PART B 生物分离工程实验
实验十二香菇多糖的分离提取
一、实验目的
让学生了解香菇多糖的理化性质及提取工艺流程，掌握真空浓缩技术。
二、实验原理
香菇是一种药食两用真菌，具有提高免疫力、抗癌、降糖等多种生理功能。水溶性多糖作为香菇主要活性成分之一，主要以β-1,3-葡聚糖的形式，分子量从几万到几十万不等。通过有机溶剂提取，真空浓缩技术进行分离提取。
三、实验材料与试剂
原料：干香菇500g
试剂：氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、重蒸酚、工业酒精
四、实验仪器
组织捣碎机、水浴锅、旋转蒸发器、1cm比色皿、751分光光度计、电子天平、台式离心机、试管、量筒、烧杯、玻璃棒
五、提取工艺流程
1. 1kg干香菇切成小块，以1：10（重量比）加入水，用组织捣碎机进行均质；
2. 取200mL均质液放入1L烧杯中，再加入300mL蒸馏水，加热至沸后，温
火煮沸1小时，（注意：煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌，以免烧杯底部发生糊结；并间歇加入少量水，使杯内液体体积保持在500mL左右；
3. 加热完毕后，将杯内液体用8层纱布过滤，除去残渣，上清液转入另一烧杯
中；
4. 将上清液倒入圆底烧瓶中，在旋转浓缩仪上进行浓缩，浓缩条件为-0.1MPa 、
60℃，浓缩液体积至100mL左右停止；
5. 将浓缩液在1×10000g离心10min，将上清液转入另一烧杯，除去残渣；
6. 上清液中加入等体积的氯仿正丁醇浓液（体积比为4：1），搅拌5min，静置
30分钟；
7. 将混合液体在1×5000g下离心20min,分离水相；
8. 在水相中加入终浓度为80%的酒精，搅拌均匀，静置20min，1×5000g下离
心10min；
9. 取出沉淀物，放入已称重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80℃下真空干燥；
10. 干燥后，称重，计算多糖的产率；
11. 准确称取干燥后多糖20mg于500ml容量瓶中，加水定容；
12. 取定容液2ml加入6%苯酚1ml，混匀，再加入浓硫酸5ml，混匀，放置20min
后，于490nm测吸光度；
13. 葡萄糖标准曲线的制定：准确称取葡萄糖20mg定容于500ml容量瓶中，分
别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，补水至2ml，依12步骤反应液，并分别测吸光度，根据葡萄糖浓度和吸光度绘制标准曲线；
14. 根据香菇多糖吸光度和葡萄糖标准曲线，计算多糖纯度。
六、思考题
1. 根据以上实验步骤，表达多糖产率及纯度的计算公式；
2. 利用所学生物化学知识，分析多糖沉淀原理。
