survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)在鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤(SNM)中的表达及其临床意义

survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)在鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤
(SNM)中的表达及其临床意义
朱文嘉;李诗敏;王纾宜
【摘要】目的探讨survivin和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤(sinonasal melanoma,SNM)中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系.方法选取2004年3月至2011年8月在本院治疗的42例SNM患者的石蜡标本.采用免疫组织化学方法检测survivin和PCNA在SNM组织中的表达情况,分析survivin和PCNA表达水平与患者临床病理特征及预后的关系.结果 survivin和PCNA表达水平与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴转移部位及个数无明显相关性(P＞0.05);肿瘤组织中survivin蛋白表达率为73.8％ (31/42),PCNA蛋白表达率为100％ (42/42);单因素分析结果显示,survivin 高表达患者无瘤生存期(disease free survival,DFS)及总生存期(overall survival,OS)明显低于survivin低表达者(P＜0.05);患者临床分期及survivin表达水平与患者预后相关(P＜0.05),差异有统计学意义;多因素分析结果显示临床分期和survivin表达水平是SNM患者的独立不良预后因素.PCNA表达与SNM患者DFS、OS无明显统计学差异.结论 survivin表达水平与SNM患者预后相关,可作为评估SNM患者预后的一项重要指标.
【期刊名称】《复旦学报（医学版）》
【年(卷),期】2014(041)005
【总页数】6页(P596-601)
【关键词】黑色素瘤;鼻腔;鼻窦;survivin;增殖细胞核抗原;预后
【作者】朱文嘉;李诗敏;王纾宜
【作者单位】复旦大学附属眼耳鼻喉科医院病理科上海200032;复旦大学附属眼
耳鼻喉科医院病理科上海200032;复旦大学附属眼耳鼻喉科医院病理科上海200032
【正文语种】中文
【中图分类】R730.23
鼻腔鼻窦恶性黑色素瘤（sinonasal melanoma，SNM）是一种来源于呼吸道黏
膜的树突状黑色素细胞的高度恶性肿瘤，可广泛浸润，并可通过淋巴结或血道转移。

原发于鼻腔者仅占全部恶性黑色素瘤的1％。

目前发病机制尚不清楚，治疗效果也不理想，5年生存率较低。

主要与其发病部位隐蔽、组织构成复杂有关。

早期诊断、及时彻底切除病灶可以提高治愈率。

细胞增殖和凋亡的失衡是肿瘤发生的两大因素。

关于survivin和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达在多种肿瘤中均有研究，
如鼻咽癌、食管鳞状细胞癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃肠道间质瘤［1-6］等，但其在SNM中的研究国内外还未有报道。

本课题旨在探讨肿瘤细胞增殖和抑凋亡相关标志物与SNM复发和转移的关系，为临床判断预后和选择治疗方案提供理论依据。

研究对象选取2004年3月至2011年8月在复旦大学附属眼耳鼻喉医院耳鼻喉
科治疗的42例SNM患者的石蜡标本。

收集患者的临床病理资料，包括性别、年龄、肿瘤部位、淋巴转移部位及个数。

临床分期参照国际癌症研究机构（IARC）
在2005年出版的《WHO肿瘤分类¯¯¯头颈部肿瘤病理学和遗传学》所制订［7］。

病例一般情况男性23例、女性19例；年龄40～86岁，中位年龄为61岁。

临
床主要症状为鼻阻、鼻出血、涕血等。

有2例发生于双侧鼻腔，1例发生淋巴结转移；40例为单侧鼻腔（左侧20例，右侧20例）：局限于鼻腔22例，鼻腔鼻窦
受累12例，鼻腔及颅底受累1例，鼻腔及咽口1例，鼻腔及软腭1例，鼻腔、筛窦及眶底1例，鼻腔及颈部淋巴结转移2例。

42例病理诊断为恶性黑色素瘤，Ⅰ期39例，Ⅱ期3例。

随访情况42例患者中，16例患者行单纯手术治疗，3例行单纯放疗，5例行手术、放疗和化疗，13例行手术和放疗，5例行其他治疗。

随访至2013年10月31日，最短随访时间2个月，最长65个月，中位随访时间24个月。

免疫组化切片常规脱蜡，以3％过氧化氢室温孵育10min，消除内源性过氧化物
酶活性，PBS液洗，经抗原微波修复分别以鼠抗人PCNA单克隆抗体（克隆号
PC10，上海基因科技公司，稀释浓度1∶300）及兔抗人survivin单克隆抗体
（克隆号EP2880Y，上海基因科技公司，稀释浓度1∶400）4℃过夜，之后En Vision二抗（丹麦DAKO公司）37℃孵育30min，DAB显色液，苏木精复染、
封片。

以PBS缓冲液代替一抗，其他步骤不变，结果作为阴性对照。

结果的评价所有病理切片由2位不了解患者病情及研究内容的病理科医师共同判断。

参考相关文献报道［1］，PCNA、survivin阳性结果判断标准：染色强度阴
性计0分，轻度染色计1分，中度染色计2分，强染色计3分；阳性细胞范围：
无阳性细胞计0分，1％～25％计1分，25％～50％计2分，≥50％计为3分；
按阳性细胞范围×染色强度评分：＜2分计阴性，≥2分计为阳性。

统计学方法计量资料采用±s表示，所有数据均采用SPSS 17.0软件进行统计学处理。

单因素分析时数值变量用t检验，分类变量用χ2检验或精确概率法，将有统计学意义的指标进行Logistic多因素回归分析。

生存分析采用Kaplan-Meier法
和Log-rank检验。

P＜0.05为差异有统计学意义。

SNM组织中survivin、PCNA表达与患者临床病理特征的关系对42例SNM患
者的组织标本进行分析，survivin表达水平与患者临床病理学特征（年龄、性别、肿瘤分期）无明显相关性，差异无统计学意义（P＞0.05）。

PCNA染色均为强阳性，与患者临床病理学特征无相关性（表1）。

survivin和PCNA染色表达情况 survivin在SNM患者肿瘤组织中阳性表达率为73.8％，主要定位于肿瘤细胞质和细胞核，呈棕黄或棕褐色，阳性细胞弥漫或局灶性分布（图1A、B）；PCNA在肿瘤组织中阳性表达率为100％，主要定位于肿
瘤细胞核，呈棕黄色至深褐色灶性分布（图1C）。

survivin和PCNA表达水平与患者预后的关系对survivin的表达情况与患者无瘤生存期（disease free survival，DFS）和总生存期（overall survival，OS）的关系进行分析，随访至2013年10月31日，42例患者中39例患者首次治疗后发
生复发或转移，37例患者因复发或转移死亡，中位无瘤生存时间为6个月，总中
位生存期为24个月。

survivin表达阳性的患者的DFS及OS均低于survivin表
达阴性的患者，差异具有统计学意义（P＜0.05，图2）。

单因素及多因素分析通过Kaplan-Meier、Cox回归及Log-rank检验可见，survivin是否表达及临床分期是SNM患者的独立不良预后因素，并且survivin表达水平高的患者的预后明显差于survivin表达水平低的患者（P＜0.05，表2、3，图3）。

肿瘤细胞的过度增殖和（或）凋亡受到抑制是肿瘤发生、发展的重要原因之一。

survivin蛋白是目前凋亡抑制蛋白（inhibitor of apotosis protein，IAP）家族成员中最强的凋亡抑制因子，它通过抑制Caspase-3和Caspase-7的活性以及与CDK4、CDK2相互作用对细胞进行调节［8］。

survivin是凋亡抑制蛋白家族的
成员，survtvtn基因是迄今发现最强的调亡抑制因子。

它在抑制细胞凋亡、细胞
有丝分裂以及诱导肿瘤细胞侵袭相关基因的表达改变等方面发挥着作用［9］。

survivin在恶性肿瘤和正常成人细胞中的表达有显著不同，它在正常成人组织中几
乎检测不到，而在实体肿瘤以及恶性血液疾病中表达增加［9］。

survivin作为生
物标志物在结直肠癌、卵巢浆液性肿瘤、膀胱癌、骶骨脊髓瘤等均有表达［10-13］，不同的研究发现survivin的高表达与患者预后呈现截然相反的结果。

在卵
巢浆液性肿瘤、结直肠癌、急性髓细胞性白血病、喉癌等［10-11，14-15］研究中发现，细胞核中survivin的高表达提示患者预后良好；而在乳腺癌、食管鳞状
上皮癌［16-18］的研究中则发现，细胞核内survivin的高表达提示患者预后不良。

本研究发现survivin在SNM中的特异性表达，且表达定位于胞质、胞核。

与前
期survivin在其他肿瘤中的研究结果相一致。

进一步分析发现，survivin在复发、转移组及无复发、无转移组之间并无显著差异，提示survivin在肿瘤复发、转移
未发挥重要作用。

同时，survivin表达阳性患者的DFS和OS明显低于survivin
表达阴性的患者。

在分析survivin与患者生存时间关系时发现，survivin表达量
的高低与患者生存时间存在相关性。

表达量较高患者的OS相较于表达量较低的患者有所缩短。

但是，survivin的表达量在发生复发、无转移的SNM组织间及未发生复发、无转移的SNM组织间差异无统计学意义（P＞0.05），这可能与黑色素
瘤分化差、肿瘤细胞的侵袭及转移能力强有关。

PCNA蛋白是一种相对分子质量（Mr）为36 000的酸性蛋白质，仅出现在增殖
状态细胞核内，在G0及G1期无明显表达，G1期的晚期开始表达，逐渐增加，
到S期达到最高浓度，在G2期和M期表达明显减少［19］。

PCNA表达量的变化与DNA合成一致，可作为细胞增殖状态的一项检测指标［20］。

因此，PCNA 逐渐用于肿瘤的研究中。

一些学者认为PCNA指数与肿瘤分期、分级以及生存率
存在明显相关性［21］，但也有学者研究发现PCNA指数与肿瘤的分期、分级及
生存率无明显相关性［22］。

本研究发现，PCNA在SNM组织中的阳性表达率
为100％，与肿瘤的各影响因素均不相关。

推测可能与PCNA是反映增殖活动的
重要指标有关。

本研究结果验证了恶性黑色素瘤是一种高度恶性的肿瘤，其细胞增
殖能力强，因此仅根据PCNA表达无法确定不同组别的差异。

综上所述，本研究认为survivin可作为评估SNM预后的一项重要指标，并能为今后SNM靶向治疗提供潜在理论依据，而鉴于恶性黑色素瘤的高度恶性特性，PCNA不能做为独立的研究标记。

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