1-细胞生物学实验

细胞生物学实验教程1. 细胞培养细胞培养是研究细胞生物学的重要工具。

其基本原理是将动植物等生物材料分离、挑选出优良细胞群体，通过合适的细胞培养基、培养条件、方法和设备，使细胞在体外生长和繁殖。

其常用培养细胞的类型有：肺、肝、胃肠、心肌、肌肉、神经、结缔组织、卵巢等。

2. 细胞分离将细胞组织挑选出来进行细胞分离，我们需要用到一般的分离试剂，如细胞酶、生物表面活性剂、离子液体、尼龙布、毛细管、细胞分选仪和细胞联合培养等，同时需要注意一些技术细节。

例如合适的分离环境和分离条件、合适的分离时间、细胞貌形的观察以及细胞去污的操作等。

3. 细胞染色细胞染色是存在于细胞的染色体、蛋白质和核酸等物质，借助不同染色剂使之显色的过程。

其优点是操作简便，速度快，结果直观且研究范围广。

根据它的使用范围和目的不同，一般分为核型分析、基因型分析、生化分析、免疫分析和化学分析等。

4. 免疫组化染色免疫组化染色是指利用抗体与细胞中的特定抗原之间的结合反应，使细胞中的抗原在细胞、组织切片或细胞培养物中可视化并得到定位的技术。

这种技术是现代生物技术与分子生物学的重要组成部分，也是研究细胞分子和生物学的密切联系。

5. 荧光标记技术荧光标记技术是指在一定条件下，荧光分子效应的物理特性。

将该技术运用于细胞生物学中，可以标记生物分子，如细胞内结构组分和生物分子中的蛋白质、核酸、糖等，以实现对其特性、运动和转化的动态和定量分析。

同时，它对于研究牛眼改良和细胞砂浆的研究、比较病理学和細胞生理学中细胞示踪标记的定位等过程中也有着积极的作用。

6. 电镜观察电子显微镜（EM）是一种利用电子束代替光束观察样品表面的高分辨率显微镜。

其操作方法较为复杂，需要像样的准备样本和设备，但提供的高分辨率和高对比度，使得研究者可以观察小于光学分辨率的细胞结构，并能发现小分子、细菌和病毒等细胞成分。

7. 分子生物学实验技术目前，分子生物学技术已经成为细胞生物学研究的重要手段之一。

细胞生物学实验班级：生科142姓名：旷江学号：10143131组号： 2小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞华东理工大学应用生物学系摘要本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。

关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构AbstractThe cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life.Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur目录第一章综述 (1)1.1实验目的 (1)第二章实验原理 (2)2.1实验流程和应用实验方法 (2)2.2细胞器活体染色与显微观察 (2)2.3细胞骨架的观察 (3)2.4细胞冻存复苏 (3)2.5细胞冻存复苏活力检测 (3)2.6哺乳动物细胞的基因转染 (4)2.7细胞凋亡诱导和分析 (4)第三章实验仪器及试剂 (6)3.1实验仪器 (6)3.2实验试剂 (6)第四章实验步骤............ 错误！未定义书签。

细胞生物学实验细胞生物学是一门复杂而有趣的科学，旨在探索细胞基础结构及其功能。

细胞生物学实验是为了更深入地了解细胞，以便更好地应用。

细胞生物学实验涵盖了在实验室中模拟和测试不同类型的细胞，以发现细胞的结构和功能。

细胞生物学实验可以根据不同的实验目的而有不同的设计。

有些实验的目的是了解细胞的基础结构，例如用来实现细胞分裂的机制和细胞内组织构建的过程；有些实验的目的是了解细胞受环境刺激后该如何反应，例如研究细胞对毒性物质或药物的反应；也有些实验的目的是了解细胞之间的相互作用，例如研究细胞传播信息的机制。

不管实验的目的是什么，它们都需要有效的实验设计、精确的操作技巧和准确的数据分析。

在实验室中，细胞生物学实验的步骤要求详细。

实验的第一步是准备实验材料，根据实验的目的而确定所需的技术和实验材料，细胞培养和试剂的准备非常重要。

实验的第二步是实施实验，要求操作者熟悉实验操作流程和技术，以确保细胞培养和观察的精确性。

实验的第三步是数据分析，分析测得的实验数据，对结果进行概括和解释，并画图显示数据。

细胞生物学实验通常分为室内实验和实地实验。

室内实验用于实验室中实现细胞培养、操作和观测，实现实验过程的模拟，这样能迅速得到实验结果，更方便地探索实验结果的可靠性和可重复性。

实地实验涉及到从实地样本中收集细胞，进行实验室外观测，探究细胞在大自然环境中的表现，进而发现细胞的新特性，从而更好地应用。

细胞生物学实验的重要性不言而喻，其探索的结果可以丰富细胞生物学的理论，为临床药物发现、新药开发和疾病治疗应用提供重要的科学依据。

近年来，细胞生物学实验技术发展迅猛，实验过程日益简化，实验结果也越来越准确可靠，为研究人员在实验室中快速发现细胞的新特性提供了良好的条件。

细胞生物学实验是一种长期探索性的实验工作，一般来说，实验结果最后能揭示的不仅仅是细胞的结构及其复杂的功能，更能揭示人类自身的始祖，以及窥探自然现象的深奥内涵。

综上所述，细胞生物学实验是一项复杂而又有趣的工作，旨在深入了解细胞结构和功能，针对不同实验目的，它要求严格的实验设计、准确的操作技巧和精确的数据分析，研究结果为药物发现、新药开发和疾病治疗提供宝贵的科学依据，进而改善人类的健康水平。

细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。

实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。

细胞生物学实验细胞生物学实验是细胞生物学研究的重要组成部分，在细胞生物学中，细胞生物学实验具有重要作用。

细胞生物学实验可以通过对细胞进行观察，检测，分离和操作等方法，对细胞内外信息进行研究，从而研究细胞的结构、功能、化学反应和物质交换等。

一般来说，细胞生物学实验可以分为直接观察实验，化学分析实验，生物分析实验，生物组装实验，以及细胞移植和培养实验等几种。

这些实验分别有不同的用途，能够更好地帮助科学家研究细胞。

直接观察实验是最基本也是最重要的实验。

它需要将细胞用显微镜放大，形成细胞图谱。

通过观看细胞图谱，能够清楚地了解细胞的结构，细胞内部的构造以及细胞间的关系。

化学分析实验主要是为了研究细胞中的物质及其交互作用，可以采用的实验方法有酶活性测定、亲和纯化及表观遗传学分析等。

这些实验可以帮助科学家了解细胞中各种物质的含量，并对细胞的功能及物质之间的相互作用做出更深入的研究。

生物分析实验主要用于研究细胞内部结构和功能，包括细胞膜和核膜蛋白的定量分析，细胞结构及功能组成分析，细胞膜蛋白及核膜蛋白结构和功能研究等。

这些实验可以帮助科学家更深入地研究细胞的结构和功能。

生物组装实验是在细胞结构的基础上构建更复杂的九聚体，通过把这些九聚体组装到细胞神经元上，可以研究神经系统的功能、结构及行为。

细胞移植和培养实验是将细胞从一种宿主机体迁移到另一种宿主机体，或从一种宿主体中分离出来，然后在体外培养以研究其特性的实验。

这种实验能够为科学家更好地研究细胞的功能和行为提供帮助。

总之，细胞生物学实验是细胞生物学研究的重要组成部分，它能够帮助科学家们更好的研究细胞的结构、功能、化学反应和物质交换等方面，从而对细胞的研究有更深入的了解。

细胞生物学实验方法与技术1.细胞培养：细胞培养是细胞生物学研究中最基本的实验技术之一、它通过将细胞放入培养基中，在特定的环境条件下进行体外培养。

通过细胞培养，可以获得大量的细胞进行进一步的实验研究。

2.免疫荧光染色：免疫荧光染色是一种常用的细胞实验方法，通过此方法可以检测特定蛋白质或分子在细胞中的分布和定位。

该技术利用特异性的抗体与目标分子结合，并用荧光染料标记抗体，从而利用荧光显微镜观察染色结果。

3. 免疫印迹法（Western Blot）：免疫印迹法是一种用于检测特定蛋白质的定量和分析的方法。

该方法通过将细胞或组织中的蛋白质经过电泳分离，并转移到膜上，然后用特异性的抗体与目标蛋白质结合，最后通过酵素反应或荧光信号检测目标蛋白质的存在和表达水平。

4.转染技术：转染技术是将外源的DNA或RNA导入到目标细胞中的一种常用方法。

常见的转染技术包括植入病毒载体、使用质粒转染剂、电穿孔和化学转染等。

通过转染技术，可以实现基因过表达、基因沉默等实验研究。

5.索引技术：索引技术是一种分析和比较细胞中基因表达的实验方法。

通过索引技术，可以快速筛选出在不同生理状态下表达差异显著的基因，并进一步研究这些基因的功能和调控机制。

常见的索引技术包括差异显著性分析、基因芯片、RNA测序等。

6.荧光显微镜技术：荧光显微镜技术是一种使用荧光染料观察细胞结构和功能的方法。

荧光显微镜可以通过选择不同的染料和光源，实现对细胞核、细胞器等结构的观察。

此外，还可以利用特定的荧光探针，实现对细胞内的信号分子、离子和代谢产物的监测。

7.流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测细胞的光学和物理特性，实现对单个细胞的定量分析和分选的方法。

该技术可以实现细胞表面标记物的检测、细胞周期分析、细胞凋亡检测等。

特别是流式细胞术结合细胞分类仪，可以实现高通量的细胞分析。

综上所述，细胞生物学实验方法与技术为研究细胞的结构、功能和特性提供了重要的工具。

随着科技的不断发展，细胞生物学实验方法与技术也在不断更新与创新，为我们更好地理解细胞的生命活动提供了强大的支持。

细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。

实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。

《细胞生物学》实验指导书（不太全供参考）适用专业:生物科学、生物技术实验目录实验一植物原生质体的分离与融合•••]实验二动物细胞原代培养•••3实验三细胞传代培养…彳实验四植物细胞骨架的光学显微镜观察••Y实验五细胞凋亡的诱导、观察与检测“I实验六环境因素诱变染色体改组的观察实验七红细胞膜蛋白的分离及其电泳检测 (11)实验一植物原生质体的分离与融合实验项目类型:综合性所属课程名称：《细胞生物学》实验计划学时：7学时一、实验目的1.掌握原生质体分离的原理与技术；2.了解细胞融合的基本原理及应用；3.初步掌握PEG融合法和电融合法.二、实验原理植物原生质体是去除了细胞壁的裸露的细胞.原生质体可以从培养的单细胞、愈伤组织和植物器官（叶等）获得.但一般认为从叶肉组织分离原生质体是理想的材料，其优点是材料来源方便，供应及时，而且遗传性较为一致.原生质体的分离通常采用酶解法，对细胞壁成分进行降解后获得.原生质体培养的条件和对营养的要求与组织、细胞相似.但原生质体由于除去了细胞壁,所以需要一定浓度的渗透压稳定剂来保持原生质体的稳定.常用的渗透压稳定剂包括甘露醇、山梨醇、蔗糖等. 其次，还应当考虑取材、酶的种类和纯度、酶液的渗透压、酶解时间及温度等因素对分离原生质体的影响.2个或2个以上的细胞合并成为1个细胞的现象称为细胞融合.细胞融合的主要方法有病毒法、聚乙二醇(PEG)法和电融合3种方法，其原理基本相同，都是两细胞接触点的膜分子发生重组,然后由于表面张力作用,形成一个球形细胞. 原生质体分离融合和培养的意义：1.除去了细胞壁为植物细胞之间的融合扫平了障碍，为制造新杂种开辟了道路.植物原生质体融合和培养在植物遗传工程和育种研究上具有广阔的应用前景.它是植物同源、异源多倍体获得的途径之一，它不仅能克服远缘杂交有性不亲和障碍，也可克服传统的通过有性杂交诱导多倍体植株的麻烦，最终将野生种的远缘基因导入栽培种中，原生质体融合技术可望成为作物改良的有力工具之一.2.原生质体可摄入外源DNA,细胞器、细菌或病毒颗粒,这些特性与植物全能性相结合为高等植物的遗传饰变打下基础.3.获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料.三、实验仪器与材料1.材料:油菜叶子、白菜花2.溶液或试剂:(1)洗涤液:甘露醇0.7mol/L,CaC12 • 2H2O3.5mmol/L,KH2PO4 0.7mmol/L(pH 5.6),高压灭菌；(2)混合酶液:1.5%纤维素酶,1%果胶酶溶于洗涤液中(pH 5.6).(3)50%PEG(4)高pH高钙稀释液：(5)20%蔗糖溶液(6)DPD培养基：3.仪器或其他用具:超净工作台、灭菌锅、显微镜、恒温培养箱、镶子、解剖刀、剪子、接种针、铝饭盒、锡箔纸、记号笔、橡皮筋、试剂瓶、三角瓶移液管、培养皿、酒精灯等.四、实验步骤(一)原生质体的制备：1.取材:取新鲜油菜叶和白菜花瓣自来水洗净，再用70%乙醇浸泡30S,0.5%次氯酸钠消毒lOmin,无菌水冲洗5次.2.酶解：材料切成1mm宽细丝，加入适量酶液，置摇床上(60〜70rpm),在25〜28°C黑暗条件下，酶解5〜7h.3.分离：用200目网过滤除去未完全消化的残渣，在lOOOrpm条件下离心5分钟,弃上清.加入3〜4ml洗涤液，相同条件下离心2-5分钟，弃上清，留1ml洗液.用滴管将混有原生质体的1ml洗液吸出，轻轻铺于20% 蔗糖溶液上(5ml离心管装3ml 20%蔗糖溶液)，在lOOOrpm条件下离心5-10分钟，由于密度梯度离心的作用，生活力强状态好的原生质体漂浮在20%的蔗糖与洗涤液之间，破碎的细胞残渣沉入管底.用200 u 1移液器轻轻将状态好的原生质体吸出（注意尽可能不要吸入下层的蔗糖溶液），放入另一干净的离心管中，加4ml洗涤液,1000rpm离心2-5分钟, 弃上清.（二）原生质体融合：1.将原生质体用DPD调节浓度为1*105个/mL.2.将原生质体混合物滴入小培养皿，静置8〜10分钟.3.然后滴入50%的PEG溶液，静置2分钟.4.依次间隔5分钟加入0.5ml、1 ml和2 ml高钙高pH洗涤液.注意在第二、三次洗液加入前,用移液器轻轻吸走部分溶液，但不能吸干，否则原生质体破碎死亡;最后用液体培养基洗1〜2次.制片，镜检.五、实验报告画出观察到的融合细胞，并计算融合率.六、思考题1.你认为要获得数量多、生活力强的原生质体，在实验中应注意那些问题？增多数量的方法:多取材且尽量切碎，增加酶浓度，提高酶解温度，延长酶解时间，操作轻柔，勿使原生质体破碎等.提高生活力的方法:取新鲜材料,采用合适的酶浓度、作用温度和时间2.举例说明原生质体融合的应用价值.实验二动物细胞原代培养实验项目类型:基础性所属课程名称：《细胞生物学》实验计划学时：4学时一、实验目的1.掌握动物细胞原代培养的基本方法和操作过程；2.熟悉原代培养细胞观察方法.二、实验原理用直接从机体获取的细胞进行的培养称为原代培养.原代培养是建立各种细胞系的第一步，该技术可以在体外进行各种类型细胞的增殖、遗传、变异、分化和脱分化、恶变与去恶变等研究.分为组织块培养法和消化法两种.三、实验仪器与材料1.材料:小鼠心、肝、脾、肾等2.溶液或试剂：(1)RPMI-1640培养基、小牛血清.(2)0.25%胰蛋白酶、(pH 5.6).(3)Hanks液3.仪器或其他用具:CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、水浴锅、解剖器械、培养瓶、微量加样器、吸管、移液管、酒精灯、酒精棉球等.四、实验步骤1.处死小鼠:将小鼠用颈椎脱臼法处死，放入75%酒精种浸泡消毒.2.取材:在超净工作台中用灭菌的解剖器械剖开小鼠腹腔，辨认并取下肝脏、脾脏和肾脏，放入灭菌的培养皿中，加入Hanks液清洗，然后加入2mL胰蛋白酶液,研磨并过滤.3.将液体转移到离心管,1200rpm离心5min收集细胞,加入适量培养液,C02培养箱培养.4.观察:逐日在倒置镜下观察细胞生长情况.五、实验报告画出细胞贴壁前和贴壁后的形态.六、思考题试述细胞原代培养成功的条件？实验三细胞传代培养实验项目类型:基础性所属课程名称：《细胞生物学》实验计划学时：3学时一、实验目的1.熟练掌握贴壁细胞传代的培养方法；2.观察传代细胞贴壁、生长、繁殖过程中细胞形态的变化.二、实验原理离体培养的细胞群体增殖达到一定密度时，细胞的生长和分裂速度就会减慢甚至停止，如不及时分离传代培养,细胞将逐渐衰老死亡.传代培养是指细胞从一个培养瓶以1:2或其它比率转移，接种到另一培养瓶的培养.贴壁培养细胞的传代通常采用胰蛋白酶消化,把细胞分散成单细胞再传代.三、实验仪器与材料1.材料:原代培养的小鼠细胞或Hela细胞2.溶液或试剂：(1)RPMI-1640培养基、小牛血清.(2)0.25%胰蛋白酶、(pH 5.6).(3)Hanks液3.仪器或其他用具:CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、水浴锅、培养瓶、微量加样器、吸管、移液管、酒精灯、酒精棉球等.四、实验步骤1.将长成单层的细胞从二氧化碳培养箱中取出,在超净工作台中倒掉瓶内的培养液，加入少许消化液.(以液面盖住细胞为宜)，静置5~10分钟.2.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变圆,相互之间不再连接成片，这时应立即在超净台中将消化液倒掉，加入3〜5ml新鲜培养液,吹打, 制成细胞悬液.3.将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml 左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养.五、实验报告分别画出贴壁生长的小鼠细胞和Hela细胞,并说明二者的不同.六、思考题写出细胞传代培养成功的条件？实验四植物细胞骨架的光学显微镜观察实验项目类型:基础性所属课程名称：《细胞生物学》实验计划学时：3学时一、实验目的了解细胞骨架的结构特征及其制备技术二、实验原理细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维.它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用.用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色或间接免疫荧光标记以后，可在显微镜下观察到细胞骨架结构.三、实验仪器与材料1.材料:洋葱鳞茎和口腔上皮细胞2.溶液或试剂：(1)M-缓冲液(2)6mmol/L(pH 6.8)磷酸缓冲液(3)l%Triton X-100(用M-缓冲液配制)(4)0.2%考马斯亮蓝R250(5)3%戊二醛3.仪器或其他用具:光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镶子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸等.四、实验步骤1.撕取洋葱鳞叶内表皮若干片,大小约lcm2,置于青霉素小瓶或小烧杯中.2.用磷酸缓冲液(PBS)浸泡片刻.3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20分钟抽提细胞骨架以外的蛋白质,从而使骨架图像更加清晰.4.吸去TritonX-100,用M-缓冲液洗3次，每次3分钟.M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用.5.用3%戊二醛固定15-20分钟6.用PBS洗3次，每次3分钟7.考马斯亮蓝染色15分钟8.蒸馅水洗2次9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察.五、实验报告绘出植物细胞骨架微丝结构图.六、思考题说出各步骤的目的和一些重要试剂的在此处的作用.实验五细胞凋亡的诱导、观察与检测实验项目类型:创新设计性实验所属课程名称：《细胞生物学》实验计划学时：9学时一、实验目的1.了解细胞凋亡的概念和原理;2.掌握细胞凋亡诱导的方法;3.认识细胞凋亡的特征.二、实验原理人体内的细胞注定是要死亡的，目前人们已经知道细胞的死亡起码有两种方式，即细胞坏死与细胞凋亡.坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程.表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢,DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应.凋亡是细胞受到内、外因子刺激后发生的由基因调控的生理性死亡行为.其细胞及组织的变化与坏死明显不同.细胞凋亡的形态学变化: 首先细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后胞质密度增加, 核质浓缩，核膜核仁破碎,DNA降解,胞膜形成小泡，最终为为几个凋亡小体，无内容物外溢,因此不引起周围的炎症反应，凋亡小体可迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬.凋亡细胞DNA的有控降解是一种内源性核酸内切酶作用的结果,该酶在核小体连接部位切断染色体DNA,这种降解表现在琼脂糖凝胶电泳中就呈现特异的梯状Ladder图谱,而坏死呈弥漫的连续图谱.三、实验仪器与材料1.鸡血细胞2.溶液或试剂：生理盐水,20mmol/LCaC12顺伯，姬姆萨染色剂，Tris.HCl,SDS, EDTA,乙醇，甲醇，蛋白酶K.3.仪器或其他用具:超净工作台、灭菌锅、显微镜、恒温培养箱、镶子、解剖刀、剪子、接种针、铝饭盒、锡箔纸、记号笔、橡皮筋、试剂瓶、三角瓶移液管、培养皿、酒精灯等.四、实验步骤（一）细胞凋亡的诱导：1.采鸡血10ml,加0.85%的生理盐水混匀,1200r/min离心5min,弃上清液（重复三次），制备红细胞悬液，然后加入50ml血细胞保存液混匀放于4°C冰箱中备用.2.取4个试管，各加入鸡血细胞保存液2ml,在1号管中加入2ml生理盐水作为阴性对照,2号试管加入2ml 10ug/ml的顺伯溶液作为阳性对照;3号试管中加入2ml 20mmol/L的CaC12溶液进行胁迫处理;4号试管不加任何物质，实验时煮沸5 min使细胞坏死.（二）细胞凋亡的形态学观察：1.处理4h取样，用生理盐水稀释5倍，各取50ul细胞悬液均匀涂布于5 片载玻片上,晾干.2.用甲醇固定2min,然后在载玻片上滴加适量姬姆萨染液染色lOmin.3.用蒸馅水轻轻洗去染液，室温晾干，在光学显微镜下观察细胞形态变化.4.照相，并对试验组细胞进行凋亡计数统计.（三）DNA梯状条带的检测：1.离心收集鸡血细胞，弃上清.2.加入1ml的细胞裂解缓冲液重悬，转入1.5ml离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20 n 1,混匀.3.在65°C恒温水浴锅中水浴30min（也可转入37°C水浴12〜24h）,间歇振荡离心管数次.4.于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另一离心管中.5.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul吸头挑出, 或12,000转/分离心5分钟，弃上清,晾干.6.用50ulTE 缓冲液(pH8.0)溶解沉淀,并加入RNase A(10ug/ul)5ul,于37 °C 保温10〜15分钟.7.1.2 %琼脂糖凝胶,75 V电压，电泳45 min左右，8.紫外灯下观察并照相.(琼脂糖凝胶电泳:称取 1.2克琼脂糖加入100ml1*TBE),加热使之溶解，取一个凝胶模子，两端用胶布封好，水平放置.将制孔器(即梳子)放在模子一侧约0.5cm处，其底部距模子约1mm.待琼脂冷至约70°C时，加入10ul 0.5mg/ml EB,混匀，倒入模子，待冷却凝固后，取下梳子，撕去两端胶布,放入电泳槽中，使有加样孔的一端放在负极一端.在电泳槽中加入1*TBE至超过凝胶表面约1mm.加入DNA 电泳样:1.5ul DNA 。

细胞生物学实验汇总1.细胞培养实验：细胞培养是一种将细胞在人造环境下生长和繁殖的方法。

这种实验可以用来研究细胞的生长和增殖，观察细胞的形态变化，评估细胞的功能和活性等。

培养的细胞可以来自动物组织、植物组织或微生物等。

2.免疫荧光染色实验：这种实验可以用来观察细胞内特定的蛋白质、细胞器或DNA分布。

研究人员可以利用荧光染料或标记的抗体与目标分子结合，在显微镜下观察细胞瞬态或持久性标记。

这种实验可以帮助我们研究细胞的结构和功能，探索细胞中不同分子的相互作用。

3.转染实验：转染是将外源DNA或RNA引入细胞内的过程。

这种实验可以用来研究基因在细胞中的功能，或将外源基因导入到细胞中来改变其表达。

常见的转染方法包括酵母转染、细菌转染、质粒转染和病毒转染等。

转染实验可以帮助我们了解基因调控机制和研究细胞行为的变化。

4. 测定细胞增殖实验：这种实验可以用来测定细胞增殖速度和细胞生长的影响因素。

常见的细胞增殖实验包括MTT（3-（4,5-二甲基-2-苯唑基）-2,5-二苯基四氮唑）实验、BrdU（5-溴脱氧尿苷）实验等。

这些实验可以帮助我们了解细胞增殖的分子机制和影响细胞增殖的因素。

5.测定细胞凋亡实验：细胞凋亡是一种编程性死亡的过程，是维持细胞内稳态的重要机制。

测定细胞凋亡的实验可以帮助我们研究细胞死亡的调控机制，并评估不同因素对细胞凋亡的影响。

常见的细胞凋亡检测方法包括DNA损伤、细胞膜破裂和细胞色素释放等。

6.蛋白质分离和电泳实验：这种实验可以用来分离和鉴定细胞中的蛋白质。

常见的蛋白质分离方法包括凝胶电泳、二维凝胶电泳和西方印迹等。

这些实验可以帮助我们研究细胞中不同蛋白质的表达和功能，了解蛋白质调控的机制。

7. 实时荧光定量PCR（polymerase chain reaction）实验：PCR是一种在体外合成DNA的技术。

实时荧光定量PCR可以用来定量检测靶基因在细胞中的表达水平。

这种实验可以帮助我们研究细胞基因表达的调控机制和研究基因在不同生物学过程中的功能。

《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验英文名称：Cellular biological experiment课程编号：14070101 实验课性质：非独立设课课程负责人：张尚立开放实验项目数：25大纲主撰人：杨晓梅曹慧仁大纲审核人：张尚立时永香石梅一、学时、学分课程总学时：54 实验学时：54 课程总学分：1.5 实验学分：1.5二、适用专业及年级生物科学、生物技术、生态学、生物工程和生命基地三年级三、实验教学目的与基本要求细胞生物学实验是为生命科学学院1～3年级各专业学生开设的实验课程，本实验课程的教学目标是：培养学生的基本实验技能，专业基础类实验能力及创新思维能力；训练学生依据实验方案能够自主完成实验项目。

通过实验训练，使学生能够具有观察、比较、分析、专业基础类，实验动手，数据处理和书写实验报告、生物绘图、制表等方面的能力。

四、主要仪器设备普通光学显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、复式光学显微镜及其摄影装置、电子显微镜、超薄切片机、冷冻切片机、石蜡切片机、制刀机、离心机、恒温箱、冰箱、培养箱、二氧化碳培养箱、恒温蜡箱、恒温水浴锅、解剖器械、超净工作台、组织捣碎机、分析天平、放大机、电热板、流式细胞仪、电泳仪、湿盒、细胞电泳仪、计算机、酶联免疫仪。

六、考核方式根据细胞生物学理论及实验教学的要求，结合细胞生物学实验课程教学的特点，制定以下考核办法：实验课考核的最终成绩，由平时成绩和期末考评组成，平时成绩占40%，考试成绩占60%。

记分办法：1.实验课课堂表现：包括实验态度、操作技能，实验记录及实验结果。

（10分）2.实验报告：要求实验报告书写规范，简明扼要，结果真实，对出现的问题、现象能以科学态度分析，进行结果讨论。

（20分）3.纪律卫生：不迟到、不旷课，不在实验室打闹、不大声喧哗。

实验结束，认真整理实验室台面，值日生负责清扫实验室卫生，离开实验室前检查实验室水电安全情况。

（10分）期末考试：实验动手能力，实验设计能力和实验创造性能力检验，老师设计各种命题让学生抽签选择，学生根据命题要求回答、操作，给出考查成绩（60分）。

细胞生物学实验随着科学发展的进步，细胞生物学实验在现代医学领域发挥着越来越重要的作用。

它的基本概念是研究细胞行为，利用实验技术探究它们和分子生物学、遗传学以及其他生物学领域之间的关系。

本文将重点介绍细胞生物学实验中的一些关键步骤，以及实验过程中注意事项，以及采用细胞生物学技术可以解决的关键问题等。

首先，在进行细胞生物学实验之前，必须进行充分的准备工作，包括确定实验的目的、目标、仪器和材料，并具体制定实验过程。

此外，要根据实验的目的和材料来选择合适的培养基，以及实验室中适当的设备和材料。

其次，在实验中，需要收集适当的细胞样本。

可以使用自然分离法或者液体悬挂法来收集活细胞标本，而死细胞标本则可以使用离心法或病原体分离法来收集。

第三，在实验中，要使用适当的技术进行各种分析。

例如，要对细胞的形态、结构和表达的基因进行分析，可以使用显微镜、抗体和示踪试剂，以及免疫荧光技术等正规技术。

此外，实验中也可以采用替代的技术，如细胞膜和细胞核的分析，使用流式细胞术、分子克隆技术和转基因动物等。

最后，要想获得准确可靠的实验结果，实验过程中也要注意一些事项，包括采集和处理样本时要保持室内温度和湿度的稳定，以及尽量减少实验过程中细胞形态和细胞功能活性变化的影响，减少污染物的污染，控制实验过程中磁场和气体浓度等。

细胞生物学实验也可以应用到多种领域，解决多种问题，如研究疾病的起源、发展过程和机制，探索新药物的开发等。

例如，在运用细胞实验技术治疗癌症时，能够快速发现肿瘤细胞受到药物影响时发生的变化，以及这种变化如何影响肿瘤细胞生长，并作出科学的判断，找出最佳的治疗方案。

在制药领域，也可以通过细胞实验发现具有药效的物质，探索新型医药，以应对多种疾病。

综上所述，细胞生物学实验是一个复杂的实验过程，要想获得准确可靠的实验结果，就需要按照步骤准备好实验材料，确保实验室的温湿度稳定，尽量减少实验过程中污染物和磁场的影响，以及采用适当的技术进行细胞分析，解决有关问题。

细胞生物学实验报告（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告实验名称：细胞染色体观察实验目的：观察和分析细胞染色体的结构和特点，了解细胞分裂过程中染色体的变化。

实验原理：细胞染色体是细胞核中的重要结构，由DNA和蛋白质组成。

本实验将通过制作和观察细胞染色体的垂直染色体图像，以分析染色体的数量、形状和分布情况，了解染色体在细胞分裂过程中的变化。

实验材料：细胞样本（如鲤鱼鳞片）、显微镜、盐酸、细胞染色试剂（如吉姆萨染液）、载片、封片胶。

实验步骤：1. 取一片鲤鱼鳞片作为实验的细胞样本，放在载片上。

2. 把加载着细胞样本的载片放入含有5%盐酸的试管中，轻轻摇晃试管，使细胞样本变得透明。

3. 把载片放入吉姆萨染液中，染液温度控制在60°C，染色时间为30分钟。

4. 取出染色后的载片用水洗净，尽量去除多余染色。

5. 将载片倒置在干净的玻璃滑板上，用纸巾轻轻擦干水分。

6. 取一滴封片胶放在载片上，再把玻璃滑板盖在上面。

7. 将载片封片胶放在显微镜架上，用显微镜进行观察。

实验结果：经过染色后，细胞样本的染色体呈现出深蓝色，能够明显看到染色体的形态。

观察到染色体的数量、形状和分布情况。

实验分析：通过观察实验结果，我们发现染色体的数量、形状和分布情况与细胞类型有关。

染色体的数量在细胞分裂过程中是相对固定的，但在不同细胞类型中会有差异。

染色体的形状也因细胞类型而异，可以是染色体形态较为规则的条状结构或染色体断裂后形成的不规则结构。

染色体的分布情况通常有两种类型，即离散分布和集中分布，前者表示细胞核内有多个染色体团，后者表示细胞核内有染色体团。

结论：通过本次实验，我们成功观察和分析了细胞染色体的结构和特点。

染色体的数量、形状和分布情况是细胞类型的重要特征，与细胞分裂过程密切相关。

这些发现对了解细胞生物学和机体发育具有重要意义。

实验存在的问题和改进方向：本实验中，实验步骤相对简单，但在染色后的观察过程中，可能存在染色不均匀、细胞过度变形等问题。