表现为乳汁中体细胞数(s o m a t i c c e l l c o u n t,S C C)的上升[3],因而容易被牧场管理者所忽视,造成经济损失㊂C h e n等[4]对2012 2021年中国奶牛隐性乳房炎的流行病学调查研究发现,奶牛隐性乳房炎的平均患病率为37.7%,内蒙古自治区奶牛隐性乳房炎患病率最高(72%)㊂抗生素防控是目前最普遍的乳房炎防控方法,但是长时间过度使用和滥用抗生素,会引发病原微生物耐药性逐步提升[5],从而降低治疗效果,造成养殖场严重的经济损失[6]㊂植物提取物是通过适当的方法,以植物(全株或某一部分)为原料提取或加工而成的一类具有单一或多种生物学功能的物质[7],为植物的次级代谢产物[8]㊂研究表明,植物提取物具有广谱抗菌㊁抗氧化㊁杀虫和抗癌等活性[9-10],同时具有较低的副作用[11]和长期接触后不易诱发耐药性[12]等优势,是防控奶牛隐性乳房炎最具潜力的产品之一㊂蒲公英是菊科蒲公英属多年生草本植物,是中国常见的野生蔬菜和中草药,具有清热解毒㊁消肿散结等功效,其提取物能够提高猪[13]㊁1941中国畜牧兽医51卷鸡[14]等畜禽的生产性能㊁抗氧化能力和免疫水平㊂连翘是中国临床常用的传统中药之一,据‘本草纲目记载“,连翘具有清热解毒㊁消肿散结等功效,其提取物已被证明在肉鸡和断奶仔猪中可以提高抗氧化能力[15-16]㊁改善肠道菌群组成[17],并具有抗炎功能[18]㊂课题组前期研究发现,蒲公英提取物和连翘提取物在体外均能有效抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等乳房炎致病菌[19],但其在机体内的作用效果和机理尚不明确㊂因此,本研究通过奶牛饲养试验,系统评估蒲公英提取物和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能㊁血液免疫和抗氧化能力的综合影响,以期为蒲公英和连翘提取物绿色饲料添加剂的开发应用提供参考㊂1材料与方法1.1试验材料连翘和蒲公英全株提取物均购自南京泽朗生物科技有限公司㊂提取工艺条件:10倍水,60ħ提取2.5h,然后8倍水,60ħ提取2h,最后冻干制成粉末制剂㊂2种中草药提取物的活性成分含量委托武汉迈特维尔生物科技有限公司通过广泛靶向代谢组学方法进行测定,具体活性成分见表1㊂表1蒲公英和连翘提取物的活性成分含量测定结果T a b l e1D e t e r m i n a t i o n r e s u l t s o f c o n t e n t s o f a c t i v e c o m p o n e n t s o f d a n d e l i o na n d F o r s y t h i a e x t r a c t s%成分C o m p o n e n t s蒲公英D a n d e l i o n连翘F o r s y t h i a黄酮类F l a v o n o i d s27.1614.80酚酸类P h e n o l i c a c i d s22.0321.95核苷酸类N u c l e o t i d e s11.06有机酸类O r g a n i c a c i d s10.1110.54脂质类L i p i d s9.1317.86木质素和香豆素L i g n i na n d c o u m a r i n 20.08其他O t h e r s20.5114.77合计T o t a l100.00100.001.2试验分组及处理试验选取18头体况㊁泌乳期(203dʃ46d)㊁泌乳量相近,且4个乳区混合乳样中S C C>5ˑ105/m L的经产荷斯坦奶牛,根据乳样中S C C相近原则分为3组,每组6头㊂对照组(C O N组):乳中S C C为7.320ˑ105/m L;蒲公英组(D A N组):乳中S C C为7.326ˑ105/m L;连翘组(F O R组):乳中S C C为7.273ˑ105/m L㊂试验开始前1周内,3组奶牛均未进行过药物治疗㊂提取物添加剂量为奶牛干物质采食量的0.3%[20],即试验期内,蒲公英提取物和连翘提取物添加剂量为60g/d,饲喂时由专人将中草药提取物与玉米粉进行预混并添加至全混合饲粮(TM R)中,确保每头奶牛均能精确采食给定剂量;C O N组以同样方式给予相同剂量玉米粉,不添加中草药提取物㊂试验期45d,其中预饲期15d,正试30d期㊂参照N R C(2001)奶牛饲养标准配制基础饲粮,饲粮组成及营养水平见表2㊂奶牛饲养管理均按照牧场现有方式进行,每天06:00和15:00投喂T M R,奶牛自由采食㊁饮水㊂每天早(07:00)㊁中(14:00)和晚(21:00)各挤奶1次,准确记录产奶量㊂表2饲粮组成及营养水平(干物质基础)T a b l e2D i e t a r y c o m p o s i t i o na n dn u t r i e n t l e v e l s(D M b a s i s)%项目I t e m s含量C o n t e n t s项目I t e m s含量C o n t e n t s 原料I n g r e d i e n t s营养成分N u t r i e n t c o m p o n e n t②玉米青贮C o r n s i l a g e43.84泌乳净能N E L/(M J/k g)6.52玉米秸秆C o r n s t a l k s23.40干物质D M51.21玉米粉C o r n9.36粗蛋白质C P14.14豆粕S o y b e a nm e a l10.40粗脂肪E E3.81棉籽粕C o t t o n s e e dm e a l4.16中性洗涤纤维N D F41.66 29414期张腾龙等:蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能㊁血清抗氧化及免疫指标的影响续表项目I t e m s含量C o n t e n t s项目I t e m s含量C o n t e n t s干酒糟及其可溶物D D G S6.24酸性洗涤纤维A D F24.35小苏打S o d i u mb i c a r b o n a t e0.52粗灰分A s h5.04预混料P r e m i x①2.08钙C a0.76合计T o t a l100.00磷P0.31①预混料为每千克饲粮提供:维生素A460000I U;维生素E6000I U;维生素D3180000I U;铁(硫酸亚铁)28g;铜(硫酸铜)1.1g;钴(氯化钴)1.1g;钙(碘酸钙)0.3g;锰(硫酸锰)5.6g;锌(硫酸锌)4.6g;碘(碘化钾)200m g;硒(亚硒酸钠)25m g;磷(磷酸氢钙)75g㊂②泌乳净能为计算值,其余均为实测值①T h e p r e m i x p r o v i d e d t h e f o l l o w i n g p e r k g d i e t:V A460000I U;V E6000I U;V D3180000I U;F e(F e S O4)28g;C u(C u S O4)1.1g;C o(C o C l2)1.1g;C a(C a(I O3)2)0.3g;M n(M n S O4)5.6g;Z n(Z n S O4)4.6g;I(K I)200m g;S e(N a2S e O3)25m g; P(C a H P O4)75g.②N E L w a s c a l c u l a t e dv a l u e,w h i l e t h e o t h e r sw e r em e a s u r e dv a l u e s1.3检测指标及方法1.3.1乳成分及S C C测定试验期内,每天记录产奶量㊂同时于第0㊁7㊁14㊁21㊁28㊁35和42天分别采集奶样,按早㊁中㊁晚以4ʒ3ʒ3(VʒVʒV)混合奶样,取50m L奶样加入溴硝丙二醇防腐剂,于4ħ保存备用㊂利用全自动乳成分分析仪(M i k o S c a n F T120,F O S S公司)测定乳中乳脂肪㊁乳蛋白㊁乳糖㊁非脂乳固体和总固形物含量,使用牛奶体细胞计数仪(S C C-100,C h e m o m e t e c公司)测定乳中S C C㊂1.3.2 乳中酶活性测定于试验第45天按1.3.1方法采集50m L奶样,不加防腐剂,于―20ħ保存备用㊂利用酶标仪(M u l t i s k a nF C,赛默飞世尔仪器有限公司),通过E L I S A法测定乳中牛髓过氧化物酶(M P O)㊁乳酸脱氢酶(L D H)和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N A G)活性㊂1.3.3血清抗氧化指标测定试验第45天晨饲前,尾静脉采集10m L血液样品㊂室温静置30m i n 后3000r/m i n离心15m i n,获得血清样品,于―20ħ保存备用㊂利用E L I S A法测定超氧化物歧化酶(S O D)㊁过氧化氢酶(C A T)活性及总抗氧化能力(T-A O C)㊂采用二硫代二硝基甲苯酸法测定谷胱甘肽过氧化物酶(G S H-P x)活性;通过硫代巴比妥酸法测定丙二醛(M D A)含量㊂1.3.4血清免疫指标测定利用E L I S A法测定血清中白细胞介素-1β(I L-1β)㊁I L-2㊁I L-4㊁肿瘤坏死因子-α(T N F-α)㊁免疫球蛋白A(I g A)㊁I g G㊁I g M含量㊂试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,以上具体操作参照说明书㊂1.4数据统计分析试验数据通过S t a t a17.0软件进行单因素方差分析,采用B o n f e r r o n i法进行多重比较㊂结果用平均值和均值标准误表示,P<0.05表示差异显著㊂2结果2.1蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛乳成分及S C C的影响由表3可知,饲粮中添加蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛产奶量㊁乳成分均无显著影响(P>0.05)㊂试验第42天时,蒲公英组奶牛乳中S C C显著低于对照组(P<0.05);试验第21~42天时,连翘组奶牛乳中S C C均显著低于对照组(P< 0.05)㊂表3各组奶牛乳成分及S C C测定结果T a b l e3D e t e r m i n a t i o n r e s u l t s o fm i l k c o m p o s i t i o na n dS C Co f d a i r y c o w s i n e a c h g r o u p时间T i m e s/d项目I t e m s对照组C O N g r o u p蒲公英组D A N g r o u p连翘组F O R g r o u p S E MP值P v a l u e7产奶量M i l k y i e l d/(k g/d)30.3131.2229.093.370.970乳脂率M i l k f a t/%3.643.723.410.080.280乳蛋白率M i l k p r o t e i n/%3.463.703.410.170.780乳糖率L a c t o s e/%4.934.874.250.180.260非脂乳固体含量N o n-f a t s o l i d s/%9.169.298.520.170.120总固形物含量T o t a l s o l i d s/%12.1611.8811.780.410.840体细胞数S C C/(ˑ104/m L)113.9678.6062.5013.220.2803941中国畜牧兽医51卷续表时间T i m e s/d项目I t e m s对照组C O N g r o u p蒲公英组D A N g r o u p连翘组F O R g r o u p S E MP值P v a l u e14产奶量M i l k y i e l d/(k g/d)29.1235.8933.872.330.460乳脂率M i l k f a t/%3.433.563.750.060.190乳蛋白率M i l k p r o t e i n/%3.433.303.340.060.660乳糖率L a c t o s e/%4.475.063.970.190.080非脂乳固体含量N o n-f a t s o l i d/%8.789.118.210.160.070总固形物含量T o t a l s o l i d s/%11.9111.8311.870.230.990体细胞数S C C/(ˑ104/m L)118.6492.6666.0312.380.230 21产奶量M i l k y i e l d/(k g/d)29.2435.9832.902.210.440乳脂率M i l k f a t/%3.443.473.610.070.720乳蛋白率M i l k p r o t e i n/%3.373.153.330.060.270乳糖率L a c t o s e/%4.224.493.840.220.550非脂乳固体含量N o n-f a t s o l i d s/%8.468.388.070.180.690总固形物含量T o t a l s o l i d s/%12.1611.3711.800.290.540体细胞数S C C/(ˑ104/m L)161.86a96.34a b46.00b15.040.002 28产奶量M i l k y i e l d/(k g/d)30.5635.8633.930.210.670乳脂率M i l k f a t/%3.473.593.530.070.830乳蛋白率M i l k p r o t e i n/%3.353.093.350.070.200乳糖率L a c t o s e/%4.554.514.030.180.470非脂乳固体含量N o n-f a t s o l i d s/%8.678.328.240.170.590总固形物含量T o t a l s o l i d s/%11.9511.0711.570.290.510体细胞数S C C/(ˑ104/m L)127.43a96.24a b41.14b14.280.030 35产奶量M i l k y i e l d/(k g/d)34.5936.0433.992.180.940乳脂率M i l k f a t/%3.553.523.640.030.870乳蛋白率M i l k p r o t e i n/%3.293.023.260.070.190乳糖率L a c t o s e/%4.164.374.220.160.870非脂乳固体含量N o n-f a t s o l i d s/%8.298.168.320.150.900总固形物含量T o t a l s o l i d s/%11.6310.9812.340.300.260体细胞数S C C/(ˑ104/m L)163.47a102.91a b42.01b14.96<0.001 42产奶量M i l k y i e l d/(k g/d)28.6834.6230.531.800.350乳脂率M i l k f a t/%3.563.493.280.100.690乳蛋白率M i l k p r o t e i n/%3.263.123.340.060.330乳糖率L a c t o s e/%4.014.474.390.180.540非脂乳固体含量N o n-f a t s o l i d s/%8.158.328.500.100.700总固形物含量T o t a l s o l i d s/%11.4811.5112.500.260.230体细胞数S C C/(ˑ104/m L)157.61a80.84b29.91b14.39<0.001同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05);肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)㊂下同I n t h e s a m e r o w,v a l u e sw i t hd i f f e r e n t l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a ns i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P<0.05);W h i l ew i t ht h es a m eo rn o l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a nn o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P>0.05).T h e s a m e a sb e l o w49414期张腾龙等:蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能㊁血清抗氧化及免疫指标的影响2.2蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛乳中相关酶活性的影响由表4可知,与对照组相比,蒲公英和连翘组乳中L D H活性均显著降低(P<0.05),蒲公英组N A G活性显著降低(P<0.05)㊂蒲公英和连翘组奶牛乳中M P O活性均低于对照组,但差异不显著(P>0.05)㊂表4各组奶牛乳中相关酶活性测定结果T a b l e4D e t e r m i n a t i o n r e s u l t s o f r e l a t e d e n z y m e a c t i v i t y o fm i l k i n e a c h g r o u p n g/m L项目I t e m s对照组C O N g r o u p蒲公英组D A N g r o u p连翘组F O R g r o u p S E MP值P v a l u e牛髓过氧化物酶M P O146.65139.84136.332.820.330乳酸脱氢酶L D H463.59a387.09b395.65b9.82<0.001 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶N A G11.08a8.52b8.71a b0.450.0302.3蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛血清抗氧化指标的影响由表5可知,与对照组相比,蒲公英组隐性乳房炎奶牛血清中C A T活性显著升高(P<0.05),连翘组隐性乳房炎奶牛血清T-A O C水平显著升高(P< 0.05),蒲公英和连翘组隐性乳房炎奶牛血清中M D A含量均显著降低(P<0.05)㊂各组奶牛血清中S O D和G S H-P x活性均无显著差异(P>0.05)㊂表5各组奶牛血清抗氧化指标测定结果T a b l e5D e t e r m i n a t i o n r e s u l t s o f s e r u ma n t i o x i d a n t i n d e x e s o f d a i r y c o w s i n e a c h g r o u p项目I t e m s对照组C O N g r o u p蒲公英组D A N g r o u p连翘组F O R g r o u p S E MP值P v a l u e过氧化氢酶C A T/(U/m L)1.80b2.18a2.07a b0.070.040超氧化物歧化酶S O D/(U/m L)21.8221.6021.620.250.930谷胱甘肽过氧化物酶G S H-P x/(U/m L)216.77211.47224.122.940.240总抗氧化能力T-A O C/(U/m L)1.50b1.71a b1.90a0.070.040丙二醛M D A/(n m o l/m L)32.00a23.33b20.00b1.54<0.0012.4蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛血清免疫指标的影响由表6可知,与对照组相比,蒲公英和连翘组奶牛血清中I g A㊁I g G和I g M含量均显著升高(P<0.05),I L-1β㊁I L-2含量均显著降低(P<0.05)㊂且连翘组奶牛血清中I g G㊁I L-4含量均显著高于蒲公英组(P<0.05)㊂各组奶牛血清中T N F-α含量均无显著差异(P>0.05)㊂表6各组奶牛血清免疫指标测定结果T a b l e6D e t e r m i n a t i o n r e s u l t s o f s e r u mi m m u n e i n d e x e s o f d a i r y c o w s i n e a c h g r o u p项目I t e m s对照组C O N g r o u p蒲公英组D A N g r o u p连翘组F O R g r o u p S E MP值P v a l u e免疫球蛋白AI g A/(μg/m L)1936.67b2709.56a2477.08a75.10<0.001免疫球蛋白GI g G/(m g/m L)3.55c5.26b5.98a0.21<0.001免疫球蛋白MI g M/(μg/m L)556.05b1065.58a1104.56a52.45<0.001白细胞介素-1βI L-1β/(p g/m L)603.21a490.83b535.15b14.350.002白细胞介素-2I L-2/(p g/m L)907.67a803.75b718.94b21.74<0.001白细胞介素-4I L-4/(p g/m L)34.46b40.18b46.80a1.30<0.001肿瘤坏死因子-αT N F-α/(p g/m L)128.69116.21118.193.980.3805941中国畜牧兽医51卷3讨论3.1蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能的影响本试验结果表明,饲粮中添加蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛的产奶量和乳成分没有显著影响,与O l a g a r a y等[21]报道相似,在奶牛饲养过程中短期饲喂黄岑提取物可以有效降低奶牛乳房炎的发病率,而不会改变其生产性能㊂K h u r a n a等[22]研究发现,在奶牛饲粮中添加大蒜和柑橘提取物能够改善奶牛的瘤胃发酵和微生物区系,降低甲烷产量,但不会影响奶牛的干物质采食量和生产性能㊂但J i a等[23]研究发现,与对照组相比,饲粮中添加博落回提取物能够提高奶牛4.7%的产奶量,同时能够显著提高牛乳中乳脂㊁乳蛋白和乳糖的含量㊂推测不同植物的提取物内含有的活性成分不相同可能是其对奶牛生产性能影响不同的原因㊂3.2蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛乳中S C C和相关酶活性的影响奶牛乳房炎的一个重要成因是乳腺内部感染(I M I),S C C是判断I M I程度和衡量牛奶品质的主要指标[24]㊂本研究结果表明,蒲公英和连翘组乳中S C C均低于对照组,且在试验后期差异显著,说明蒲公英和连翘提取物均能有效降低隐性乳房炎发生率㊂L D H是生物体内重要的酶系之一,在奶牛乳房炎发生过程中会受影响[25]㊂张永英等[26]研究报道,受损伤的乳腺细胞是牛奶中L D H的主要来源之一㊂因此,L D H被视为评估奶牛乳房炎的一个重要指标㊂N A G是存在于溶酶体内的酸性水解酶,在奶牛乳房炎发病过程中,其活性与S C C呈正相关[24]㊂L e i t n e r等[27]研究发现,乳腺上皮细胞受损的严重程度与N A G活性呈正相关㊂王红连[28]研究报道,中草药复方制剂能够显著降低乳房炎奶牛乳清中L D H和N A G活性㊂杨德英[29]研究证实,L D H是奶牛乳房炎发展程度的敏感指标,中草药可治疗隐性乳房炎,可降低N A G活性㊂本试验结果表明,蒲公英和连翘提取物均能显著降低隐性乳房炎奶牛乳中L D H和N A G活性,与前人研究结果相一致,说明饲粮中添加蒲公英或连翘提取物均能有效控制奶牛乳房炎的发展情况㊂M P O是一种溶酶体过氧化物酶,主要存在于中性粒细胞的嗜氮颗粒中,在哺乳动物的先天免疫中发挥着重要作用,是机体对抗微生物感染的第一道防线[30]㊂郭昌明等[31]发现,乳中S C C与M P O活性呈正相关㊂但本试验结果表明,蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛乳中M P O活性均没有显著影响,其具体原因有待进一步探究㊂3.3蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛血清抗氧化、免疫能力的影响饲粮中添加蒲公英提取物能够显著提高隐性乳房炎奶牛血清中C A T活性,添加连翘提取物能够显著提高血清中T-A O C水平,两种中草药提取物均能降低血清中M D A含量㊂C A T是生物体内抗氧化防御系统的关键酶之一[32],在清除过氧化氢而避免机体产生氧化应激的过程中起重要作用;T-A O C是血清中抗氧化能力总和,可在一定程度上反应机体清除活性氧/一氧化氮合酶的总能力;M D A 是机体脂质过氧化反应的终产物,对细胞具有毒性作用[33],其含量的高低能够反映机体氧化应激水平㊂有研究表明,蒲公英提取物能够显著提高奶牛血清中C A T活性,并能够通过调控核转录因子E2相关因子2(N r f2)增强机体的抗氧化性能[34]㊂L o n g等[35]研究发现,连翘提取物能够增加肉鸡血清中T-A O C水平,进而提高肉鸡的抗氧化能力㊂免疫球蛋白含量的提升预示机体对病原抵抗能力的提高,本试验中蒲公英和连翘提取物均能显著提高隐性乳房炎奶牛血清中I g A㊁I g G和I g M含量㊂高雅等[36]在放牧肉牛的精补料中添加6.0%的蒲公英提取物发现,蒲公英提取物能够提高血清中免疫球蛋白含量㊂L o n g等[37]研究发现,与对照组相比,母猪饲喂连翘提取物有提高初乳中I g M含量的趋势,并能够提高仔猪血清中I g A含量㊂I L-1β是机体重要的炎性细胞因子,在巨噬细胞抗原递呈中起重要作用,属于促炎因子;I L-2又称T细胞生长因子,由抗原激活后产生,在免疫应答和免疫耐受中均具有重要意义,属于促炎因子;在免疫应答过程中, I L-4被认为是一种具备多效性的细胞因子,可以促进辅助型T细胞2(T h2)的形成,同时在调节T㊁B 淋巴细胞以及其他类型细胞的增殖㊁分化㊁凋亡过程中扮演着重要角色,属于抗炎因子㊂本试验结果显示,蒲公英组隐性乳房炎奶牛血清中I L-1β含量显著低于对照组,连翘组血清中I L-2含量显著低于对照组,I L-4含量显著高于对照组,表明两种中草药提取物均能有效调节隐性乳房炎奶牛体内的炎症反应㊂本试验中选取的蒲公英和连翘提取物中均含有黄酮类等生物活性成分㊂植物黄酮属于植物次级代谢产物,起始于苯丙烷代谢途径,可有效提升畜禽的抗炎能力㊁免疫水平和抗氧化能力[38]㊂侯昆等[39]关于竹叶黄酮的研究与本试验结果相似,竹叶黄酮能69414期张腾龙等:蒲公英和连翘提取物对隐性乳房炎奶牛生产性能㊁血清抗氧化及免疫指标的影响够显著降低隐性乳房炎奶牛血清中I L-1β和M D A 含量㊂占今舜等[40]研究发现,随着苜蓿黄酮饲喂剂量的增加,奶牛血清中I g G含量呈现先升高后下降的趋势㊂本试验中,两种中草药提取物对隐性乳房炎奶牛血清中免疫指标和抗氧化指标均产生了影响,可能是源于其含有的黄酮类㊁酚酸类等多种生物活性物质在体内发挥了生物学效应,进而增强了隐性乳房炎奶牛免疫及抗氧化能力㊂4结论在本试验条件下,饲粮中添加蒲公英和连翘提取物均能在不改变生产性能的情况下,降低隐性乳房炎奶牛乳中体细胞数,增强机体免疫及抗氧化能力,进而达到防控奶牛隐性乳房炎的效果㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] C A S T E L A N IL,A R C A R O J R P,B R A G A JE P,e t a l.S h o r tc o m m u n i c a t i o n:A c t i v i t y of n i s i n,l i p i db i l a y e r f r a g m e n t s a n dc a t i o n i c n i s i n-l i p id n a n o p a r t i c le sa g a i n s t m u l t i d r u g-r e s i s t a n t S t a p h y l o c o c c u s s p p.i s o l a t e df r o m b o v i n e m a s t i t i s[J].J o u r n a lo f D a i r yS c i e n c e,2019,102(1):678-683.[2] B L OW E Y R W,B L OW E Y R W,E D MO N D S O N P.M a 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一、实验目的1. 学习抗菌中药的提取方法，掌握常用提取溶剂及提取工艺。

2. 了解抗菌中药活性成分的检测方法，评估其抗菌活性。

3. 分析不同提取工艺对抗菌中药活性的影响。

二、实验原理抗菌中药的提取主要是通过溶剂法将植物中的有效成分提取出来。

根据植物成分的溶解性质，常用的提取溶剂有水、醇、酸、碱等。

本实验采用水提醇沉法提取抗菌中药，该方法能较好地保留有效成分，同时降低杂质含量。

抗菌中药的活性成分检测方法有多种，本实验采用抑菌圈法测定抗菌中药的抗菌活性。

该方法简单易行，结果准确可靠。

三、实验材料1. 药材：金银花、黄连、黄芩、连翘等。

2. 试剂：氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、乙醇等。

3. 仪器：电热恒温水浴锅、显微镜、抑菌圈测定仪等。

四、实验方法1. 提取工艺（1）取金银花、黄连、黄芩、连翘等药材，粉碎成粗粉。

（2）将粗粉置于提取罐中，加入适量水，加热提取1小时。

（3）过滤，取滤液，加入乙醇，使醇沉。

（4）过滤，收集沉淀，晾干，得到抗菌中药提取物。

2. 抗菌活性测定（1）将抗菌中药提取物溶解于无菌生理盐水中，配制成一定浓度的溶液。

（2）取无菌琼脂平板，加入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株，均匀涂布。

（3）将抗菌中药溶液滴加于平板表面，直径约为6mm。

（4）37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈大小。

五、实验结果与分析1. 不同提取工艺对抗菌中药活性的影响（1）水提醇沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为10mm、8mm。

（2）醇提水沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为7mm、5mm。

（3）酸提碱沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为6mm、4mm。

结果表明，水提醇沉法提取的抗菌中药活性成分含量较高，抗菌活性较强。

2. 抗菌中药提取物对不同菌株的抗菌活性（1）金黄色葡萄球菌：水提醇沉法提取的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为10mm，具有较好的抗菌活性。

几种中药提取液对常见的致病菌体外抑菌及抗氧化活性的初步研究历雪;夏青;李艳;赵凤胜;何秀霞【摘要】测试了四种中草药对4种常见的病原菌的单独、联合抑菌效果,旨在找到能够作为防腐剂、抗菌药膏有效的中草药成分,采用滤纸片法进行体外抑菌试验,利用二倍稀释法测定4种中草药提取液的最低抑菌浓度(MIC);同时通过DPPH法测定其抗氧化活性.结果表明,独角莲对全部的病原菌无抑菌作用,而黄连、迷迭香、大蒜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均有抑制作用,只有黄连对粘质沙雷氏菌有抑菌作用.以金黄色葡萄球菌为指示菌,迷迭香、黄连、大蒜的MIC值依次为1.95mg/mL,3.9mg/mL、50mg/mL,同时DPPH自由基清除能力依次为:迷迭香＞黄连＞独角莲＞大蒜.说明这3种中草药具有良好的抑菌及抗氧化作用,药物两两混合后,独角莲对迷迭香和黄连的抑菌能力有一定的促进作用,可以联合.【期刊名称】《长春理工大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(042)001【总页数】4页(P139-142)【关键词】中药提取液;病原菌;抑菌作用;抗氧化活性【作者】历雪;夏青;李艳;赵凤胜;何秀霞【作者单位】长春理工大学生命科学技术学院,长春130022;长春理工大学生命科学技术学院,长春130022;长春理工大学校医院,长春130022;长春理工大学生命科学技术学院,长春130022;长春理工大学生命科学技术学院,长春130022【正文语种】中文【中图分类】Q939.92食源性疾病[1-2]已经对人类的健康带来了严重的危害[3]，而全世界所有食源性疾病暴发案例中，有60%以上为细菌性致病菌污染食物所致的，食品的细菌污染是指暴露于环境中的食品通过不同途径被细菌污染，在细菌作用下腐败变质，失去其应有的营养成分，从而影响其食用性和安全性的现象。

人们在食用了被有害细菌污染的食品后，会发生各种中毒现象，同时细菌污染是最常见的食品污染之一。

连翘的功效与作用分析连翘作为清热药中的一种，他的很多功效也是很多网友所不能了解的。

下面内容为大家详细整理分析了连翘的功效与作用，以及相关的注意事项，下面我们就来具体了解一下吧。

连翘连翘喜光，有一定程度的耐荫性;喜温暖，湿润气候，也很耐寒;耐干旱瘠薄，怕涝;不择土壤，在中性、微酸或碱性土壤均能正常生长。

首先我们要来了解的是连翘的禁忌：脾胃虚弱，气虚发热，痈疽已溃、脓稀色淡者忌服。

在众多生物以及植物中，会有外形十分相似的物种，下面小编要带领大家来区别一下连翘与迎春。

连翘迎春与连翘的主要区别：1)迎春是木樨科茉莉属，植株外形呈灌木丛状，较矮小，枝条呈拱形、易下垂。

连翘是木樨科连翘属，外形呈灌木或类乔木状，较高大，枝条不易下垂。

2)迎春的小枝为绿色，连翘的小枝颜色较深，一般为浅褐色。

3)迎春的枝条是充实的，排有片状髓;连翘枝条中空无髓。

4)迎春是三小复叶，连翘是单叶或三叶对生。

5)迎春叶全呈十字形对称生长，叶片较小，卵状椭圆形，全缘，先端狭而突尖。

连翘叶卵形、宽卵形或椭圆状卵形，叶片较大，边缘除基部以外有整齐的粗锯齿。

6)迎春有六个花瓣，连翘则只有四个花瓣。

7)迎春花很少结实，连翘花结实。

连翘连翘主要用途在经济方面：连翘属于野生植物油料，连翘籽含油率达25%～33%，籽实油含胶质，挥发性能好，是绝缘油漆工业和化妆品的良好原料，具有很好的开发潜力，油可供制造肥皂及化妆品，又可制造绝缘漆及润滑油等，还富含易被人体吸收、消化的油酸和亚油酸，油味芳香，精炼后是良好的食用油。

[2] [4] 连翘提取物可作为天然防腐剂用于食品保鲜，尤其适用于含水分较多的鲜鱼制品的保鲜。

连翘提取物能有效抑制环境中常见腐败菌的繁殖，延长食品的保质期，是一种较有希望的成本低而安全的新型食品防腐剂口。

药用连翘主要含苯乙醇苷类、木脂体及其苷类、五环三萜娄、挥发油类等化合物。

药理研究认为其具有抗菌、抗炎、解热、镇吐、利尿强心、抗肝损、镇痛、抑制磷酸二酯酶、抗病毒、降血压、抑制弹性蛋白酶活力、抗内毒素等作用。

连翘苷的提取实验报告连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实。

连翘分布辽宁、河北、河南、山东、江苏、湖北、江西、云南、山西、陕西、甘肃等地。

连翘具有清热解毒，消肿散结等功效。

《日华子本草》记载："通小肠，排脓。

治疮疖，止痛，通月经。

"连翘常用于痈疽、乳痈、风热感冒、神昏发斑、温病初起、温热入营、热淋尿闭等。

连翘具有改善学习记忆障碍、舒张血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解热、抗DNA损伤、防护耳毒性等药理作用。

连翘苷为连翘主要成分之一。

连翘苷作为药用的为木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实的提取物，具有清热、解毒、散结排脓等功效。

本实验以连翘苷为指标对连翘提取工艺进行研究。

1仪器与试药实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；TMSH-6050B超级恒温水槽（上海添时科学仪器有限公司）；FA1204CFAC 型全自刃k子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；TY-727型可见分光光度计（台州斯帕克仪器仪表有限公司）；PHS-550智能型台式酸度计（杭州陆恒生物科技有限公司）；WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）。

连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。

乙腈（北京亚太龙兴化工有限公司）；甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）。

2方法与结果2.1单因素考察2.2.1提取次数取连翘除去杂质，筛去脱落的心及灰屑，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。

基于人呼吸道上皮细胞炎症模型的连翘提取物抗炎活性实验研究刘建洲;张立伟【摘要】通过复制LPS诱导的BEAS-2B炎症模型,探讨连翘提取物对炎症反应中炎性因子分泌的作用.采用WTT法检测BEAS-2B细胞活力,筛选连翘乙醇提取物(FSEE)、60％连翘酯苷A(60％ FTA)、90％连翘酯苷A(90％ FTA)最佳给药浓度;采用倒置显微镜观察连翘提取物对细胞作用后的细胞形态;采用Griess Reagent法检测细胞培养上清NO含量;流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的水平.毒性试验结果表明,连翘提取物浓度小于128 μg/mL时,对BEAS-2B细胞没有产生毒性;浓度在128～256 μg/mL时,60％ FTA与90％ FT A均表现出对细胞的毒性.抗炎结果表明,在给药浓度设置为25、50、100 μg/mL时,三种提取物均表现出减少NO 分泌的效果(P＜0.01),90％ FT A组存在剂量依赖关系;三种提取物可显著降低LPS 诱导的BEAS-2B细胞胞内活性氧的水平(P＜0.05),且呈量效关系.另外,FSEE、60％FTA、90％ FTA组间的治疗效果也逐渐增强.由此得出,90％ FT A为连翘提取物抗炎作用的主要活性部位,其抗炎活性成分可能为连翘酯苷A,这将为连翘抗炎活性的进一步研究提供基础.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2015(027)007【总页数】7页(P1248-1253,1265)【关键词】连翘提取物;连翘酯苷A;呼吸道上皮细胞;炎症模型;LPS【作者】刘建洲;张立伟【作者单位】山西大学分子科学研究所,太原030006;山西大学分子科学研究所,太原030006【正文语种】中文【中图分类】Q965.1连翘［Forsythia suspensa (Thunb.)Vahl.］始载于《神农本草经》，是传统常用中药，味苦，微寒，归肺、心、小肠经。

连翘具有清热解毒、消肿散结、疏散风热等功效［1］，临床中广泛用于对呼吸系统炎症、发热等病症的治疗［2］。

10 ·2022.04Experimental research | 试验研究0 引言大肠杆菌造成的腹泻是常见疾病和高致死率病症之一，是多种动物感染性腹泻的重要病原，并发现细菌性感染腹泻多见于机体的肠道内。

大肠杆菌的持续性危害在全球范围内都有许多报道。

研究发现肠道受到外界入侵屏障受损时，肠道可以积极抵御进一步的损害。

山西特产连翘茶（Forsythia suspensa ），主治清热、解毒、散结、消肿[1-3]。

连翘的抗菌谱极广，对常见的链球菌、沙门氏菌等都包含肉眼可见的抑菌效果[4]。

利用连翘茶干预大肠杆菌感染的小鼠，对比健康小鼠，探讨连翘茶改善肠道腹泻效果。

1 材料与方法1.1 材料与仪器健康雄性SPF 级小鼠35只，体重22～32 g ，购自太原康宝瑞实验动物技术有限公司；连翘茶，购自山西省晋城市陵川县乡土人家农业综合开发有限公司；大肠杆菌购自上海赫澎生物科技有限公司；石蜡、玻璃片、耐高温塑料染色架、二甲苯溶液、各种浓度酒精、苏木精溶液等购自上海化邦生物科技有限公司。

1.2 试验方法1.2.1 连翘茶提取物制备称取茶叶20 g ，加蒸馏水300 mL ，煮沸后过滤，茶叶放回锅中再加蒸馏水300 mL ，煮沸过滤，滤液倒入培养皿中，放置烘干箱100 ℃，待液体浓缩至膏状不流动。

取膏体加入定量的蒸馏水中，测得其饱和水溶液为50 mg/ mL ，配制50 mL 连翘茶饱和水溶液以备灌胃使用。

1.2.2 试验动物模型建立取健康SPF 级雄性小鼠30只，随机分配3组，空白对照组（A 组），连翘茶提取物组（B 组），连翘茶加大肠杆菌组（C 组），剩余的小鼠为试验备用鼠；试验总共进行14 d ，A 组每天定点灌胃0.2 mL 生理盐水；B 组每天定点灌胃0.2 mL 连翘茶提取物饱和溶液；C 组每天定点灌胃0.2 mL 连翘茶提取物饱和溶液，第14天灌胃完毕作者简介：杨雨彤（2000-），女，汉，河北石家庄人，本科，研究方向：连翘茶提取物对大肠杆菌感染小鼠肠道的试验性研究。

连翘化学成分及其药理学研究进展一、本文概述连翘，作为一种传统中药材，历史悠久，用途广泛。

近年来，随着现代科学技术的进步，对连翘的研究逐渐深入，特别是在其化学成分和药理学作用方面取得了显著的进展。

本文旨在综述连翘的化学成分研究以及药理学研究的最新成果，以期为连翘的进一步开发和利用提供科学依据。

在化学成分研究方面，连翘中含有多种活性成分，如黄酮类、苯乙醇苷类、木脂素类等。

这些成分在连翘的药理作用中发挥着重要作用。

近年来，研究者们利用先进的分离和检测技术，对连翘中的化学成分进行了系统的分析和鉴定，为深入研究其药理作用提供了物质基础。

在药理学研究方面，连翘具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。

近年来，研究者们通过体外实验、动物实验以及临床试验等多种手段，对连翘的药理作用进行了深入的研究。

这些研究不仅证实了连翘在传统医学中的应用价值，还为其在现代医学中的新用途提供了理论依据。

本文将对连翘的化学成分和药理学研究进行详细的综述，以期为读者提供一个全面、系统的了解。

我们也期望通过本文的探讨，能够为连翘的进一步研究和开发提供新的思路和方法。

二、连翘的化学成分连翘作为一种传统中药材，其化学成分丰富多样，主要包括黄酮类、苯乙醇苷类、木脂素类、挥发油类以及其他如有机酸、酚酸、萜类化合物等。

这些成分在连翘的药理作用中发挥着重要作用。

黄酮类：连翘中的黄酮类化合物主要包括连翘苷、连翘酯苷等，这些黄酮类化合物具有显著的抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，是连翘药材中的主要活性成分之一。

苯乙醇苷类：苯乙醇苷类是连翘中的另一类重要成分，如连翘酚苷、连翘醇苷等。

这些化合物具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种生物活性，对多种疾病的治疗具有潜在的应用价值。

木脂素类：木脂素类化合物也是连翘中的一类重要成分，如连翘木脂素等。

这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用，是连翘药材中的重要活性成分之一。

挥发油类：连翘中的挥发油类成分主要包括萜类化合物、醛类、酮类等，这些化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒等作用，对连翘的药理作用也有一定的贡献。

大蒜等12种中草药的体外抑菌实验【摘要】目的研究大蒜、辣椒粉、黄柏等12种常见中草药的体外抑菌性能及培养基对中草药抑菌效果的影响。

方法采用药敏纸片扩散法确定各中草药对各病原菌抑菌性能及最小抑菌浓度(MIC)。

结果辣椒粉对副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用，MIC分别为12.5%，12. 5%;大蒜对副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑菌作用，MIC分别为6. 25%，12. 5%;黄桕等常见中草药对各病原菌也都有一定的抑菌效果。

结论大蒜、辣椒提取物对特定病原菌有抑制作用，黄柏等常见中草药对各种病原菌均有较强抑菌效果。

培养基显著影响中草药抑菌效果。

【关键词】辣椒；大蒜；黄柏；药敏纸片扩散法；体外抑菌Abstract： ObjectiveTo study the inhibitory effect of capsicum, garlic and several herbs on pathogens. MethodsThe minimum inhibiting concentration (MIC) of these herbs on chosen pathogens was determined by K-B programm. ResultsCapsicum could inhibit S. typhimurium and S. aureus in vitro with MIC 12. 5% and 12.5% respectively; Garlic showed inhibitory effect on S. typhimurium and S. aureus with MIC 6. 25% and 12. 5% respectively; Other herbs had great inhibitory effect on chosen pathogens. ConclusionCapsicura and garlic can inhibit some pathogens in vitro. Traditional Chinese herbs such as Bark of Chinese Corktree can inhibit pathogens greatly. Medium affects inhibiting effect greatly.Key words： Capsicum; Garlic; Bark of Chinese Corktree; K-B programe; Inhibitory effect in vitro大蒜是人们日常饮食中的重要调味品，具有健胃开食、增进消化的功能，其辛辣成分大蒜素对多种病原菌及深部感染真菌有抑制作用[1，2]，在禽类及水产养殖方面对养殖动物能起到防病保健和促进生长的作用[3，4];此外，大蒜还有良好的抗氧化作用，可加入食用油延长其保质期[5];在疾病预防方面，经常进食大蒜可以提高血浆及红细胞抗氧化性能[6],并能有效降低血压，预防动脉粥样硬化和心脑血管疾病[7，8];大蒜还可以抑制结肠癌细胞的生长[9]，也可通过抑制硝酸盐还原细菌繁殖和亚硝酸盐合成预防胃癌的发生[10];除大蒜素外，大蒜还含有大蒜多糖等多种保健成分，可以和银杏叶制成天然保健饮料[11，12]。