血液及骨髓标本的细菌检验
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血液、骨髓标本的 细菌学检验
一、标本采集
• 采集时间 发热初期（1-2天内）或高峰时期 用药之前（或下次用药之前）
• 采血部位和频率 多选肘静脉 （多部位或增加采血频率可提高检出率）
• 采血量及接种 为培养基的1/10为宜（成人5-10ml；婴幼儿1-5ml；儿童3-5ml）
注入培养基后，立即轻轻混匀（同时厌氧、需氧培养时，应先种厌氧）
临床意义
• 从血液、骨髓检出任何细菌都具有意义。但必须 排除采样、或无菌操作不严引起的污染。
• 若2次培养或多部位采血培养出同一细菌或定量培 养一种菌大量生长，多为菌血症或败血症的病菌。
• 血液细菌培养是菌血症、败血症的常用检验方法
血液、骨髓标本中常见的病原体
革兰阴 性球菌
革兰阳 性球菌
革兰阳 性杆菌
• 骨髓采集 适宜怀疑细菌性骨髓炎或长期用药患者，采1-2ml(二) 检验方法Fra bibliotek• 检验程序：见表
血液/骨髓
血液标本的检验程序：
增菌培养
(需氧、厌氧、CO2)
涂片染色镜检
分离培养
直接药敏
报告
需氧及CO2
（ BA、CA ）
（一级报告）
厌氧 （厌氧BA）
报告 （二级报告）
鉴定
菌落 形态
涂染检
生化 反应
• 第三级报告（检验单）方式： 培养----天有----细菌生长
• 阴性结果报告： 增菌未发现细菌生长，继续培养到第
7天，经3次以上的盲转，可报告：
经---天培养无菌生长
3.特殊培养
• 草绿色链球菌
• 初代、次代应接种3瓶胰酪蛋白大豆肉汤同时做需 氧、厌氧及CO2培养
• 第一周转种BA，如有细小、针尖样凸起并有草绿 色溶血环的菌落，按链球菌鉴定，报告“有草绿 色链球菌生长”。
L-型细菌培养
• 标本—种入高渗培养基增菌—移种BA和L型 细菌培养基分离，如有“油煎蛋”样菌 落—反复传代接种使之反祖—鉴定
• 对不能返祖的需与支原体鉴别
• 经1月培养仍无菌生长者可报告阴性
真菌培养
• 常用SA作真菌分离培养
鼠疫杆菌、钩端螺旋体、立克次体
• 可将患者血液接种于动物，更易得到阳性 结果。
• 如培养7天无菌生长，则需继续培养至第四周，每 周移种2次，涂片染色镜检，仍无菌，报告：4周 培养无草绿色链球菌生长。
脑膜炎奈瑟菌培养
• 增菌培养基：葡萄糖肝浸液、胰胨肉汤 • 瓶内先充入5-10%的CO2气体，培养基先预温
• 沙门菌培养
• 增菌培养基：葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 • 疑有菌生长—SS、MAC等培养基分离—KIA初步鉴
定—系统生化反应、血清学鉴定、药敏试验
布氏杆菌
• 增菌培养：血—2瓶肝浸液肉汤（1瓶先充CO2， 1瓶普通培养）—出现肉眼可见的浑浊、菌膜、 粘性沉淀物—涂片染色镜检—移种2个肝浸液平 板（同上培养）—涂、染、镜检—生化反应、 血清学凝集—最终报告
• 阴性报告：培养3-4周无菌，则报告“经-周培 养无菌生长”。
革兰阴 性杆菌
其他
金葡、表葡、化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺炎球菌、 肠球菌、厌氧链球菌
脑膜炎奈瑟菌 卡他布兰汉菌
结核杆菌、产单核李斯特菌、炭疽芽孢杆菌、产气荚膜 杆菌、丙酸杆菌、阴道加特纳菌
沙门菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、粪产碱杆菌、大肠杆 菌、不动杆菌、沙雷菌、布氏杆菌、鼠疫杆菌、类杆菌 真菌、螺旋体
增菌培养长了细菌以后：
1.挑取培养物涂、染、镜检，将镜检结果报告给
临床医生（一级报告）
2.分离培养：镜检有细菌，排除污染后，取瓶底 培养物接种BA、巧克力等。
同时进行初步药敏试验，并将结果报告临床医 生（为二级报告）。
3.对分离细菌进行鉴定：涂片染色，生化反应， 血清学等；标准化药敏，发出报告（第三级报 告）
• 用过氨基糖苷类、多粘菌素—加聚茴香脑 磺酸钠（SPS）0.25-0.5g/L
• 抗磺胺药—加对氨基苯甲酸0.5%（10ml/L） • 抗链霉素、四环素、新霉素及多粘菌素B—
硫酸镁(24.7%，20ml加入1000培养基中) • 抗青霉素—青霉素酶（2u/ml）
2.常规培养
接种2-3个血培养瓶，同时做需氧、CO2和厌氧培养。 每日观察一次，培养结果观察，注意培养基的变化： • 一般细菌 — 浑浊 • 致病性葡萄球菌 — 胶东状态凝固 • 链球菌 — 颗粒状，沉于瓶底 • 溶血链球菌 — 有溶血现象 • 多数革兰阴性菌 — 浑浊，酚红变色 • 微浑浊，有绿色 — 疑为肺炎链球菌 • 有菌膜，浑浊，有绿色荧光 — 铜绿假单胞菌 • 表面有灰白色菌膜，液体较清亮—枯草杆菌或类白喉杆菌 • 需氧瓶无菌生长，厌氧瓶有生长现象——为厌氧菌
厌氧菌培养
• 程序：血—牛心浸液或肝浸液，置厌氧环境—如 出现浑浊、恶臭或产气—涂片染色镜检—培养物 移种2个BA\CA,分别进行厌氧和需养培养，48-72 小时长菌—据形态、生化反应进行最后鉴定—药 敏—报告“厌氧培养有—细菌生长”。
• 阴性报告 如48h无菌生长—盲转—以后每隔4d做 一次盲转，至14日，若仍无菌，则报告“厌氧培 养14d无菌生长”。
血清学 鉴定
药敏 试验
确定报告 （三级报告）
1. 增菌培养
• 培养基的选择 一般细菌—普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤 布氏菌 — 肝浸液 甲链、脑膜炎球菌—胰胨肉汤或葡萄糖肉汤 厌氧菌 — 硫乙醇酸盐肉汤、牛心脑浸液 L型菌 — 加10%蔗糖 可疑心内膜炎持续培养阴性者，培养基内需 加维生素-B
添加药物拮抗剂：
一、标本采集
• 采集时间 发热初期（1-2天内）或高峰时期 用药之前（或下次用药之前）
• 采血部位和频率 多选肘静脉 （多部位或增加采血频率可提高检出率）
• 采血量及接种 为培养基的1/10为宜（成人5-10ml；婴幼儿1-5ml；儿童3-5ml）
注入培养基后，立即轻轻混匀（同时厌氧、需氧培养时，应先种厌氧）
临床意义
• 从血液、骨髓检出任何细菌都具有意义。但必须 排除采样、或无菌操作不严引起的污染。
• 若2次培养或多部位采血培养出同一细菌或定量培 养一种菌大量生长，多为菌血症或败血症的病菌。
• 血液细菌培养是菌血症、败血症的常用检验方法
血液、骨髓标本中常见的病原体
革兰阴 性球菌
革兰阳 性球菌
革兰阳 性杆菌
• 骨髓采集 适宜怀疑细菌性骨髓炎或长期用药患者，采1-2ml(二) 检验方法Fra bibliotek• 检验程序：见表
血液/骨髓
血液标本的检验程序：
增菌培养
(需氧、厌氧、CO2)
涂片染色镜检
分离培养
直接药敏
报告
需氧及CO2
（ BA、CA ）
（一级报告）
厌氧 （厌氧BA）
报告 （二级报告）
鉴定
菌落 形态
涂染检
生化 反应
• 第三级报告（检验单）方式： 培养----天有----细菌生长
• 阴性结果报告： 增菌未发现细菌生长，继续培养到第
7天，经3次以上的盲转，可报告：
经---天培养无菌生长
3.特殊培养
• 草绿色链球菌
• 初代、次代应接种3瓶胰酪蛋白大豆肉汤同时做需 氧、厌氧及CO2培养
• 第一周转种BA，如有细小、针尖样凸起并有草绿 色溶血环的菌落，按链球菌鉴定，报告“有草绿 色链球菌生长”。
L-型细菌培养
• 标本—种入高渗培养基增菌—移种BA和L型 细菌培养基分离，如有“油煎蛋”样菌 落—反复传代接种使之反祖—鉴定
• 对不能返祖的需与支原体鉴别
• 经1月培养仍无菌生长者可报告阴性
真菌培养
• 常用SA作真菌分离培养
鼠疫杆菌、钩端螺旋体、立克次体
• 可将患者血液接种于动物，更易得到阳性 结果。
• 如培养7天无菌生长，则需继续培养至第四周，每 周移种2次，涂片染色镜检，仍无菌，报告：4周 培养无草绿色链球菌生长。
脑膜炎奈瑟菌培养
• 增菌培养基：葡萄糖肝浸液、胰胨肉汤 • 瓶内先充入5-10%的CO2气体，培养基先预温
• 沙门菌培养
• 增菌培养基：葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 • 疑有菌生长—SS、MAC等培养基分离—KIA初步鉴
定—系统生化反应、血清学鉴定、药敏试验
布氏杆菌
• 增菌培养：血—2瓶肝浸液肉汤（1瓶先充CO2， 1瓶普通培养）—出现肉眼可见的浑浊、菌膜、 粘性沉淀物—涂片染色镜检—移种2个肝浸液平 板（同上培养）—涂、染、镜检—生化反应、 血清学凝集—最终报告
• 阴性报告：培养3-4周无菌，则报告“经-周培 养无菌生长”。
革兰阴 性杆菌
其他
金葡、表葡、化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺炎球菌、 肠球菌、厌氧链球菌
脑膜炎奈瑟菌 卡他布兰汉菌
结核杆菌、产单核李斯特菌、炭疽芽孢杆菌、产气荚膜 杆菌、丙酸杆菌、阴道加特纳菌
沙门菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、粪产碱杆菌、大肠杆 菌、不动杆菌、沙雷菌、布氏杆菌、鼠疫杆菌、类杆菌 真菌、螺旋体
增菌培养长了细菌以后：
1.挑取培养物涂、染、镜检，将镜检结果报告给
临床医生（一级报告）
2.分离培养：镜检有细菌，排除污染后，取瓶底 培养物接种BA、巧克力等。
同时进行初步药敏试验，并将结果报告临床医 生（为二级报告）。
3.对分离细菌进行鉴定：涂片染色，生化反应， 血清学等；标准化药敏，发出报告（第三级报 告）
• 用过氨基糖苷类、多粘菌素—加聚茴香脑 磺酸钠（SPS）0.25-0.5g/L
• 抗磺胺药—加对氨基苯甲酸0.5%（10ml/L） • 抗链霉素、四环素、新霉素及多粘菌素B—
硫酸镁(24.7%，20ml加入1000培养基中) • 抗青霉素—青霉素酶（2u/ml）
2.常规培养
接种2-3个血培养瓶，同时做需氧、CO2和厌氧培养。 每日观察一次，培养结果观察，注意培养基的变化： • 一般细菌 — 浑浊 • 致病性葡萄球菌 — 胶东状态凝固 • 链球菌 — 颗粒状，沉于瓶底 • 溶血链球菌 — 有溶血现象 • 多数革兰阴性菌 — 浑浊，酚红变色 • 微浑浊，有绿色 — 疑为肺炎链球菌 • 有菌膜，浑浊，有绿色荧光 — 铜绿假单胞菌 • 表面有灰白色菌膜，液体较清亮—枯草杆菌或类白喉杆菌 • 需氧瓶无菌生长，厌氧瓶有生长现象——为厌氧菌
厌氧菌培养
• 程序：血—牛心浸液或肝浸液，置厌氧环境—如 出现浑浊、恶臭或产气—涂片染色镜检—培养物 移种2个BA\CA,分别进行厌氧和需养培养，48-72 小时长菌—据形态、生化反应进行最后鉴定—药 敏—报告“厌氧培养有—细菌生长”。
• 阴性报告 如48h无菌生长—盲转—以后每隔4d做 一次盲转，至14日，若仍无菌，则报告“厌氧培 养14d无菌生长”。
血清学 鉴定
药敏 试验
确定报告 （三级报告）
1. 增菌培养
• 培养基的选择 一般细菌—普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤 布氏菌 — 肝浸液 甲链、脑膜炎球菌—胰胨肉汤或葡萄糖肉汤 厌氧菌 — 硫乙醇酸盐肉汤、牛心脑浸液 L型菌 — 加10%蔗糖 可疑心内膜炎持续培养阴性者，培养基内需 加维生素-B
添加药物拮抗剂：