3-1菊花的组织培养

课题1 菊花的组织培养

[课题目标]说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。

[课题重点与难点]植物组织培养过程中使用的无菌技术。

基础知识

（一）植物组织培养的基本过程

1. 植物组织培养的相关概念

（1）细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在_____、______和________上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因_________ 的结果。

（2）细胞的全能性：_______的植物细胞仍然具有发育成为__________的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。

（3）愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过__________过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种

__________的呈无定形状态的__________。

（4）脱分化：由______的植物组织或细胞产生_________的过程，称为脱分化，又叫去分化。

（5）再分化：脱分化产生的继续进行培养，又可以重新分化成_________，这个过程叫做再分化。

（6）外植体：用于离体培养的植物。

2. 植物组织培养的基本过程

（二）影响植物组织培养的因素

1.内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料，__________ ，________等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择的茎上部新萌生的侧枝。

2.外部因素：

（1）营养条件：常用的是______ 培养基，其主要成分包括： __________，如

_________________；__________ ，如_________________________ ；_________ 等。

（2）植物激素：植物激素中__________ 和__________ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。___________、______________ 以及________等，都会影响实验结果。

（3）环境因素：________ 、________ 、 _________等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一般pH控制在 ____ ；温度控制在 ______ ；每天用日光灯照射_____小时。

思考1：MS培养基中各营养成分各有什么作用？与微生物培养基的配方相比，有什么不同?

思考2：生长素使用的先后顺序、用量比例不同分别会造成哪些影响？

实验操作

（一）制备MS固体培养基：

实验室一般使用℃保存的配制好的来制备

1.配制各种母液。

配制母液时，大量元素浓缩__ 倍，微量元素浓缩___倍。常温保存。类、类以及用量比较小的可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的，计算用量。

2.配制培养基。

配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。调节___，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装__ _或。

3.灭菌。将分装好的连同其他一起进行灭菌。

（二）外植体消毒

选取菊花茎段时，要取 _____________的_______。

过程：流水冲洗→（可加少许洗衣粉）软刷刷洗→流水冲洗________→用

吸干外植体表面→体积分数为____的酒精中摇动2～3次，持续______→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的______溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次，漂净。

思考3：对培养材料进行消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？

注意：即使对于有经验的操作人员，操作后出现培养物被污染的情况也常有。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，如未戴口罩，接种时说话，或手及器械消毒不严等。真菌污染可能是植物材料灭菌不当。

思考4：为什么说无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键？

（三）接种

接种前，用体积分数70%的将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操

思考5：外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？

[知识补充]植物组织培养技术的应用

植物组织培养技术的应用范围是很广的，除了快速繁殖、培育无病毒植物外，还可以通过大规模的植物细胞培养来生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等。例如，从大量培养的紫草愈伤组织中提取的紫草素，是制造治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料。用植物组织培养的方法，诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题。此外，转基因植物的培育，也要用到植物组织培养的方法。【反馈练习】

1.把胡萝卜的单个韧皮部的细胞放入配制的培养基上培养，获得了许多完整的植株。这种繁殖方式和细胞工程技术分别属于

A.孢子生殖和细胞杂交技术B .无性生殖和植物组织培养

C. 配子生殖和细胞杂合技术

D. 卵式生殖和细胞培养

2.下面有关细胞分化的叙述不正确的是

A.细胞分化发生在生物体的整个生命过程中

B.细胞分化仅发生在胚胎时期

C.经过细胞分化会形成各种不同的细胞和组织

D.细胞分化是一种持久的变化。

3.细胞具有全能性的原因是

A.生物体细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能

B.生物体的每一个细胞都具有全能性

C.生物体的每一个细胞都含有个体发育的全部基因

D.生物体的每一个细胞都是由受精卵发育来的

4.胡萝卜韧皮部细胞通过组培，能发育成新的植株。下列有关叙述不正确是

A.说明高度分化的植物细胞具有全能性

B.植物细胞的全能性得以表达要离开母体

C.新植株的形成是细胞分裂和分化的结果

D.高度分化的动物细胞也具有全能

5.用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可形成愈伤组织，下列说法错误的是

A.该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的