医学检验毕业论文 This manuscript was revised on November 28, 2020
华北理工大学高等教育自学考试毕业论文
题目三种肺炎支原体检测法
的临床应用分析
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华北理工大学高等教育自学考试办公室
三种肺炎支原体检测法的临床应用分析
摘要
目的探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.5±2.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。结论3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。关键词肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对研究
目录
前言
肺炎支原体（mycoplasmapneumoniae,MP）是婴幼儿、青少年急道感染的主要病原体之，临床上表现为呼吸道感染综合征，其中约3%～10%可发展为支原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由MP或病毒、细菌等病原体引起的儿童
呼吸道感染，给临床治疗带来一定的困难。笔者采用3种MP检测法对362例临床拟诊为呼吸道（非细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助临床准确做出诊治。
第一章文献综述
§1.1肺炎支原体的定义
小儿肺炎支原体肺炎多见于5~15岁儿童，婴幼儿患病常表现为毛细支气管炎。多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干咳，常有咽痛，头痛等症状。X线改变明显，多为单侧病变，也可见双侧病变，以下叶为多见，有时病灶呈游走性，少数呈大叶性阴影；病程2~3周不等，X线阴影完全消失比症状消退更延长2~3周之久，偶有延长至6周者。
§1.2肺炎支原体的发病机制
肺炎支原体肺炎（MycoplasmaPneumoniaePneumonia，MPP）的发病机制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫学发病机制等学说，其中免疫调节异常在MPP的发生发展中可能起重要作用
§1.3肺炎支原体的临床表现
1.多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干咳，常有咽痛，头痛等症状。
2.可出现多系统多器官的损害，皮肤粘膜表现为麻疹样或猩红热样皮疹；偶见非特异性肌痛和游走性关节痛；也有表现心血管系统、神经系统损害、血尿及溶血性贫血等。
3.全身症状比胸部体征明显。体检肺部体征不明显，偶有呼吸音稍低及少许干湿罗音者
§1.4肺炎支原体的临床诊断
病原学诊断
肺炎支原体快速鉴定培养法优于被动凝集法，在肺炎支原体肺炎感染的早期可提供重要的依据，可做为临床诊断MP感染的优先试验[8]；气管肺泡灌洗液
MP-DNA测定不仅能诊断MP感染,且支气管肺泡灌洗术可促进呼吸道症状的改善及体征恢复，且通过纤维支气管镜收集支气管肺泡灌洗液MP-DNA，痰液MP-DNA 及血清MP抗体检测阳性率没有差异。CRP的检测是肺炎病原体的辅助诊断方法，一定程度可区分细菌性肺炎和支原体肺炎。聚合酶链反应(PCR)技术检测MP具有可靠、特异性高的特点，逐渐成为早期特异诊断的有力武器。
§1.5肺炎支原体的实验室检查
急性期MPP患儿血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明显升高，IgA明显降低；而恢复期hs-CR、IgG仍然较高，而IgM和IgA均没有明显变化，补体C3、C4在恢复期内也没有明显变化，因此血清C-反应蛋白、免疫球蛋白和血清补体的监测对诊断急性期或恢复期MPP有重要意义。MP-IgM和冷凝集试验同时检测可提高小儿支原体肺炎实验诊断的准确率；支原体肺炎患儿外周血白细胞大多正常占80%，中性粒细胞增高占61%；65.6%患儿C-反应蛋白增高；53.6%患儿血沉增快；58.4%患儿心肌酶谱增高；24.0%患儿肝酶增高；16.8%患儿尿酸增高。5流行病学特点及进展
MP肺炎发生率约为22.3%，9～12岁感染率最低,3～6岁最高,10～12月是发病高峰月,小儿支原休肺炎发病率有所上升,发病年龄有趋小倾向,秋冬季发病率高,肺炎支原体只要通过呼吸道进行传播，尤其发病率较高的地区，局部区域每隔3-5年可发生一次肺炎支原体感染，每2-6年可发生一次大范围的肺炎支原体感染，每次感染的时间都持续较长，有的感染可持续一年左右，因此，有关部门一定要采取相应的预防措施，切断呼吸道飞沫传播途径对控制疾病发生和流行具有重大意义。控制支原体感染的发生和流行。
第二章材料和方法
§2.1样本
收集黄河中心医院检验科2013年1月1日～8月6日在儿科就诊住院患儿病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对
象，其中男175例，女187例；年龄为2个月～12岁，病程为1～90天。
§2.2方法
具体方法有：（1）用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测，记录结果。（2）通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数，并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。
§2.3临床诊断MP感染的诊断标准
按文献［1］、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断——即患儿经红霉素治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等；以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。
§2.4MP快速培养法
支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽拭子用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37℃培养；培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外灯下出现180bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照（阳性对照为MP质粒，阴性对照为无菌生理盐水），由专人进行操作，质量控制。MP-Ab法：试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab检测试剂SERODIA-MYCOⅡ凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作，抽取患儿静脉血3ml，采用明胶颗粒被动
