成人重症肌无力1642例抗核抗体和抗核抗体谱检测结果分析

成人重症肌无力１６４２例抗核抗体和
抗核抗体谱检测结果分析
冯　苏，梁翠娟，程丽姗，潘　婧，宋国威，梁　芸
（石家庄市第一医院检验科，河北石家庄０５００１１）
摘要：目的　研究抗核抗体（ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ，ＡＮＡ）和抗核抗体谱在成人重症肌无力中的分布和临床意义。

方法　采用间接免疫荧光法（ＩＩＦ）检测１６４２例成人重症肌无力患者抗核抗体，免疫印迹法同时检测ＡＮｕＡ、Ａｎｔｉ Ｐ、ａｈａ、ＡＭＡＭ２、ＣＥＮＰＢ、Ｊｏ １、ＰＣＮＡ、ＰＭ Ｓｃｌ、Ｒｏ ５２、ＳＣＬ ７０、ＳＳ Ｂ、Ｓｍ、ｄｓＤＮＡ、ｎＲＮＰ／Ｓｍ、ＳＳ Ａ共１５种抗核抗体。

结果　在１６４２例成人重症肌无力患者中，ＡＮＡ阳性率为３９．０％，其中男性阳性者占３２．１４％，女性阳性者占６７．８６％，二者差异有统计学意义（Ｐ＜０．００１）；同性别不同年龄组间ＡＮＡ阳性率差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；同年龄组间女性ＡＮＡ阳性率均高于男性（Ｐ＜０．００１）。

成人重症肌无力ＡＮＡ阳性患者荧光模式分析结果表明，单一荧光核型以均质型最多（３４．１７％），其次是核斑点型（２８．５５％）和胞浆型（１４．９８％）。

混合荧光模式以核斑点型／细胞浆型（Ｓ／Ｃ）为主（４．８４％）。

ＡＮＡ阳性患者滴度以１∶１００为主，占５７．５７％。

抗核抗体谱以Ｒｏ ５２、ＳＳ Ａ、ＡＭＡＭ２和ＣＥＮＰＢ阳性率较高，约７０％ＡＮＡ均质型阳性标本中其ＡＮＡ谱为阴性。

结论　成人重症肌无力患者ＡＮＡ阳性率女性显著高于男性，高年龄组阳性率更高。

ＡＮＡ荧光核型以均质型、核斑点型和胞浆型为主，ＡＮＡ谱以Ｒｏ ５２、ＳＳ Ａ、ＡＭＡＭ２和ＣＥＮＰＢ阳性率较高。

约７０％ＡＮＡ均质型阳性标本中其ＡＮＡ谱为阴性，因此均质型中高度怀疑有其他重症肌无力特异性抗体未被识别。

关键词：重症肌无力；　抗核抗体；　抗核抗体谱；　自身免疫性疾病；　滴度
中图分类号：Ｒ７４６．１ 文献标识码：Ａ
ＡｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＴｅｓｔｉｎｇＲｅｓｕｌｔｓｏｆＡｎｔｉｎｕｃｌｅａｒＡｎｔｉｂｏｄｙａｎｄＡｎｔｉｎｕｃｌｅａｒＡｎｔｉｂｏｄｙＳｐｅｃｔｒｕｍｉｎ１６４２ＡｄｕｌｔｓｗｉｔｈＭｙａｓｔｈｅｎｉａＧｒａｖｉｓＦＥＮＧＳｕ，ＬＩＡＮＧＣｕｉｊｕａｎ，ＣＨＥＮＧＬｉｓｈａｎ，ＰＡＮＪｉｎｇ，ＳＯＮＧＧｕｏｗｅｉ，ＬＩＡＮＧＹｕｎ
（ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｓｏｆａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ（ＡＮＡ）ａｎｄａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙｓｐｅｃｔｒｕｍ（ＡＮＡｓ）ｉｎａｄｕｌｔｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＩＩＦ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＡＮＡｉｎ１６４２ａｄｕｌｔｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＡＮＡｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ１５ｍａｒｋｅｒｓｓｕｃｈａｓＡＮｕＡ，Ａｎｔｉ Ｐ，ａｈａ，ＡＭＡ Ｍ２，ＣＥＮＰＢ，Ｊｏ １，ＰＣＮＡ，ＰＭ Ｓｃｌ，Ｒｏ ５２，ＳＣＬ ７０，ＳＳ Ｂ，Ｓｍ，ｄｓＤＮＡ，ｎＲＮＰ／Ｓｍ，ａｎｄＳＳ Ａ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｍｏｎｇ１６４２ａｄｕｌｔｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ，ｔｈｅＡＮＡｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｗａｓ３９．０％，ｏｆｗｈｉｃｈｍｅｎａｃｃｏｕｎｔｅｄｆｏｒ３２．１４％ａｎｄｗｏｍｅｎａｃｃｏｕｎｔｅｄｆｏｒ６７．８６％（Ｐ＜０．００１）；ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＡＮＡａｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｇｅｇｒｏｕｐｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｓｅｘｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜０．０５）；ｔｈｅＡＮＡｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎｗｏｍｅｎｔｈａｎｍｅｎｉｎｔｈｅｓａｍｅａｇｅｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．００１）．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｏｆＡＮＡｐｏｓｉｔｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｓｔｓｉｎｇｌｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｋａｒｙｏｔｙｐｅｗａｓｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ（３４．１７％），ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｓｐｅｃｋｌｅ（２８．５５％）ａｎｄｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ（１４．９８％）．Ｔｈｅｍｉｘｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｋａｒｙｏｔｙｐｅｗａｓｍａｉｎｌｙｎｕｃｌｅａｒｓｐｏｔ／ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ（Ｓ／Ｃ）（４．８４％）．ＴｈｅｔｉｔｅｒｏｆＡＮＡｐｏｓｉｔｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓｗａｓｍａｉｎｌｙ１∶１００，
ＤＯＩ：１０．１１７４８／ｂｊｍｙ．ｉｓｓｎ．１００６－１７０３．２０２０．０７．００６
收稿日期：２０２０ ０３ ２７；修回日期：２０２０ ０７ ０６
基金项目：河北省石家庄市科技支撑计划（编号：１５１４６０８６３）
作者简介：冯苏（１９８１—），女，主管检验师。

Ｔｅｌ：１３８３１１２０１２７；Ｅ ｍａｉｌ：ｆｅｎｇｓｕｓｕ２００８＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者：梁芸。

Ｅ ｍａｉｌ：３１７５３５０４５＠ｑｑ．ｃｏｍ
ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ５７．５７％．ＴｈｅＡＮＡｓｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎＲｏ ５２，ＳＳＡ，ＡＭＡＭ２ａｎｄＣＥＮＰＢ，ａｎｄａｂｏｕｔ７０％ｏｆＡＮＡｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｐｏｓｉｔｉｖｅｓａｍｐｌｅｓｈａｄｎｅｇａｔｉｖｅＡＮＡｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＡＮＡｉｎｗｏｍｅｎｗｉｔｈｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｍｅｎ，ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｉｓｈｉｇｈｅｒｉｎｔｈｅｏｌｄｅｒｇｒｏｕｐｓ．ＡＮＡｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｋａｒｙｏｔｙｐｅｓａｒｅｍａｉｎｌｙｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ，ｎｕｃｌｅａｒｓｐｅｃｋｌｅａｎｄｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ，ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆＡＮＡｓｐｅｃｔｒｕｍａｒｅＲｏ ５２，ＳＳＡ，ＡＭＡＭ２ａｎｄＣＥＮＰＢ．Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ７０％ｏｆＡＮＡｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｐｏｓｉｔｉｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｈａｖｅａｎｅｇａｔｉｖｅＡＮＡｓ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔｏｔｈｅｒｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｒｅｈｉｇｈｌｙｓｕｓｐｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｋａｒｙｏｔｙｐｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ；　Ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ；　Ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙｓｐｅｃｔｒｕｍ；　Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ；　Ｔｉｔｅｒ
重症肌无力（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ，ＭＧ）是一种由乙酰胆碱受体（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＣｈＲ）抗体介导的获得性自身免疫性疾病［１］。

自身免疫性疾病患者血清中可检测到多种自身抗体，其中一种或多种抗体可提示特征性自身免疫性疾病，并在该类疾病的诊断、预后判断和疗效监测中发挥重要作用。

抗核抗体（ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｂｏｄｙ，ＡＮＡ）是对细胞抗原具有不同特异性自身抗体的总称。

重症肌无力作为一种自身免疫性疾病，其患者的抗核抗体是否具有疾病特异性，是否与年龄、性别相关，目前尚无大规模相关性分析，笔者收集本院２０１４年至２０１７年已确诊的重症肌无力患者标本抗核抗体的检测结果，对重症肌无力患者体内的抗核抗体不同核型和抗体分布情况进行分析，探讨其临床意义，以期为临床诊治提供依据。

材料和方法
１　一般资料
选择２０１４年１月至２０１７年１２月石家庄市第一医院（河北省重症肌无力诊疗中心）门诊和住院重症肌无力患者１６４２例，且排除其他自身免疫性疾病患者；重症肌无力诊断标准：①临床表现：眼睑下垂，咀嚼吞咽困难，全身无力等，肌无力症状晨轻暮重，持续活动后加重，休息可缓解好转；②药理表现：新斯的明试验阳性；③肌电图：提示重频电刺激低频衰减，高频无递增；④血液指标：ＡｃｈＲ Ａｂ抗体阳性。

符合以上两项可诊断为重症肌无力［４］。

其中男７３５例，年龄１８～８７岁，平均年龄５２岁；女９０７例，年龄１８～８６岁，平均年龄４９岁。

均使用促凝剂真空采血管，采集患者５ｍＬ全血，分离血清后待检。

１６４２例血清样本均同时检测抗核抗体和抗ＥＮＡ抗体谱。

２　ＡＮＡ检测方法
使用间接免疫荧光法，试剂购自德国欧蒙实验诊断公司。

每个反应区包括２种抗原基质：人Ｈｅｐ ２细胞及灵长类肝片。

第一步温育：按试剂盒要求将１∶１００、１∶３２０、１∶１０００和１∶３２００稀释的血清标本与固定在载片反应区上生物薄片中细胞进行抗原抗体反应，第二步温育：ＦＩＴＣ标记的抗人ＩｇＧ与第一步结合的抗体反应，然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型，全过程严格按照试剂说明书操作。

滴度≥１∶１００判断为阳性。

３　抗核抗体谱检测方法
使用免疫印迹法，试剂购自德国欧蒙实验诊断公司。

该试剂盒检测印迹条上平行包被了１５种（ＡＮｕＡ／Ａｎｔｉ Ｐ／ａｈａ／ＡＭＡＭ２／ＣＥＮＰＢ／Ｊｏ １／ＰＣＮＡ／ＰＭ Ｓｃｌ／Ｒｏ ５２／ＳＣＬ ７０／ＳＭ／ＳＳＡ／ＳＳＢ／ｄｓＤＮＡ／ｎＲＮＰ）高浓度纯化的抗原。

在第一次温育时，已稀释的血清与检测膜条反应。

为检测已结合的抗体，加入酶标抗人ｌｇＧ进行二次温育，然后加入酶底物，以产生可观察的颜色反应。

所用仪器为欧蒙全自动免疫印迹仪。

４　统计学处理
用ＳＰＳＳ２１．０统计软件统计分析。

同性别患者不同滴度范围ＡＮＡ阳性率的比较，采用ＲｘＣ列联表的χ２检验，同一滴度范围男性与女性患者阳性率的比较，采用四格表资料的χ２检验。

以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

结 果
１　重症肌无力患者１６４２例总体阳性率
ＡＮＡ抗体阳性者为６４１例，总阳性率为３９．０％。

其中，男性ＡＮＡ阳性者为２０６例，占总阳性例数的３２．１４％（２０６／６４１）；女性ＡＮＡ阳性者为４３５例，占总阳性例数的６７．８６％（４３５／６４１），且两组差异有统计学意义（Ｐ＜０．００１）。

２　不同年龄组中ＡＮＡ阳性率
将不同性别中年龄１８～４９岁为一组，≥５０岁为
一组，进行分析。

在６４１例重症肌无力ＡＮＡ阳性患者中，≥５０岁组阳性率较高（３９．８％），与１８～４９岁组阳性率（３４．８％）比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。

在９０７例重症肌无力女性患者中，≥５０岁组阳性率（５２．１％）高于１８～４９岁组（４３．４％），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；同样在７３５例重症肌无力男性患者中，≥５０岁组阳性率（３１．０％）高于１８～４９岁组（２３．１％），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。

在两个年龄组中，女性患者ＡＮＡ阳性率均高于男性，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．００１）。

表１　６４１例重症肌无力ＡＮＡ阳性患者不同性别
年龄组中ＡＮＡ阳性率比较
性别
阳性率（％）
１８～４９岁≥５０岁
χ２值Ｐ值
女性４３．４（１８８／４３３）５２．１（２４７／４７４）６．８４９＜０．０１男性２３．１（６４／２７７）３１．０（１４２／４５８）５．７５６＜０．０５χ２值３０．７８２４１．７５９
Ｐ值＜０．００１＜０．００１
注：括号内为阳性标本数／本组标本总数
３　６４１例ＡＮＡ抗体阳性者荧光核型分析
ＡＮＡ抗体阳性者共６４１例，荧光核型分析如下：①单一荧光模式：均质型（Ｈ）为２１９例，在ＡＮＡ阳性抗体者中占比最大３４．１７％；核斑点型（Ｓ）为１８３例，占比２８．５５％（１８３／６４１）；细胞浆型（Ｃｙｔｏ）包括颗粒型、高尔基体型、胞浆纤维等为９６例，占比１４．９８％（９６／６４１）；核仁型（Ｎ）为２５例，占比３．９０％（２５／６４１）；着丝点型（ＡＣＡ）有２０例，占比３．１２％（２０／６４１）；致密斑点型（ｄｆｓ）为１５例，占比２．３４％（１５／６４１）；②混合荧光模式：核斑点８型／细胞浆型（Ｓ／Ｃ）有３１例，占比４．８４％（３１／６４１）；均质型／细胞浆型（Ｈ／Ｃ）有１４例，占比２．１８％（１４／６４１）；核斑点型／均质型（Ｓ／Ｈ）有１７例，占比２．６５％（１７／６４１）；核仁型／均质型（Ｎ／Ｈ）和着丝点型／均质型（Ａ／Ｈ）均有５例，分别占比０．７８％（５／６４１）；③其他荧光模式：包括罕见核型及三种混合核型共１０例占比１．５６％（１０／６４１）。

见表２。

表２　６４１例ＡＮＡ阳性重症肌无力成人患者荧光模式分布荧光模式阳性例数构成比（％）
Ｈ２１９３４．１７（２１９／６４１）
Ｓ１８３２８．５５（１８３／６４１）
Ｃｙｔｏ９６１４．９８（９６／６４１）
Ｎ２５３．９０（２５／６４１）
ＡＣＡ２０３．１２（２０／６４１）
ｄｆｓ１５２．３４（１５／６４１）
Ｍ１０．１６（１／６４１）
Ｓ／Ｃ３１４．８４（３１／６４１）
Ｈ／Ｃ１４２．１８（１４／６４１）
Ｓ／Ｈ１７２．６５（１７／６４１）
Ｎ／Ｈ５０．７８（５／６４１）
Ａ／Ｈ５０．７８（５／６４１）
其他１０１．５６（１０／６４１）
注：Ｈ核均质型；Ｓ核斑点型；Ｍ核膜型；Ｎ核仁型；ＡＣＡ着丝点型；Ｃｙｔｏ细胞浆型；ｄｆｓ致密斑点型；其他：包括罕见核型及三种混合核型
４　６４１例重症肌无力ＡＮＡ阳性患者滴度分布 １∶１００阳性者最多，共３６９例，占比达到５７．５７％；１∶３２０阳性和１∶１０００阳性者分别为１８９例（２９．４９％）和７６例（１１．８６％）；１∶３２００阳性者最少共７例（１．０９％）。

１∶１０００以上滴度中女性５０岁以下和５０岁以上ＡＮＡ阳性率差异无统计学意义，男性差异较小；主要差异存在于１∶３２０滴度以下；男性和女性在同滴度同年龄组阳性占比差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。

表３　不同ＡＮＡ阳性滴度在不同性别、年龄分布［ｎ（％）］
滴度
女性男性
１８～４９岁≥５０岁１８～４９岁≥５０岁
共计
１∶３２００３（０．４７）３（０．４７）０１（０．１６）７（１．０９）１∶１０００２８（４．３７）２９（４．５２）６（０．９４）１３（２．０３）７６（１１．８６）１∶３２０５０（７．８０）８６（１３．４２）１６（２．５０）３７（５．７７）１８９（２９．４９）１∶１００１０５（１６．３８）１３１（２０．４４）４１（６．４０）９２（１４．３５）３６９（５７．５７） 注：括号内为该滴度标本数／６４１例阳性标本总数
５　各ＡＮＡ荧光核型与对应抗核抗体谱相关分析
５．１　ＡＮＡ阳性单一荧光模式　①ＡＮＡ阴性者１６０１例中，Ｒｏ ５２阳性２９例，ＳＳＡ阳性１１例；自身抗体阳性率６．８９％；②ＡＮＡ核型均质型２１９例中，ＳＳＢ阳性１５例，Ｒｏ ５２阳性１４例，ＳＳ Ａ阳性者１３例；自身抗体阳性率３３．３３％；③ＡＮＡ核型核斑点型１８３例中，ＳＳ Ａ阳性４２例，Ｒｏ ５２阳性５２例；自身抗体阳性率６９．４％；④ＡＮＡ核型胞浆型９６例中，ＰＣＮＡ阳性２０例，ＡＭＡＭ２阳性１６例；自身抗体阳性率５０．０％；⑤ＡＮＡ核型着丝点型２０例中，混合核型占到５１％，ＣＥＮＰＢ阳性１８例；自身抗体阳性率９０．０％；⑥ＡＮＡ核型致密斑点型１５例中，ＡＭＡＭ２阳性１例，ＰＭ Ｓｃｌ阳性２例，Ｒｏ ５２阳性２例；自身抗体阳性率３３．３３％。

５．２　ＡＮＡ阳性混合荧光模式　①核斑点型／细胞浆型（Ｓ／Ｃ）３１例中，ＡＭＡＭ２阳性２例，Ｒｏ ５２阳性８例，ＳＳＡ阳性８例；自身抗体阳性率４８．４％；
②均质型／细胞浆型（Ｈ／Ｃ）１４例中，自身抗体全阴性；③核斑点型／均质型（Ｓ／Ｈ）１７例中，Ｒｏ ５２阳性２例，ＳＳＡ阳性２例，自身抗体阳性率２３．５％。

④核仁型／均质型（Ｎ／Ｈ）５例中，自身抗体阳性率２０％；
⑤着丝点型／均质型（Ａ／Ｈ）５例中，自身抗体阳性率８０％。

表４　不同ＡＮＡ荧光核型与抗核抗体谱相关分析
ＡＮＡＡＮｕＡＡｎｔｉ ＰａｈａＡＭＡＭ２ＣＥＮＰＢＪｏ １ＰＣＮＡＰＭ ＳｃｌＲｏ ５２ＳＣＬ ７０ＳＳ ＢＳｍｄｓＤＮＡｎＲＮＰ／ＳｍＳＳ ＡＡＮＡ谱全阴性阴性００１７１１３７２９３０３１３１１９４３Ｈ２１１３５１１３１４１１５０１５２１３２１５Ｓ０２１７３３２４５２１２２２７４２１５４
Ｃｙｔｏ０００１６３１２００００００００８１０２Ｎ０００１２００２０００００００３２
ＡＣＡ００００１８００１２０００００２２
ｄｆｓ０００１０００２２００００００１１Ｍ０００１００００１００００００３
Ｓ／Ｃ０００２００００８０００００５１５
Ｈ／Ｃ０００００００００００００００１２
Ｓ／Ｈ００００００００２０００００３１０
Ｎ／Ｈ０００１０００００００００００４
Ａ／Ｈ００００４０００００００００００
注：上表数字为重症肌无力ＡＮＡ阳性患者荧光核型对应自身抗体阳性例数
讨 论
通过对河北省石家庄市重症肌无力诊疗中心自２０１４年至２０１７年４年来１６４２例重症肌无力成年患者的抗核抗体和ＡＮＡ谱进行回顾性分析，结果显示，ＡＮＡ阳性者为６４１例，总阳性率为３９．０％，提示重症肌无力ＡＮＡ阳性率大大低于中国人群自身免疫性疾病ＡＮＡ阳性率８２％，同时低于大部分自身免疫性疾病如ＳＬＥ、ＲＡ、ＳＳ及ＰＳＳ，而高于少数的自身免疫性疾病如ＩＴＰ［３］。

这种差异的来源可能为患者样本来源的差异和结果效价判断的差异。

目前并无大数据表明重症肌无力患者的ＡＮＡ分布，本研究数据来自全国各地重症肌无力患者，有一定代表性。

其次对于结果效价判断，大部分实验室仍采用人工镜检判读的方式，可能存在实验室间判读标准的不一致［４］，同时也受间接免疫荧光法手工操作、检测液配制、操作流程及实验室环境等因素的制约［５］。

重症肌无力女性患者ＡＮＡ占总阳性例数的６７．８６％，高于周仁芳等［６］的研究，其中女性标本ＡＮＡ阳性率在５０％～６０％之间，并且女性患者在两个年龄组中ＡＮＡ阳性率均高于男性，说明重症肌无力发病率与性别之间的高度相关性与自身免疫性疾病类似。

女性的抗核抗体阳性率更高，可能由于性激素尤其是雌激素在局部炎症反应过程中，诱导免疫系统许多细胞的受体相互作用，提高Ｔｈ２淋巴细胞的免疫反应［７］，从而在自身免疫性疾病的发展中起重要作用。

在ＡＮＡ阳性的不同年龄组中，年龄越
大者ＡＮＡ阳性率越高（Ｐ＜０．００１），这一结论可能与衰老和自身免疫性疾病的发展有关，因此推断年龄并非独立于重症肌无力的风险因素。

随着年龄增加，能够产生ＩＬ １０的Ｂ细胞减少［８］，而ＩＬ １０对于维持免疫系统的功能具有强大的生物学作用。

对６４１例ＡＮＡ抗体阳性的重症肌无力成年患者的荧光核型进行分析，单一荧光模式呈现多样化分布，主要表现为以下核型：均质型（Ｈ）在ＡＮＡ阳性者中占比最多为３４．１７％，核斑点型（Ｓ）占比２８．５５％，细胞浆型（Ｃｙｔｏ）占比１４．９８％。

混合荧光模式围绕主要单一荧光模式表现为核斑点型／细胞浆型（Ｓ／Ｃ）、均质型／细胞浆型（Ｈ／Ｃ）和核斑点型／均质型（Ｓ／Ｈ）。

重症肌无力常见ＡＮＡ荧光核型与一般自身免疫性疾病（ＡＩＤ）的主要荧光核型不同，周仁芳等［６］和王泽筠等［９］的大样本量统计，自身免疫性疾病（ＡＩＤ）包括ＳＬＥ、ＳＳ、ＲＡ等的主要荧光核型均为核斑点型，分别约占其总样本量ＡＮＡ阳性者的３０．０３％和６２．２５％。

荧光模式的不同表明重症肌无力患者主要自身抗体与ＳＬＥ、ＳＳ、ＲＡ等自身免疫病的自身抗体有区别。

另外，ＡＮＡ滴度分析以１∶１００为主，共计５７．５７％，而≥１∶３２０占２９．４９％，说明重症肌无力患者ＡＮＡ阳性滴度以低滴度分布为主，与正常人群中随年龄增加ＡＮＡ阳性率增高相符。

所有入组重症肌无力患者均不合并其他自身免疫性疾病，而ＡＮＡ高滴度ＭＧ患者不同年龄组１∶１０００以上滴度女性ＡＮＡ阳性率差异无统计学意义，男性差异较小。

本研究初步分析７６例ＡＮＡ在１∶１０００以上滴度ＭＧ患者中，Ｏｓｓｅｒｍａｎ分型眼肌型占１２．５％，ＩＩ型占５４．２％，ＩＩＩ型占１４．６％，ＩＶ型占１８．７％；胸腺异常包括胸腺增生及胸腺瘤患者占５４．２％。

与所有重症肌无力患者流行病调查中Ｏｓｓｅｒｍａｎ分型相比，ＡＮＡ高滴度ＭＧ患者中呈现眼肌型患者减少和ＩＶ型患者增多的趋势。

临床诊断与预后判断需结合临床表现及其他检查综合分析，是否与重症肌无力患者的症状轻重或疾病分级有关仍需进一步深入研究。

在重症肌无力患者ＡＮＡ荧光核型和抗核抗体谱的相关研究中发现，１００１例ＡＮＡ阴性患者中有６９例出现自身抗体阳性条带，并以ＲＯ ５２、ＳＳ Ａ、ＡＭＡＭ２和ＰＭ Ｓｃｌ为主。

２１９例ＡＮＡ均质型，自身抗体阳性条带仅出现６３例，以ＲＯ ５２、ＳＳＢ、ｄｓＤＮＡ和ＳＳ Ａ为主，符合率仅为２８．７７％。

１８３例核斑点型中，自身抗体阳性条带出现１２７例，ＲＯ ５２和ＳＳ Ａ占绝对优势，符合率为６９．４％。

９６例胞浆型中，自身抗体阳性条带出现４８例，以ＡＭＡＭ２、ＰＣＮＡ、ＳＳＡ为主符合率为５０％。

以上三个主要单一荧光核型中，均质型阳性占比最大，而相应自身抗体特异性最小，推断可能均质型中存在现有膜条中未被识别的抗体，而这种抗体极有可能是均质荧光核型中的重症肌无力特异性抗体。

综上，重症肌无力成年患者的抗核抗体和ＥＮＡ抗体谱回顾性分析显示，ＡＮＡ总阳性率为３９．０％，较其他自身免疫性疾病偏低。

女性显著高于男性，高年龄组阳性率更高。

ＡＮＡ荧光核型以均质型、核斑点型和胞浆型为主，ＡＮＡ谱ＲＯ ５２、ＳＳ Ａ、ＡＭＡＭ２和ＣＥＮＰＢ阳性率较高。

约７０％ＡＮＡ均质型阳性标本中其ＡＮＡ谱为阴性，因此均质型核型患者中高度怀疑有其他重症肌无力特异性抗体未被识别。

这一猜测还需大量临床试验验证，为下一步重症肌无力新型抗体发现指明方向。

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