流式细胞仪的分类

实验七流式细胞仪检测技术免疫细胞是一组不均一的细胞群体。

各种特定的细胞群其细胞表面表达有各自特异的表面标志分子，利用这些特异的表面标志，可以鉴定、分离和纯化相应的细胞群。

随着单克隆抗体技术的诞生和免疫标记技术（特别是荧光标记技术）的发展，以及计算机科学的应用，使利用仪器的方法检测特异的细胞膜表面分子成为可能。

本章介绍的荧光激活细胞分类技术就是采用单克隆抗体技术和免疫荧光标记技术，并结合光学检测和计算机分析技术而产生的鉴定和分离特定细胞亚群的技术。

实验原理流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。

其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。

当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。

根据测得的散射光（scattered light ）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。

在流式细胞仪分离装置中，返回到计算机的信号，可用来产生一种电荷，这种电荷以特定准确的时间通过FACS的吸管孔，在与吸管孔的液体流相相遇时，可将液体流打碎成只含一个细胞的微滴。

流式细胞仪及流式细胞术流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。

它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置)，光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析。

其优点如下：1、具有操作简便，只要将染色的单个细胞推入仪器中，就会得出数据。

2、具有较高的灵敏度及测定速度，而且每次可测出许多数据，一般情况下，每秒可测5000个细胞，能迅速分析和记数大量细胞，并能准确统计群体中荧光标记细胞的比例。

3、应用广泛，即可用于测定细胞活力、繁殖周期和细胞定型分析，也可区别死亡细胞、分裂细胞和静止细胞群，既可测定DNA和RNA、测凋亡峰，又可测蛋白含量，特别是胞浆蛋白。

基本流程原理：1、将待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定的角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

2、流式细胞仪通常以激光作为发光源。

经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。

这两种信号同时被前向光电二极管和90度方向的光电倍增管接收。

散射光不依赖任何细胞样品的制备技术，被称为细胞的物理参数或固有参数，散射光有包括前向角散射和侧向叫散射，前向角散射与被测细胞直径的平方密切相关，侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信号。

荧光信号也有两种，一种是细胞自身在激光照射下发出的微弱荧光信号，另一种是经过特异荧光素标记后的细胞受激发照射后得到的荧光信号。

流式细胞技术的操作方法
流式细胞技术是一种用于分析和分类细胞的方法，通常包括以下步骤：
1. 细胞准备：从组织样本或培养细胞中收集细胞。

可以使用细胞培养、离心、切片等方法获取细胞。

2. 细胞处理：对收集到的细胞进行处理，包括洗涤、消化、染色等步骤。

洗涤可以去除细胞外的杂质，消化可以使细胞变成单细胞悬浮状态，染色可以标记特定细胞结构或分子。

3. 细胞悬浮：将处理后的细胞悬浮在缓冲液中，确保细胞以单个细胞为单位悬浮。

4. 流式细胞仪设置：根据实验需要，对流式细胞仪进行设置，包括调整流速、选择相应的激发波长和检测滤光片等。

5. 细胞分析：将悬浮的细胞通过流式细胞仪进行分析。

细胞会依次通过激光束，激光照射到细胞上时，细胞中的荧光标记物会被激发，发出特定的荧光信号。

根据细胞在不同参数上的荧光信号的强弱和分布情况，可以得到细胞的特征信息。

6. 数据分析：根据流式细胞仪得到的荧光信号，可以利用相关的软件进行数据分析，包括细胞计数、细胞分类、细胞亚群分析等。

7. 结果解读：根据数据分析的结果，解读实验结果，得出相应的结论。

需要注意的是，流式细胞技术的操作方法可能会因具体实验目的和流式细胞仪型号的不同而有所变化。

在进行实验前，最好参考操作手册或相关文献，了解具体的操作步骤和注意事项。

facs中单细胞分选的通道
FACS（流式细胞仪术）中的单细胞分选通道通常是通过多个参数来对细胞进行分类和分选。

通常使用的参数包括：
1. 光散射参数：包括前向散射（FSC）和侧向散射（SSC），用于区分细胞的大小和复杂性。

2. 荧光标记参数：可以使用荧光染料或荧光标记的抗体，用于标记特定的细胞亚群或表达特定的分子。

FACS仪器可以同时检测多种不同的荧光标记，以便更准确地对细胞进行分类。

3. 双重参数：可以使用两个或更多的荧光标记来对细胞进行分类，例如通过同时检测CD4和CD8标记来鉴定T细胞亚群。

4. 排序通道：用于将特定亚群的细胞分离出来，通常是通过产生一个电流来推动细胞进入不同的集合管。

根据实验需要和仪器型号的不同，FACS仪器可以配置不同数量和类型的通道，以满足特定的研究要求。

流式细胞仪工作原理(一)流式细胞仪工作原理什么是流式细胞仪？流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够对细胞进行快速分析和分类的仪器，在医学、生物学等领域有着广泛应用。

流式细胞仪的组成流式细胞仪由主体仪器和计算机分析系统组成。

主要部分包括光源、检测器、激光、样品注射系统和流动细胞仓等部分。

流式细胞仪的原理流式细胞仪的工作原理基于细胞在流动状态下通过一束激光，同时检测细胞与光的交互作用，通过对细胞数量和物理特征的分析来实现细胞分类。

流式细胞仪的步骤流式细胞仪的操作步骤主要分为样本制备、仪器校准、样本注射、数据采集和数据分析。

样本制备将待检测的样本准备到合适的浓度和体积，通常需要使用细胞培养、荧光染色等方法。

仪器校准流式细胞仪需要进行仪器校准来保证数据质量，包括激光能量、电子学增益等方面的调整。

样本注射样本注射一般使用样本传送器或注射管来完成，注射后样品进入流动细胞仓进行分析。

数据采集流式细胞仪通过检测样品中的细胞和荧光信号来获得数据，数据将会被记录下来。

数据分析通过软件对数据进行分析和处理，比如进行细胞计数、细胞分类等。

流式细胞仪的应用流式细胞仪广泛应用于生物学、医学等领域，比如细胞学、免疫学、感染病学、药物研究等方面。

结语流式细胞仪是一种非常有用的仪器，在科学研究和医学诊断中都有着重要作用。

掌握流式细胞仪的工作原理和操作方法对于科研人员和医护人员来说是非常重要的。

流式细胞仪的优势流式细胞仪具有许多优势，例如高速度、快速获取结果、高精度、高通量、良好的灵敏度和特异性等。

流式细胞仪的缺点流式细胞仪也存在一些缺点，例如价格昂贵、需要较为复杂的校准和操作、需要专业的技术人员进行操作和分析等。

流式细胞仪技术的发展随着技术的进步，流式细胞仪也在不断发展和改进。

例如，现代化的流式细胞仪已经具备了多色激光、高通量、高精度、高速度、多参数检测等方面的特点。

流式细胞仪的未来未来，流式细胞仪具有广泛的应用前景。

流式细胞仪分类1. 简介流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的生物学实验仪器，用于对细胞进行分类和分析。

它通过将细胞悬浮液注入仪器中，利用激光束照射细胞，测量细胞在不同参数上的散射和荧光信号，从而对细胞进行分类和计数。

流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。

2. 流式细胞仪的分类方式根据不同的参数和功能，流式细胞仪可以分为以下几种类型：2.1. 基础型流式细胞仪基础型流式细胞仪是最常见的类型，它可以测量细胞在不同波长的激光照射下的散射和荧光信号。

基础型流式细胞仪通常具有多个激光器和多个探测器，可以同时测量多个参数。

常见的参数包括细胞大小、形态、颜色、荧光标记物等。

2.2. 高通量流式细胞仪高通量流式细胞仪是一种能够快速处理大量样本的流式细胞仪。

它通常具有多个样本载体和多个样本接口，可以同时处理多个样本，提高实验效率。

高通量流式细胞仪广泛应用于大规模细胞筛选、细胞库构建和高通量药物筛选等领域。

2.3. 分选型流式细胞仪分选型流式细胞仪是一种能够根据细胞的特定特征进行分选的流式细胞仪。

它通常具有一个或多个分选器，可以根据预设的分选条件将特定类型的细胞分选出来。

分选型流式细胞仪广泛应用于细胞克隆、单细胞测序和细胞治疗等领域。

2.4. 成像型流式细胞仪成像型流式细胞仪是一种能够对细胞进行高分辨率成像的流式细胞仪。

它通常具有高倍率物镜和高灵敏度的相机，可以对细胞进行三维成像和时间序列成像。

成像型流式细胞仪广泛应用于细胞动力学研究、细胞迁移和细胞内信号传导等领域。

3. 流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理包括激光照射、散射信号检测和荧光信号检测三个步骤。

3.1. 激光照射流式细胞仪通过激光器产生高能量的激光束，将激光束聚焦到细胞悬浮液中的单个细胞上。

激光束的波长和功率可以根据需要进行选择，常用的波长包括488nm、532nm和633nm等。

3.2. 散射信号检测当激光束照射到细胞上时，细胞会发生散射现象。

流式细胞术简介流式细胞术简介一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry， FCM)是七十年代发展起来的高科学技术，?它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体，同时具有分析和分选细胞功能。

它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状，还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等，可对群体细胞在单细胞水平上进行分析，在短时间内检测分析大量细胞，并收集、储存和处理数据，进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞，分选纯度＞95%。

在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。

国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产: Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)和BECKMAN- COULTER公司。

流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。

B-D?公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。

BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL。

EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外，还具有细胞分选功能，?多用于科学研究。

二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞。

2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。

3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小，一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。

4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，，一般流式细胞仪能够达到<2.0%，这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。