动物细胞培养技术思考题

一．思考题1. 为什么要严格保持细胞工程操作环境和物品的无菌？答：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。

培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。

2. 配制培养基时，为什么要先配制母液？答：1.方便配置其他培养基；2.保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取第三章一．思考题1. 胚状体与合子胚有何异同？答：异：体细胞胚又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。

子胚是指由植物的雌雄配子融合形成的合子继而发育形成的胚，经过受精作用。

同：都含有一整套遗传信息,都可以发育成新一代生物个体.二．练习一、单选题1、植物组织培养是建立在___理论基础上的。

(B)A进化论 B植物细胞全能性C基因决定论 D细胞多样性2、植物组织培养的培养基不含___。

(C)A含N物质 B碳源 C血清 D生长素3、过滤除菌适用对象___。

(D)A玻璃器皿 B塑料器皿 C金属器皿D易被高温破坏的材料如抗生素、激素等试剂4、将___重新转移到成分相同的新鲜培养基上生长的过程称为继代培养。

(B)A外殖体 B愈伤组织 C 生根苗 D 幼苗5、下列植物细胞全能性最高的是（A）A. 形成层细胞B. 韧皮部细胞C. 木质部细胞D. 叶肉细胞6、植物组织培养过程中的脱分化是指（C）A. 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B. 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C. 植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D. 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程三、判断题•1、非胚性愈伤组织与胚性愈伤组织具有同样的再生能力（×）•2、一个细胞由分生状态转变为成熟状态的过程，叫脱分化。

（×）•3、所有的植物培养材料都必须高压灭菌锅灭菌121℃、15分钟。

《动物细胞培养》思考题1、细胞培养的一代生长过程如何？答：原代培养的过程就是动物细胞培养的第一代细胞。

原代培养是这样的：取出动物胚胎或者幼龄动物组织或器官后用胰蛋白酶使其分散为单个细胞，然后配置成一定浓度的悬浮液放入培养瓶（其液体培养基含动物血清）中置于培养箱中培养。

2、什么是原代培养、传代培养？答：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。

传代培养是指当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。

3、细胞生长需要满足哪些条件？4、操作人员如何保持无菌？5、无菌操作的要点是什么？6、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？7、器材包装有何要求？8、叙述超净工作台的工作原理？9、正压过滤器为何会除菌？10、配制后液体呈黄色意味着液体的ph发生了什么变化？11、用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D－Hanks液或PBS液配制？Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。

因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。

12、L－谷氨酰胺在营养液中有何作用？L－谷氨酰胺属于生长因子的一种，是细胞生长所必需的。

13、营养液配制后为什么要小剂量分装？避免污染后全军覆没。

14、你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。

用筛网滤掉未消化的组织块。

2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。

3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。

4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。

5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。

15、培养瓶移入CO2恒温培养时，瓶盖为何要稍松？拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好16、如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？17、细胞培养到一定时间为何要传代？18、你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染？19、你认为组织培养成功需要哪些条件？20、原代细胞和传代细胞培养有哪些区别？。

实验一清洗与灭菌（4学时）一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。

二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。

体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。

细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。

清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。

如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。

灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。

假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。

以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。

三、实验材料、用品1．材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。

2．药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)。

3．仪器：超净台，干燥箱，高压蒸气灭菌锅，过滤器，过滤泵。

四、实验步骤(一)清洗1．新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗，再浸泡5％稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。

2．使用过的玻璃器皿的清洗(1)使用过的培养用品应立即浸入清水，避免干涸难洗。

(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿，自来水清洗数遍，倒置自然干燥。

(3)浸酸性洗液过夜。

(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10．15次去除残余酸液，蒸馏水涮洗3次，倒置烘干。

(5)包装(牛皮纸或一般纸)。

(6)高压(15磅20 min)或干热(170℃2 h)灭菌。

(7)贮存备用。

3．胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0．2％NaOH煮沸lO-20 min。

(2)自来水清洗10次。

(3)再用1％稀盐酸浸泡30 min。

哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核移植。

第一章绪论课后习题答案1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。

2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。

第二章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。

离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。

有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。

动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。

从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。

贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。

按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。

由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。

细胞生物学实验思考题第一篇：细胞生物学实验思考题细胞生物学实验思考题1、为什么暗视场照明的视场暗黑，而样品像明亮？相差显微镜镜检时，为什么要用绿色滤色镜观察活体样本？暗视场显微镜照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的；为获得好的效果，要用波长范围窄的单色光，选用绿色滤光镜，不但可满足这个要求，而且绿色可吸收红外光，减少发热。

2、为什么活细胞不易染色，从细胞生物学角度解释原因。

染色剂一般有剧毒，而细胞膜具有选择透过性，会将一部分对细胞有害的物质阻挡在细胞外，所以活细胞难以染色。

而当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，染色剂得以进入，细胞就被染色。

3、简述中性红染液、詹纳斯绿B染液用于细胞超活染色的原理。

Janus green B活体细胞染色的机理：Janus green B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

Neutral red 碱性染料活体染色的机理：neutral red为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。

4、什么是细胞骨架？它有何主要功能？生物学中细胞骨架指真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的纤维网络。

包括微管、微丝和中间丝。

细胞骨架不仅在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用，而且还参与许多重要的生命活动，如：在细胞分裂中细胞骨架牵引染色体分离，在细胞物质运输中，各类小泡和细胞器可沿着细胞骨架定向转运；在肌肉细胞中，细胞骨架和它的结合蛋白组成动力系统；在白细胞(白血球)的迁移、精子的游动、神经细胞轴突和树突的伸展等方面都与细胞骨架有关。

《动物细胞培养技术》复习思考题1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?如果器皿中有杂质,会对细胞培养产生什么样的影响?答:①离体细胞对各种毒物都很敏感,若所用器材清洗效果未达到要求,各种毒物会损坏细胞影响实验。

②器皿使用高压灭菌锅,121.3℃,20~30分钟,在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿,避免造成污染。

③2.叙述超净工作台的工作原理?答:超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程,在这个过程中风机起到了心脏的作用。

鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。

3.正压过滤器为何会除菌?答:正压式过滤器没有内置灭菌灯,正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜,这层膜可以将细菌阻挡在膜上,过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗?如果不精确,会导致什么后果?请举例说明。

你认为精确配制各种溶液?答:5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化?答:配制后的液体应呈桃红色,PH值为7.4左右。

苯酚红的变色域:1.2(橙)~3.0(黄), 6.5(棕色)~8.0(紫色),若为黄色,则液体呈酸性,不利于细胞的生存。

6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制答:Ca+2、Mg+2是细胞膜的重要组分,具有使细胞凝聚的作用。

因此,用于分离细胞的消化液宜用无Ca+2、Mg+2离子的D-Hanks液或PBS液。

7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用?答:L-谷氨酰胺是细胞的能量来源;是一种必须氨基酸,是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体,也是蛋白质合成分解的调节物;是细胞内氨的清除剂,氨对一些细胞有毒性。

8.HEPES溶液的作用机理?答:它是一种氢离子缓冲剂。

主要作用是防止培养基pH迅速变动9.平衡盐溶液的组成与基本作用?小牛血清在细胞培养中有哪些作用?答:①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。

Chap1 绪论问答题：1.实验动物的基本概念是什么？2.实验动物有那三大特点？3.实验动物学的定义是什么？4.实验动物的标准化包括哪些内容？它有什么意义？5.为什么说实验动物学是一门新兴的综合性基础学科？6.什么叫比较医学？7.生命科学研究所必需的四个基本条件是什么？8.什么是动物福利？9.针对动物保护主义，科技界的对策是什么？10.国际上对动物实验伦理有哪些要求？11.什么是动物实验的“3R原则”？Chap2 实验动物的遗传学控制1. 请说出实验动物种、品种、品系的概念。

2. 按遗传学控制分类，可将实验动物分为哪几类？3. 什么叫近交？什么叫近交系？用近交系动物做实验的优点是什么？4. 请叙述亚系的概念和形成原因。

5. 请叙述支系的概念。

6. 请叙述重组近交系、重组同类系、同源突变近交系和同源导入近交系的概念。

7. 在饲养繁殖中发现一只雄性无毛小鼠，已知无毛基因hr/hr是隐性基因，根据Snell发明的基因导入原理，如何将此基因导入到C57BL/6J小鼠体内？8. 动物近交可引起哪些变化？9. 近交系动物有哪些特点？10. 近交系动物的局限性和缺点是什么？11. 请叙述封闭群动物的概念。

12. 近交系动物和封闭群动物在种群维持和生产时的交配方式上有什么区别？13. 请叙述突变系动物的概念。

14. 动物基因发生突变有哪两种形式？基因突变可出现哪些表现？15. 对动物进行诱发突变的方法有哪些，各具什么特点？16. 请叙述杂交群动物的概念和特征。

Chap3 实验动物的微生物学和寄生虫学控制1.根据对实验动物微生物学和寄生虫学的控制，可将实验动物分为哪几类？各类动物的定义是什么？应饲养在什么环境中？2.一般动物实验是否用无菌动物/悉生动物做实验，其结果一定比用SPF动物要好？3.试述无菌动物的生物学特性4.试述传染性疾病对实验动物生产和使用的危害。

5.列举出实验动物中的人畜共患性疾病。

6.试述传染性脱脚病、流行性出血热病毒感染、弓形体感染的病原体和流行病学特点。

第一章细胞概述8.请简述病毒的生活史。

答：病毒的生活史分为5个基本过程:吸附(absorption): 病毒对细胞的感染起始于病毒蛋白外壳同宿主细胞表面特殊的受体结合，受体分子是宿主细胞膜或细胞壁的正常成分。

因此，病毒的感染具有特异性。

侵入(penetration): 病毒吸附到宿主细胞表面之后，将它的核酸注入到宿主细胞内。

病毒感染细菌时，用酶将细菌的细胞壁穿孔后注入病毒核酸；对动物细胞的感染，则是通过胞吞作用，病毒完全被吞入。

复制(replication): 病毒核酸进入细胞后有两种去向，一是病毒的遗传物质整合到宿主的基因组中，形成溶原性病毒；第二种情况是病毒DNA(或RNA)利用宿主的酶系进行复制和表达。

成熟(maturation): 一旦病毒的基因进行表达就可合成病毒装配所需的外壳蛋白，并将病毒的遗传物质包裹起来，形成成熟的病毒颗粒。

释放(release): 病毒颗粒装配之后，它们就可从被感染的细胞中释放出来进入细胞外，并感染新的细胞。

有些病毒释放时要将被感染的细胞裂解，有些则是通过分泌的方式进入到细胞外。

第二章细胞生物学研究方法1．举例（3～5个）说明研究方法的突破对细胞生物学发展的推动作用。

答：①细胞培养技术，②离心分离技术，③流式细胞分离技术，④基因敲除技术，⑤干细胞培养技术，⑥……7．什么是细胞培养?答：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。

第三章细胞质膜与跨膜运输14. 膜的流动性的生理意义何在？答：①细胞质膜适宜的流动性是生物膜正常功能的必要条件。

②酶活性与流动性有极大的关系，流动性大活性高。

③如果没有膜的流动性，细胞外的营养物质无法进入，细胞内合成的胞外物质及细胞废物也不能运到细胞外，这样细胞就要停止新陈代谢而死亡。

④膜流动性与信息传递有着极大的关系。

⑤如果没有流动性，能量转换是不可能的。

⑥膜的流动性与发育和衰老过程都有相当大的关系。

细胞工程（动物部分）思考题生技1402 李静1402140105一、动物原代细胞培养应注意哪些问题?答：动物原代细胞培养分为取材、分离细胞、制备成可用于培养的组织块或细胞、接种到合适的无菌培养液中、在适宜的环境条件下进行体外培养等,每个阶段需要注意的问题如下：1)在取材阶段我们需要注意取材部位是否准确、所取材料是否保持活性、材料处理是否得当等问题，一般选择在动物幼小时取材。

整个取材过程一般要在超净工作台或其他工作台面上进行。

在无菌条件下取出组织和器官，放在BSS或培养液中，立即送往实验室。

如果不可避免的要延误时间，如去屠宰场或临床手术室取材时，解取的组织应立即冷却，然后尽快送往实验室;；2)在分离细胞时，由于组织均由多种细胞和纤维成分组成，一般体积大于1mm3 的组织块置于培养瓶后，处于周边的少量细胞可能生存和生长，而大部分细胞因营养物质穿透有限而代谢不良，且受纤维成分束缚而难以移出。

为获取较大量生长良好的细胞，必须把组织分散开，使细胞充分解离出来，但不伤害细胞本身；一定要注意多余水分的去除，水分若不除去，会使组织块剪切不细，消化后的细胞悬液清亮（细胞数少），并可见消化液中有线状或絮状物漂浮。

原代培养的贴壁细胞需控制消化时间。

吹打已消化的细胞应减少机械损伤。

3)在培养细胞时，为促进组织块尽快粘贴在培养瓶上，可以在接种前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。

细胞培养过程中，胶原中的促细胞贴附因子先吸附于培养瓶底壁上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促细胞贴附因子的底壁附着；4)用组织块培养时，要及时观察。

当发现细胞向外迁移出来后，要记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除；5)加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。

6)组织块接种后的前3d，从组织块向外迁移的细胞数很少，组织块的粘附不牢固。

在观察和移动过程中，注意不要引起液体的振荡。

“动物细胞培养”一节教学中的常见问题及解析洪长根（江苏省宜兴中学 214200）中文摘要：动物细胞培养一节内容，确实有太多的跟植物组织培养过程的不一样，文章以问题及解析的形式出现，既条理清楚也分析透彻，读来应该有所收获。

关键词：贴壁生长、接触抑制、胰蛋白酶、不死性、pH值在学生看来，学习动物细胞培养，根本就没有感到与植物组织培养有大同小异的轻松，也没有一目了然的从一块组织到一个个体的完整过程，更多呈现的倒是动物细胞的娇（常死及易变）、怪（贴壁生长及接触抑制）和无能（无鲜活个体出现）的特点，还有始终不见细胞真容的神秘，为此，每次涉及到这个内容时，不管是新授课还是复习课，学生都会有许多问题提出，本文整理了几个常见问题及相关解析，以供大家参考。

1 动物组织块一定要经剪碎然后酶解为细胞悬液才能培养吗？细胞分散成单个细胞容易培养，因为细胞所需的营养容易供应，其代谢废物也容易排出，但这不意味着动物细胞培养时非得分散成单个细胞才行，有时候培养的细胞甚至还不能分散。

1.1组织块培养。

跟植物组织培养一样，动物组织块也可以直接培养，而且是最常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法，早期的动物细胞的培养多采用此法，只要将剪成的组织团块（1mm3大小的小块）接种（间距0.2-0.5cm）于培养瓶（或皿）壁即可。

1.2细胞悬液培养。

如果是上皮组织，获得细胞悬液的最佳方案还不是酶解，而是用EDTA（乙烯二胺四乙酸）来分散，因为该化学物质能与细胞膜上的钙、镁离子结合成螯合物，利用结合后的机械力使细胞变圆而分散或使贴壁细胞从瓶壁上脱离。

1.3器官培养。

有时整个器官不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下也能培养，当然，为确保器官中心不发生因缺乏营养和氧气而坏死的现象，其厚度或直径不宜太厚，另外，除仍保持5%CO2外，一般要加注纯氧，使氧分压达到90%。

2 贴壁是一个怎样的过程？有不贴壁也能生长的细胞吗？贴壁的过程目前还不是十分清楚，一般认为细胞附着于底物时并非一种需要能量的过程而与电荷有关，其中一些特殊的促细胞附着的物质（如层粘连蛋白、纤维链接蛋白、III型胶原、血清扩展因子等）可能参加了细胞的贴附过程，这些因子均为蛋白质，存在于细胞膜表面或培养液尤其血清之中，在培养过程中，这些带有阳电荷的促贴附因子先吸附于底物上，然后悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附因子的底物附着。

《动物细胞培养》课堂反思一、教学目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。

二、教学重点、难点1. 教学重点动物细胞培养的过程及条件。

2. 教学难点动物细胞培养的过程及条件三、教学过程【课堂导入】师：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？生：取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植师：如何获得大量健康的自体皮肤来治疗？【新知学习】请同学们阅读课本后，简述动物细胞培养的基本过程？学生结合图2-16简述细胞培养的过程，教师强调其中原代培养和传代培养的含义，及细胞贴壁和接触抑制现象。

师：结合以上过程思考以下问题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成分？6、细胞膜的主要成分是什么？7、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？8、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？9、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？同桌之间相互讨论后回答，教师点评或指正。

师布置任务：1﹑请同学根据以上内容总结出动物细胞培养的定义2﹑多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，请根据所学的知识，分析体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容？同桌之间相互讨论后回答，教师点评或指正。

动物实验课思考题1.鱼类哪些结构与排泄有关？肾、输尿管及膀胱组成。

其功能除排泄尿液外，在维持鱼体内正常的体液浓度、进行渗透压调节方面也具有重要作用。

3.多细胞动物胚胎发育包括那几个阶段？受精与受精卵、卵裂、囊胚的形成、原肠胚的形成（内陷、内移、分层、内转、外包）、中胚层及体腔的形成（端细胞法、体腔囊法）、胚层的分化（内：消化道的大部分上皮、肝、胰、呼吸器官以及排泄与生殖器官的小部分；中：肌肉、结缔组织（包括骨骼血液等）、生殖与排泄器官的大部分；夕卜：皮肤上皮（包括上皮各种衍生物如皮肤腺、毛、角、爪等）、神经组织、感觉器官、消化道的两端）。

4.斑马鱼胚胎发育（受精卵——孵化）时间是多少？24h5.常用模式生物有哪些？果蝇、小白鼠、兔子、大白鼠6.比较鲤形目和鲂形目的不同点.体披圆鳞或裸露；栉鳞。

腹鳍腹位；腹鳍胸位或喉位。

7.比较鳗鲫和黄鳍的异同。

左右鲍孔在喉部相连为一；左右鲍孔不相连有胸鳍，无腹鳍，奇鳍彼此相连；无胸鳍腹鳍，背、臀、尾鳍相对退化9.蟾赊心脏结构包括哪些。

心脏由静脉窦、二心房、一心室和动脉圆锥组成。

10.鲫鱼、黄颖鱼与消化相关的结构有哪些不同？（3点）肠的长度不同，11.鱼的心脏山哪些结构组成？心脏由静脉窦、一心房、一心室组成。

心脏内含缺氧血。

12.蟾赊解剖时，列出三项注意点。

在剪开腹壁过程中，应沿腹中线偏左，避开腹中线上的腹静脉，剪尖要上挑以免及内脏。

眼睛远离，避免分泌物射入眼内，如入，立刻用生理盐水冲洗13.比较鳖科和龟科的异同。

甲板外被有革制皮；甲板外被以角质鳞板指趾间具蹊；不一定具蹊14.蛙科和树蛙科动物主要不同点是？树蛙科指端具膨大的吸盘15.写出蛙科、眼镜蛇科动物各五种。

五步蛇（尖吻腹）、竹叶青、蝮蛇、草原蛙、烙铁头眼镜蛇、金环蛇、银环蛇、眼镜王蛇16.鸟类心脏组成。

心脏分为四腔：二心房，二心室，为完全的双循环；静脉窦完全消失与右心房合并，左体动脉弓退化;17.鸟类生殖系统组成。

实验动物学思考题⼀、医学实验动物学201609131. laboratory animal，LA：实验动物，经⼈⼯培育，来源清楚遗传背景明确，对其携带的微⽣物和寄⽣⾍和健康状态进⾏监控，⽤于⽣命科学研究、药品与⽣物制品⽣产和检定以及其他科学研究的动物。

2. animals for research：实验⽤动物，⼀切可⽤于实验的动物，包括野⽣动物、经济动物、警卫动物、观赏动物和实验动物。

3. laboratory animalization：实验动物化，将野⽣动物或经济、观赏动物驯化、培育成实验动物的过程。

4. animal experiment：动物实验，为了可接受的⽬的⽽使⽤实验动物进⾏的实验，实验过程可能造成动物的疼痛、痛苦、苦恼、持久性损伤、受孕、⽣育等，包括实验的前、中、后过程。

5. Euthanasia：安死术，以迅速造成动物意识丧失⽽⾄⾝体、⼼理最⼩伤害的处死动物的⽅法。

6. humane endpoint：⼈道终⽌点，考虑到对待动物的要求和实验要求，合理终⽌动物⽤于实验的时间。

7. 3R：替代replacement原则，要求尽可能采⽤低等实验动物或⾮实验动物，以替代⾼等实验动物进⾏实验；减少reduction原则：要求尽可能减少实验动物的⽤量，甚⾄可以降低统计学要求；优化refinement原则：要求优化实验设计和操作，避免或减轻与实验⽬的⽆关的疼痛和紧张。

8. 实验动物⽣物安全：对实验动物可能产⽣的潜在风险或现实危害的防范和控制。

9. 国家标准规定的实验动物品种是哪些？⼤⿏、⼩⿏、豚⿏、地⿏、兔、⽝、猴、鸡10. 实验动物福利（lab welfare）的五⼤⾃由⽣理福利：免于饥渴；环境福利：免于不适，适当居所；卫⽣福利：免于痛苦伤病；⾏为福利：表达正常⾏为；⼼理福利：免于恐惧与焦虑。

11. 实验动物福利与动物实验伦理审查的关系实验动物福利并不意味着就绝对的保护实验动物不受到任何伤害，⽽是在兼顾科学问题探索和在可能的基础上最⼤限度地满⾜实验动物维持⽣命、维持健康和提⾼舒适程度的需要；实验动物福利贯穿实验动物整个⽣命过程，应考虑到实验动物的需要，尤其⼼理需要；动物实验伦理审查局限于涉及实验动物的课题，在课题执⾏过程善待动物。

2。

2动物细胞工程2。

2.1动物细胞培养和核移植技术基础巩固1下列不属于动物细胞培养必需条件的是（)A。

无菌、无毒的环境B.适宜的温度和pHC.O2等气体环境D。

适宜的光照条件答案D2下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是( )A。

动物细胞培养技术的原理是细胞的全能性B。

传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞C.癌细胞在培养瓶中不会出现接触抑制现象D。

动物细胞培养一般需要使用CO2培养箱解析动物细胞培养的原理是细胞增殖。

答案A3在动物细胞培养过程中,使用胰蛋白酶的目的是（)A。

使动物组织分散为单个细胞B.去掉细胞壁，使其成为原生质体C.去掉细胞膜，暴露出原生质体便于细胞融合D.促进蛋白质水解为多肽解析在进行动物细胞培养前,先用胰蛋白酶使组织块中的细胞相互分散开,以增加细胞与培养液的接触面积，便于培养。

答案A4下列有关核移植的说法，错误的是（）A。

用核移植得到的动物称为克隆动物B.核移植的受体细胞最好是受精卵C.核移植可以充分发挥优良种畜的繁殖潜力D。

核移植得到的克隆动物属于无性生殖解析核移植的受体细胞应该是MⅡ中期的卵母细胞，相对受精卵来说,MⅡ中期的卵母细胞细胞质所含的物质更有利于细胞核全能性的表达.答案B5用于动物体细胞核移植的供体细胞一般选用（)A.受精卵B。

传代10代以内的细胞C.传代10～50代以内的细胞D.处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞解析培养的动物细胞一般当传代至10~50代时，部分细胞核型可能会发生变化,而传代10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。

因此,在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞作为供体细胞。

答案B6在进行核移植时，通常将整个体细胞而不是细胞核注入去核卵母细胞中，下列有关叙述错误的是( ）A.体细胞太小因而去除细胞核较困难B。

细胞质中遗传物质少因而对遗传的影响很小C。

直接将体细胞注入卵母细胞中简化了操作程序D.体细胞的核离开了原来的细胞质将不能存活解析体细胞太小因而去除细胞核较困难，因此可将整个体细胞注入去核卵母细胞中，A项正确；DNA主要位于细胞核中,细胞质中遗传物质少，因而对遗传的影响很小,B项正确；将整个体细胞注入去核卵母细胞中，简化了操作程序，C项正确；体细胞的核离开了原来的细胞质，注入去核的卵母细胞依然能存活,D项错误。