7.3改良人体解剖标本固定液的应用
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人体解剖使用的3种标本保存液对比研究尸体标本的保存,通常情况下均使用酒精-甲醛溶液进行保存,但是由于福尔马林对人体和环境都有较大的伤害,导致多年以来人们一直在探寻他的较好的替代品。
文章通过对于酒精-甲醛液、尸体保存液、尸体保存液内加1%的甲醛制成的混合液的使用效果对比,寻找较为合适的尸体标本保存液。
标签:人体解剖;标本;保存液福尔马林具有较强的防腐作用,是应用最为广泛的防腐固定剂之一。
但是对人体的呼吸道和结膜有严重的损害,此外,对于环境也有一定的污染,近年来的科学研究更是将其定义为一种致癌物。
那么如何減少福尔马林对人体和环境的危害,选择合适的标本保存液,对于营造健康的学习工作环境和提高解剖学教学质量有着重要的意义。
1实验部分1.1实验材料我们选取以下三种不同的标本保存液:①酒精-甲醛液(工业酒精25%、甲醛3%、水72%);②尸体保存液(主要成分:50%戊二醛、乙醇、防霉防腐剂、甘油等,不含甲醛;产于中国吉林);③尸体保存液内加1%的甲醛制成的混合液。
选取三间面积一致的实验室而积各为(68m2),每间实验室内都配备有四台抽风式解剖台,十件小型局部标本,在解剖台内放置有两件完整上下肢和躯干标本,一具尸体标本,在标本缸内陈列有五件标本。
配备有显微镜及组织切片所须工具:美国产的IQ-250型甲醛检测仪,分辨率0.lppm/lppm[1]。
1.2方法每间实验室进行独立操作,每个实验室使用一种保存液,并保证所选用的保存液体积是一致的。
将教学标本和尸体标本浸泡于保存液中,并完全浸没,密封保存。
在不同的时间段内打开盖进行检查,此过程中不添加任何液体。
通过肉眼观察标本颜色、腐化程度,通过触碰感受标本弹性,通过仪器测量标本保存液的挥发量,这样的检测操作进行2年[2]。
对选择的5个定点进行甲醛的含量测定,取所有人体标本均切片后进行比较。
2结果4个月后第一次开盖比较三种保存液的效果,观测三种液体质量和颜色的变化情况:尸体保存液下降了16cm,混合液下降了14cm,酒精- 甲醛溶液下降了7cm;陈列标本缸内的液体含量没有变化。
人体解剖标本防腐固定方法的新探讨发布时间:2022-07-29T02:18:26.005Z 来源:《教育学文摘》2022年2月总第400期作者:金杰[导读] 清洗和消毒处理。
无论人体解剖标本的来源如何,在对人体解剖标本进行防腐处理之前都要对其进行清洗消毒,防止病菌的传播,降低人体解剖标本池中防腐液的浊度。
昆明卫生职业学院云南昆明650000摘要:在人体解剖学教学过程中常使用人体解剖标本,而保存标本过程中传统的方法为使用福尔马林液,由于此方法具有经济性、杀菌性与防腐性,因此其应用较为广泛。
但根据实践可知,经福尔马林液灌注、浸泡及保存的标本,具有较强的刺激性与毒害性,严重影响到操作者的身体健康。
经过反复的实验和观察,学者们从标本防腐过程与防腐固定液的角度展开了研究,对人体解剖标本的防腐固定做了一些改进。
关键词:人体解剖标本防腐固定一、人体解剖标本防腐前的准备工作1.清洗和消毒处理。
无论人体解剖标本的来源如何,在对人体解剖标本进行防腐处理之前都要对其进行清洗消毒,防止病菌的传播,降低人体解剖标本池中防腐液的浊度。
清洗消毒流程一般是先用自来水冲洗,再用5%来苏或2%新洁尔灭进行喷洒消毒。
2小时后,再用自来水冲洗。
2.预处理。
在获得无腐败人体解剖标本后,下一步操作就是展开防腐预处理,具体操作措施如下:剔毛、洗净,根据解剖学姿势,平坦放置,并取仰卧位;此后,在腹股沟附近切开股动脉,并插入T形管,最后固定。
3.排血。
血液引流(排血)是在灌注工作完成之后过大概半小时后再往血管中输注5000毫升生理盐水,促进血液流出。
输入生理盐水的过程不能一次直接输入,而是应该缓慢注入,只要在1.5小时之内输入完成就算达标。
然后,切开对侧下肢足背动脉,血液会从静脉端流出,直至无血液体流出为止。
二、人体解剖标本固定液1.灌注固定液的制备。
传统上采用20%甲醛水溶液对人体解剖标本进行固定,但操作容易因为组织变硬、弹性差、解剖时标本组织容易被扯下等原因而失败,且操作过程伴随甲醛的挥发,会影响操作人员的身体健康。
环保组织标本固定液特点:
1、绿色环保无毒无害,全面替代甲醛。
2、彻底解决了甲醛对病理工作者的伤害。
长期接触甲醛的人群如医院病理科、外科工作人员等经常吸入少量甲醛能引起慢性中毒,记忆力衰退,体内白细胞数明显下降。
【固定原理】
固定任何蛋白质,防止组织和细胞的自溶。
Cannice环保组织标本固定液(即用型)的优越性
1、淡黄色液体、气味清香,绿色环保、无毒、无害,彻底解决了甲醛对病理工作者的危害。
2、适用于病理组织标本、常规染色、组织化学染色、免疫组化染色
等,全面替代甲醛。
3、迅速渗入组织而固定原生态,使短期解剖的组织细胞形态不至于有变化。
4、固定液有相当的渗透力,可使组织内外完全固定,且无损伤。
5、缩短脱水、脱脂时间。
固定的同时,发生脱水、脱脂作用,缩短了病理切片制作过程中的脱水、透明时间。
6、增加细胞内含物质的折光度,易于鉴别,增加媒染作用和染色作用。
7、蛋白间不发生交联反应,免疫组化效果大大优于甲醛。
操作步骤与注意事项
【操作步骤】
1、将组织标本固定液编号、写上姓名等;
2、将离体组织及时浸入组织标本固定液中,一般不超过5分钟,组织标本的体积与液体的比例为1:4,固定时间为2至12小时。
【注意事项】
1、小块组织标本(小于1.2CM*1.2CM*0.6CM)及各种活检组织标本,固定2至12小时即可,直接进行脱水、浸蜡、切片、染色等。
2、大块的组织标本需固定在12小时以上;或将大块的组织标本固定2小时后,取材,再固定2小时即可。
大体标本常用的固定液
固定液是生物组织或细胞学研究中不可或缺的一部分,它可以帮助保存和稳定组织和细胞,使它们能够在后续的样品处理和分析中保持完整。
一般来说,固定液包括多种化学成分,不同的固定液适用于不同的组织和细胞类型。
以下是最常用的固定液:
1. 10% 福尔马林(Formaldehyde)
福尔马林是最常用的固定液之一,它可以作为一种信标分子,标记细胞蛋白。
福尔马林具有良好的渗透性,能够迅速渗透到组织中,提供良好的固定效果。
2. 十二烷基硫酸钠-10%EDTA浸液(SDS-EDTA Buffer)
SDS-EDTA浸液是常用的细胞质微管结构和线粒体固定液。
该固定液是一种离子池化学固定液,能够特异性地固定蛋白质,适用于研究细胞骨架和线粒体。
3. Bouin液
Bouin液是一种精细的组织学固定液,不过使用比较少。
该固定液包括福尔马林、酯化醛和乙酸,可以用于特异性地固定肝脏和其他含脂肪的组织。
4. Carnoy液
Carnoy液是一种比较强的组织学固定液,由95%的乙醇、氯仿和冰醋酸组成。
该固定液可以用于稳定核质和细胞膜,适用于肝脏和小肠等组织。
5. 4%多聚甲醛(Paraformaldehyde)
4%多聚甲醛是一种可以在室温下固定细胞和组织的固定液,可以优先固定蛋白质和核酸。
多聚甲醛很便宜,但其固定效果不及福尔马林。
需要注意的是,不同的固定液会对研究结果产生不同的影响。
因此,选择固定液前需考虑组织或细胞类型、后续的实验目的和预期结果等因素,才能选择最合适的固定液。
同时,固定液使用时需要注意安全,防止吸入和接触固定液。
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固定液的种类和功能1.单纯固定液(1)4%中性福尔马林固定液:最常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。
一般无特殊要求的病理标本均适用。
尤其值得注意的是,中性福尔马林是以pH7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%福尔马林固定液。
此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不超过一个月。
福尔马林(40%)100ml无水磷酸氢二钠6.5g磷酸二氢钠4.0g蒸馏水900ml(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性福尔马林,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多聚福尔马林:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液(1)乙醇一福尔马林(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。
该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
福尔马林(40%)100ml95%乙醇900ml(2)B5(醋酸钠一升汞一福尔马林)固定液:多用于固定淋巴组织。
染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠1.25g升汞6.0g蒸馏水90ml使用前加入福尔马林10ml(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。
Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。
需现配现用。
饱和苦味酸水溶液(约1.22%)75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
无水乙醇60ml氯仿30ml冰醋酸10ml(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。
该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效。
升汞5.0g重铬酸钾2.5g硫酸钠1.0g蒸馏水(加至)100ml。
病理组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本(器官或组织),于离体(活体或尸体)后,应尽快置放(浸泡)于装有足够量固定液的容器中固定。
固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。
置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定,应适当大一些。
临床科室切取的标本置放于容器中固定后,应尽快送交病理科继续固定。
未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
㈡常规固定液为4%中性甲醛(10%中性福尔马林),应预先多量配制贮存,以备随时使用。
小标本的固定时间为4~6小时,大标本为18~24小时或更久。
㈢根据病理学特殊检查(特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等)的需要,应选用其他适宜的固定液进行固定[参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”]。
㈣器官、组织固定的基本方法1.食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官:依规范方法剪开后,按其自然状态平铺于硬纸板上(重点暴露黏膜面或内表面的病变处),并用大头针将标本边缘处固定于纸板上,然后放入4%中性甲醛中固定(黏膜面或内表面朝向容器的液面,并覆盖薄层脱脂棉)。
2.肝、脾:由器官背面,沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开,切成数片。
将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中,容器底面衬以脱脂棉。
应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3.肺叶:放入固定液中的肺叶漂浮于液面,需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。
必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4.肾:沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面(深达于肾盏),再行固定。
5.淋巴结:先用4%中性甲醛固定1小时后,再沿其长轴切成数片(厚 2 ~3mm),继续固定。
6.骨组织:先锯成小片(若是长骨应作横向锯片),在4%中性甲醛中固定24小时后,再进行脱钙。
7.微小组织或液体沉淀物:先用拭纸或滤纸妥为包裹(需用大头针扎牢),然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定,以防检材遗失。
8.凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号(病理号)。
生殖器标本制作方法生殖器标本是科学研究、医学教育和临床诊断中重要的工具,它们能够帮助我们更好地了解生殖器的结构和功能。
本文将介绍一种常见的生殖器标本制作方法。
材料准备在开始制作生殖器标本之前,需要准备以下材料:1.装配生殖器解剖模型或供体标本;2.10% 福尔马林固定液;3.70% 乙醇;4.甘油。
制作步骤步骤一:固定标本1.将生殖器解剖模型或供体标本放置在一个容器中;2.向容器中倒入足够的10% 福尔马林固定液,确保标本完全浸泡在固定液中;3.将容器盖好,密封固定液中的气体;4.将标本在室温下固定24小时。
步骤二:脱水处理1.从固定液中取出标本,将其置于一个含有70% 乙醇的容器中;2.确保标本完全浸泡在乙醇中;3.将容器盖好,密封乙醇中的气体;4.将标本在室温下脱水24小时。
步骤三:浸泡甘油1.从乙醇中取出标本,将其置于一个装有甘油的容器中;2.确保标本完全浸泡在甘油中;3.将容器盖好,密封甘油中的气体;4.将标本在室温下浸泡24小时。
步骤四:制作标本1.从甘油中取出标本,将其置于一个适合的展示容器中;2.调整标本的位置和姿态,使其呈现最佳展示效果;3.盖好容器,确保标本不受环境影响。
注意事项1.在进行标本制作过程中,要采取适当的防护措施,如佩戴手套和口罩,以防止接触化学药品对健康的影响;2.在固定和脱水处理标本时,要确保标本完全浸泡在液体中,以保证标本的完整性;3.在浸泡甘油的过程中,要定期更换甘油,以确保其清洁度。
结论通过本文介绍的生殖器标本制作方法,我们可以制作出清晰、真实的生殖器标本,为生殖器相关的科学研究、医学教育和临床诊断提供有力的支持。
在进行标本制作过程中,我们需要注意适当的防护措施和操作方法,以确保标本质量和个人健康的安全。
希望本文对于有需要制作生殖器标本的人士有所帮助。
注意:本文所述方法仅供参考,请务必在专业人士的指导下进行操作。
固定液主要成分
固定液的种类很多,根据配制成分可分为简单型与混合型。
1. 切片标本以一种化学药品配制的固定液叫做简单固定液。
常用的简单固定液有:酒精(乙醇)、福尔马林(甲醛)和醋酸。
其中,酒精穿透力强,固定时间常在1小时以内,高浓度酒精有使材料收缩的作用。
福尔马林固定液一般不单独作固定,而与其他液体混合使用。
醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液,所用浓度为0.2~5%,也常与其他固定剂配合使用。
醋酸穿透性很强,单独使用,有使原生质膨胀的作用,故常与酒精,甲醛等合用,醋酸为固定染色体的优良固定液,因此固定染色体的固定液中,几乎都含有醋酸。
2. 手术标本固定液成分包括:缓冲剂、醛固定剂。
此外,还有一种特殊类型的固定液叫做卡诺氏液,又名卡诺氏固定液,是1886年由比利时细胞学家让·巴蒂斯特·卡诺伊发明的一种固定液。
它是一种由乙醇和乙酸(也可以加入三氯甲烷,即氯仿)配制而成的非水相固定剂,需现配现用。
卡诺氏液主要适用于一般植物组织和细胞的固定,也可以用于手术切除角化囊肿后的局部治疗。
如需了解更多关于固定液的成分,建议咨询专业化学家或查阅化学书籍。
标本固定总结范文标本固定是现代生物学中极为重要的一项技术,它用于保存生物样本,使其长期保持原有形态和结构,便于后续的研究和分析。
标本固定技术的发展与应用,对于生物学研究、医学诊断和生物资源的保护都起到了重要的作用。
本文就标本固定的原理、方法以及常见应用进行了总结和分析。
首先,标本固定的原理主要是通过化学处理来固定生物标本,防止其腐败和组织结构的破坏。
一般情况下,标本固定的关键步骤包括固定剂的选择和标本固定条件的控制。
常用的固定剂有福尔马林、醋酸、乙醛等,不同的固定剂具有不同的固定效果,要根据需要选择合适的固定剂。
而标本固定的条件包括温度、浸泡时间和固定剂的浓度等,这些条件的控制也对固定效果起到了重要作用。
其次,标本固定的方法主要有两类:湿法固定和干法固定。
湿法固定是将生物标本置于含有固定剂的溶液中进行浸泡,使固定剂渗透到组织内部,实现固定的目的。
湿法固定适用于大部分生物标本的固定,其优点是固定效果好,缺点是标本处理过程繁琐。
而干法固定是将生物标本暴露在空气中,利用干燥使标本固定,适用于一些较小的生物标本。
干法固定的优点是操作简单,缺点是固定时间较长。
标本固定在生物学研究中具有广泛的应用。
首先,标本固定为生物学研究提供了可靠的样本。
通过固定处理,生物标本可以得到保存和保护,便于后续的解剖、显微镜观察和实验分析。
其次,标本固定为医学诊断提供了重要的依据。
固定后的组织标本可以用于病理学检查,帮助医生进行疾病的诊断和治疗。
此外,标本固定还可以应用于生物资源的保护。
通过固定处理,可以保存珍稀濒危动物或者某些生物资源,为其保护和研究提供了基础条件。
综上所述,标本固定是一项重要的技术,通过固定和保存生物样本,为后续的研究和分析提供了便利。
标本固定的原理和方法需要根据实际情况进行选择和控制,以达到最佳的固定效果。
在生物学研究、医学诊断和生物资源保护中,标本固定发挥了重要的作用。
虽然标本固定技术还存在一些不足,但随着科学技术的不断进步,相信标本固定技术在未来会有更加广阔的应用前景标本固定是生物学研究中不可或缺的技术,通过湿法和干法固定可以有效地保护和保存生物标本。
PDCA循环法改良手术室盛放标本固定液容器【摘要】目的:使手术室盛放标本固定液容器能保证医务人员及手术患者安全,符合临床应用需要。
方法:应用PDCA循环法对手术室盛放标本固定液容器不断改进,更新。
结果:改进后的手术室盛放标本固定液容器设计更加人性化,不仅外形美观,价格便宜,透明、耐腐蚀、而且便于清洗,得到所有使用人员的认可,效果满意。
结论:改进后的手术室盛放标本固定液容器能有效减少甲醛对环境、人员的危害、使用方便、减少浪费、节省体力、提高工作效率。
【关键词】PDCA循环法盛放标本固定液容器改良PDCA循环法具有大环带小环,阶梯式上升,科学管理方法的综合应用特点[1];甲醛溶液因渗透力强,固定均匀,组织收缩小、价格较低等特点[2]。
常用于手术室病理组织的固定,但甲醛溶液易挥发,有较强的刺激性,对手术室的环境、人员造成一定的危害,因此如何最大限度的降低其危害,就成为手术室工作人员一直思考的问题,因此我科自2015年开始对手术室盛放标本固定液容器运用PDCA循环法不断改进,取得了良好效果,方法如下:1.改良背景1.1手术常规标本送检使用10%甲醛溶液浸泡固定。
1.2手术室第一代盛放标本固定液容器为传统的塑料桶放在地面上,上面加盖。
使用时,医务人员必须下蹲或弯腰才能用塑料杯舀取甲醛溶液,再倒入标本袋内,取用不方便,浪费时间,取用溶液量不易控制,浪费较多。
1.3在取用溶液过程中,由于桶盖打开,大量甲醛气体挥发,污染空气,医务人员接触、吸入大量甲醛气体,会出现流泪、无法呼吸、嗅觉短暂丧失等刺激症状,危害身体健康。
1.4长期接触甲醛污染的环境,除呼吸系统危害外,还会导致生殖毒性以及突变和致癌作用。
1.5用塑料杯舀取甲醛溶液时,溶液容易外漏,污染医务人员的皮肤(手),污染环境,而且标本固定液使用量不易控制,影响检验结果,存在安全隐患。
2.改良目的2.1医务人员不必用手直接舀取甲醛溶液,避免皮肤接触。
2.2密闭装置,方便取用,按需取液,避免甲醛溶液的浪费和经济支出。
一些固定液及方法介绍前,免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
在此,简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂,以供读者选用。
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3)试剂:多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法:称取40g多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(Phosphate Buffer以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。
另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂:A液:多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液:Na2HPO4•2H2O16.88g蒸馏水300mlC液:NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法:A液最好在500ml的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。
注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后,将B液倒入C液中,混合后再加入A液,以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至1000ml充分混合,4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,最好加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。
该固定剂较温和,适于组织的长期保存。
组织标本于该固定液中,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
3.Bouin's液及改良Bouin's液试剂:饱和苦味酸40%甲醛250ml冰醋酸50ml配制方法:先将饱苦味酸过滤,加入甲醛(有沉淀者禁用),最后加入冰醋酸,混合后存于4℃冰箱中备用。
标本组织固定液的选择和方法病理组织学常用制备技术组织的固定(一)固定的概念应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定(fixation)。
病理标本(样本)离体后,由于微环境的变化将发生自溶和(或)***,使其结构破坏。
固定的目的和机制是:①使蛋白质凝固,终止或减少分解酶的作用,防止自溶,保存组织、细胞的离体前结构状态,包括保存组织或细胞的抗原性,使抗原不失活,不发生弥散。
②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物,维持病变的特异性特征。
③使上述物质转为不溶解状态,防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。
④起助染作用。
固定方法有:①物理学方法,如低温冷冻,干冰(dry ice,即固态无水碳酸)冰冻真空脱水,石蜡渗入法。
②化学方法,采用各种化学溶液作固定液,使组织细胞进入固定状态。
这是国内最常用的方法。
固定应在标本离体后尽快进行,小标本可在取材后直接放入固定液内,大标本应在手术结束前或结束后迅速放入固定液内。
固定液与标本的比例不得少于标本体积得5倍。
有特殊要求者应事先选定相应得固定液,如欲查糖原,应选择无水乙醇作固定液等。
固定得时间应适当,微小标本(如胃粘膜等)2~4h即可,大标本应置放12~24h,但亦不要过久,以免影响抗原性,造成免疫组化操作中得困难。
(二)常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1甲醛(formaldehyde)是无色气体,易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发,且有强烈刺激气味,常用得是37%~40%得甲醛溶液,商品名为福尔马林(formalin)。
用作固定的浓度习惯为10%福尔马林(即1份甲醛溶液加9份水配制而成),实际含甲醛4%。
10%福尔马林渗透力强,固定均匀,对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好,是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织,易产生黑色的沉淀,称福尔马林色素。
2 乙醇无色液体,易溶于水,它除可作为固定剂外,还可作为脱水剂,对组织有硬化作用。
改良贝林(Balling)固定液简介:固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。
固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。
固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Leagene 改良贝林(Balling)固定液又称为改良拉瓦兴固定液,为改良的铬酸-醋酸-福尔马林固定液(又称拉瓦兴固定液,Navaschin 固定液),主要由铬酸、醋酸、甲醛等组成,该固定液多用于一般植物组织的固定,尤其适用于固定植物细胞学、胚胎学样本以及植物根尖、花药、子房等。
该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
组成:操作步骤(仅供参考):1、 临用前,试剂(A):(B)混匀,即为Balling Fluid (改良贝林固定液)。
2、 取适量组织完全浸没于Balling Fluid ,固定时间,大标本应适当延长固定时间。
3、 乙醇洗涤数次。
4、 脱水、透明、封固。
注意事项:1、 Leagene Balling Fluid 有一定刺激性和腐蚀性,请在通风环境下小心操作。
2、 组织取材的厚度不同,固定时间也不同。
3、 固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
4、 温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
5、 取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
有效期: 12个月有效。
编号 名称DF03072×100ml DF03072×500ml Storage试剂(A): Balling A Fluid 100ml 500ml RT 避光 试剂(B): Balling B Fluid 100ml500mlRT 避光使用说明书1份相关:编号名称CC0022 D-Hanks平衡盐溶液(1×,含酚红)CC0130 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液NR0003 Lezol(总RNA提取试剂)TC0699 植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。
病理组织常用固定液的配制(免疫组化)一、常规固定液的配制(1)10%甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml(2 ) 缓冲中性甲醛液浓甲醛10mlPBS缓冲液(Ph7.2)90ml(3 ) 10%中性甲醛液浓甲醛10ml蒸馏水90ml碳酸钙加至饱和(4 ) Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75 ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml该固定液中的冰醋酸,对胶原纤维等组织有膨胀作用,而甲醛对组织有收缩作用,两种试剂的混合使用,用以抵消彼此间的副作用,使组织固定达到优良的固定水平。
(5)醛糖钙固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸钙20g蒸镏水90ml先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水,后加入甲醛。
该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好,组织固定后,做冰冻切片,再给予显示。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。
从免疫组织化学的角度来说,甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测,据多人认为,它对lgA ,lgM,J链,K 链和λ链的标记效果较好,且背景清晰。
但美中不足的是:经它固定的组织,可与蛋白形成醛交联蛋白,这种醛键可封闭抗原。
固此,在免疫组化实际检测中,应根据不同的要求和需要,采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法,以便破坏醛键重新暴露抗原。
(6)Zenker氏固定液:重铬酸钾25g升汞50g蒸馏水1000ml冰醋酸50ml先将重铬酸钾和升汞溶于水中,尢其是重铬酸钾,应用热水或加温的方法将其溶解,然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中,如暴露于空气中,该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深,导致失效。
临用时,取贮存液950ml,加入50ml的冰醋酸,即可使用。
应用该固定液固定的组织,一般不要超过24h,取出组织,流水冲冼12小时以上,然后保存于75%-80%的酒精中,在切片染色前,必须用碘除去汞盐的沉着。
应用该固定液的组织,细胞核及细胞浆染色十分清晰,特别是要显示骨骼肌的横纹时,应用本液可获得满意的结果,但由于其含有醋酸,故不能用于保存细胞颗粒,红细胞及含铁血黄素。
人体解剖用标本收藏装置的制作和应用摘要:为了方便医学生和从事医学相关专业的工作人员对人体解剖组织的研究,我们对传统的人体标本收藏装置进行改良,用更加方便快捷、节约环保的方式做出更加清晰和更容易操作的新型人体解剖用标本收藏装置。
将原有的普通收藏装置增加升降台、水冲器、制冷装置等设施,使医学相关人员对人体解剖标本的研究更加方便,数据更加准确并使人体标本储藏时间更加长久。
该研究装置可以使人体解剖用标本收藏装置提升一个新的高度,既能方便观察和操作,又能保护环境,应予以强烈推广。
关键词:医学;解剖学;标本收藏装置人体解剖学是医学的基础学科,解剖实验教学是医学教学的基础和支撑,使用人体标本进行实验教学是培养医学生必不可少的条件,只有对人体结构充分了解,才能进一步学习其他医学知识[1]。
上世纪70年代末,德国海德堡大学巩尔特-冯哈根斯发明的生物塑化技术,他首先用福尔马林对生物组织进行固定,丙酮脱水,真空负压环境将硅橡胶填充,最后固化处理制成标本,无需保存液保存[2],可长期置于室内自然状态下数十年,甚至更久。
但是,此技术只用于标本观察,并不能着手实验解剖。
现在的标本收藏装置是只能用于医学生及医学相关工作人员对人体各个器官结构进行认识、观察的装置,而不能着手进行解剖和研究,且装置里的保存液-福尔马林保存液中会有多聚甲醛形成,使保存液变浑浊,极大地影响医学生及医学研究人员观察,因此更换保存液的工作也变得频繁,而且即使是5%的福尔马林也具有损伤人体呼吸道,降低人体白细胞等副作用。
因此,我们根据医学生及医学科研人员的调查需求对标本收藏装置进行了改良,改良后人体解剖用标本收藏装置通过增加升降台、水冲器、制冷装置等设施,避免了标本保存液挥发,保证了研究人员的安全而且能使医学生及医学工作人员对人体及人体局部结构既能观察又能进行解剖,极大方便了他们对标本的观察及研究。
1.材料与方法1.1材料1.1.1 亚克力玻璃人体解剖用标本收藏装置对玻璃要求较高,本装置将采用新材料亚克力玻璃俗称特殊处理有机玻璃,具有硬度大、强度高、不吸水、表面光洁、耐碱、防腐、无毒、防火、防蛀、质轻、保温、隔音绝缘、防震等性能[3]。
改良人体解剖标本固定液的应用
【摘要】目的:探究人体解剖标本中比较理想的固定液,为其标本的保存提供借鉴。
方法:标本灌注应用改良人体解剖标本固定液,应用保存液将标本浸润一段时间,经过干燥,比较传统保存方法及改良人体解剖标本固定液保存的效果。
结果:在人体解剖标本处理中应用改良人体解剖标本固定液具有重要的作用,对标本材料体积、自然形态、颜色具有保护作用,且有一定的弹性,有较好的保存效果,另外有较小的刺激性和毒性,安全环保。
结论:改良人体解剖标本固定液对保存人体解剖标本有重要的作用,对改善实验教学环境也具有促进作用,值得开发利用。
【关键词】人体解剖标本;改良;固定液;应用
人体解剖学作为形态科学的一个重要学科,在解剖实验过程中都会应用到解剖标本,人体解剖标本固定液在传统上均应用福尔马林液体,其应用广泛是由于其具有较强的杀菌能力、成本低、防腐作用强、对霉菌生长有抑制作用等优势,然而福尔马林刺激性较强,会危害人体[1]。
在研究中甲醛的危害性得以证实,甲醛会导致很多类型的癌症发生,甚至会造成基因突变和损害。
因此,必须将甲醛的危害性降到最低,开发出效率高、毒性低的固定液具有重要的意义。
尤其是对师生学习和工作环境的改善具有重要的作用,也是保证其健康的关键。
本研究中改良人体解剖标本固定液的配方的主要成分为甘油,在应用实验中得出,其有较好的保存效果,可代替传统的固定液。
现将研究成果报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
准备4种配方的固定液,分别为用A配方、B配方、C配方、D配方来表示,A配方:750mL甲醛、300g硝酸钾、450g醋酸钾、15000mL水、15g麝香草酚。
B配方:1600mL80℃热水、250mL95%乙醇、160g氯化钠、1600mL甘油、少量香精。
C配方:600mL80℃热水、200g氯化钠,1600mL甘油、200mL95%乙醇,香精少量。
D配方:600mL80℃热水、200g氯化钠、4000mL甘油、200mL95%乙醇,香精少量。
1.2 方法
对新鲜标本进行防腐处理,准备没有腐败的尸体,将其毛发剔除,进行清洗,摆好尸体,仰卧姿势,选取腹股沟区,将股动脉切开,在股动脉中插入T形管,并牢固固定。
之后进行灌注,其程序如下。
A配方:一次性将约10000mL固定液通过T形管注入其中,发挥防腐固定作用的为甲醛,杀菌作用的为酒精,而硝酸钾及醋酸钾发挥着保色和防腐,而防霉变作用的发挥通过麝香草酚来实现[2]。
灌注后,将标本材料放入到温度为5℃左右的冷冻箱中,放置10d后将1000mL的50%的乙醇和100mL的氨水注入,然后再10d将1000mL90%乙醇和100mL氨水。
甲醛和氨水可混合,将乌洛托品生成,以此将甲醛的刺激气味减少,同时发挥防腐作用[3]。
B配方:每3d注入一次,注入共3次,每具尸体进行12500mL的灌注总量。
C配方:每3d进行1次注入,共进行3次注入,每具尸体有12000mL灌注总量。
D配方:每5d进行1次注入,共进行2次注入,每具尸体有12000mL。
灌注时根据标本具体情况进行加减灌注量。
标本灌注完成后,用塑料袋将其密封,浸润3-4周,在人体组织中均匀弥散着固定液,之后可进行制作教学标本,并可以用不锈钢支架将标本固定起来,放置到室内,要特别注意不要使其与灰尘接触,标本使用完毕,用布将其盖好[4]。
2 结果
比较传统固定液与改良人体解剖标本固定液的保存效果经对比,后者的保存效果明显较好,方便保存,几乎没有刺激性气味,有较强的防霉变性,对标本的质感、形态及颜色有很好的保持作用,同时弹性较好,另外,有较低的制作成本,与环保的要求一致,污染小,对于实验教学环境的改善具有重要的作用,也保证了师生的健康。
其效果对比如下表1。
表1 传统固定液与改良固定液保存效果对比
传统固定液改良固定液
眼结膜刺激作用较强较小
呼吸道刺激作用较强较小
对人体危害程度重度微小
标本颜色和形态较好较好
标本腐烂及发霉情况无无
弹性较差较好
3 讨论
人体解剖标本是实验室经常应用到的用具,在多年来一直应用福尔马林来保存标本,但是其有很强烈的气味,对人体也有很大的伤害,导致教学环境恶劣,影响教学和学习的积极性,因此,研发出新型的固定液加以保存是必要的。
甘油的亲水性较强,与乙醇和水可以进行混合,会形成较为稳定的溶液,同时甘油吸湿性较强,防止其干燥,保证标本具有柔软性。
甘油还具有吸附作用,将滞留在标本上的药物进行吸附,保证其他防腐剂的效果,以此将防腐效果增强,将防腐能力提升。
另外,甘油会将甲醛的挥发作用降低,以此将刺激性气味降低,实现实验环境的改善[5]。
从本文的研究结果中得知:改良人体解剖标本固定液保存效果明显较好,方便保存,几乎没有刺激性气味,有较强的防霉变性,对标本的质感、形态及颜色有很好的保持作用,同时弹性较好,另外,有较低的制作成本,与环保的要求一致,污染小,因此,对人体有很小的伤害,大大提升了师生在教学中的积极性,同时也能让学生主动去观察标本,是开展实验教学的关键环节。
综上所述,改良人体解剖标本固定液有较好的保存效果,有较小的刺激性,与传统的固定液相比,效果较为理想,可以作为人体解剖标本的新的保存方法,同时也需要在未来的研发中进一步改善,以完善其不足,以此对实验教学环境有改善作用,保证师生的健康,为解剖学的发展奠定基础。
参考文献:
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[2] 何炎,马彬,季建等.人体解剖标本防腐固定方法的新探讨[J].四川解剖学杂志,2014,22(3):59-60.
[3] 钟学仪,李志明.运用动物标本在人体解剖实训中应注意的问题[J].中外健康文摘,2010,07(14):328-329.
[4] 谭刚,吴建清,陈显兵等.人体解剖标本解说大赛在系统解剖学互动式教学中的应用与思考[J].解剖学杂志,2014,37(5):708-710.
[5] 黄俊,郭兴,郭中献等.塑化标本技术在人体解剖标本制作的应用[J].湘南学院学报(医学版),2013,15(3):75-76.。