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第十三章紫外可见分光光度法1概述
1.1定义、所用光谱区域、可见光谱区域
1.2分光光度法的发展过程
1.3特点
2分光光度法基本原理
2.1吸收光谱的分类
2.1.1电磁波谱范围
2.1.2原子吸收光谱和分子吸收光谱
2.2溶液的颜色与光吸收的关系
2.2.1 溶液呈现不同颜色的原因
2.2.2 光吸收曲线的绘制
2.2.3 最大吸收波长及其与浓度的关系
2.3光的吸收定律
2.3.1定义
2.3.2数学表达式
2.3.3透射比与吸光度的关系
2.4摩尔吸收系数
2.4.1摩尔吸收系数定义及计算
2.4.2摩尔吸收系数对测定的影响
2.5吸光度的加和性
2.6光吸收定律的适用范围
2.6.1朗伯定律的适用范围
2.6.2比耳定律的适用范围
2.6.3偏离朗伯比耳定律的因素
3目视比色法
3.1定义及特点
3.2工作原理
3.3测定方法（标准系列法）
3.4优点及缺点
4紫外可见分光光度仪器
4.1紫外可见光光度仪器主要部件
①光源：对光源的要求、紫外光源、可见光源
②单色器：作用、主要元件
棱镜和光栅
③吸收池：作用、常用吸收池的光程长度
④检测器：作用、常用类型
⑤测量系统
4.2紫外可见分光光度计的结构
4.2.1分类方法
4.2.2单波长单光束分光光度计
4.2.3单波长双光束分光光度计原理、特点
4.2.4双波长分光光度计原理、特点
4.3紫外可见分光光度计的型号及性能
4.4紫外可见分光光度计的使用
4.5分光光度计的检验和维护
4.5.1分光光度计的检验：稳定度、波长准确度、透射比准确度、基线平直
度、噪声、吸收池配套性
4.5.2分光光度计的保养和维护方法
5可见分光光度法
5.1分光光度分析的方法
5.2显色反应的定义及对显色反应的要求
5.3常用显色剂
5.4多元配合物显色体系
5.5反应条件的选择：显色剂用量、溶液酸度、温度的影响、显色时间、溶剂5.6共存离子的干扰及消除方法
5.7参比溶液的作用及选择方法
5.8测定条件的选择
5.8.1入射光波长的选择原则：吸收最大、干扰最小
5.8.2吸光度范围（0.2-0.8）的控制方法：调节溶液浓度、使用厚度不同的吸
收池
5.8.3狭缝宽度的选择：不减少吸光度时的最大狭缝宽度
5.9定量分析
5.9.1一般定量方法：工作曲线法、标准对照法、吸收系数法、解解联立方程
5.9.2示差分光光度法：原理、操作方法、对仪器和实验条件的要求
5.9.3双波长分光光度法：原理、单组分和混合组分的测定
5.9.4分光光度法的误差：方法误差和仪器误差
6紫外分光光度法
第十六章气相色谱法
1色谱分析法的原理及分类
1.1色谱分析法的分离原理及特点
1.1.1实现色谱分离的先决条件、内因、外因
1.1.2色谱分析法的特点
1.2色谱分析法的分类
1.2.1按固定相和流动相的状态分类
1.2.2按固定相性质和操作方式分类
1.2.3按色谱分离过程的物理化学原理分类
2气相色谱法简介
2.1方法特点及应用范围
2.1.1主要特点：选择性高、分离效率高、灵敏度高、分析速度快
2.1.2应用范围：低分子量、易挥发有机化合物
2.1.3缺点：不能直接定性、对无机物和高沸点有机物的分析比较困难
2.2气相色谱流出曲线的特征
2.2.1色谱图定义
2.2.2色谱峰的位置：是进行气相色谱定性分析的主要依据
保留时间、基线、死时间、调整保留时间
2.2.3色谱峰的峰高和峰面积：定量分析的重要依据
定义及峰面积计算公式
2.2.4色谱峰的宽窄：愈窄说明柱效愈高，愈宽说明柱效愈低
拐点宽度、半峰宽度、基线宽度
2.2.5色谱峰间的距离：距离大，说明色谱柱对各组分的选择性好；选择性
也表明了对不同组分的分离能力
2.2.6分离度R及相邻两个峰分离程度的关系
3气相色谱仪
3.1气相色谱分离的原理
3.2热导池检测器和氢火焰离子化检测器的气路流程
3.3载气流速控制及测量装置
3.3.1载气及其净化
①载气的作用、常用的载气、气体高压气瓶的颜色
②所用载气的纯度主要取决于色谱柱、检测器和分析的要求
色谱柱角度：影响色谱柱的活性、寿命和分离效率；除水用硅胶和5A分子筛；除烃类用活性炭
检测器角度：硅胶、分子筛、活性炭按顺序净化
分析要求：痕量杂质分析需高纯载气，特殊净化方法
3.3.2载气流速的控制
①减压阀：氧气表，将10-15MPa压力减小到0.1-0.5MPa；使用方法；缺
点
②稳压阀：出口压力在0.1-0.3MPa
③针形阀：调节载气流量
④稳流阀：输出压力0.01-0.25MPa，输出流量5-400mL/min
3.3.3载气流速的测量
①转子流量计
②皂膜流量计
③电子气路控制系统及优点
3.4进样器和气化室
3.4.1进样器
①气体样品进样：注射器进样、气体定量管进样（平面六通阀取样和进样位置）
②液体样品进样：微量注射器
③固体样品进样：先溶解后注射器进样
3.4.2气化室
①作用
②对气化室的要求
③隔垫吹扫装置
④分流进样器：使用目的、分流比
⑤气化室温度的选择与控制方法
3.5色谱柱及柱温控制
3.5.1色谱柱的作用及分类
3.5.2固定相作用、气固色谱和气液色谱
①气固色谱固定相种类：活性炭、氧化铝、硅胶、分子筛、高分子多孔小球
②气固色谱固定相各自的特点及适用范围
③气固色谱法的应用范围
④气液色谱的固定相分为载体和固定液两部分
⑤对载体的要求、常用载体的性质及处理方法
⑥对固定液的要求、常用固定液的分类及选择固定液的原则
⑦常用石英毛细管柱分离性能简介：不对称因子、分离数
3.5.3色谱柱的材料、形状、内径及连接方法
3.5.4柱温控制：恒温箱；程序升温方法及使用范围
3.6检测器
3.6.1检测器的作用
3.6.2检测器的种类：
①质量型：FID
特点及适用范围、检测原理、结构、测量电路、影响灵敏度的因素、注意事项
②浓度型：TCD
特点及适用范围、检测原理、结构、影响TCD灵敏度的因素、使用注意事项3.6.3检测器的性能指标：灵敏度、检测限、响应时间、线性范围
3.7气相色谱仪的使用和维护
3.7.1气相色谱仪的使用规则
3.7.2气相色谱仪的维护：气路系统、电路系统
3.8定性及定量分析方法
3.8.1定性分析方法
①常用保留值介绍：
保留时间、调整保留时间、相对保留值、比保留体积、保留指数
②纯物质对照法
适用于组成不太复杂的样品
③利用保留值的经验规律定性
碳数规律和沸点规律
④利用其它方法定性
利用化学方法配合进行未知组分定性、结合仪器进行定性
3.8.2定量分析方法
①峰高、峰面积定量法—工作曲线法
简便，分析结果的准确度主要决定于进样量的重复性和操作条件的稳定程度
②定量校正因子：绝对校正因子、相对校正因子
③定量校正因子与检测器相对响应值的关系
④内标法：
对内标物的要求：样品中不含内标物；无反应；与各待测物保留时间和浓
度相差不大
⑤外标法：定义及要求、计算公式
⑥归一化法：计算公式
要求样品中各组分均能被色谱柱分离并被检测器检出而显示各自的色谱峰3.9基本原理
3.9.1塔板理论
用高斯分布曲线方程式描述色谱峰的峰形、计算理论塔板数和理论塔板高度的方法
3.9.2速率理论
①速率方程式及简化式
②涡流扩散项及影响因素
③分子扩散项及影响因素
④传质阻力项及影响因素
⑤改善柱效率的因素
3.9.3色谱分离操作条件的选择
①色谱柱的选择性：R
②柱效率：与载气流量、载体性能、进样量等因素有关
③载气的选择
④载气流速的选择
⑤柱温的选择
⑥载体的选择
⑦固定液用量的选择
⑧色谱柱形、柱内径及柱长的影响
⑨气化室温度的选择
⑩进样量与进样时间的影响
3.9.4毛细管柱的速率理论及操作条件的选择
①速率方程
②操作条件：
柱效评价、柱内半径、载气线速、固定液液膜厚度、进样量、柱温的选择
③毛细管柱与填充柱的比较
毛细管柱比填充柱的柱效高、柱容量小、渗透率高
3.9.5气相色谱法的实验技术
①新型气源的使用：空气发生器、氮气发生器、氢气发生器的工作原理
②气体纯度对色谱分析的影响
③填充色谱柱的制备：
色谱柱管的预处理、固体吸附剂或载体的预处理、载体的涂渍。

色谱柱的装填、色谱柱的老化
④毛细管色谱柱的制备方法
⑤程序升温操作技术：
基本原理、操作条件的选择、应用范围
第十七章高效液相色谱法
1高效液相色谱法简介
1.1方法特点：分离效能高、检测灵敏度高、分析速度快、选择性高
1.2应用范围和局限性
2高效液相色谱仪
2.1流动相的储液罐
2.1.1材质、要求
2.1.2流动相需脱气原因、方法
2.2高压输液泵及梯度洗脱装置
2.2.1高压输液泵
①对高压输液泵的要求
②高压输液泵的分类
恒流泵：注射型泵和往复型泵的工作原理、优缺点
恒压泵：工作原理、优缺点
③输液系统的辅助设备：管道过滤器、脉动阻尼器
④梯度洗脱装置
梯度洗脱概念、低压梯度和高压梯度的工作原理
2.3进样装置
2.3.1注射器进样装置
2.3.2六通阀进样装置的原理
2.4色谱柱
2.4.1柱材料及对色谱柱的处理
2.4.2柱规格：柱内径、长度、填料粒度
2.4.3柱填料种类
2.4.4保护柱及作用
2.4.5柱接头和连接管
2.5检测器
2.5.1检测器的分类
按检测的对象分类：整体性质检测器（RID）和溶质性质检测器（UVD）按适用性分类：选择性检测器（UVD）和通用性检测器（RID）
2.5.2检测器的性能指标
噪声、基线漂移、灵敏度、线性范围和检测器的池体积
2.5.3紫外吸收检测器（UVD）
①固定波长UVD
②可变波长UVD
③光二极管阵列UVD
2.5.4折光指数检测器（RID）
①工作原理
②分类：反射式、偏转式和干涉式
③适用范围：一般不用于梯度洗脱、不宜用于痕量分析
2.6固定相和流动相
2.6.1液固吸附色谱
①固定相：极性和非极性固定相种类及特点
②流动相：需满足的要求、选择流动相的方法、表征溶剂特性的重要参数
2.6.2液液分配色谱
①固定相：包括惰性载体和固定液、涂渍固定液的方式、防止固定液流失
的措施
②流动相：四氢呋喃、乙醇、甲醇、乙腈、异丙醇等
2.6.3化学键合相色谱
①特点
②键合相色谱法分类：正相和反相键合相色谱
③键合固定相分类：全多孔或薄壳型微粒硅胶为基体
④键合相色谱流动相：
溶剂的选择性分组、选择流动相的一般原则、改善色谱分离选择性的方法、多元混合溶剂的多重选择性、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律
2.6.4离子交换色谱
①原理
②固定相
③流动相
2.6.5凝胶色谱
①分离原理
②固定相：软质凝胶、半刚性凝胶、刚性凝胶
③流动相：对流动相的要求、GPC流动相常用四氢呋喃、GFC流动相常用
水相缓冲溶液
2.7高效液相色谱仪的使用和维护
2.7.1操作步骤
2.7.2对各部件的维护
3基本理论
3.1表征色谱柱性能的重要参数
3.1.1色谱柱的特征
3.1.2总孔率
3.1.3柱压力降
3.2速率理论
3.2.1速率方程式
3.2.2方程式中各项的影响因素
3.3高效液相色谱操作条件的优化
柱长、填充固定相粒径、柱的压力降
4高效液相色谱法的实验技术
4.1溶剂的纯化技术
4.1.1 G4微孔玻璃漏斗或0.45μm的微孔滤膜过滤、分子筛除水、硅胶净化
4.1.2超声或真空脱气
4.2色谱柱的装填
4.2.1装填方法：干法和湿法
4.2.2柱性能评价：测色谱柱的理论塔板数、色谱峰的不对称因子和柱压力
降
4.3色谱柱的保护与再生技术
①在分析柱前连接保护柱
②在正式分析前，用10倍柱体积的流动相冲洗色谱柱
③选用合适的清洗色谱柱
④修补柱头并同时更换不锈钢烧结片
⑤倒冲色谱柱
4.4梯度洗脱技术
4.4.1特点及应用范围
4.4.2使用注意事项
4.4.3二元溶剂梯度洗脱
4.4.4三元溶剂梯度洗脱。