YPD培养基配制

毕赤酵母电转化方法及转化子的筛选菌体的准备：1。

挑取酵母单菌落，接种至含有5ml YPD 培养基的50ml 三角瓶中，30℃、250—300r/min 培养过夜；2. 取100-500µl （≤1：100）的培养物接种至含有50ml 新鲜培养基的200mL三角摇瓶中，28~30℃、250—300r/min培养过夜(约20h）,至OD600 达到1.3～1。

5;3。

将细胞培养物于4℃，1500g 离心5min，用50ml 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；4。

按步骤3 离心，用25ml的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬5。

按步骤3 离心,用2—5ml,1M的冰预冷山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；6。

按步骤3 离心，用160µl的冰预冷的1mol的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，其终体积约为240 ul；备注:可将其分装为80 µl 一份的包装-70冷冻起来，2周之内使用，但会影响其转化效率。

比如常见的pPIC9K的载体转GS115一般先用MD平板初筛，然后长出的克隆子可以挑到不同浓度的含G418抗性的YPD平板上筛选高拷贝。

对正确筛选出的单菌落接YPD小瓶摇活后，转大瓶BMGY摇瓶发酵。

一般对于甲醇诱导菌株,摇瓶一天左右后开始补加甲醇,就类似BMMY的功能了。

✓KM71比GS115生长的要慢。

毕赤酵母都应该是白色菌落的✓对于LOX家族蛋白的表达，可尝试在酵母培养基中加入Cu2+ 离子，提高表达量和蛋白活性？菌种保存：挑单克隆到YPD中培养18-24h,然后取菌液以1：1加入30％灭菌甘油，—80o C ul/管冻存（一般用10ug以上质粒用SalI酶切,然后直接加乙醇沉淀，70％乙醇洗一遍，约20ul ddH2O 重溶。

转化效率一般大于100个克隆每ugDNA。

建议你不要用胶回收kit，回收的DNA可能还有盐，导致电击时放电时间很短。

乙醇沉淀主要步骤如下：1)酶切体系（80ul)中2倍体积的无水乙醇加1/10体积的PH5.2 NaAC,混匀2)—20℃20分钟沉淀3）13200rpm,20min，离心后弃上清4)75％乙醇300ul轻轻洗，同上离心5min，弃上清5)37 度烘箱至无乙醇气味(或是用摇床的出风口吹出的暖风吹）。

1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。

若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。

若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。

4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。

5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。

若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。

毕赤酵母表达的培养基配制［5］2.1 LB（Luria－Bertani）培养基：Trypton l％Y east Extract 0.5％NaCl l％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。

121℃高压灭菌20min。

可于室温保存。

用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。

2.2 LLB（Low Salt LB）培养基：Trypton l％Y east Extract 0.5％NaCl 0.5％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。

121℃高压灭菌20min。

可于室温保存数月。

用于培养pPICZαA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。

2.3 YPD （又称YEPD）Y east Extract Peptone Dextrose Medium，（Y east Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基）Trypton 2%dextrose (glucose) 2%+agar 2%+Zeocin 100 μg/ml液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。

加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。

2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Y east Extract Peptone Dextrose Medium）：yeast extract 1%peptone 2%dextrose (glucose) 2%sorbitol （山梨醇）1 M+agar 2%+ Zeocin 100 μg/ml不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。

2.5 MGYMinimal Glycerol Medium （最小甘油培养基）（34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。

培养基的配方：YPD完全培养基：酵母提取物10g/L ，蛋白胨20g/L ，葡萄糖20g/L，（固体培养基1.5%琼脂）；MM：13.4 g/L YNB，4x10-4 g/L 生物素，5 ml/L 甲醇，15 g/L 琼脂MD：13.4g/L酵母基本氮源；0.4mg/L生物素；20g/L葡萄糖操作方法：用无菌牙签挑取his+转化子的单克隆并分别按先后顺序划到MM和MD平板上（不同的克隆需换牙签），30℃培养两天，观察平板。

在MM和MD平板上均能正常生长的菌落表型为Mut+（Methanol utilization plus），在MD 平板上能正常生长但在MM 平板上生长相对缓慢或者不生长的菌落表型为Muts (Methanol utilization slow)。

用点MM、MD平板点方法。

准备几块MM、MD，平板用maker笔划小格子，标号，两种平板点标号要一一对应。

准备无菌牙签，点取G418板上长出点菌落，先轻轻点MM平板（小格内），再点到MD平板相同标号点小格内。

如此点约100个转化子，30℃培养2-5天，观察比较MM、MD上相同标号点菌落，MD平板上生长快，MM平板上生长缓慢或不生长点为Muts，生长速度一样点为Mut+。

原理是Mut+能够快速利用甲醇为碳源，而Muts则不能利用甲醇为碳源。

所以Mut+能够在含甲醇（MM)平板也快速生长，而Muts只能在含葡萄糖（MD)平板快速生长。

MD培养基是怎么筛选酵母的?细菌在这种培养基上是不是不生长?MD （Minimal Dextrose Medium，最小葡萄糖培养基）组成如下：（YNB 13.4g/l、葡萄糖20g/l、生物素4×10-4g/l、若制平板加琼脂粉15g/l），它属于组氨酸缺陷型培养基，细菌能生长，配制完后仍需高压蒸气灭菌处理。

用于表达的毕赤酵母都属于组氨酸缺陷型的，只有染色体上成功整合入重组质粒载体基因的毕赤酵母菌株才能在组氨酸缺失的MD培养基生长，以此筛选出重组子。

常用微生物培养基分离真菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40°C左右），同时加入氯霉素和链霉至终浓度为0.5 mg/mL（提前配置好，用0.22 µm微孔滤膜过滤，-20℃存储），混匀后倒平板，用于抑制细菌生长。

1.GPY培养基：葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，酵母提取物10 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.5，115℃，30 min灭菌2.PDA培养基：Potato Dextrose Agar干粉39 g/L，海盐15 g，蒸馏水1 L，pH 6.5-7.0，121℃，15 min灭菌3.马丁培养基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1 g，七水合硫酸镁0.5 g，孟加拉红0.03 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，115℃、30 min灭菌4.MEA培养基：麦芽浸粉17g，蛋白胨3g，海盐15g，蒸馏水1L，121℃，20 min 灭菌5.YPD培养基：酵母提取物10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，琼脂20 g/L，115℃，30 min灭菌6.沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA，每升培养基）：蛋白胨（peptone）10.0 g，葡萄糖（glucose）40.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 4.0 - 6.0；7.酵母汁麦芽提取物琼脂培养基（YM，每升培养基）：麦芽浸粉（malt extract）3.0 g，酪蛋白胨（casein peptone）5.0 g，酵母提取物（yeast extract）3.0 g，葡萄糖（glucose）10.0 g，琼脂（agar）15 g，pH 6.0 - 6.5；8.察氏培养基（CDA，每升培养基）：硝酸钠（NaNO3）3. 0 g，氯化钾（KCl）0.5 g，蔗糖（sucrose）30. 0 g，七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5 g，七水合硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）0. 01 g，磷酸氢二钾（K2HPO4）1.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 6.0 - 6.5；分离放线菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40℃左右），同时加入制霉菌素（终浓度为100.0 μg/ml）和萘啶酮酸（终浓度为25.0 μg/ml）（提前配置好，用0.22µm 微孔滤膜过滤，于-20℃冻存），混匀后倒平板，分别用于抑制真菌和细菌生长。

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法、常用培养基1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用INNaOH （〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

2 、SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。

3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4 、TB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60 C , 再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

5、2X Y培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用INNaOH (〜1ml )调整pH 至7.0，再补足水至1L 。

注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。

6、YPD 培 养基将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（～1ml)调整pH至7。

0,再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L，上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L.2、SOB培养基将下列组分溶解在0。

9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0。

5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4、TB培养基将下列组分溶解在0。

9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0。

72mol/LK2HPO4的溶液(2。

31g的KH2PO4和12。

54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml.高压灭菌或用0。

22um的滤膜过滤除菌）.5、2×YT培养基将下列组分溶解在0。

9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（~1ml）调整pH至7.0,再补足水至1L。

注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

6、YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后,高压灭菌.建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1。

6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

二、常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。

用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。

加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。

PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。

MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。

由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。

当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。

以此分离乳酸菌。

乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。

这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。

除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。

目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。

常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等基时加入）。

pH值用5mol/L NaOH溶液调至7.2-7.4（用精密pH试纸测定）。

配置完后在高压锅内高压灭菌21min。

二、YPD培养基配制（酵母菌培养基）1）溶解酵母膏/酵母粉（yeast extract）10g/L、蛋白胨（peptone）20g/L于单/双去离子水中，如制平板加入20g/L琼脂粉(配制固体培养基)；2）高压灭菌 121°C 20min；3 加入20g/L葡萄糖(dextrose或glucose，葡糖糖溶液灭菌后加入、防止与蛋白胨反应)；注：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。

1、活化培养基YPD培养基：10g/L 酵母提取物（yeast extract），20g/L Peptone，20 g/L 甘油。

2、种子培养基BMGY培养基：1％YE，2％peptone，1.34％YNB，4×10-5％生物素，1％甘油，100mM pH6.0磷酸bufferPeptone 20g酵母提取物10g甘油10g溶于700ml双蒸水中，高压灭菌121℃，20min.待冷至室温后，依次加入：1M磷酸钾缓冲液（pH6.0）100ml10X YNB 100ml500X生物素（biotin）2ml混合均匀后使用或者4℃保存。

3、摇瓶诱导培养基BMMY培养基：1％YE，2％peptone，1.34％YNB，4×10-5％生物素，1%甲醇，100mM pH6.0磷酸bufferPeptone 20g酵母提取物10g溶于700ml双蒸水中，高压灭菌121℃，20min.待冷至室温后，依次加入：1M磷酸钾缓冲液（pH6.0）100ml10X YNB 100ml500X生物素（biotin）2ml10%甲醇100ml混合均匀后使用或者4℃保存。

4、1M磷酸钾缓冲液（pH6.0）：1M磷酸氢二钾132ml1M磷酸二氢钾868ml溶于双蒸水中，用KOH或者磷酸调节pH为6.0，定容至1000ml，高压灭菌121.0℃，20min.,于4℃保存。

5、10X YNB：YNB 13.4g溶于1000ml双蒸水中，用0.2微米的滤膜过滤除菌。

6、500X 生物素：生物素0.2g溶于1000ml双蒸水中，用0.2微米的滤膜过滤除菌。

6、PTM1：(我有配好的)CuSO4·5H2O 6.0g，KI 0.8g，MnSO4· H2O 3.0g，Na2MoO4·2H2O 0.2g，H3BO3 0.2g，CaSO4·2H2O 0.5g，ZnCl2 20g，FeSO4· 7H2O 65g，生物素0.2g，浓H2SO4 5ml用去离子水定容至1L。

欢迎阅读酵母菌的培养技术一.酵母菌的培养基的配方1.麦芽汁培养基的配制培养基成分:新鲜麦芽汁一般为10-15波林。

配制方法:(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h ，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日(2)(检查方法是取(3)，调匀(4)(5)(6)(7)2.培养基成分:马铃薯20g 葡萄糖2g 琼脂1.5-2g 水100ml 自然pH配制方法:(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g ，切成小块，加水1000m1。

80℃浸泡lh 用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。

100Pa 灭菌20min 。

即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。

（2)配制时，按每100m1马铃薯浸汁加入2g 葡萄糖，加热煮沸后加入2g 琼脂，继续加热融化并补足失水。

(3)分装、加塞、包扎。

(4)高压蒸汽灭菌100Pa 灭菌20min 。

3.豆芽汁葡萄糖培养基的配制培养基成分:黄豆芽10g 葡萄糖5g 琼脂1.5～2g 水100ml 自然pH配制方法:（1）称新鲜黄豆芽10g ，置于烧杯中，再加入100ml 水，小火煮沸30min ，用纱布过（2足失水。

（3（44.蔡氏（O0.05g FeSO 4配制方法:3、K 2HPO 4、KCl 、溶液。

（2（3（4（5）高压蒸汽灭菌100Pa 灭菌20min 。

5.YPD 培养基的配制YPD 或YPED ，：YeastExtractPeptoneDextroseMedium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD ）琼脂培养基用于酵母菌的培养配方：1%YeastExtract （酵母膏）2%Peptone （蛋白胨）2%Dextrose(glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：（1）溶解10gYeastExtract（酵母膏）,20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉(2)高压121度20min(3)加入100ml10×Dextrose(glucose)（葡萄糖）,葡糖糖溶液灭菌后加入注：葡萄糖，yeastextract,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分YPEG二.营养：酸度：水分温度：20～30℃。

点板实验方案●实验准备YPD培养基、YPD固体培养基、灭菌水、5ml EP管、50ml离心管、平板●实验步骤1)菌种活化将待实验的菌株从-80℃拿出，取10-15μL菌液接种至含1.5mL YPD培养基的5ml离心管中。

30℃摇床培养24h左右，至有明显浑浊现象；将菌种转接到小黑瓶或50mL离心管中，每管5ml YPD培养基+50μL菌液（如有需要，可以进行保菌）。

30℃摇床培养12h左右，至有明显浑浊现象。

可再转接活化，视情况而定。

2)平板制备3)调菌体浓度测每个菌种的OD620，将菌种密度调一致。

以1mL最低浓度X1作为标准，其余样采用灭菌的ddH20来稀释至1mL同一菌体密度。

4)梯度稀释采用梯度稀释5倍或10倍的方式，将X1作为第一梯度浓度，混匀后依次稀释5次，（200μL X n+800μL ddH20=X n+1，先全部把无菌水加好）。

5)点板每个样采用2μL的量进行点板，从低浓度向高浓度点样，同一系列无需换枪头。

待液体风干后，盖平板，倒置后放于30℃或40℃培养。

505152535455505152535455 BY x x x x x x BY x x x x x x BY-HO-GFP x x x x x x BY-HO x x x x x x BG2○1x x x x x x BY-HO-GFP x x x x x xBG2○2x x x x x x BY2○1x x x x x xBGp○1x x x x x x BY2○2x x x x x xBGp○2x x x x x x BYp○1x x x x x x●实验注意事项✓一次活化用5mL的EP管，实验前的最后一次活化采用小黑瓶（小白瓶），实验前根据菌株生长情况总共活化2-3次✓菌体活化到OD=1.0左右即可开始实验✓当添加物易挥发时，倒平板及晾干平板的过程中关掉超净台的风，在点板时也最好把风关掉✓按照从低浓度到高浓度的顺序进行点板，中途可以不更换枪头✓记得实验要设置平行组，实验前必须确认好所采用的对照菌是什么以及有几个对照。

常用培养基LB培养基配方Typtone 1%Yeast extract 0.5%NaCl 1%Amp选择培养基加量：50µg/mL Amp。

YPD培养基配方Typtone 2%Yeast extract 1%D-glucose 2%半乳糖培养基Typtone 2%Yeast extract 1%D-galactose 2%抗性培养基抗生素加量：G418：350 μg/ml；Zeocin：150 μg/ml 5-FOA培养基的配置（100mL）①50mL 5-FOA-YNB培养基（过滤除菌）50mL5-FOA 125mgUra 5mgYNB 170mg硫酸铵0.5g脯氨酸100mg葡萄糖2gH2O 50mL②50mL琼脂溶液（高压灭菌）称取2.0g琼脂粉，加入50mL水，高压灭菌。

常用实验方法酵母电转化方法：（1）酵母于YPD平板上活化后，接种3mL YPD液体培养基，30℃200r/min培养8h左右。

（2）取0.1mL种子液转接至30mL新鲜的YPD液体培养基，30℃100r/min继续培养10h 左右，至菌液OD600在1.2~1.5之间。

（3）6000r/min 4℃离心5min收集菌体，用20mL无菌水离心洗涤菌体1次。

（4）用15~20mLDTT溶液重悬菌体，30℃水浴放置60min，6000r/min 4℃离心5min收集菌体。

（5）用20mL 4℃预冷的1M山梨醇溶液重悬菌体，6000r/min 4℃离心5min洗涤菌体。

（6）重复步骤（5）三次，共四次。

（7）用1mL 1M山梨醇重悬菌体，转移至1.5mL离心管，离心后收集菌体，加入与菌体近似等体积的1M山梨醇重悬菌体。

（8）每个转化取80μL菌液，加入10μL转化片段或质粒，20μL鲑鱼精DNA，混匀后转入电击杯，冰上放置5min后，1.5kv电击。

（9）加入0.9mL含山梨醇的YPD培养基将电转液洗出，30℃100r/min复苏2h。

北京雷根生物技术有限公司
YPD/YEP 培养基
简介：
YPD 培养基又称YEPD 培养基，可用于多种细菌培养，主要用于酵母常规生长的复合培养基。

Leagene YPD 培养基主要由胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖等组成，其浓度比常规LB 培养基高，不含琼脂，经高压灭菌处理。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 加入合适的抗菌素和菌种进行培养。

2、 如需制备平板，加入琼脂后，高压灭菌，待冷却后，加入并加入合适的抗菌素。

注意事项：
1、 注意无菌操作，尽量避免污染。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

相关：
编号 名称 CM0036 Storage YPD/YEPD 培养基 500ml 4℃
使用说明书 1份 编号 名称 CA0005 氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml) CM0002 LB Lennox 培养基 DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 NE0011 CTAB 抽提液 NR0003
Lezol(总RNA 提取试剂) PE0018
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

6、YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

二、常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

培养基LB液体培养基：胰化蛋白胨：1％，酵母抽提物：0.5％，NaCl：1％，pH 7.5LB固体培养基：在LB液体培养基中加入1.5％的琼脂粉YPD液体培养基：酵母抽提物：1％，蛋白胨：2％，葡萄糖：2％，pH自然YPD固体培养基：在YPD液体培养基中加入1.5％的琼脂粉完全极限省却成分培养基（CM）：YNB：0.67％，葡萄糖：2％，其中含（mg/L）：苏氨酸150 酪氨酸30 缬氨酸150赖氨酸30 谷氨酸100 丝氨酸150天冬氨酸100 甲硫氨酸20 苯丙氨酸50异亮氨酸30 精氨酸20其它营养成分（mg/L）：腺嘌呤50 尿嘧啶50 组氨酸100亮氨酸100 色氨酸100省却特定的氨基酸成分，液体培养基pH 5.6，固体培养基加1.5％的琼脂粉，pH 6.510×YNB（13.4%酵母氮源，含硫酸铵不含氨基酸）：溶解13.4gYNB于100mL水中，过滤除菌，加热至YNB完全溶解，存于4℃。

500×B（0.02%生物素）：溶解20mg生物素于100mL 水中，过滤除菌，放于4℃。

100×AA（0.5%各种氨基酸）：溶解各50mg L-谷氨酸，L-蛋氨酸，L-赖氨酸，L-亮氨酸，L-异亮氨酸于100mL 水中，过滤除菌，存于4℃。

10×D（20%葡萄糖）：溶解200g D-葡萄糖于1 000mL水中，高压灭菌15min。

500×生物素(0.02%)：溶解20mg生物素于100mL水中，过滤除菌，放于4℃，可放1年。

100×H（0.4%组氨酸）：溶解400mg L-组氨酸于100mL水中，低于50 度加热以促溶解，过滤除菌，可放1年。

10×D（20%葡萄糖）：溶解200g D-葡萄糖于1 000mL水中，高压灭菌15min或过滤除菌，可放1年。

10×M（5%甲醇）：混合5mL甲醇与95mL水，过滤除菌存于4℃，可放2个月。