药学微生物项目四培养基的配制[可修改版ppt]

三 实验材料
• 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蔗糖；可溶性淀 粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O 等。
• 高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱、超净工作台。 • 其它：天平、牛角匙、电炉、1MHCl、1MNaOH、pH
试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、玻璃珠、 三角瓶、带塞子的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、 吸管、各种包装纸、防水纸、标签等。
培养基的种类
据组成成分可分为:
1. 合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 （如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。） 2. 半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然 物质配制而成。（如马铃薯蔗糖培养基。） 3. 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
（如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。）
福建农林大学生命科学学院
药学微生物项目四培养基的 配制
营养六要素
• 碳源：提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、 蛋白质、核酸合成。
• 氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋 白质、核酸合成。
• 能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射 能。
• 生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。 • 无机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。 • 水分：水是保证生命活动重要的介质。
菌效力比干热大。其原因 通过加热，使灭菌锅隔套间的水 有三：一是湿热中细菌菌 沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧 体吸收水分，蛋白质较易 地将锅内的冷空气从排气阀中驱 凝固，因蛋白质含水量增 尽，然后关闭排气阀，继续加热， 加，所需凝固温度降低，
此时由于蒸气不能溢出，而增加 二是湿热的穿透力比干热
了灭菌锅内的压力，从而使沸点 大，三是湿热的蒸气有潜
• 过滤除菌 • 辐射灭菌
• 放射线辐照灭菌 • 紫外线灭菌
• 化学药品灭菌
加热灭菌——干热灭菌
❖ 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而 达到灭菌的目的。
❖ 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受 热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快， 反之含水量越少，凝固缓慢。
过滤除菌
不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血 清），一般可用细菌过滤器进行除菌。
紫外线灭菌法
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200-300nm 的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。 在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的 乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧 啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复 制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再 使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧 化氢（H2O2）。O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力 不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气 及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为 宜。
为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前； 可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3%～5%石炭酸 溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落， 另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌 面、凳子可用2%～3%的来苏尔擦洗，然后再开 紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。
化学药品灭菌
微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高 锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔 灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。
加富培养基：加富培养基是指在普通培养基里加过血、血 清、动物（或植物）组织液或其他营养物质（或生长因子） 的一类营养丰富的培养基，用以培养某种或某类营养要求 苛刻的异养微生物
选择培养基：选择培养基是根据某种或某一类群微生物的 特殊营养需要或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的 一类培养基。利用这种培养基可以将某种或某类微生物从 混杂的微生物群体中分离出来。
增高，得到高于100℃的温度。 热存在。这种潜热，能迅
导致菌体蛋白质凝固变性而达到 速提高被灭菌物体的温度，
灭菌的目的。
从而增加灭菌效力。
因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨 胀压，所以，当水蒸气中含有空气 时，在同一压力下，含空气蒸气的 温度低于饱和蒸气的温度。
一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温 度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量 等具体情况而有所改变。
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～ 170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超 过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起 燃烧。
湿热灭菌 1g水在100℃时，由气态变 为液态时可放出2.26kJ(千
高压蒸气灭菌是焦将)待的热灭量菌。的物 品放在一个密闭的加压灭菌锅内， 在同一温度下，湿热的杀
四 实验步骤
1. 称量 2. 溶化 3. 调pH 4. 过滤 5. 分装
6. 加塞 7. 包扎 8. 灭菌 9. 搁置斜面 10. 无菌检查
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 • 调pH值：用1MNaOH或1MHCl调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 • 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确
从培养基的物理状态可分为
1. 液体培养基：不加凝固剂（常用凝固剂为琼脂） 的液体状态培养基。
2. 固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的 凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3. 半固体培养基：在液体培养基中加入0.2-0.5% 凝固剂而成的半固体状培养基。
按照培养基的用途，可将其分为：
鉴别培养基：普通培养基中加入能与某种代谢产物发生反 应的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征性变化， 以区别不同的微生物
培养基 灭菌
❖ 配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微 生物
❖ 微生物生长繁殖：
➢ 消耗养分 ➢ 改变培养的酸碱度 ➢ 产生毒素或者抑制物
Hale Waihona Puke 灭菌方法• 加热灭菌
• 干热灭菌 • 湿热灭菌