植物生产国家级实验教学示范中心
《食用菌栽培技术基础性实验》
实验项目
序号实验项目名称建议学时数每组人数必选/可选
1 食用菌形态结构的观察
2 2 必选
2 母种培养基的配制 2
3 必选
3 高压蒸汽灭菌 2
4 必选
4 母种的转管及分离技术 2 1 必选
5 主要病虫害的识别 2 3 必选
实验一、食用菌形态结构的观察
常见与栽培的食用菌主要是担子菌亚门层菌纲和腹纲的一些种类，它们由双核菌丝分化形成子实体，子实体是有性孢子着生的器官其孢子外生在担子上，并聚集成一层子实层，但它们的子实体（担子实）形状因种类不同而有很大差别，故为我们认识食用菌类别的主要标志之一。
一、目的要求
使学生能找出食用菌次生菌丝的特征，分辨伞菌的微观构造；熟练制作标本片，能在显微镜下快速找出目标；并能分析图像不清的原因或排除显微镜的某些故障。
二、仪器用品及实验材料
1. 器具：光学显微镜、尖头镊子、解剖刀、解剖针、解剖剪、刀片、载玻片、盖玻片、酒精灯、火柴、蕃红染色剂、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。
2. 材料：平菇、草菇、香菇、蘑菇、金针菇等食用菌的斜面菌种与平板菌落，及其各种鲜子实体，胡萝卜。
三、实验内容与方法
（一）实验内容
1.次生菌丝体的观察（菌苔形态及微观形态的观察）
2.子实体的观察（外观形态及菌褶微观构造的观察）
（二）方法步骤
1、次生菌丝体的观察
（1）肉眼观察
从颜色、菌丝生长势、爬壁力、有无无性孢子、菌苔边缘特征等方面进行识别。
（2）显微镜观察
制片：在载玻片中央滴蕃红，用无菌接种针拨去气生菌丝，取其下绿豆粒大一薄片培养基置于蕃红染液中。放盖片，颠吸水纸后用手指适当按压，将培养基压碎，使其均匀平展于载玻片上。
镜检：将标本片固定于载物台上，低倍镜下找理想目标，高倍镜下观察菌丝的分支、分隔、锁状联合等特征。
2.子实体的观察
（1）肉眼观察
先观察完整子实体，从颜色、大小、及其菌盖、菌褶、菌柄、菌环、菌托等特征将各菌类的子实体进行比较识别。
用解剖刀纵切子实体，观察菌盖和菌柄等部分的组成。从菌肉颜色、质地、菌褶着生情况；菌柄的质地、粗细、是否中实等方面进行比较。
（2）微观观察
切片：用尖头镊子取一小块菌褶，将其夹于胡萝卜条的切线中间，用刀片横切，切下的切片放入有蒸馏水的培养皿中，切片要求薄而均匀。
制片：载玻片中央滴蒸馏水，用解剖针挑取最薄的切片放于载片水滴中，放盖片。
镜检：将标本片固定于载物台上，用低倍镜找理想目标，再用高倍镜观察子实层、担子和担孢子的形态、大小及排列状况。
四、思考题与实验报告
1. 表格总结平菇、蘑菇、草菇、金针菇、香菇等子实体各部分的宏观特征
2. 出次生菌丝、担子、担孢子及子实层的图像
实验二、母种培养基的配制
母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。
一、目的要求
掌握固化培养基的配制，学会棉塞的制作方法。分析有天然原料与无天然原料培养基在配制过程中的不同。
二、仪器用品及实验材料
1.器具：天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布、电炉、菜刀、菜板、小铝锅等。
2．材料：马铃薯、葡萄糖或蔗糖、麸皮、琼脂、水。
三、实验内容与方法
（一）实验内容
1.制马铃薯滤液
2.融化琼脂
3.培养基的分装
4．棉塞的制作
（二）方法步骤
1．配方（PDA）
马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15~20g，自来水1000ml，pH自然。
2．制作方法
（1）制滤液马铃薯刮去粗皮，去芽眼，切成碎块，称量后放锅中，加水1200~1300ml，将其煮沸20min。用双层纱布过滤，取1000ml滤液。
（2）化琼脂将滤液加热至即将沸腾时加入琼脂，不断搅拌（控制火力不要使培养基溢出或烧焦）。琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水补足水量）。
（3）分装通过漏斗装置，趁热将培养基分装于试管中，装量约占试管高度的1/4（分装三角瓶，其装量以不超过其容积的一半为宜）。管口或瓶口不要沾染培养基。
（4）制棉塞棉花以白色长绒的不脱脂棉花为宜。根据试管口大小取棉花，将其卷成棉塞，最好外包一层纱布。将棉塞塞入试管口。棉塞长度约6~7cm，塞入试管2/3。要求外表光滑，外包的纱布无皱折，松紧适宜等。
A.正确;
B.不正确
（5）包扎管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。
四、思考题与实验报告
1.制取母种培养基时，配方中的天然原料应怎样处理？
2.何时加入琼脂？融化时注意什么问题？
3.分装的技术要求有哪些？
4.棉塞的作用和技术要求有哪些？
5.菌种培养时管口堵胶塞或软木塞行吗？为什么？
实验三、高压蒸汽灭菌
高压蒸汽消毒和常压蒸汽消毒统称湿热灭菌。通过饱和蒸汽杀死物体上和介质中的全部病原微生物及其孢子和芽孢。湿热灭菌的饱和蒸汽具有很强的穿透力，可以破坏病原微生物及其孢子和芽孢的核酸、使蛋白质变性凝固、酶失去活性。
一、目的要求
了解高压锅的构造及其功能，能独立完成各环节的操作。并能解释安全阀自动打开或灭菌不彻底的原因。
二、仪器用品及实验材料
