PolyHigh非脂质体高效转染试剂

PolyHigh 非脂质体高效转染试剂
产品编号： E607401 产品包装： 0.5 mL/1 mL
产品简介
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。

目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们的特点和病毒类似，容易透过细胞膜。

其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。

由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。

本试剂采用专利配方的阳离子聚合物为主要成分，其高度的分支结构确保了高正离子电荷密度，使得与带有负电荷的外源基因结合更有效，容易被细胞吸收，排斥少，因此能显著提高外源基因的转染效率。

根据长时间的实验验证，PolyHigh 转染每微克DNA 用量少，效率高，成功率高，适合多种类型的细胞系，细胞存活率高，可以广泛用于瞬时转染和稳定转染。

试剂组分
组分
E607401
E607401 组分 A ：PolyHigh 非脂质体高效转染试剂 0.5 mL
1 mL
说明书
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储存条件
2-8°C 冷藏保存，有效期为6个月。

-20°C 保存，有效期为2年。

操作步骤
1. 准备细胞（24孔板为例）： a) 转染前18~24小时，接种适量细胞于24孔板中，并将细胞培养板置于37°C ，5% CO 2培养箱培养，转染前细胞密度达到60~90%为理想状态（具体密度视细胞的不同可进行适当调整）。

b)
转染前PBS 洗涤细胞2-3次，并更换新鲜培养液；
2.
准备转染工作液： a)
将0.8~1 µg 质粒DNA 溶于 50 µL 转染稀释液中，轻轻混匀，室温静置5 min ；
b) 将 2 µL 的PolyHigh 溶于50 µL 转染稀释液，轻轻混匀，室温静置5 min ；
c) 将含有PolyHigh 的稀释液加入含有粒DNA 的稀释液中，轻轻混匀，室温静置15 min ；
3. 将上述转染工作液，逐滴滴入对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于37°C ，5% CO 2培养箱中进行培养；
4. 4~8小时后，更换新鲜培养基；
5.
转染24~48小时后，观察或收取细胞。

数据分析
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图1：pEGFP-N1质粒转染HepG2细胞。

转染前一天将HepG2细胞接种于24孔板中，105
个细胞/孔；转染更换新鲜培养基，按PloyHigh (µL)：DNA (µg)= 2：1进行转染；转染4小时后更换培养基，24小时后，奥林巴斯IX73荧光倒置显微镜 (Olympus)下观察。

注意事项
1. 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、DNA 转染量、转染试剂与DNA 比例等，应该在具体实践
中优化来确定最佳转染条件。

2. 细胞：为了取得较高的转染效率，推荐使用在50代以内的细胞进行转染。

3. DNA 的质量：为了取得较高的转染效率，推荐使用高纯度的质粒，OD 260/OD 280≥1.8。

4. PolyHigh 的用量：在体外细胞转染试验中，对于接种细胞密度在60-90%之间的实验样本，可通过预实验在PolyHigh (µL)：
DNA (µg)=2:1~6:1之间选择最佳的比例。

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