Annexin_蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义_付海峰

展过程。
［中 国 普 通 外 科 杂 志 ，2011 ，20 ( 3 ) : 26 1 － 264］
关 键 词 : 胰 腺 肿 瘤 / 病 理 学 ; AnnexinⅠ 蛋 白 ; 免 疫 组 织 化 学 ; 免 疫 印 迹
中图分类号: R 735． 9
文献标识码: A
Expression of AnnexinⅠ in pancreatic cancer and its clinical significance
Abstract : Objective To explore the expression of Annexin Ⅰ in pancreatic cancer and its clinical significance ． Methods Immunohistochemical method and the Western blot method were used to examine the expression of AnnexinⅠ in pancreatic cancer tissues ，tumoral adjacent tissues ，and normal pancreatic tissues obtained during operation from 4 0 pancreatic carcinoma patients and 2 0 patients with normal pancreas ． The relationships with pathological grade ， clinical stage and metastasis of pancreatic cancer were statistically analyzed ． Results The percentage of positive cells that expressed AnnexinⅠ protein in human pancreatic tissues ，tumor adjacent tissues and normal tissues was 7 2 ． 5 % ，3 7 ． 5 % and 2 0 ． 0 % ，respectively ，with the protein expression level of AnnexinⅠ showing gradual decline from cancer to normal tissue ( P ＜ 0 . 0 5 ) ． The highly expressed AnnexinⅠ correlated significantly with the degree of tumor differentiation ，advanced TNM stage and lymph node metastasis ． Similar results were obtained by Western blot test ． Conclusions Annexin Ⅰ has high expression in pancreatic cancer tissues ． Annexin Ⅰ expression has a close relationship with pathological grades of pancreatic cancer ， suggesting that AnnexinⅠ might play an important role in the development and progression of pancreatic cancer through immunologic mechanism ．
1 资ห้องสมุดไป่ตู้与方法
1． 1 临床病理学资料 收集武汉协和医院 40 例胰腺癌 患者的 新鲜
胰腺癌组织及相应的癌旁组织( 距肿瘤边缘 1 ～ 2 cm ) ，胰 腺 癌 标 本 经 术 后 病 理 证 实 诊 断 。 患 者 术 前 未 行 放 疗 及 化 疗 。 男 2 7 例 ，女 1 3 例 ; 年 龄37 ～ 76( 平 均 58 ) 岁。 肿 瘤 组 织 病 理 分 级: 高 分 化 16 例 ，中 低 分 化 2 4 例 。 淋 巴 结 转 移 1 3 例 ，未 转 移 27 例; 其余病理特征及其例数见表 2。另取 20 例 正 常 胰 腺 组 织 ，标 本 取 自 其 他 原 因 需 行 胰 腺 部 分 切 除 的 非 肿 瘤 患 者 。 手 术 切 除 的 标 本 分 2 份 ，1 份 立 即 置 入 液 氮 中 ，－ 8 0 ℃ 保 存 备 用 ，另 1 份 用 1 0 % 甲 醛 溶 液 固 定 后 石 蜡 包 埋 ，用 于 免 疫 组 织 化 学分析。 1 ． 2 免 疫 组 化 检 测 AnnexinⅠ 蛋 白 的 表 达
度 、TNM 分 期 、淋 巴 结 转 移 有 关 。 Western blot 检 测 结 果 与 免 疫 检 测 方 法 结 果 一 致 。 结 论 AnnexinⅠ 在 胰
腺 癌 组 织 中 高 表 达 ，且 其 表 达 与 肿 瘤 分 级 有 关 ，提 示 AnnexinⅠ 可 能 通 过 免 疫 机 制 参 与 胰 腺 癌 的 发 生 、发
性 ( + + ) ，5 分 以 上 为 强 阳 性 ( + + + ) 。 ( + + ) 与 ( + + + ) 为 高 表 达 ，( － ) 与 ( + ) 为 低 表 达 。 1． 3 免 疫 印 迹 ( Western blot) 检 测 Annexin Ⅰ 蛋 白
表达 常 规 方 法 进 行 组 织 蛋 白 提 取 ，考 马 斯 亮 蓝 法 测 蛋 白 浓 度 。 取 1 5 μL 蛋 白 进 行 1 0 % 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 ，电 转 至 硝 酸 纤 维 素 膜 ，5 % 脱 脂 奶 粉 封 闭 非 特 异 性 抗 原 ，加 入 1 ∶ 7 5 0 稀 释 的 兔 抗 人 AnnexinⅠ 单 克 隆 抗 体 ( Cell Signaling 公 司 ) ，4 ℃ 孵 育 过 夜 ; 用 含 0 ． 1 % Tween2 0 的 Tris 盐 酸 缓 冲 液 ( TBST ) 洗 膜 ，加 入 辣 根 过 氧 化 物 酶 ( HRP ) 标 记 的 山 羊 抗 兔 二 抗 ，室 温 孵 育 2 h ，洗 膜 后 加 入 增 强 化 学 发 光 底 物 EcL Plus 试 剂 ，曝 光 于 X 胶 片 上 ，曝 光 时 间 为 3 0 s ; 常 规 显 影 ，定 影 。 采 用 自 动 电 泳 凝 胶 成 像 分 析 软 件 ( Band Scan v5 ． 0 ) 进 行 图 像 扫 描 和 分析。 1． 4 统计学处理 采 用 SPSS 1 3 ． 0 统 计 分 析 软 件 处 理 数 据 ，应 用 t 检 验 ，χ2 检 验 ，Fisher 精 确 概 率 法 及 秩 和 检 验 作 数值间的 差 异 检 验。以 α = 0． 05 为 检 验 水 准; P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
参照免疫组化试剂盒( 武汉博士德公司) 说明 书进行。显 微 镜 下 观 察 细 胞 染 成 棕 黄 色 者 为 阳 性 ; 着 色 物 质 呈 颗 粒 状 或 片 状 ，主 要 存 在 于 肿 瘤 细 胞胞 浆 内。染 色 结 果 通 过 双 盲 评 价。 随 机 观 察 1 0 个 高 倍 视 野 ，避 开 肿 瘤 边 缘 及 坏 死 区 域 。 根 据 显色强度和着色百分数进行半定量分析。依细胞 阳 性 着 色 程 度 记 分 : 阴 性 为 0 分 ，弱 阳 性 为 1 分 ， 中 等 阳 性 为 2 分 ，强 阳 性 为 3 分 。 依 着 色 阳 性 百 分 比 记 分 : 未 染 色 为 0 分 ，阳 性 细 胞 总 数 ＜ 2 5 % 为 1 分 ，阳 性 细 胞 在 2 5 % ～ 5 0 % 为 2 分 ，阳 性 细 胞 总 数 ＞ 5 0 % 以 上 为 3 分 。 将 2 个 分 值 相 加 ，0 ～ 1 分 为 阴 性 ( － ) ，2 ～ 3 分 弱 阳 性 ( + ) ，4 ～ 5 分 为 阳
第 20 卷第 3 期 2011 年 3 月
中国普通外科杂志 Chinese Journal of General Surgery
文章编号: 1005 － 6947( 2011) 03 － 0261 － 04
Vol． 20 No． 3 Mar． 2011
·基础研究·
AnnexinⅠ蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义
付海峰1 ，贺德华1 ，许安荣1 ，张华1 ，李桂中1 ，黄凯中2
( 1． 湖北省东风汽车公司茅箭医院 普通外科，湖北 十堰 442012; 2． 湖北省武汉市协和医院 胰腺外科 中心，湖北 武汉 430022)
摘 要 : 目 的 探 讨 AnnexinⅠ 蛋 白 在 胰 腺 癌 组 织 中 的 表 达 其 临 床 意 义 。 方 法 采 用 免 疫 组 织 化 学
及 免 疫 印 迹 方 法 检 测 4 0 例 胰 腺 癌 组 织 及 其 相 应 的 癌 旁 组 织 、2 0 例 正 常 胰 腺 组 织 中 AnnexinⅠ 蛋 白 的 表
达 ，并 分 析 胰 腺 癌 组 织 中 AnnexinⅠ 蛋 白 的 表 达 与 临 床 病 理 特 征 尤 其 是 病 理 分 级 、临 床 分 期 及 转 移 的 关
第 20 卷
AnnexinⅠ 即 钙 依 赖 磷 脂 结 合 蛋 白 ( calcium -dependent phospholipid -binding protein -Ⅰ ) 是 膜 联 蛋 白 超家族中第一个被发现的成员。最早是作为糖皮 质 激 素 诱 导 的 磷 脂 酶 A2 ( phospholipase ，A2 ) 抑 制 蛋 白 来 描 述 的 ，目 前 认 为 AnnexinⅠ 可 能 在 增 殖 的 细 胞 内 信 号 转 导 和 细 胞 分 化 、细 胞 骨 架 相 互 作 用 中 发 挥 重 要 作 用［1 －2］ 。 近 来 研 究 证 明 AnnexinⅠ 在 很 多 恶 性 肿 瘤 中 有 表 达 改 变 ，但 其 是 否 与 胰 腺 癌 的 发 生 ，发 展 有 关 ，以 及 是 否 与 胰 腺 癌 肿 瘤 分 化 TNM 分 期 及 淋 巴 结 转 移 病 理 特 征 有 关 系 目 前 尚 不 明 了 。 本 研 究 旨 在 通 过 观 察 胰 腺 癌 中 AnnexinⅠ 的 表 达 情 况 ，探 讨 其 与 胰 腺 癌 发 生 发 展 的 关 系 及 其 临 床 意 义 ，为 胰 腺 癌 的 治 疗 提 供 新 的 线 索 。
［Chinese Journal of General Surgery ，2 0 1 1 ，2 0 ( 3 ) : 2 6 1 － 2 6 4］
收稿日期: 2010 － 09 － 06; 修订日期: 2011 － 02 － 14。 作者简介: 付海峰，湖北省东风汽车公司茅箭医院主治医师，主要从事肝胆胰外科方面的研究。 通讯作者: 贺德华 E-mail: dfmjyy1@ 163． com
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中国普通外科杂志
Key words : Pancreatic Neoplasms / pathol ; AnnexinⅠ Protein ; Immunohistochemical ; Western blot
CLC number : R 7 3 5 ． 9
Document code : A
系 。 结 果 胰 腺 癌 AnnexinⅠ 蛋 白 阳 性 表 达 率 为 7 2 ． 5 % ，癌 旁 组 织 为 37 ． 5 % ，正 常 胰 腺 组 织 为 20 % ，三
者 呈 递 减 趋 势 ，各 组 之 间 差 异 有 统 计 学 意 义 ( P ＜ 0 ． 05 ) 。 胰 腺 癌 AnnexinⅠ 蛋 白 的 表 达 与 肿 瘤 分 化 程
FU Haifeng1 ，HE Dehua1 ，XU Anrong1 ，ZHANG Hua1 ，LI Guizhong1 ，HUANG Kaizhong2
( 1 ． Department of General Surgery ， Maojian Hospital ， Dongfeng Motor Corporation ， Shiyan ， Hubei 4 4 2 0 1 2 ，China ; 2 ． Department of Pancreatic Surgery Center ，Union Hospital ，Tongji Medical College ， Huazhong University of Science and Technology ，Wuhan 4 3 0 0 2 2 ，China )