血液标本的采集和冻存
一、全血收集
请按照实际使用的收集方法，如注射器收集或真空收集管等，参考相应的厂商提供产品说明进行操作。采集好全血，将采集好的全血转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放入- 20°C或- 70°C冰箱。长期保存，可放入液氮。
二、血浆收集为获得血浆进行实验，应使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g离心10分钟，分离血浆和细胞组分。将采集好的血浆转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放入- 20°C 或- 70°C 冰箱。长期保存，可放入液氮。
注：血浆收集应使用抗凝管，抗凝剂可以用柠檬酸钠或EDTA等，但一定不要使用肝素抗凝，因为肝素对RNA实验有较大影响。
三、血清收集为获得血清进行实验，应使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清。采血后轻轻倒转采血管混合4~5次，直立置于室温待血液完全凝固（一般约一小时），1000g离心10分钟，分离血清。将采集好的血清转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放入- 20°C 或- 70°C冰箱。长期保存，可放入液氮。
四、血清、血浆和全血样本的保存和运输
→microRNA芯片检测血清、血浆或全血标本约需要1~2ml的量（即每份样品2~4管，每管3-5ml）。→在样品保存及转移的过程中，应避免反复冻融样品。注：保存血清，血浆或者全血所使用的1.5 ml冻存管或离心管，操作中使用的枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。
五、血细胞采集：因外周血成熟红细胞无细胞核，通常只采集白细胞（主要用于DNA检测），且需用红细胞裂解液裂解或低渗法并去除红细胞，避免其影响结果。（一）低渗法去除红细胞试验步骤：
1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80C冻存。
试验要求：采血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。
（二）裂解液法去除红细胞方法：
1.新鲜抗凝血，离心弃去上清液；
2.取出4℃冰箱预冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向细胞沉淀中加
入ELS裂解液（1ml细胞压积加入6-10ml裂解液），轻轻吹打混匀；
3.800-1000rpm离心5-8分钟，离心弃去上层红色清液；
4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次；
5.如裂解不完全可重复步骤2和3；
6.重新悬浮陈淀细胞，用于后续实验；如提取RNA，最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液进行。
