全菌抗原的ELISA.

elisa抗原检测原理一、概述ELISA抗原检测是一种基于免疫反应的检测方法，主要用于检测样本中的特定抗原。

该方法具有较高的灵敏度和特异性，广泛应用于临床诊断、传染病检测和疫苗研究等领域。

二、工作原理1. 抗原抗体反应：抗原抗体反应是抗原和抗体之间相互识别、互补的结合过程。

当抗原与抗体结合后，会形成特定的免疫复合物，从而产生反应。

2. 酶标记物：酶是一种能够将底物转化为具有颜色或荧光的物质。

常用的酶标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和荧光物质等。

酶标记物在抗原抗体反应中被吸附在免疫复合物上，通过酶的作用，使得底物与酶反应后的产物具有颜色或荧光效应。

3. 颜色反应和荧光检测：通过光学仪器或观察池观察底物与酶反应后的产物颜色或荧光强度，可以判断样本中是否存在抗原。

颜色的深浅或荧光的亮度与抗原浓度成正比，据此可以确定样本中是否存在特定的抗原。

三、应用领域1. 传染病诊断：ELISA抗原检测广泛应用于传染病诊断，如乙肝、丙肝、艾滋等。

通过检测血液、体液或组织中的抗原，可以早期诊断疾病，评估治疗效果和监测传染源。

2. 肿瘤标志物检测：肿瘤标志物是反映肿瘤发生、发展和转归的物质，通过检测血液或其他体液中的肿瘤标志物，可以辅助诊断肿瘤类型，评估治疗效果和监测复发。

3. 疫苗研究：ELISA抗原检测在疫苗研究中也具有重要作用。

通过对疫苗接种人群的免疫反应进行检测，可以评估疫苗的效果和免疫应答，为进一步改进疫苗提供依据。

四、优点与局限性1. 优点：灵敏度高、特异性强、操作简便、易于自动化。

2. 局限性：存在假阳性或假阴性结果的可能，对于一些低浓度抗原的检测难度较大。

此外，ELISA抗原检测结果受到试剂质量、操作规范、样本处理等因素的影响，需要严格的质量控制和操作规范。

五、注意事项1. 样本选择：选择合适的样本类型，如血液、体液、组织等，以确保样本中存在足够的抗原。

2. 试剂选择：选择正规品牌、生产日期和有效期的酶标试剂盒，确保试剂的质量和准确性。

elisa检测抗原的方法和原理(一)ELISA检测抗原的方法和原理引言ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测抗原或抗体的存在和浓度。

本文将以浅入深的方式介绍ELISA 检测抗原的方法和原理。

ELISA的基本原理ELISA基于酶底物反应的颜色变化来判断样品中抗原的存在与否。

该方法主要分为四个步骤：涂层、孵育、洗涤和检测。

1. 涂层步骤在实验板的微孔中涂覆特异性抗体，形成抗原与抗体之间的结合。

2. 孵育步骤将待测样本加入实验板的微孔中，让待测抗原与涂层中的抗体结合。

3. 洗涤步骤通过多次洗涤，去除未结合的物质，以减少假阳性的可能性。

4. 检测步骤在洗涤后，加入与抗原结合的酶标记抗体。

酶标记抗体会结合到待测抗原-抗体复合物上。

在酶底物的作用下，酶催化底物发生变化，产生颜色。

颜色的强度与抗原的浓度成正比。

ELISA的类型ELISA方法在实验设计上有多种不同的变体，根据不同的目的和要求，可以选择以下几种常见的ELISA类型：1. 直接ELISA直接ELISA是最简单的ELISA类型，用于检测已知抗原的存在与否。

在涂层步骤中，直接将抗原直接固定在微孔表面。

接下来的步骤与基本原理相同。

2. 间接ELISA间接ELISA常用于检测抗体的存在。

在涂层步骤中，将抗原固定在微孔表面。

然后，加入待检测样品中含有的抗体。

接下来的步骤与基本原理相同。

3. 间接竞争ELISA间接竞争ELISA是一种常用于测定激素、药物等物质浓度的ELISA类型。

在涂层步骤中，将抗原固定在微孔表面。

然后，加入标记有相同抗原的酶标记抗体和待检测样品。

待检测样品中的抗原与酶标记抗体竞争结合。

颜色的强度与抗原浓度成反比。

4. 免疫层析ELISA免疫层析ELISA常用于快速检测样品中的病原体。

与传统ELISA 不同的是，免疫层析ELISA中使用了带有检测抗体的固定相（如纸片）。

待测样品通过纸片时，特定抗原与检测抗体结合形成一条线。

elisa的检测原理及步骤ELISA也就是酶联免疫吸附法，是常见的一种免疫学实验技术，广泛应用于疾病诊断、药物检测和基因工程等多个领域。

下面对该检测方法的原理和步骤进行详细介绍。

一、原理ELISA是一种通过酶标记在特定抗原-抗体反应后，通过测定酶活性或者荧光强度来检测特定抗体或抗原的方法。

具体原理包括以下几个方面：1.抗体/抗原的孕育：为了进行ELISA检测，首先需要制备抗体或者抗原，在抗原的孕育过程中，一般采用细胞、细胞质、蛋白质、肝炎病毒核心抗原、抗体等作为抗原。

2.抗原加到板上：将抗原添加到检测板上，用于捕获待测样品中的特定抗体/抗原。

5.辣根过氧化物酶标记抗体加入：将与辣根过氧化物酶标记的抗体加入到检测板上，抗体与待测样品中的抗原结合。

6.底物加入：将底物（可以是苯基乙酸和过氧化物的混合物）加入到检测板上，通过酶标记抗体加强底物的催化，产生颜色。

7.读板：用酶标记抗体催化反应的底物生成的颜色强度，表示样品中的相应抗体或抗原的含量。

二、步骤ELISA步骤如下：1.制备捕获抗体：制备捕获抗体，将其吸附到检测板上。

2.将样品加入检测板：向检测板添加待测物质，例如蛋白质或者抗体。

3.洗涤步骤：用缓冲液冲洗检测板上的非特异性结合物质，以减少假阳性反应的出现。

4.加入探针抗体：加入与待测物质特异性结合的酶标记抗体。

6.底物加入：加入底物，让酶标记物质生成颜色。

7.读板：对反应所生成的颜色进行测量，例如比色法或者发光法等。

三、总结ELISA检测具有以下优点：非常准确、灵敏性高、易于操作、可产生准确可靠的结果等。

其通过测定酶活性成分的存在，展示了其在生物医学领域中的重要应用，帮助人们更好地理解生物分子，并依据该理解开展诸如疾病诊断、药物检测和基因工程等工作。

ELISA方法的及步骤
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay）是一种免疫分析的方法，也叫酶标免疫分析，是在免疫学及其它生物领域中常用的分析技术，通过酶，抗体和抗原等物质的反应来测定其中一种物质的存在量及含量。

1、准备样品
首先将样品放入微孔板中，根据所需的数量准备多个样品，如果样品太浓，可以把它们降解成所需的浓度；如果样品太稀，可以根据需要加以稀释。

2、准备抗体和抗原
分别准备抗体和抗原，其中抗体是用来特异性结合抗原的，并起到抗原的定位、分析的作用，而抗原是根据需要溶解在其中一种介质(Buffer Solution)中，通常是立即使用；如果出于其中一种原因不能立即使用，可以先保存冰上，在使用前加热到室温。

3、准备链式反应物
将抗体和抗原分别加入微孔板中，同时把链式反应物加入微孔板中，链式反应物也叫链式抗体，可以促进抗体和抗原之间的反应，一般抗体和抗原均可与链式反应物发生反应，这样可以提高反应的准确性及灵敏度。

4、酶标偶联反应
将已准备的样品、抗体、抗原和链式反应物放入微孔板中，用摇床摇匀即可进行酶标偶联反应，反应的原理是：抗体和抗原发生特异性结合，当抗体和抗原结合后，其中的链式反应物与抗原结合。

ELISA方法详细过程及步骤ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用于测定生物样本中特定分子的定量方法。

它结合了免疫化学和酶学原理。

下面是对ELISA方法的详细过程及步骤的完整版说明：1.准备工作：首先，准备实验室材料，包括ELISA板、试剂、标样、洗涤液、试管、酶标板读取器等。

确保所有物品都是干净且无污染的。

2.涂覆抗原或抗体：将要测定的抗原或抗体在ELISA板的孔中涂覆。

可以将抗原或抗体溶液加入每个孔中，然后在37°C的恒温箱中孵育2到4个小时，以便其吸附在板上。

3.孔的封闭：将孔洗涤掉未吸附的物质，并用阻断液封闭孔，以防止非特异性结合。

4.样本和标准品的加入：将待测样本和不同浓度的标准品加入对应的孔中。

将ELISA板返回恒温箱，孵育一段时间，使样本和标准品中的抗原或抗体与固相相结合。

5.洗涤：将洗涤液加入孔中，用洗涤机或手动洗涤涡流器洗涤孔，以去除未结合的物质。

6.加入检测抗体：加入检测抗体，该抗体具有与待测物质结合的亲和性。

将ELISA板返回恒温箱进行孵育，使检测抗体与待测物质结合。

7.洗涤：重复第5步中的洗涤步骤，以去除未结合的检测抗体。

8.加入次级抗体：加入与检测抗体结合的二抗，通常是与酶结合的抗体。

这个二抗具有抗体结合和酶活性。

9.洗涤：重复第5步中的洗涤步骤，以去除未结合的次级抗体。

10.反应底物：加入染色底物，它通常是可以与酶发生反应并产生可见信号的底物。

11.反应停止：通过加入停止液，中止底物的反应并停止信号的产生。

12.读板：使用酶标板读取器，在特定波长下测量每个孔的吸光度。

这个吸光度与待测样本中目标物质的含量成正比。

13.数据分析：根据标准曲线，计算出待测样本中目标物质的浓度。

总结：ELISA方法是一种常用的免疫学定量方法，它可以用于测定生物样本中特定分子的含量。

在ELISA方法中，首先将待测物质（抗原或抗体）固定在ELISA板上，然后加入待测样本和标准品，进行孵育和洗涤的步骤，以去除未结合物质。

elisa原理和步骤ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）是一种检测生物分子的方法，主要用于检测抗原或抗体的存在。

它是一种非常灵敏、快速、可靠的检测方法，广泛应用于医学、生命科学、生物工程、环境监测等领域中。

下面就为大家详细地介绍一下ELISA的原理和步骤。

1. 原理ELISA的原理是利用酶作用产生的光信号来检测目标分子。

一般来说，ELISA分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等几种类型。

其中最常使用的就是间接ELISA。

间接ELISA主要是利用抗体的特异性识别目标抗原，然后用另一种抗体与其结合，标记上酶来检测。

当样品中含有目标抗原时，它将特异性地结合到ELISA板上的抗体上，随后加入酶标记的第二抗体，在洗涤后酶标记的抗体得以固定。

最后，加入底物后，酶作用会产生光信号，信号的强度与目标抗原的浓度成正比。

2. 步骤（1）涂覆ELISA板将检测抗体溶液加入到微孔板中，一般是96孔板，放置过夜。

它的作用是将检测抗体吸附到微孔板上，形成成分固定的ELISA板。

（2）阻断加入一定浓度的蛋白质或其他酶抑制剂，以防止非特异性的蛋白质与孔的表面互相结合，从而阻止抗体结合并引起假阳性的结果。

（3）加入样品加入待测试的样品，通常需要稀释样品以得到正确的浓度范围。

ELISA可以检测抗原或抗体，或者两者之间的竞争。

如果检测的是抗原，则加入样品和待测物，如果检测的是抗体，则加入包含特异抗原的样品。

（4）加入检测抗体加入与检测抗原特异性结合的检测抗体，也称为探针抗体。

这个抗体标记了酶，通常是使用HRP（辣根过氧化物酶）。

（5）加入底物加入底物，就是加入一种可以被该特定酶催化分解的化合物，以产生一个可检测的信号，通常是这种底物是TMB（3,3′,5,5′-四甲基联苯二胺）。

（6）读取结果使用酶标仪读取微孔板的吸收值，可以算出待测样品中目标分子的含量。

通常会测量每个孔的吸光度，并使用标准曲线来计算样品中目标分子的浓度。

ELISA的原理和基本类型ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫测定技术，通过测定抗原或抗体与其相应配体之间的特异性反应来检测目标物质的存在和浓度。

这项技术具有高灵敏度、高特异性和高通量性的优势，已广泛应用于医学、生物学、环境科学和食品安全等领域的研究和临床诊断中。

1.直接ELISA：直接ELISA是最简单的ELISA形式之一、在直接ELISA中，适量的抗原被吸附在固相（如微孔板）上后，样本中的抗体与其结合。

接着，通过与该抗体特异性结合的酶标记抗体检测目标物质的存在与否。

最后，加入底物使酶催化发生彩色反应，根据颜色的强度来确定抗原浓度。

2.间接ELISA：间接ELISA是最常用的ELISA形式之一、在间接ELISA中，抗原被吸附在固相上，然后与试样中的抗体结合。

随后，加入与试样中抗体结合的酶标记抗体，再加入底物以进行酶催化的彩色反应。

该方法的优势在于，只需要极少量目标抗原即可进行检测。

3.竞争ELISA：竞争ELISA用于测定抗体或抗原浓度，是一种定量分析的方法。

在竞争ELISA中，抗原或抗体与固相相结合的抗体或抗原发生竞争结合，测定竞争反应的结果来确定目标物质的浓度。

4.夹心ELISA：夹心ELISA又被称为“双抗体夹心ELISA”。

该方法可用于检测样品中特异的抗原或抗体。

在夹心ELISA中，首先将一种抗体吸附在固相上，样品中的抗原与之结合。

然后加入酶标记的第二抗体与抗原再次结合。

最后，加底物使酶发生催化反应，并测量酶催化发生的信号。

总而言之，ELISA是一种高灵敏度、高特异性的免疫测定技术，可以通过测定抗原和抗体之间的特异性反应来快速、准确地检测目标物质的存在和浓度。

在不同类型的ELISA中，抗原或抗体通过固相吸附、结合特异性的酶标记抗体、进行酶催化反应的彩色反应来实现检测。

ELISA技术在医学、生物学和环境科学等领域的研究和诊断中发挥了重要作用。

elisa原理及步骤Elisa原理及步骤。

ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。

它的原理基于酶标记的抗体或抗原与待检测样品中的特定分子结合，然后通过酶介体的作用产生可定量检测的信号。

ELISA方法具有高灵敏度、高特异性和简单操作的特点，因此在生物医学研究和临床诊断中得到了广泛的应用。

ELISA的原理。

ELISA方法的原理是基于抗体-抗原的特异性结合。

在ELISA实验中，待检测的抗原或抗体首先被吸附在微孔板上，然后加入特异性的酶标记抗体或抗原，形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物。

随后，通过加入底物使酶产生可定量检测的信号，最终通过光度计或荧光计测定信号的强度，从而确定待检测样品中抗原或抗体的浓度。

ELISA的步骤。

1. 样品处理，将待检测的样品（血清、尿液、细胞上清液等）进行处理，如离心、稀释等，以便得到适合实验的样品。

2. 固定抗原或抗体，将待检测的抗原或抗体溶液加入微孔板中，使其吸附在板上，然后对板进行洗涤，以去除未结合的物质。

3. 加入酶标记抗体或抗原，将特异性的酶标记抗体或抗原加入微孔板中，与固定的抗原或抗体结合，形成复合物。

4. 洗涤，对微孔板进行洗涤，以去除未结合的酶标记抗体或抗原。

5. 加入底物，加入适当的底物，使酶产生可定量检测的信号。

6. 反应停止，在适当的时间后，加入反应停止液停止酶的反应。

7. 测定光密度，使用光度计或荧光计测定产生的信号的强度，从而确定待检测样品中抗原或抗体的浓度。

ELISA方法的应用。

ELISA方法在临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域得到了广泛的应用。

在临床诊断中，ELISA方法常用于检测感染病原体的抗体、抗原或相关蛋白质，如HIV、乙肝病毒、丙肝病毒等。

在生物医学研究中，ELISA方法常用于检测细胞因子、生长因子、激素等蛋白质的浓度，以及疾病标志物的检测。

常用的单克隆抗体检测方法通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。

由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。

①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取L Na2CO3 8ml，L NaHCO3 17ml混合，再加75ml 蒸馏水，调PH至。

Tris-HCl缓冲液（，L）：取L Tris 100ml，L HCl 混合，加蒸馏水至1000ml。

b、洗涤缓冲液（的PBS）：KH2PO4 ，KCl ，Na2HPO4·12H2O ，NaCl ，Tween-20 ，加蒸馏水至1000ml。

c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA），加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。

d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水，滴加浓硫酸（98%）。

e、底物缓冲液（，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取L Na2HPO4 ，L柠檬酸，再加50ml蒸馏水。

柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。

f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2 。

TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml），底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。

ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS ，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。

g、抗体对照：以骨髓瘤细胞培养上清作为阴性对照，以免疫鼠血清作为阳性血清。

h、抗原：可溶性抗原：尽量纯化，以获得高特异性。

病毒感染的传代细胞或全菌抗原。

淋巴细胞等悬液。

i、酶标抗鼠抗体或酶标SPA或其他类似试剂。

j、细胞固定液：-20℃丙酮；或丙酮-甲醛固定液：Na2HPO4 100mg，KH2PO4 500mg，蒸馏水150ml，丙酮225ml，甲醛125ml；或丙酮-甲醛溶液（1；1）；或-20℃甲醇。

ELISA的原理ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用于检测抗体或抗原的实验技术。

其原理基于抗原与抗体相互结合的特性，通过酶偶联实现对目标分子的快速、敏感和定量的检测。

首先，在ELISA实验中，需要将用于检测的目标物质（抗原或抗体）附着到一个固定表面上，这个过程称为包被。

常用的包被材料有微孔板或固相支持（如玻璃管和磁珠），其中微孔板比较常见。

为了获取可靠的结果，包被材料通常需要经过预处理，例如用特定浓度的溶液溶解目标物质，将其均匀地分布在包被材料上。

其次，在结合步骤中，待测样品（包括目标物质）与包被材料中固定的目标物质相结合。

这种结合形成的复合物可以被其他特异性抗体或抗原识别和结合。

该过程通常在液体相中进行，将待测样品和目标物质同时加入到微孔板中，并进行适当的孵育。

在此过程中，特定的抗体或抗原与目标物质发生特异性的结合。

然后，检测步骤通过使用特异性的二抗或标记物检测目标物质的结合。

通常，二抗与抗体或抗原结合，并可以通过酶染色反应来检测结合事件。

常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。

这些酶会与染色底物发生酶促反应，产生颜色或荧光信号。

最后，在颜色反应步骤中，染色底物通过加入合适的反应底物并发生化学反应，产生可测量的颜色或荧光信号。

这些信号的强度与目标物质的浓度成正比。

通过测量颜色或荧光信号的强度，可以确定待测样品中目标物质的含量。

ELISA有几种不同的变体，其基本原理相同，但在实施细节上有一些差异。

例如，直接ELISA使用是否标记的一抗直接与目标物质结合并进行检测。

间接ELISA则使用两个抗体：第一个抗体与目标物结合，第二个抗体与第一个抗体结合并进行检测。

竞争ELISA则是使用标记的一抗和待测样品中的目标物竞争结合，从而实现目标物含量的测定。

elisa法检测步骤ELISA法，即酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种常用于检测特定抗原或抗体的方法。

它基于免疫学原理，通过特异性抗体与抗原结合并利用酶的催化作用产生可测定的信号，从而实现对目标物质的定量检测。

下面将介绍ELISA法的基本步骤以及注意事项。

1. 抗原或抗体的固定需要将待测抗原或抗体固定在固相载体上，常用的载体有微孔板等。

固定的目的是为了使待测物能够与特异性抗体或抗原结合，并保持其稳定性。

2. 阻断非特异性结合位点在固定的抗原或抗体上，加入一种阻断剂，如牛血清蛋白（BSA）或鱼胶蛋白（Gelatin），以防止非特异性结合。

3. 特异性抗体的结合将待测样品加入到固定的抗原上，使其中的抗原与特异性抗体发生结合反应。

特异性抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，其选择应根据具体实验需求。

4. 酶标记二抗的结合经过特异性抗体的结合后，再加入酶标记的二抗。

酶标记的二抗与特异性抗体的结合形成免疫复合物。

5. 酶底物的加入在免疫复合物形成后，加入酶底物。

酶底物与酶标记的二抗结合后，酶会催化底物的反应，产生可测定的信号。

常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。

6. 反应停止根据酶底物的选择，选择合适的反应停止液，使酶催化反应停止。

常用的反应停止液有硫酸或碳酸氢钠。

7. 信号检测将停止反应后的溶液转移到酶标仪或光度计中，测定产生的信号强度。

ELISA法可以通过颜色反应或发光反应来进行信号检测。

ELISA法作为一种常用的检测方法，在临床诊断、生物医学研究和生物工业等领域都有广泛应用。

但在进行ELISA实验时，还需要注意以下几点：1. 严格控制实验条件，包括温度、时间和pH值等，以确保实验结果的准确性。

2. 选择合适的阳性和阴性对照，以验证实验的可靠性和敏感性。

3. 遵循操作规范，注意实验操作的无菌和无污染。

4. 合理选择稀释倍数，以保证实验结果在检测范围内。

ELISA试验方法ELISA是一种免疫学实验方法，用于检测和定量分析生物样本中的特定蛋白质或抗原。

它的全称是“酶联免疫吸附实验”（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是酶联免疫技术的一种应用。

ELISA试验方法基于抗原与抗体间的特异性结合原理。

首先，需要在固相载体上固定抗原，将其与待测样本中的特定蛋白质相结合。

然后，在固定的抗原上加入与待测样本中特定蛋白质结合的抗体，使其与抗原结合。

随后，通过加入酶标记的二抗来结合与待测样本中特定蛋白质结合的抗体，并通过显色反应来检测和量化结合事件。

下面是ELISA试验方法的详细步骤：1.板涂覆：将含有特定抗原的溶液加入固相载体（如微孔板）中，使抗原吸附在载体表面。

2.板洗涤：将未结合的抗原洗去，保留结合在载体上的抗原。

3.阻断：加入适当的阻断剂（如牛血清蛋白），阻止非特异性结合。

4.样品加入：将待测样本加入载体孔中，使样本中的特定蛋白质与载体上的抗原结合。

5.洗涤：将未结合的样品洗去，保留与载体上抗原结合的特定蛋白质。

6.加入一抗：加入与待测样本中的特定蛋白质结合的一抗体，使其与特定蛋白质结合。

7.洗涤：将未结合的一抗洗去，保留与载体上抗原结合的一抗体。

8.加入二抗：加入与一抗体结合的酶标记二抗体，使其与一抗体结合。

9.洗涤：将未结合的二抗洗去，保留与载体上抗原结合的酶标记二抗体。

10.底物加入：加入酶促反应底物（如TMB）使其发生显色反应，生成可见色素。

11.反应停止：加入停止剂（如硫酸）停止显色反应。

12.光密度测量：使用光密度仪测量载体中的各孔的吸光度（OD值），即可检测和定量特定蛋白质的含量。

1. 高灵敏度：ELISA能够检测到低浓度的特定抗原或抗体，一般可达到ng/mL的级别。

2.特异性强：ELISA方法利用抗原与抗体的特异性结合，因此可以高度特异性地识别并定量特定蛋白质。

3.可重复性好：ELISA方法的结果具有较好的重复性，可以进行定量和对比分析。

常用的单克隆抗体检测方法通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。

由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。

①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。

Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。

b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。

c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。

d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。

e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。

柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。

f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O20.15ml。

TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。

ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。

ELISA原理及步骤ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附法）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的分析技术。

它基于免疫学原理，通过检测特定抗原和抗体的结合来定量测定目标物。

1.直接ELISA的原理及步骤：直接ELISA方法适用于已知抗体，且目标物的抗原性较好的情况。

该方法将特异性的抗原通过硫酸盐或其他方法固定于微孔板上，然后用荧光素标记的抗体与其结合，最后通过测量荧光素的荧光强度来进行定量测定。

步骤：1）将抗原分散涂布在微孔板上，然后孵育，使其与货物绑定。

2）将非特异性结合位点封闭，以防止非特异性结合。

3）加入荧光素标记的抗体，与抗原特异性结合。

4）洗涤净化微孔板以除去未结合的荧光素标记的抗体。

5）加入底物，并进行发光强度测定。

6）测量荧光素的荧光强度，利用标准曲线计算样品中目标物的浓度。

2.间接ELISA的原理及步骤：间接ELISA方法适用于已知抗原，但目标物的抗原性较差的情况。

该方法在抗原固定之后，加入绕行适体素标记的次级抗体，通过该次级抗体与目标物特异性结合，最后通过测量标记抗体的发光强度来进行定量测定。

步骤：1）将抗原分散涂布在微孔板上，然后孵育，使其与货物绑定。

2）将非特异性结合位点封闭，以防止非特异性结合。

3）加入特异性的初级抗体与目标物结合。

4）洗涤净化微孔板以除去未结合的初级抗体。

5）加入绕行适体素标记的次级抗体，使其与初级抗体结合。

6）洗涤净化微孔板以除去未结合的次级抗体。

7）加入底物，并进行发光强度测定。

8）测量标记抗体的发光强度，利用标准曲线计算样品中目标物的浓度。

3.竞争ELISA的原理及步骤：竞争ELISA方法适用于已知抗体和已知抗体与抗原的结合关系的情况。

该方法将标记抗原与固定抗原共同加入到微孔板中，通过测量标记抗原与抗体的竞争情况来进行定量测定。

步骤：1）将抗原分散涂布在微孔板上，然后孵育，使其与货物绑定。

2）将标记抗原共同加入到微孔板中。

elisa是什么检测方法ELISA是一种常用的免疫学检测方法，全称酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）。

它通过检测抗体和抗原之间的特异性结合来诊断疾病、监测疾病进展、评估治疗效果等。

ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可靠等优点，因此在临床诊断和科研领域得到广泛应用。

ELISA检测方法的原理是利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过酶标记的二抗或底物来检测样品中抗原或抗体的含量。

在ELISA实验中，首先将待检测样品加入已包被在微孔板上的抗原或抗体，待样品中的抗原或抗体与包被的抗原或抗体结合后，用洗涤液去除未结合的物质，然后加入酶标记的二抗或底物，通过比色反应或荧光反应来检测待检测物质的含量。

ELISA检测方法有直接法和间接法两种。

直接法是将待检测样品直接加入包被的抗原或抗体后进行检测，适用于待检测物质为抗原的情况；间接法是将待检测样品加入包被的抗原或抗体后再加入酶标记的二抗或底物进行检测，适用于待检测物质为抗体的情况。

此外，还有竞争性ELISA和间接竞争性ELISA等衍生方法，用于检测特定的生物分子。

ELISA检测方法在临床诊断中有着广泛的应用。

例如，ELISA可以用于检测病毒、细菌、寄生虫等微生物的抗体或抗原，用于诊断感染性疾病；也可以用于检测肿瘤标志物、药物残留、激素水平等，用于诊断肿瘤、药物中毒、内分泌疾病等。

此外，ELISA还可以用于监测疾病进展和评估治疗效果，对于临床诊断和治疗具有重要的意义。

在科研领域，ELISA检测方法也被广泛应用。

科研人员可以利用ELISA方法检测蛋白质、抗体、抗原等生物分子的含量，用于研究细胞信号通路、免疫应答机制、药物作用机制等。

ELISA方法的灵敏度高、操作简便、结果可靠，使其成为科研实验室中不可或缺的技术手段。

总之，ELISA是一种常用的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可靠等优点，在临床诊断和科研领域得到广泛应用。

elisa常用方法及其原理Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验方法，广泛应用于生物学和医学研究中。

本文将介绍Elisa的常用方法及其原理。

一、Elisa的基本原理Elisa是一种通过检测抗原-抗体反应来测定物质浓度的方法。

其基本原理是将待测物质（抗原或抗体）固定在固相载体上，然后加入特异性的酶标记二抗，通过酶标记物的催化作用，将待测物质与酶底物反应产生可测定的信号。

Elisa可以根据待测物质的特异性与酶标记物的催化作用来测定物质的浓度。

二、Elisa的常用方法1.直接Elisa法：将待测抗原直接固定在固相载体上，然后加入酶标记的第一抗体，通过酶标记物的催化作用来测定抗原的浓度。

这种方法简单快速，适用于抗原浓度较高的情况。

2.间接Elisa法：将待测抗原固定在固相载体上，然后加入与抗原特异性结合的第一抗体，再加入酶标记的第二抗体，通过酶标记物的催化作用来测定抗原的浓度。

这种方法灵敏度较高，适用于抗原浓度较低的情况。

3.竞争Elisa法：将待测抗原固定在固相载体上，然后加入与抗原特异性结合的酶标记抗体和待测样品，通过抗原与酶标记抗体的竞争来测定抗原的浓度。

这种方法可以测定抗原和抗体的亲和力，适用于测定抗原或抗体的亲和力常数。

4.间接竞争Elisa法：将待测抗原固定在固相载体上，然后加入与抗原特异性结合的第一抗体，再加入酶标记的第二抗体和待测样品，通过第一抗体与第二抗体的竞争来测定抗原的浓度。

这种方法可以测定抗原和抗体的亲和力，适用于测定抗原或抗体的亲和力常数。

三、Elisa的操作步骤1.涂覆：将待测物质（抗原或抗体）溶液加入固相载体上，使其吸附固定在载体表面。

2.阻断：加入适当的阻断剂，防止非特异性结合。

3.第一抗体反应：加入特异性的第一抗体，使其与待测物质发生特异性结合。

4.洗涤：用洗涤缓冲液洗去未结合的抗体。

5.酶标记抗体反应：加入酶标记的第二抗体，使其与第一抗体结合。

6.洗涤：用洗涤缓冲液洗去未结合的酶标记抗体。

ELISA的概念原理操作步骤ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附试验）是一种常用于检测抗原或抗体的高度敏感和特异性的实验技术。

ELISA基于抗原和抗体之间的特异性结合反应，借助酶催化对这种结合反应进行增强，并且可以通过分析底物的酶活性来定量检测分析物的含量。

1.抗原固定：将待测抗原固定在试验板上，可以通过直接吸附或间接固定，例如，在试验板上吸附荧光素偶联的抗体作为捕获抗体，再通过另外的抗原与之结合。

2.阻断：用非特异性蛋白质（如牛血清白蛋白）封闭未吸附的潜在结合位点，以防止干扰物和试剂的非特异吸附。

3.抗体结合：加入试验液中的样品和检测抗体一起加入到试验板中，待检测抗原与固相捕获抗体结合形成复合物，再用洗涤液洗去非特异吸附物。

4.二抗结合：加入与待测抗体免疫球蛋白特异性结合的标记（如HRP酶标记的抗人免疫球蛋白）二抗，形成"抗原-一抗-二抗酶标纯化物"复合物。

5.洗涤：将非特异性吸附的试剂彻底洗净。

6.酶底物反应：加入酶底物（如TMB底物）反应，形成可呈色的产物。

7.酶停止反应：加入酶停止液中的酸，停止酶的活性，颜色转变为黄色。

8.光度计测定：用光度计测定所生成的黄色产物的吸光度，与待检测抗原的浓度成正比关系。

1.准备试验板：选择适宜的试验板（通常为96孔或384孔的微孔板），吸附待测抗原于试验板上，封闭非特异吸附位点。

2.建立标准曲线：将一系列已知浓度的标准物质添加到试验板上，用于后续的定量测定。

3.添加样品和检测抗体：将待测样品添加到试验板中，同时加入检测抗体。

确保足够的洗涤步骤以去除非特异吸附物。

4.添加标记二抗：加入标记的二抗，该二抗对待测抗体免疫球蛋白进行特异性结合。

5.洗涤：将试验板洗涤数次，以去除未与特异抗体结合的非特异抗体。

6.酶底物反应：加入酶底物，观察产生的可呈色产物。

7.酶停止反应：加入酶停止液停止酶底物反应。