上海市鼠伤寒沙门菌流行特征及分子分型研究

鼠伤寒沙门菌PFGE分型及溯源用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型技术，研究四川省2007年鼠伤寒沙门菌分子流行病学,查找沙门菌污染源,为预测疫情和制定防治措施提供依据。

方法选择Xba I酶对12株鼠伤寒沙门菌全基因组DNA进行酶切，用PFGE对菌株进行分子分型，Bionumerisc 统计软件聚类分析。

结果12株鼠伤寒沙门菌用XbaI 限制性酶切后，分成5个PFGE图谱类型，其中1个PFGE图谱类型有7株菌株，其指纹图谱的相似性达到100％，该型别占分析菌株的58.33%。

其余4个PFGE图谱类型分别有2株菌和1株菌。

含7株菌的PFGE图谱型中，源于成都市的菌株4株，攀枝花、自贡、内江市的菌株各1株。

结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对鼠伤寒沙门菌食源性疾病的溯源和预警。

沙门菌是重要的食源性病原菌, 鼠伤寒沙门菌(S．typhimurium) 是我国引起食物中毒最常见的沙门菌血清型[1]。

为掌握鼠伤寒沙门菌在四川省的分布及流行状况，分析比较从不同患者分离到的同一血清型的沙门菌在分子生物学水平的异同及菌株的同源性研究，为传染源追踪和分子流行病学研究及制定防治措施提供依据，对2007年收集的鼠伤寒沙门菌进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型研究，并结合流行病学调查进行分析，结果报告如下。

1.材料与方法1.1 菌株来源12株菌株分别分离自成都市、攀枝花市、自贡市、内江市和达州市各哨点医院的沙门菌感染患者（表1），由四川省CDC进行菌株鉴定及血清学分型。

PFGE用分子质量标准参考菌株为：沙门菌Braenderup血清型全球参考菌株H9812，由PulseNet亚太区网络实验室（香港公共卫生署实验室检测中心）分发，中国疾病预防控制中心传染病预防控制所保存。

1.2 PFGE操作由中国CDC传染病所国家重点实验室完成，实验过程按中国CDC传染病所沙门菌PFGE标准操作方法进行。

取平板上的菌落进行菌体的收集及灌制凝胶块，用蛋白酶K消化和采用XbaI 限制性酶切。

沙门菌属的流行病学特点
沙门菌属是一类常见的细菌，在全球范围内都有广泛分布。

这些
细菌能够引起人体各种部位的感染，例如肠道、泌尿生殖系统、呼吸
系统等。

最常见的沙门菌属病原体是沙门氏菌，它是肠道菌群中的一
种常见的细菌。

沙门氏菌通过污染的食物、水、接触传染和口腔-肛门传播等途径
传播。

其中，食物污染是最主要的传播途径。

常见的食物源包括家禽、家畜、野生动物等肉类及其制品，蛋类和乳制品，以及一些生鲜蔬菜
和水果等。

此外，气溶胶传播也可能会引发疫情，例如利用沙门氏菌
制备食物的工业车间或实验室等。

沙门氏菌感染的表现形式多种多样。

典型的沙门氏菌感染表现为
急性胃肠炎，患者主要症状包括发热、恶心、呕吐、腹泻、腹痛等，
一般为自限性疾病，但重症和多发病则需及时治疗。

沙门氏菌也可以
引起败血症、肺炎、尿路感染等。

孕妇、老年人、免疫功能低下者和
婴幼儿是感染沙门氏菌后并发症的高危人群。

预防沙门氏菌感染的最有效方法就是饮食安全。

应选择新鲜而熟
透的肉类及其制品，尤其是禽肉，要妥善贮存和加工，防止交叉污染。

饮用无污染的水，做好卫生习惯，保持个人卫生和环境卫生是预防沙
门氏菌感染的关键。

提高公众对沙门氏菌的认识，加强食品卫生监管
和科学防控策略也是有效控制沙门氏菌感染暴发的重要手段。

1175及毒力[3]。

另外，S. Typhimurium对宿主细胞的感染过程包括其对肠道上皮细胞的入侵[4]及在巨噬细胞内的复制[5]。

S. Typhimurium进化出一系列毒力因子，其中主要的毒力因子位于沙门菌毒力岛（Salmonella pathogenicity islands，SPIs）上。

沙门菌黏附上皮细胞，引起宿主细胞骨架的重排以及膜褶皱的形成，诱导宿主将黏附的沙门菌通过胞饮吞入胞内，此过程主要依赖于SPI-1发挥作用。

沙门菌成功入侵细胞后在包含沙门菌的液泡（Salmonella-containing vacuoles，SCVs）中，能够生存并复制，此过程主要依赖于SPI-2发挥作用[6]。

S. Typhimurium在感染宿主过程中，针对宿主内多种环境压力[7]，需要快速做出应答以维持蛋白的稳定性和活性，增强自身在宿主内的生存能力[8]。

这种应答通常需要多种调控机制来实现[9]，包括基因转录水平的调控、mRNA翻译过程中的调控以及翻译后的调控。

基因在转录水平的调控离不开转录调控因子的参与。

转录调控因子通过结合于靶基因DNA序列而发挥转录调控作用[10]，全局性的转录调控因子能够产生系统性的影响。

此外，自调控、共调控以及交叉调控[11]等共同丰富了原核生物的调控网络。

通过这一复杂而高效的转录调控系统，原核生物能够快速地应答环境信号的瞬时变化。

如双组分调控系统PhoP/PhoQ中的调控蛋白PhoP，能够在激活状态时结合于下游基因的启动子序列，激活或抑制相关基因的转录，由此参与沙门菌对低pH[12]、低Mg2+[13]的适应，以及入侵上皮细胞[14]和在巨噬细胞内复制[15]等多种生命活动。

此外，HilD[16]、Lrp[17]等转录调控蛋白也分别以不同方式参与对S. Typhimurium生命活动的调控。

HilD由SPI-1编码，并介导许多基因对SPI-1的调控[18]。

例如，HilD介导OmpR对SPI-1的调控[19]，进而影响了多种毒力相关基因的表达。

专利名称：一种鼠伤寒沙门菌MLVA分型的检测引物组、试剂盒及其应用
专利类型：发明专利
发明人：杨小鹃,吴清平,张菊梅,曾海燕,余树波,王涓,薛亮,吴浩明,张淑红
申请号：CN201910105795.5
申请日：20190201
公开号：CN109609668A
公开日：
20190412
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种鼠伤寒沙门菌MLVA分型的检测引物组、试剂盒及应用。

本发明针对鼠伤寒沙门菌4个具有较好分辨能力的VNTR位点设计特异性引物，建立多重PCR扩增检测方法，对各位点PCR扩增产物片段进行测序，采用本地Blast技术对测序结果进行分析，获得4个位点重复序列数目组合，对鼠伤寒沙门菌进行MLVA分型。

本发明的方法可对鼠伤寒沙门菌进行稳定的分型检测，仅分析4个VNTR位点、一次多重PCR扩增检测、直观方便的本地Blast分析获得VNTR重复序列数目，其分辨率与原MLVA‑5点分型方法相同，但分型效率高于原有MLVA‑5位点法，更简单、方便。

申请人：广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)
地址：510070 广东省广州市越秀区先烈中路100号大院56号
国籍：CN
代理机构：广州科粤专利商标代理有限公司
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文献综述：鼠伤寒沙门氏菌试验（Ames试验）摘要：食品安全无论如何怎样强调都不会过分，迅速而准确地检测致癌物质是食品安全问题的重要方面。

美国科学家Dr. Bruce Ames及其同事创立了一种方法，叫鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验），它是利用一组组氨酸营养缺陷型菌株加入待测物在有或没有微粒体活化系统条件下，发生回复突变的特征鉴定化学物质的诱变活性，现已成为初步筛选化学物潜在致突变的首选方法。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌试验；基本原理；一般步骤；应用及其研究进展；1 前言污染物对人体的潜在危害，引起人们的普遍关注。

世界上已发展了百余种短期快速测试法，检测污染物的遗传毒性效应。

美国科学家Dr. Bruce Ames等经十余年努力，于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验（亦称Ames试验）已被世界各国广为采用。

该法比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种污染物的综合效应。

众多学者有的用Ames试验检测食品添加剂、化妆品等的致突变性，由此推测其致癌性；有的用Ames试验检测水源水和饮用水的致突变性（比如，美国派斯净水器就通过了Ames 试验），探索较现行方法更加卫生安全的消毒措施；或检测城市污水和工业废水的致突变性，结合化学分析，追踪污染源，为研究防治对策提供依据；有的检测土壤、污泥、工业废渣堆肥、废物灰烬的致突变性，以防止维系生命的土壤受致突变物污染后，通过农作物危害人类；检测气态污染物的致突变性，防止污染物经由大气，通过呼吸对人体发生潜在危害；用Ames 试验研究化合物结构与致变性的关系，为合成对环境无潜在危害的新化合物提供理论依据；检测农药在微生物降解前后的致突变性，了解农药在施用后代谢过程中对人类有无隐患；还有用Ames试验筛选抗突变物，研究开发新的抗癌药等等[1]。

2 定义2.1 回复突变（Reverse mutation）细菌在化学致突变物作用下由营养缺陷型回变到原养型(prototroph)。

鼠伤寒沙门菌：通常严重污染后，也没有感官性状的改变（因为不分解蛋白质）。

潜伏期一般为12－36小时，短者6小时，长者48－72小时，大多集中在48小时内，超过72小时不多。

症状为头痛、恶心、呕吐、腹泻、腹痛，腹泻一日数次至十余次，主要为水样便，少数带有粘液或血。

体温38－40度，一般在发病2－4天体温下降。

多数病人在2－3天后胃肠炎症状消失。

鼠伤寒沙门菌即是胃肠炎型，突然发病，发烧，体温可达38－40度以上，伴有恶寒、恶心、呕吐、腹泻、腹痛。

吐、泻严重者有脱水现象或出现感染性休克，是较为常见的一种类型。

二型类伤寒型,病情缓和,突出的有高热,胃肠炎症状不明显。

三型类霍乱型，有剧烈的呕吐、腹泻，大便呈米汤样。

四型类感冒，体升高，恶寒，全身不适，四肢及腰部疼痛。

五型败血症型，起病突然，有高烧、恶寒、可有脑膜炎合并症。

多由猪霍乱沙门菌引起。

中毒发生的原因分析：首先是食品被鼠伤寒沙门菌污染，其次是本菌在适宜的条件下，在被污染的食品中大量繁殖（因为丁香鱼是定型包装的成熟制品，师傅直接拆封包装后在容器中加入调料盛装上盘，没有加热处理，未能杀死病菌）。

急救与治疗：1、洗胃、催吐、导泻（硫酸钠）、0.05%高锰酸钾溶液反复洗胃，越早效果越好。

2、抗生素治疗。

3、补充水份和纠正电解质紊乱。

4、对症治疗。

预防：1、防止食品被污染――生熟分开等。

2、控制食品中沙门菌的繁殖，主要因素是温度和贮藏时间（最适宜繁殖温度是37℃，要低温贮藏）。

加工后的食物，保存时间应缩短在6小时内。

3、彻底杀死沙门菌。

加热灭菌，沸水起煮2.5－3小时，中心温度达80℃以上持续12分钟以上。

4、注意事项：禽蛋煮沸8分钟以上，隔顿食物吃前一定要回锅加热，即使感官性质没有明显改变，也必须回锅加热或改制。

鼠伤寒沙门菌分子分型及耐药性特点程招敏;蓝锴;柏彩英;邓秋莲;袁彩虹;周强;张文【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2016(037)012【摘要】目的了解广州市鼠伤寒沙门菌的分子分型以及耐药性特点.方法利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对鼠伤寒沙门菌进行分子分型,采用纸片扩散(K-B)法进行药敏试验,且采用WHONET 5.6软件对药敏结果进行耐药分析.结果 PFGE结果聚类分析将44株鼠伤寒沙门菌分为15型,其中PFGE9型、PFGE8型、PFGE3型为广州市的优势菌型,菌株比例为54.5％(24/44).耐药表型分型可将其分为21型,多重耐药菌占61.4％(27/44).结论广州市鼠伤寒沙门菌分子分型呈多样性,分离株的多重耐药较为严重.【总页数】3页(P1601-1603)【作者】程招敏;蓝锴;柏彩英;邓秋莲;袁彩虹;周强;张文【作者单位】广东省中医院检验科,广州510120;广东省广州中医药大学第二临床学院 510120;广东省中医院检验科,广州510120;广东省妇幼保健院检验科,广州510010;广东省广州市妇女儿童中心检验科 510623;广东省中医院检验科,广州510120;广东省中医院检验科,广州510120;广东省中医院检验科,广州510120【正文语种】中文【相关文献】1.北京市21株鼠伤寒沙门菌多重耐药和分子分型研究 [J], 张新;曲梅;黄瑛;刘桂荣;李爽;贾蕾;李锡太;黎新宇;王全意2.2011-2013年河南省鼠伤寒沙门菌耐药与分子分型研究 [J], 赵嘉咏;黄丽莉;穆玉姣;谢志强;苏佳;张白帆;夏胜利;许汴利3.福建省鼠伤寒沙门菌PFGE分子分型和耐药的关联性研究 [J], 杨劲松;陈建辉;林杰;郑金凤;严延生;陈爱平4.2006-2010年中国鼠伤寒沙门菌分子分型分析 [J], 陈建才;樊粉霞;王淑京;娄静;刁保卫;阚飙;赵英伟;闫梅英5.2014—2018年仙桃市伤寒沙门菌分子分型及耐药性分析 [J], 叶恒平; 张雅婷; 袁敏; 邢学森; 吕静; 何飞; 周海健; 李国明; 杨红梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

上海市鼠伤寒沙门菌单相变异株的鉴定和耐药谱分析吴雯;屠丽红;张雯霞;张曦;陈敏【摘要】目的了解2013—2015年上海市流行的鼠伤寒沙门菌单相变异株的基因型和耐药谱.方法对2013—2015年上海市疾病预防控制中心细菌检测实验室保存的1179株分离自腹泻患者的沙门菌进行血清分型复核,结合聚合酶链反应(PCR)筛选、鉴定鼠伤寒沙门菌单相变异株.采用PCR检测鼠伤寒沙门菌单相变异株基因型.采用改良纸片扩散法对鼠伤寒沙门菌双相株和单相株进行14种抗菌药物体外药物敏感性试验,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判断结果.结果 1179株沙门菌中共检出鼠伤寒沙门菌单相变异株52株,在沙门菌和鼠伤寒沙门菌中的阳性率分别为4.4％和23.3％,病例来源主要为上海郊区,且以青中年人群为主.在52株鼠伤寒沙门菌单相变异株中,有44株(84.6％)fljB基因缺失;在8株fljB基因未缺失株中,有2株(3.8％)基因型为fljB+fljA-hin-,6株(11.6％)为fljB+fljA+hin+.药物敏感性试验结果显示,耐3类以上抗菌药物的单相株有40株(76.9％),耐4类以上抗菌药物的单相株有36株(69.2％),并且鼠伤寒沙门菌单相株对氨苄西林-链霉素-磺胺类药-四环素(ASSuT)的耐药率(61.54％)和对氨苄西林-氯霉素-链霉素-磺胺类药-四环素(ACSSuT)的耐药率(19.23％)均远高于双相株(10.6％)(P<0.05).结论上海市鼠伤寒沙门菌单相变异株检出率较高且人群分布不均,多重耐药性严重,在疾病防控中应注意合理布局资源和使用药物.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2018(033)009【总页数】5页(P798-802)【关键词】鼠伤寒沙门菌;耐药性;基因型;单相变异株【作者】吴雯;屠丽红;张雯霞;张曦;陈敏【作者单位】上海市疾病预防控制中心,上海 200336;上海市疾病预防控制中心,上海 200336;上海中医药大学附属曙光医院检验科,上海 201203;上海市疾病预防控制中心,上海 200336;上海市疾病预防控制中心,上海 200336【正文语种】中文【中图分类】R446.5鼠伤寒沙门菌是引起食物中毒最常见的致病菌之一，也是重要的医院感染致病菌[1]。

４株来自猪肉制品，２株牛肉制品。

２００６－－２００７年开展ＧＳＳ项目同步进行的食源性监测未分离到山夫登堡沙门菌。

２．山夫登堡沙门菌病例监测：２００６年从ＧＳＳ病例中分离到山夫卺堡沙门菌３４株（１７．３％，３４／１９６），被确认病例菌株集中在夏季（７—９月）共分离３０株，其中８月为高峰期达１４株。

４个监测点７—９月内以长宁区分离菌株最多（１９／３０），其次为浦东新区（５／３０）、卢湾区（４／３０）和金山区（２／３０）；２００７年ＧＳｓ病例仅分离到山夫登堡沙门菌５株（３．０％，５／１６８），历史同期的８月未分离到，而９月仅分离到３株。

２年内山夫登堡在非伤寒沙门菌病例血清型构成比例由２００６年的第３位下降至２００７年的第６位。

３．菌型构成比的回顾性分析：１９９９－－２００７年收集的沙门菌株血清型１。

１０位顺位构成显示，山夫登堡沙门菌属于比较常见的血清型之一，在食品、食品从业者和腹泻病例中均能检出。

但是以分离时间为坐标反映菌型的排列变化可以明显发现，代表不同时间段分离山夫登堡沙门菌所构成的顺位排列呈现上升趋势；２００６年山夫登堡沙门菌在菌型分布上处于历史的最高峰；２００７年菌型排序出现明显下降；同时期所进行的同步食源监测均未能从样品中分离到山夫登堡沙门菌（表１）。

４．抗生素耐药性：１４种抗生素纸片测试７株山夫登堡沙门菌食品分离株的耐药性，除１株表现为萘啶酸耐药外，其他均敏感；测试包括２００５年的２株和２００６－－２００７年ＧＳＳ的３９株腹泻病例分离株除对四环素耐药率为７５．６％（３１／４１）和对萘啶酸耐药率为２．４％（１／４１），其他均敏感。

５．ＲＰ指纹图谱分析：２００５－－２００７年使用砌“Ⅱ限制性内切酶对４ｌ株山夫登堡沙门菌腹泻病例分离株菌体染色体中的核糖体位点进行酶切分析，结果显示为完全相同的２种类型电泳图谱：１１株硫化氢和ｈｉｌＡ、ｉｎｖＡ基因表型均为阴性的山夫登堡沙门菌腹泻病例分离株对应一类完全相同的图谱；其余３０株硫化氢和ｈｉｌＡ、ｉｎｖＡ基因表型均为阳性的山夫登堡沙门菌腹泻病例分离株则对应了另一类完全相同的图谱。

鼠伤寒沙门培养基特点
鼠伤寒沙门在SS培养基上形成半透明较小菌落，符合肠杆菌的特点。

具体来说，它是一种革兰氏染色阴性、短杆状的细菌，没有荚膜和芽孢，多数有周围鞭毛，能够自我运动。

恢复期为第四周末，体温下降后症状消失，但仍可带菌1年左右，主要通过粪便排出[2]。

此外，ATCC 13311也是一种鼠伤寒沙门菌的菌株，广泛应用于媒体测试、测试杀菌剂、肠道研究、新兴传染病研究、药品和个人护理，并且可以在营养琼脂或营养肉汤培养基中生长[1]。

因此，鼠伤寒沙门的培养基特点主要包括：在SS培养基上形成半透明较小菌落，符合肠杆菌特点；在营养琼脂或营养肉汤培养基中生长[1]。

我国部分省市区鼠伤寒沙门菌生物学分型及分布
周刚;茹维萍;潘若男;张新增;王建丽
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】1999(9)2
【摘要】鼠伤寒沙门菌（鼠伤寒）对人类健康的危害将是疾病控制和卫生监督工作中长期面临的问题。

因此，探索研究新的、有效实用的流行病学调查监测实验方法，也将是卫生防疫的一项重要任务。

作者在对河南省各地区不同来源的鼠伤寒菌株进行了分型和应用研究外〔１、２〕，又对来自...
【总页数】3页(P90-92)
【关键词】鼠伤寒沙门菌;分型;分布
【作者】周刚;茹维萍;潘若男;张新增;王建丽
【作者单位】河南省卫生防疫站;江西省南昌市医学科学研究所;郑州市卫生学校【正文语种】中文
【中图分类】R378.22;R372
【相关文献】
1.鼠伤寒沙门菌生物学分型方法在流行病学调查和监测中的应用 [J], 周刚;茹维萍;廖予妹
2.我国部分省市区鼠伤寒沙门菌的质粒谱分型及其分布 [J], 潘若男;魏旭兰;罗明
3.20个省市区鼠伤寒沙门氏菌噬菌体分型 [J], 何晓青;刘小玲
4.河南省鼠伤寒沙门菌生物学分型研究 [J], 茹维萍;廖予妹
5.鼠伤寒沙门氏菌生物学分型及应用 [J], 周刚;廖予姝
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一起鼠伤寒沙门氏菌院内感染的分子流行病学研究
高汴京;单兆南;邵亚萍;李秀荣;孙锦山
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】1992(0)1
【摘要】1988年4月开封市妇产医院婴儿室发生一起由鼠伤寒沙门氏菌(STM)感染引起的腹泻暴发。

流行期间作者共检出40株 STM,其中新生儿31株、产妇2株、医护人员4株、外环境3株。

40株 STM 经系统鉴定均符合 STM 特性.质粒提取48株均含有60mol
【总页数】2页(P62-63)
【关键词】鼠伤寒沙门氏菌;院内感染;开封市妇产医院;外环境;血清学鉴定;婴儿室;质粒提取;药敏试验;大质;肠杆菌科细菌
【作者】高汴京;单兆南;邵亚萍;李秀荣;孙锦山
【作者单位】开封市预防医学中心
【正文语种】中文
【中图分类】R115
【相关文献】
1.鼠伤寒沙门氏菌院内交叉感染的流行病学调查 [J], 周崇连;陈红莲;伍运生;孙莲英
2.新生儿鼠伤寒沙门氏菌感染分子流行病学的研究 [J], 吴仕孝;唐毅
3.一起新生儿鼠伤寒沙门氏菌院内感染暴发流行 [J], 丁田;王美华
4.鼠伤寒沙门氏菌院内交叉感染的流行病学调查 [J], 周崇连;伍运生;陈红莲;孙莲英;
5.鼠伤寒沙门氏菌院内感染18例流行病学及临床表现 [J], 翟奇;陈茂余
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