8章 放射免疫技术(免疫学)

比放射
单位化学量标 记物中所含的放 射性强度 单位：Ci/g mCi/mg Ci/mmol 比放射性过高， 将影响标记物免 疫活性
免疫活性
亲和性
特异性
效价
免疫复合物与游离抗原的分离
分离方法要求： 简便 效果要好、快速 试剂稳定、价廉 不易受干扰 适合自动化
常用分离方法：
吸附去附游离抗原法：加吸附剂
抗原抗体反应：
1）平衡法：标记与非标记Ag同时与Ab反应
2）顺序饱和法：待测Ag先与Ab反应，后加入Ag*
B和F的分离
放射性强度测定
数据处理
第三节 免疫放射分析
Miles将放射性核素标记胰岛素抗体， 用双抗体夹心检测血清胰岛素，为区别放 射免疫分析法，将之称为免疫放射分析。
一、免疫放射分析－基本原理
似ELISA技术。 以125I标记抗体与待测抗原进行非竞争性免
疫结合反应, 用固相免疫吸附剂对B或F进行分
离，其灵敏度和可测范围均优于RIA操作也较
RIA简单。
分为直接法和双抗体夹心法
单位点 IRMA
先用过量标记抗体与 待测抗原进行反应，形 成抗原抗体复合物；用 固相抗原吸附游离的标 记抗体，分离, 测定上 清液的放射量
以标记抗原与反 应系统中未标记 抗原竞争结合特 异性抗体来测定 待检样品中抗原 量。
以过量标记抗体 与抗原非竞争结 合，采用固相免 疫吸附载体分离 游离和结合标记 抗体。
二、常用的放射性核素
常用标记核素
125I 3H
射线 理化性
γ 活泼
β 差
核素丰度
半衰期 标记方法 标记设备 测量条件
>90%
60.2d 简单 低廉 简单
结合率与测值成反比
IRMA
抗体 非竞争结合
固相
Ab、Ab*、Ag 快 高
宽 1~2 数量级 优（McAb）
结合率与测值成正比
大小分子
二抗原决定簇
放射免疫分析技术的应用
1. 常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志
物和药物等微量物质的测定。
2. 药理学方面
3. 其它
思考题
1.反应结束后，如何将免疫复合物与游离标记物分离？ 2. 免疫放射分析与放射免疫分析的反应原理有何不同？
第八章 放射免疫技术
1986年前苏联切尔诺贝利核灾难
可怕吗？ Yalow和Berson利用放射性核素标记胰岛素，建 立了放射免疫分析技术。 于1977年获得诺贝尔生理医学奖
掌握:
1.掌握标记免疫技术的概念； 2.放射免疫分析及免疫放射分析的原理。 熟悉:
1. RIA与IRMA的异同点及技术要点。 2.放射免疫技术的特点及应用。
优点：灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用
量少、操作简便且易于标准化等
缺点：放射性元素污染
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合
反应原理的放射免疫分析(RIA)；
稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射
分析(IRMA)。
一、放射免疫技术－原理及分类
放射免疫
RIA
免疫放射
IRMA
其它 放射受体分析 RRA 放射配体结合 分析RBA
125碘-标记物的制备－纯化
凝胶过滤法 离子交换层 析法 聚丙烯酰胺 凝胶电泳 高效液相色 谱法
标记蛋白
聚合、 损伤物
游离125I
125碘-标记物的制备－鉴定
标记物质量 放射化学纯度 比放射性 免疫活性
放射化学纯度 单位标记物中结合于被标记物 上的放射性占总放射性的百分率 应大于95%
化学沉淀法：选择沉淀分离复合物
双抗体法：加抗抗体
PR试剂法：双抗体法+化学沉淀法
固相分离法：磁颗粒法为常用
第二节 放射免疫分析
一、放射免疫分析－基本原理
竞争性结合反应： 标记抗原（Ag*）和 非标记抗原（Ag）
与限量抗体(Ab)竞
争性结合
Ag*和Ag具有等同
的与Ab结合能力
技术要点
主要内容
第一节 概述 一、常用的放射性核素 二、标记物制备及鉴定 三、免疫复合物的分离 第二节 放射免疫分析 一、基本原理 二、实验方法及测定 第三节 免疫放射分析 一、基本原理 二、IRMA与RIA的比较
第一节 概述
放射免疫技术（radioimmunoassay technique)： 是以放射核素为示踪物的一种免疫标记测定技术。
双位点 IRMA
先用固相抗体与抗原 结合，再用过量的标 记抗体与抗原的另一 决定簇结合，形成固 相抗体-抗原-标记抗 体复合物，洗弃剩余 标记抗体，测固相上 放射性。
二、IRMA与RIA比较
RIA
标记物 原理 反应体系 反 动 学 应 力 灵敏度 检测范围 特异性 标准曲线 待测抗原 抗原 竞争性结合 Ag*、Ag、Ab 慢 相对低 窄 差（PcAb）
－
12.3y 复杂 昂贵 复杂
三、标记物制备及鉴定
125碘-标记物的制备－标记
直接标记法
I-氧化成碘原子或I+， 通过取代反应置换被标 记物分子中酪氨酸或酪 胺残基以及组胺残基上 的氢原子。
125I-
பைடு நூலகம்
125I或125I+
取代反应
125I-标记物
（混合物）
间接标记法
先将125I 标记在含酪氨酸 残基上，与蛋白分子上的 氨基酸残基反应，从而使 待标记物被碘化。