木薯块根总RNA提取方法的比较和改进

西北林学院学报2020!35)3*+95-99JournalofNorth=estForestry?niversitydoi+103969,jissn1001-746120200315云南栘［木衣&十片总RNA提取方法的比较与改进慈晓彤12!石辰12!王大玮12%!沈莲文12!何承忠12!蔡年辉12!段安安12)1西南林业大学!云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室!云南昆明650224#2西南林业大学!西南山地森林保育与利用省部共建教育部重点实验室!云南昆明650224*摘要：高质量RNA的提取是开展云南栘+木衣］分子生物学研究的前提$采用OMEGA(Plant RNA Kit50)试剂盒、TIANGEN(TRNzo-A+Reagent)试剂盒、CTAB法、Trizol法、SDS法及其改良法6种方法提取云南栘+木衣，叶片的RNA#并用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测仪及RT-PCR技术比较了6种不同方法提取的总RNA样品的质量$结果表明，2种试剂盒法和trizol 法不适合云南栘+木衣］RNA提取，无法得到28S、18SrRNA条带，CTAB法和SDS法虽能得到RNA的3条带，但拖带现象严重,A260(A230的比值较低，对SDS法进行改进，提高.-巯基乙醇的量，在缓冲液中增加PLP，使用HiBind RNA Mini柱，有效地抑制多酚多糖的污染，得到了较高质量、可用于RT-PCR扩增的云南栘+木衣］的RNA$对其开展分子生物学研究提供技术支撑$关键词：云南栘+木衣,；叶片；RNA；比较与改进中图分类号:S722.39文献标志码:A文章编号：1001-7461(2020)03-0095-05ComparisonandImprovementofTotalRNA E xtraction MethodsfromA)0=n/a;ela?a=/Leaves=*X-7G.AG0112!+3*=,E012!O4:;V7.FE-12%!+3L:)-70.FE012!3L=,E01.\,G0112!=4*:-70.,9-12!V>4:40.7012(19Qe=7a2)rat)r=3)r<)re t Genet/0an;TreeR4pr)?e4entL(r)pagat/)n/n>n/?er/t/e)3M+nnan(r)?/n0e!#)+t-Ce t<)re t r=>n/?er/t=!Q+n4/ng650224!M+nnan!C-/na#29Qe=7a2)rat)r=3)r<)re t Ge)+r0eC)n e r?at/)nan;>t/l/Pat/)n/nt-e#)+t-Ce t I)+nta/n)3C-/na!#)+t-Ce t<)re t r=>n/?er/t=!Q+n4/ng650224!M+nnan!C-/na)4?@AB7CA+RNAextractionisaprerequisitefor molecularbiologyresearchof A)0=n/a;ela?a=/!aprecious treespeciesoccurringinsouth=esternChinaInthisstudy!OMEGA(PlantRNA Kit50)kit!TIANGEN (TRNzol-A+Reagent)kit!andthemethodsofCTAB!Trizol!SDS!andimprovedSDS=ereusedtoextract totalRNAfrom A9;ela?a=/leaves The amounts of total RNA extracted by di f erent methods=ere com-paredbygelelectrophoresis!nucleicacidprotein meterandRT-PCR Theresultssho=edthatthet=okits andtrizolmethod=erenotsuitableforRNAextractionbecause28Sand18SrRNAbandscouldnotbeob-tained CTABandSDSmethodscouldobtainthreebandsofRNA!butthetailingphenomenon=asserious! theratioofA260,A230=aslo=er SDS methodcouldbeimprovedbyincreasingtheadditionof.-mercapto-ethanol!addingPLPinthebu f er!andusingHiBindRNAMinicolumn!=hiche f ectivelyinhibitedthecon-tamination of polyphenol polysaccharide!and a higherquality RNA to be used for RT-PCR amplification couldbeobtainedItlaidthefoundationforitsmolecularbiologyresearchDE/FGBH@+A)0=n/a;ela?a=/#leaf#RNA#comparisonandimprovement云南栘［木衣%(Aoc=nia；elava=i)为蔷薇科(RosBceeie)栘［木衣］属(Doc=nia)植物，主要分布于收稿日期2019-08-17修回日期2019-11-27基金项目：国家林业和草原局林业科技发展项目（KJZXSA2019036*云南森林资源培育与利用协同创新中心开放基金。

木薯中lncRNA-CRR5在低温胁迫下的功能分析作者：沈婕董世满李淑霞彭明来源：《热带作物学报》2021年第01期摘要：低温胁迫严重影响木薯的生长、产量以及块根品质。

长链非编码RNAs （（lncRNAs）lncRNAs）作为关键的调节因子，在植物响应非生物胁迫过程中发挥重要的功能。

然而，lncRNAs在木薯中的功能和调控机制尚无报道。

因此，为了研究木薯lncRNAs在低温胁迫应答中的功能，本研究以木薯主栽品种‘60444’为材料，利用低温处理前后的叶片转录组数据，鉴定到一个受低温胁迫调控的lncRNA（cold-responsive lncRNA5，CRR5）。

通过对其序列比对进行同源性分析， RNA二级结构预测和共表达分析鉴定来分析lncRNA-CRR5响应低温胁迫的分子功能。

并根据基因的共表达分析推测CRR5的顺式作用和反式作用靶基因。

这些结果为更进一步研究CRR5的功能提供了理论依据。

关键词：木薯;低温胁迫;lncRNA;功能分析;同源性分析;RNA二级结构预测;共表达基因分析;靶基因中图分类号：S533 文献标识码：AAbstract： Low temperature stress seriously affects the growth and yield of cassava and the quality of roots. Long non-coding RNAs （lncRNAs） function as major regulators， have been shown to play essential roles in plants in response to abiotic stresses. However， the function and regulation mechanism in cassava has not been reported yet. Therefore， in order to investigate the function of lncRNAs in low-temperature response， we identified a cold-responsive lncRNA 5 （CRR5）from the transcriptome data using cassava cultivars ‘60444’as the material. We analyzed the molecular function of lncRNA-CRR5 in response to low temperature stress by homology analysis， RNA secondary structure prediction and co-expression analysis. The cis-acting target gene and trans-acting target gene of CRR5 were predicted based on the analysis of gene co-expression. The results would provide a new perspective theoretical basis for further exploring the response of CRR5 to low temperature.Keywords： cassava; cold stress; lncRNA; functional analysis; homology analysis; RNA secondary structure; co-expression gene analysis; target genesDOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.01.006木薯（Manihot esculenta Crantz）是热带、亚热带地区重要的经济作物，在中国广东、广西、海南等省份被广泛种植。

植物组织RNA提取的难点及对策从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。

要进行Northern 杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。

因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。

一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。

在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA 相互作用。

酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。

对于这些植物材料，用常规的RNA提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA。

如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA时未能成功，他们的结果分为三种情况：提出的RNA已被降解；RNA的得率很低；得到的RNA不能进行体外翻译。

他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强，其中也包含RNase，不溶性的淀粉转化为可溶性的多糖，芒果果实细胞壁中特殊的成份，以及果实中高含量的多酚化合物都是干扰RNA 提取的因素。

Tesniere等在用苯酚法和胍法提取葡萄果实的RNA时，发现RNA与某种未知化合物凝聚成不溶性的复合物，并且这种未知化合物在230nm和270nm处有强的光吸收，从而干扰了RNA紫外吸收的测定。

因此能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA提取的其它代谢产物是提取高质量植物RNA成败的关键。

本文根据文献综述了解决上述植物RNA提取过程中难点的相应对策。

木本植物组织总RNA提取的要点与原理1)王玉成杨传平姜静(东北林业大学,哈尔滨,150040)摘要根据提取木本植物组织RNA时所获得的知识和经验,对木本植物组织总RNA提取时所遇到的提取产量低、RNA降解、多酚物质干扰、DNA干扰、多糖干扰、蛋白质干扰及杂质干扰等问题进行了探讨,并提出了具体的解决方法。

同时,对各种常用的RNA提取方法进行了分类,并对它们的原理及优劣进行了论述与评价。

关键词木本植物;RNA提取;总RNA分类号Q522The M ain Points and Principles of Isolating Total RNA from Ligneous Plant Tissues/Wang Yucheng,Yang Chuanping, Jiang Jing(Northeast Forestry University,Harbin150040,P.R.China)//Journal of Northeast Forestry University.-2002,30 (2).-1~4According to the knowledge and experiences acquired in isolating total RNA from ligneous plan t tissues,the authors probe in and discuss the problems that often occur in i solating total RNA from ligneous plant tissues,such as low RNA ou tput,RNA de-grading,the interference of hydroxybenzenes,DNA,amylose,protein and other i mpuri ties,then bring forward the resolvable ways of these problems in particular.Meanwhile,sort the RNA isolating ways in common use into some categories,and also di s-cuss their principles and evaluate their strongpoints and inferiors.Key words Ligneous plant;RNA isolation;Total RNA提取木本植物完整的总RNA,是对其进行分子水平遗传分析及基因克隆的重要一环。

植物总rna的提取实验报告(共4篇) 植物总RNA的提取实验植物总RNA 的提取RNA 的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调节和cDNA 的合成都是必须的，RNA 的纯度和完整性对于Northern blot，RT-PCR 和cDNA 文库的构建等分子生物学实验都至关重要。

RNA 分离的方法很多，最关键的因素是尽量减少RNA 酶的污染。

本实验采用异硫氰酸胍(GTC)和β-巯基乙醇等抑制RNA 酶利用GTC 和N-十二烷基肌氨酸钠将促使核蛋白复合体解离，使RNA 与蛋白质分离,并将RNA 释放到溶液中, 用乙醇沉淀方法分离RNA。

本实验从番茄幼苗中提取总RNA 的提取，掌握Trizol 提取的方法和步骤。

一材料与方法1. 植物组织设备番茄（Lycopersiconesculentum）幼苗为材料，利用移液器，冷冻高速离心机，低温冰箱，台式高速离心机，液氮罐，陶瓷研钵，1.5ml 离心管等设备。

2. 试剂本实验中所有试剂均用无RNA 酶灭菌水，用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2 小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌而得到。

75%乙醇，氯仿:异戊醇(24 : 1 by volume) 或氯仿，异丙醇、无水乙醇、70％乙醇，Trizol 试剂等试剂由分子生物学实验室提供。

3. 实验方法1. 50-100mg 组织在液N 中磨成粉末后，加入1ml Trizol 液，注意样品总体积不能超过所用Trizol 体积的10%。

2. 研磨液室温放置5 分钟，然后以每1mlTrizol 液加入0.2ml 的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15 秒。

3. 取上层水相于一新的离心管，加入等体积异丙醇，室温放置10 分钟，10000r/min 离心10 分钟。

4.弃去上清液，按每ml Trizol 液加入至少1ml 的比例加入70%乙醇，涡旋混匀，4℃下10000r/min 离心5 分钟。

木薯块根总RNA 提取方法的比较和改进余洁,郭运玲,郭安平3,贺立卡　(中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口571101)摘要　[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA 提供科学依据。

[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA ,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT 2PCR 技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA 的质量。

[结果]结果表明,用改进的CT A B 法和plant RNA Reagent kit 均能提取高质量的RNA ,用plant RNA Reagent 更能节省时间,而且纯度比较高。

对plant RNA Reagent 提取的RNA 进行RT 2PCR 克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的S BEII 基因。

[结论]plant RNA Reagent kit 提取的RNA ,其质量可以满足基本的试验要求。

关键词　木薯;块根;总RNA 提取;S BEII 基因;基因克隆中图分类号　S533 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2008)12-04872-02Comp arison and Improvem ent of the M ethod of E xtraction T otal RNA form T ubers of Manihot esculenta C rantzYU Jie et al (Institute of T ropical Bioscience and Biotechn ology ,C A T AS ,H aik ou ,H ainan 571101)Abstract [Objective]T he purpose was to provide the scientific basis for im proving the quality of Manihot esculenta Crantz and extracting the high 2quality total RNA form tubers of Manihot esculenta Crantz by genic m eth od.[M eth od]T he best sim ple and effective m eth od from four m easures which can extract RNA form tubers of M anih ot esculenta Crantz was applied.Branching enzym e of cassava was cloned w ith RT 2PCR techn ology and the quality of RNA ex 2tracted was analyzed.[Result ]T he results sh owed that the developed CT A B and plant RNA Reagent kit could get the high 2quality RNA ,and the latter was w ith the less tim e and higher purity.By RT 2PCR cloning RNA extracted w ith plant RNA Reagent kit ,S BE LL gene which was related to synthesis of the cassava was g ot .[C onclusion]T he quality of RNA extracted w ith plant RNA Reagent kit can m eet the dem ands for ex perim ent.K ey W ords Manihot esculenta Crantz ;T uber ;E xtraction of total RNA ;S BEII gene ;G ene clone基金项目　中央级公益性科研院所基本科研业务费项目“热带能源植物遗传改良与分子育种”中国热带农业科学院科技基金项目(RKY 0724)。

木本植物组织总rna提取的要点与原理木本植物的组织RNA提取需要注意以下几点：
1.样品准备：样品应当避免受到外界污染，同时保持绿色和新鲜的状态以保证RNA的完整性。

2.细胞破碎：样品需要完全破碎以释放RNA。

一般而言，用组织研磨器或液氮粉碎器破碎都可以。

3. RNA提取：RNA可以用多种方法提取，如TRIzol法、Qiagen RNAeasy kit等。

其中TRIzol法适用于大样品量，但要注意该试剂易溶解于有机溶剂，应当注意储存条件。

4. RNA清洗与分离：RNA提取后，需要清洗以去除杂质并分离出所需的RNA。

一般可以使用RNase-free DNase I消除DNA污染，同时也可以使用RNA纯化柱进行纯化和分离。

RNA的提取原理主要基于RNA的特性。

RNA是由核苷酸组成的，其核苷酸顺序的不同可控制蛋白质的合成。

RNA在细胞中的主要功能是在转录过程中将DNA编码信息转移到蛋白质合成机构上。

RNA提取的目标是从样品中分离出RNA，并去除杂质。

RNA的提取包括细胞破碎、沉淀、清洗、分离等步骤，常常要利用试剂或仪器进行加工。

RNA提取心得一组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。

2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80°或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4°，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。

注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。

如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。

后面的步骤和细胞RNA提取一样。

二培养细胞的RNA提取1.贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到离心管中，离心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。

悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。

然后离心去上清，不需要用PBS洗。

2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10分钟。

（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80°，用的时候提取和新的提取的效果一样。

）在冰上操作。

3.上面的混匀5-10分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。

我只介绍一些需要注意的地方。

1.一定要注意冰上操作，低温离心。

2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。

3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。

4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC 浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。

5.吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。

一种植物总RNA的快速提取方法刘芬;于秀梅;刘大群【摘要】为验证NaAc/无水乙醇沉淀法提取植物总RNA的质量,本研究对小麦不同组织及其他不同种属植物花的总RNA进行提取和检验,结果表明,该方法提取的植物总RNA完整性好、纯度高.以Tubulin为参照对其余4个持家基因GAPDH、Actin、Rubisco和Ubiquitin的表达情况进行分析.扩增结果表明,选定的各持家基因在叶锈菌侵染不同时间的小麦叶片中的表达量并不一致,且各基因在小麦叶片中的丰度也存在差异.通过对几种基因的扩增,进一步证实该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物总RNA提取方法.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2010(025)002【总页数】5页(P140-144)【关键词】植物;总RNA提取;持家基因;小麦;RT-PCR【作者】刘芬;于秀梅;刘大群【作者单位】河北农业大学,生命科学学院,河北,保定,071001;河北农业大学,生命科学学院,河北,保定,071001;河北农业大学,植物保护学院,河北,保定,071001;河北农业大学,植物保护学院,河北,保定,071001;河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S512.101;Q522.03RNA的提取技术是分子生物学研究领域的基本操作之一。

由于RNase广泛存在，又不易变性失活，RNA很容易被内源及外源的RNase降解，所以高质量的总RNA的获取方法一直是研究者们关注的焦点之一。

目前已经有多种总RNA的提取方法在动物、植物及微生物等材料上应用，且不同方法对材料的针对性和选择性较强。

已有研究表明，同种植物的不同组织其RNA提取方法会有很大的差异[1-3]。

基因型不同的同种植物材料，其最适的RNA提取方法也不尽相同[4]。

因此不同的组织和材料，其总RNA提取方法往往需要通过试验进行确定。

RNA 抽提比基因组DNA 抽提要困难得多。

事实上,现有的RNA 抽提方法/试剂,如果用于从培养细胞中抽提RNA,比抽提基因组DNA 更方便,成功率也更高。

那为什么同样的方法用于组织RNA 的抽提,总会碰到问题呢?组织RNA 抽提失败的两大现象是:RNA 降解和组织内杂质的残留。

关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA 不容易降解。

现有的RNA 抽提试剂,都含有快速抑制Rnase 的成分。

在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有的细胞与裂解液充分混匀,细胞被彻底裂解。

细胞被裂解后,裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的Rnase,所以RNA 得以保持完整。

也就是说,培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触,所以其RNA 不容易被降解;反过来讲,组织中的RNA 之所以容易被降解,是因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触所致。

因此,假定有一种办法,在抑制RNA 活性的同时能使组织变成单个细胞,降解问题也就可以彻底解决了。

液氮碾磨就是最有效的这样一种办法。

但是,液氮碾磨方法非常麻烦,如果碰到样品数比较多的时候更加会有此感觉。

这样就产生了退而求其次的方法:匀浆器。

匀浆器方法没有考虑细胞与裂解液接触前如何抑制Rnase 活性这个问题,而是祈祷破碎组织的速度比细胞内的Rnase 降解RNA 的速度快。

电动匀浆器效果较好,玻璃匀浆器效果较差,但总的来说,匀浆器方法是不能杜绝降解现象的。

因此,如果抽提出现降解,原来用电动匀浆器的,改用液氮碾磨;原来用玻璃匀浆器的,改用电动匀浆器或者直接用液氮碾磨,问题几乎100% 能获得解决。

影响后续实验的杂质残留问题,其原因比降解更多样,解决方法响应也不同。

总之,如果出现降解现象或者组织内杂质残留现象,则必须对具体实验材料的抽提方法/试剂进行优化。

优化大可不必使用您的宝贵样品:可以从市场上购买一些鱼/鸡之类的小动物,取相应部分的材料用于RNA 抽提,其它部分用于抽提蛋白质–用嘴碾磨,肠胃抽提。

实测植物总RNA提取液套装提取土豆、桑叶中的RNA一直以来，搞植物研究的同学们对Trizol试剂提取植物RNA诟病不断，在这样的背景和需求下，我们特别研发了植物总RNA提取液套装，套装中除了植物总RNA提取液外，还包括了Buffer EX(氯仿替代品)，RNA沉淀液（异丙醇替代品）以及β-巯基乙醇。

真可谓一个套装在手，提取植物RNA无烦恼！现在我们特别选择了土豆块茎（Trizol试剂提取失败）和桑叶（Trizol试剂提取效率极低）两个典型样本实测植物总RNA提取液套装的效果。

实验目的：用植物总RNA提取液套装从桑叶和土豆块茎中提取RNA。

实验材料：桑树叶片、土豆块茎，研钵，植物总RNA提取液套装（Simgen Cat.No.5123100）超微量电子天平（DENVER INSTRUMENT，TP-213）旋涡震荡器（越新仪器，XH-C）台式离心机（eppendorf Centrifuge5415D）超微量分光光度计（Simgen Cat.No.sim100）电泳仪（北京六一仪器厂，DYY-6C型）土豆内参引物（F：ATTGGAAACGGATATGCTCCA/R：TCCTTACCTGAACGCCTGTCA）2×One Step SYBR Green RT-qPCR Mix（Simgen Cat.No.7405500）荧光定量PCR仪（ABI7500）实验内容：1.在研钵中加入约300mg小块的土豆块茎或桑树叶片，加入1.8ml已加入β-巯基乙醇的植物总RNA提取液，然后用研磨棒进行研磨，直至组织呈匀浆状。

2.吸取700µl混合液分装到两个1.5ml离心管中（备注：在植物总RNA提取液套装说明书中步骤1、2要求将植物样本经液氮磨成粉末状后再按每管100mg的量分装到1.5ml 离心管中，每管再加入600µl含β-巯基乙醇的植物总RNA提取液）。

3.加入600µl Buffer EX，用力混合均匀，13000rpm离心10分钟。

Science &Technology Vision 科技视界RNA 是转录水平上研究基因表达与调控机制的载体,是基因操作的重要对象。

它主要包括3种:rRNA 占82%,tRNA 占16%,mRNA 占2%[1]。

RNA 是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA 的降解,而且植物组织RNA 的提取较动物和微生物困难,如酚类物质氧化后可使RNA 活性丧失[2],多糖可形成难溶胶状物质与RNA 一起被沉淀[3],所以细胞内RNA 分子的多样性和易被降解决定了其提取过程的复杂性。

所有RNA 的提取过程都包括以下5个要点:即样品细胞或组织的彻底破碎;有效地使核蛋白复合体变性;对内源RNase 的有效抑制;充分地将RNA 从DNA 和蛋白质混合物中分离;对于多糖含量高的样品还需要将多糖杂质完全除去。

其中最关键的是抑制RNase 活性[4]。

由于RNA 的提取对分子生物学的研究至关重要,所以纯度高、浓度高、完整性好的RNA 为基因的下游操作例如:Northern 杂交、mRNA 纯化、互补DNA 文库的构建及PT-PCR 等提供了良好的保证[5]。

但是,有关植物总RNA 提取方法与难点对策分析的总结迄今仍不完整。

2005年谷守芹等讨论了植物组织总RNA 提取的常用方法及检测技术[6]。

2009年杨占军等简要介绍了几种植物组织总RNA 的提取方法,总结了在提取过程中遇到的酚类物质、多糖和蛋白质的干扰及外源RNase 污染等问题[7]。

本文较系统总结了近年有关植物组织总RNA 提取的方法、适用范围及提取过程中出现的问题和具体的解决策略,以期为总RNA 提取方法的比较研究提供参考。

1植物组织总RNA 提取的方法1.1化学试剂提取1.1.1强变性剂法1968年,Cox 首次运用胍盐从富含RNase 的植物材料中抽提出无降解的RNA [8]。

胍盐和异硫氰酸胍都是强的蛋白质变性剂,可以很快的抑制RNase 而保证分离出完整的RNA [9]。

专利名称：一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法专利类型：发明专利
发明人：任军方,周新成,陈新,卢诚,王文泉,蔡嘉慧
申请号：CN202010734172.7
申请日：20200727
公开号：CN111855853A
公开日：
20201030
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明申请属于种质资源学技术领域，具体公开了一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法，包括对木薯的叶片和块根部位进行取样，然后经65℃水浴预热过的85％甲醇混合处理，并放入100℃水浴内加热后于冰上充分冷却，而后通过离子阱质谱仪对氰苷进行提取。

本方案主要应用在对木薯中氰苷含量的提取过程中，可做为木薯食用品种选育中氰苷含量鉴定的有效方法，解决了现有技术中对木薯直接提取氰苷的方法存在提取周期较长、组织样品的需求量较大、同一样品测定结果变幅较大的问题。

申请人：海南省农业科学院热带园艺研究所
地址：571199 海南省海口市流芳路9号
国籍：CN
代理机构：北京国坤专利代理事务所(普通合伙)
代理人：赵红霞
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木薯块根总RNA提取方法的比较和改进余洁;郭运玲;郭安平;贺立卡【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2008(036)012【摘要】[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据.[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量.[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNA Reagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNA Reagent更能节省时间,而且纯度比较高.对plant RNA Reagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因.[结论]plant RNA Reagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求.【总页数】3页(P4872-4873,4887)【作者】余洁;郭运玲;郭安平;贺立卡【作者单位】中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口,571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口,571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口,571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口,571101【正文语种】中文【中图分类】S533【相关文献】1.近缘两个木薯品种块根蛋白质组比较分析 [J], 张振文;罗秀芹;林立铭;陈松笔2.不同淀粉含量木薯品种块根淀粉粒结构观察比较 [J], 张玉;罗兴录;黄学荣;朱艳梅;宁瑜3.不同淀粉含量木薯品种块根淀粉粒结构观察比较 [J], 张玉;罗兴录;黄学荣;朱艳梅;宁瑜;;;;;;4.基于改进蜘蛛群集算法的木薯收获机块根拔起速度优化 [J], 杨望;李杨;郑贤;陈科余;杨坚;莫建霖;隋明君5.木薯周年生产中不同采收期的块根品质比较分析 [J], 王颖;谢向誉;曹升;严华兵;李明娟;张雅媛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种快速高质量植物总RNA提取方法介绍
刘文宝
【期刊名称】《山东蔬菜》
【年(卷),期】2007(000)002
【摘要】植物总RNA的提取方法很多，但是多数步骤烦琐，耗时较长，而且最后RNA的提取质量不高。

采用Trizol法虽然所提RNA的质量较高，但是价格昂贵。

本实验室在长期实践中摸索出一套快速高质量的植物总RNA的提取方法，现介绍如下：
【总页数】1页(P48)
【作者】刘文宝
【作者单位】山东省农业科学院科技开发总公司,济南,250100
【正文语种】中文
【中图分类】S6
【相关文献】
1.一种用于黄曲霉高质量总RNA提取方法与应用 [J], 林剑青;王成成;肖春华;陈国华;贺竹梅
2.活性污泥高质量总RNA提取的一种有效方法 [J], 黎秋华;李平;陈忠正;吴锦华;梁世中
3.棉花高质量总RNA提取的一种有效方法 [J], 窦道龙;王冰山;唐益雄;王志兴;孙敬三
4.半夏块茎高质量总RNA提取的一种有效方法 [J], 黄月琴;徐有明;薛建平
5.油菜种子高质量总RNA提取的一种有效方法 [J], 丁勇;刘英;杨鸯鸯;甘莉
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