奶牛妊娠的实验室诊断方法

母牛诊断妊娠的直肠检查方法配种后经过一定时间进行怀孕诊断，目的是确定母牛是否已经怀孕。

对怀孕母牛，须改善饲养管理，适度挤奶，小心使役，以保证胎儿正常生长发育、母体健康和避免流产。

对于未配上的母畜，则要查明原因：配种不当者，下次配种要改进措施；生殖道有病者，须进行相应的治疗，使他们尽快怀上，以保证生产计划和育种计划的完成。

怀孕诊断对产奶母牛尤为重要。

奶牛饲养业的集约化生产已进一步得到发展，怀孕产犊与否，直接关系到乳产量及奶牛场的经济效益，因此，怀孕诊断技术在奶牛业中应受到特别重视。

一、怀孕诊断方法。

怀孕诊断方法大体可分3类：即临床诊断法――问诊、视诊、听诊和触诊；实验室诊断法――血清、乳、及宫颈粘液生物学检查法和化学检查法；特殊诊断法―一阴道活组织检查、X射线诊断、超声波探测、胎儿心电图检查、免疫学诊断等。

这些方法中有的不够准确；有的需要怀孕较久才能做出确诊；有的虽很准确，但操作复杂，实践中很难推广使用。

在没有仪器条件的情况下，对牛进行直肠检查诊断是诊断妊娠最为简单可靠的方法。

二、牛的直肠检查方法和步骤：先摸到子宫颈，再将中指向前滑动，寻找角间沟；然后将手向前、向后、再向后，试把2个子宫角都掌握在手内，分别触摸。

经产牛子宫角有时不呈现绵羊状而垂入腹腔，不易全部摸到；这时可先握住子宫角向后拉，然后手带着肠管迅速向前滑动，握住子宫角，这样逐渐向前移，就能摸清整个子宫角。

摸过子宫角后，在其尖端外侧或下侧寻找卵巢。

通常用一只手进行触诊即可。

寻找子宫动脉的方法是将手掌贴着骨盆顶向前移；超过峡部以后，可以清楚地摸到腹主动脉粗大的两条分支，它们是髂内动脉。

子宫动脉从髂外动脉分出后不远即进入阔韧带内，所以追踪它时感觉它是游离的。

触诊阴道动脉的子宫支的方法，是将指甲伸至相当于荐骨末端处，并且贴在骨盆侧壁的坐骨上棘附近，前后滑动手指。

阴道动脉是骨盆腔内比较游离的一条动脉，由上向下行，而且很短，不太容易识别。

牛直肠粘膜受到刺激，容易渗出血液，手在直肠内操作时，只能用手指肚、手指尖不要触黏膜。

奶牛妊娠诊断常用的方法作者：李春来源：《现代畜牧科技》 2015年第9期李春（黑龙江省肇源县超等乡政府 166500）奶牛配种后，采取简便且有效的妊娠诊断，能够正确区分空怀奶牛和妊娠奶牛。

对于妊娠奶牛，要适当提高饲养管理水平。

对于空怀奶牛，要查找分析未妊娠的具体原因，并于下个发情期进行补配，从而减少空怀，使产犊间隔缩短，使繁殖率提高。

本文简要介绍奶牛妊娠诊断的常用方法，以供参考。

1 外部观察法奶牛妊娠后，在食欲、眼神、行为、运动、被毛、腹围、泌乳、阴门等方面都会发生变化。

一般情况下，妊娠奶牛采饲量增加，行动稳健，被毛光亮，阴门出现皱褶，黏膜呈苍白色或粉白色，阴蒂颜色变深且增大。

阴道有粘稠状粘液，类似胶皮糖，并有粪便粘夹在阴门最下面的阴毛上。

青年母牛的乳房在妊娠4～5个月开始发育，腹围逐渐增大，且在妊娠7～9个月时腹壁右侧显著增大。

外部观察法能够初步断定奶牛是否妊娠，虽然只能作为辅助手段用在生产中，但对奶牛管理具有一定的指导意义，如对照配种日期适时转群、干奶、移人产房，做好保胎工作，避免发生流产，提高营养供给等工作。

2 直肠检查法直肠检查一般是检查员用左手隔着直肠触摸妊娠子宫、子宫中动脉和胎儿的变化情况，并据此判断奶牛是否妊娠和确定妊娠时间。

这种方法是奶牛早期最主要的妊娠诊断方法之一，经验丰富的操作人员，能够在奶牛妊娠40～60天确定是否妊娠，准确率高于95%。

在保定架内，将待检奶牛站立保定，如果没有保定架，也可将牛头栓系于固定的木桩上，最好有一人站立在牛的右后侧进行辅助保定。

操作人员将左手伸入直肠，握住骨盆底部的子宫颈，手指向前伸来找寻子宫间沟，然后握住并分别触摸2个子宫中角，沿子宫角尖端轻柔触摸卵巢。

触摸子宫中动脉时，用手掌贴着骨盆顶向前滑动，通过岬部，向前则可触摸到颤动、游离的子宫中动脉。

奶牛未妊娠时，子宫和卵巢均处于骨盆腔内，两侧的子宫角形状、大小和硬度相同，收缩像绵羊角状，富有坚实感和弹性。

中国畜禽种业2019.03作者简介：王斐(1989.11-），女，辽宁省开原市人，兽医师，研究方向：预防兽医及动物疫苗研制。

奶牛早期妊娠诊断技术简述王斐（黑龙江省齐齐哈尔市畜牧总站161000）摘要：随着人民生活水平的提高，我国畜牧养殖业飞速发展，人们对牛奶的需求量大增，奶牛养殖业得到蓬勃发展。

在奶牛养殖中，繁殖技术是奶牛养殖业的重中之重，奶牛早孕诊断一直是奶牛养殖业亟待解决的问题，本文简述常规奶牛早孕诊断技术手段，以期为奶牛产业繁殖效率提高提供参考。

关键词：奶牛；养殖；妊娠；诊断20世纪90年代以来，中国乳牛的存栏量大增，奶牛养殖量不断增加。

高效养牛模式是目前养殖场追求的方式，早期妊娠诊断可提高奶牛繁殖率，从而提高奶牛养殖的经济效益。

近年来，奶牛早孕诊断技术出现了很多新的方法与技术。

1奶牛的早期妊娠诊断主要技术1.1早孕因子诊断法早孕因子是一种妊娠相关蛋白复合物，通过抑制雌性动物的细胞免疫，使胎儿能正常存活，从而达到避免母体免疫排斥的目的。

早孕因子的诊断方法主要是确定早孕因子的含量，以此作为早孕诊断的重要指标[1]。

1.2乳胶凝集抑制试验当精子和卵子结合形成合子时，胚胎和胎盘在母牛体内发育，绒毛膜促性腺激素是由绒毛膜滋养细胞和囊胚子叶分泌出来的，通过乳胶凝集抑制试验测定怀孕雌性动物的尿液和奶中的激素可作为早期妊娠诊断的方法[2]。

1.3超声波诊断法超声波有A 超、B 超、D 超，其中多普勒超声被广泛应用。

其原理是利用超声波对动物子宫扫描，根据信号判断动物是否怀孕[3]。

我国运用超声波在动物早孕的诊断进行大量研究。

邓甘珍等在2004年用B 超检测了137只处于不同妊娠阶段的雌性动物，在交配后第30天的诊断准确率为89%，在交配后31～35d 的诊断准确率为97%，35d 以上的诊断准确率为100%。

1.4宫颈-阴道黏液电导率测定法有研究者通过测定宫颈-阴道黏液电导率在妊娠早期和发情周期有规律的变化发现，健康奶牛发情时导电性水平较低，从发情开始逐渐上升到发情后期逐渐下降；在发情后受精过程中，孕牛的电导率变化与空牛不同。

母牛妊娠管理1、妊娠诊断母牛配种后最好进行三次妊娠诊断，第一次在配种后60―90天采用直肠检查法；第二次在配种后4―5个月采用直肠检查法；第三次停奶前采用腹壁触诊法。

有条件可在配种后30―60天采用超声妊娠诊断法及配种后22―24天采集牛奶应用放射免疫或酶联免疫进行早期妊娠诊断，主要目的是检出未妊娠母牛。

其它方法还有在配种后30―60天取子宫颈口粘液加碱煮沸法等。

2、奶牛的妊娠期及预产期推算方法黑白花奶牛的妊娠期平均280天左右，范围255―305天。

青年母牛的妊娠期比经产母牛短3天，怀母犊比怀公犊妊娠期短2天，怀双胎比怀单胎短4天。

奶牛预产期的推算方法是：“月减3，日加5”，即预产月份为配种月份减去3，如果配种月份小于或等于3，则先加12再减3；预产日期为配种日期加5，如果配种日期在月底，加5后预产日期就可能推到下月初。

3、奶牛的流产发生率、流产原因及流产类型奶牛人工授精的流产发生率为10%左右，胚胎移植的流产发生率为15%左右。

流产的原因分传染性流产和非传染性流产两大类，传染性流产是传染病的一种症状，大多数流产为非传染性流产。

非传染性流产的原因有：营养性流产；损伤性流产；中毒性流产；药物性流产；症状性流产。

根据流产的月龄及胎儿的变化，流产可分为以下几种类型：（1）隐性流产。

又称早期胚胎死亡，发生在妊娠早期1―2月龄，占流产中的25%。

（2）小产。

即排出未经变化的死胎，发生在妊娠中后期。

这是最常见的一种流产，占流产中的49.8%。

（3）干胎。

胎儿死亡后滞留在子宫内，由于子宫颈口关闭，胎儿水分被吸收发生干尸化，死胎多发生在妊娠4―5个月，占流产中的24%。

（4）胎儿浸溶。

胎儿死亡后由于非腐败菌侵入子宫，胎儿的软组织被溶解流失，而骨骼滞留在子宫内，死胎月龄与干胎相近，占流产中的0.9%。

（5）胎儿腐败。

胎儿死亡后由于腐败菌侵入子宫，使胎儿发生腐败分解，产生大量气体使胎儿增大造成难产，是最危险的一种流产，临床上极少见，占流产中的0.3%。

如何判断奶牛是否妊娠作者：暂无来源：《乡村科技》 2014年第9期1.外部观察法。

配种后的母牛在经过一个发情周期后，未出现发情就可能已妊娠，而出现发情的，则未妊娠。

这对发情周期比较正常的母牛非常具有参考价值，但不能作为主要依据。

因为饲养管理不良时，母牛虽未妊娠也可能表现不发情，少数已妊娠的母牛也可能出现假发情。

2.阴道检查法。

①阴道黏液色泽。

母牛妊娠后阴道黏液膜由粉红色变为苍白，无光泽，表面干燥。

②黏液性状。

母牛妊娠2个月后子宫附近有浓稠黏液；妊娠3~4个月，黏液量增加并更浓稠似糊状；同时阴道收缩，插入开膣器有阻力，子宫颈口被灰暗浓稠的液体封闭。

③子宫颈的变化。

母牛妊娠后子宫颈口紧闭，被灰暗浓稠的液体封闭，形成子宫栓，子宫颈口的位置随妊娠时间的增加从阴道正中向下方位移，有时也会偏向一侧。

3.激素检查法。

①激素反应法。

在母牛配种后18~20天，肌内注射雌激素2~3毫克，5天内不发情者可诊断为妊娠；未妊娠母牛注入外源性雌激素，可表现为明显发情。

②黄体酮水平测定法。

妊娠期在35~82天的母牛，乳中黄体酮含量大于4.22，小于此数值为未妊娠。

4.直肠检查法。

直肠检查法是判断母牛是否妊娠的一种可靠方法，同时还可确定妊娠以及胎儿发育情况，在生产上得到了广泛应用。

其诊断依据是妊娠后母牛生殖器官的一些变化：如妊娠初期，主要是子宫角的形态和质地变化；30天后以胎泡的大小变化为主；中后期则以卵巢、子宫的位置变化和子宫动脉特异搏动为主。

未妊娠母牛的子宫颈、子宫体、子宫角及卵巢均位于骨盆腔；经产牛有时子宫角可垂入骨盆腔入口前缘的腹腔内。

未孕母牛两侧子宫角大小相当，形状相似，向内弯曲如绵羊角；经产牛会出现两角不对称现象。

触摸子宫角时有弹性，有收缩反应，角间沟明显，有时卵巢上有较大的卵泡存在，说明母牛已开始发育。

5.B超检查法。

使用兽用B超可明显缩短妊娠判断时间，并增强准确性。

在奶牛配种12天后能检测到子宫体积增大，子宫内体液增多；配种24天后可检测到胎儿并能够确诊妊娠，比直肠检查法可提前36天，能及时发现未妊娠母牛并采取措施，大大缩短奶牛的空怀时间，提高母牛的繁殖效率，减少损失；配种55~57天后可鉴别胎儿性别，在生产中有更广泛的用途。

养殖技术-奶牛的妊娠诊断和预产期推算一、妊娠诊断奶牛发情配种后，经20—60天不再发情，可初步断定已怀孕。

奶牛的妊娠诊断常用的方法有外部观察法、阴道检查法及直肠检查法。

1、外部观察法母牛配种后在下一个发情周期到来时不出现发情征状，且性情变得温驯，行动迟缓，躲避角斗和追逐；放牧和驱赶运动时，常落在牛群之后，易感疲劳，食欲和饮水量大增，被毛光泽与膘情变好时可初步确定已怀孕。

到妊娠中后期时，母牛腹部明显变大，妊娠6个月以后可在腹壁触到或看到胎动。

2、阴道检查法通过开膣器检查时可以看出怀孕一个月的母牛阴道粘膜和子宫颈显得苍白没有光泽，且粘膜干燥，随着妊娠期的延长阴道粘膜越显干燥。

子宫颈口闭合，偏到一边，被灰暗的子宫颈粘液栓堵塞。

相反，未孕母牛的阴道与子宫颈粘膜为水红色而不是苍白色，具有光泽，且湿润。

检查时若操作不当，容易损坏阴道粘膜，造成粘膜出血和感染，一定要特别小心。

3、直肠检查法直肠检查是目前最常用、最可靠的准确诊断妊娠的方法。

如果有丰富的直肠检查经验和详细的繁殖记录，在一个月左右就可确诊。

主要是依据母牛妊娠后生殖器官的一些变化，隔着直肠壁触诊卵巢、子宫、胎儿及子宫中动脉来判断是否妊娠。

直肠检查时要先清宿便，再清洗消毒，动作一定要缓慢轻柔，切忌粗暴。

Ⅰ期：妊娠奶牛早期（30天左右）触摸排卵侧的卵巢有突出于表面的妊娠黄体，卵巢体积大于对侧；检查子宫时，两侧子宫角不对称，孕角稍大于空角，增粗、质地较松软，有波动感。

空怀母牛卵巢无大的变化，可摸到有黄体存在，又有小的卵泡在发育；子宫角大小相等，角间沟明显，子宫角较硬有弹性。

Ⅱ期：妊娠40—60天，孕角比空角明显增大1—2倍，角间沟变平，孕角波动明显。

Ⅲ期：妊娠60天后子宫开始垂入腹腔，但仍可摸到胎膜的滑落感。

Ⅳ期：妊娠90天，角间沟完全消失，子宫已失去固有形状，大如婴儿头，有的大如排球，有明显的波动感。

子宫壁变薄，子宫开始沉入腹腔口。

初产牛子宫下沉时间较晚，有时可以摸到胎儿。

奶牛妊娠的实验室诊断方法作者：那仁巴特来源：《现代畜牧科技》 2015年第6期那仁巴特（新疆博乐市小营盘畜牧兽医工作站833400）孕期的动物因胎盘和胎儿的影响，母体的新陈代谢会出现改变，其体内的血、尿、乳成分产生了较大的改变，因此可以通过对这些成分的变化检测来确定其是否妊娠，可以作为诊断的依据。

早期妊娠诊断中，进行了很多的探索，可是却没有找到比较完美的实验室诊断方法，比较可靠优秀的妊娠诊断需要包含下列的要求：①在配种后一个发情周期之内显示出诊断结果。

②妊娠诊断的诊断准确率应在85%以上。

③对母体和胎儿安全无害。

④方法简便、经济实用。

实验室进行动物妊娠诊断的方式有很多，本文主要是对其中使用较多，效果较好的一些方法进行了阐述，并对其应用前景进行介绍。

1 牛乳孕酮诊断法因为妊娠，动物的血液、乳中会有较高的孕酮浓度，在配种后1824天时牛妊娠的早期，其体内会有内分泌改变，对妊娠早期奶牛的孕酮进行测量，可以确定是否发生了妊娠，根据临床研究显示，奶牛早期妊娠的最佳诊断时间就是在配种后23天对其孕酮情况进行分析。

孕酮- ELISA(P - ELISA)诊断法：P- ELISA诊断法利用抗原（孕酮）、酶标抗原（酶标记孕酮）与抗体（孕酮抗体）的饱和竞争性结合反应原理，来监测乳样中孕酮浓度的高低，依据反应系统中所产生的颜色（蓝、黄和粉红）深浅程度，用肉眼定性孕酮在乳样中的浓度范围，从而达到妊娠诊断的目的。

荷兰等国已生产出相应的商品性P - ELISA诊断试剂盒，但我国尚无此类型的商品试剂盒上市，此方法早期妊娠诊断的准确率为84.5%，成本较高。

孕酮乳胶凝集抑制试验：①诊断原理：孕酮乳胶凝集抑制试验( PLAIT)是一种利用孕酮单克隆抗体和由孕酮包被的胶珠进行乳汁孕酮快速定性测定的免疫学方法。

其诊断原理是将孕酮包被在特化的乳胶珠上，使奶样中的游离孕酮和胶珠上的孕酮竞争与单克隆抗体上的有限位点相结合，以此来定性显示乳样中孕酮水平高低。

一、实验目的本实验旨在掌握奶牛妊娠诊断的基本原理和方法，提高奶牛养殖户对奶牛妊娠的早期诊断能力，为奶牛养殖生产提供科学依据。

二、实验原理奶牛妊娠诊断主要依据妊娠母牛体内激素水平的变化，如孕酮、雌激素等。

通过检测这些激素水平，可以判断奶牛是否妊娠。

三、实验材料1. 实验动物：健康黑白花奶牛5头，分别编号为1、2、3、4、5。

2. 试剂与仪器：3%硫酸铜溶液、饱和氯化钠、0.1%氧化镁溶液、医用碘酒、试管、酒精灯、火柴、温度计等。

3. 实验步骤：（1）乳汁诊断法① 分别取1毫升3%硫酸铜溶液加入0.5-1毫升乳汁中，观察乳汁是否凝结。

② 取1毫升乳汁放入试管中，加入1毫升饱和氯化钠，振荡后再加入15毫升0.1%氧化镁溶液，振荡20-25秒。

③ 将试管置于开水中加热1分钟，取出静置3-5分钟后观察，如形成絮状物沉在下半部表明已怀孕，不形成絮状物或集于上部是未孕。

（2）尿液诊断法① 取母牛清晨排出的尿液20毫升放入试管中。

② 加入1毫升醋，再滴入1毫升2%-3%医用碘酒。

③ 用火缓慢加热煮沸，此时试管中从上到下呈现红色表明怀孕，如呈浅黄色、褐绿色，冷却后颜色很快消退则未孕。

四、实验结果1. 乳汁诊断法① 奶牛1、2、3号乳汁凝结，表明已怀孕。

② 奶牛4、5号乳汁不凝结，表明未怀孕。

2. 尿液诊断法① 奶牛1、2、3号尿液在加热煮沸后呈红色，表明已怀孕。

② 奶牛4、5号尿液呈浅黄色、褐绿色，冷却后颜色很快消退，表明未怀孕。

五、实验分析通过本次实验，我们掌握了奶牛妊娠诊断的基本原理和方法。

乳汁诊断法和尿液诊断法均能准确判断奶牛是否妊娠。

在实际生产中，可根据具体情况选择合适的方法进行诊断。

六、实验总结1. 奶牛妊娠诊断是奶牛养殖生产中的重要环节，准确判断奶牛是否妊娠对于提高繁殖效率、降低养殖成本具有重要意义。

2. 本次实验中，乳汁诊断法和尿液诊断法均具有较高的准确性，为奶牛养殖户提供了便捷的妊娠诊断方法。

3. 在实际生产中，应根据奶牛的具体情况选择合适的妊娠诊断方法，以确保诊断结果的准确性。