解读《全国艾滋病检测技术规范(修订版)》PPT

质控图的构成 一中心横线及其上、下各一或 两条平行的控制线，并有按时间顺序填入的各 质控血清测定的数值。
建立质控图参数




算术平均值（X） 代表一组S/CO值的平均值，为了统计学上有显著意义，应该采用至 少20次（天）所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。 标准差（S） 是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对照值的S/CO值 均值有关的预期范围。 变异系数（CV） 是反映各次S/CO值相对于均值的离散程度的一个指标，可以用于衡 量被检标本检测的重复性或精密度。 控制限 由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。
提示存在质量隐患，应引起重视的情况：

运输包装、内盒或试剂盒的物理损伤； 在单包装内存在混杂物质； 标签出现错误、缺失或字迹模糊（产品名称或出产厂家 名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）； 缺失目录； 泄露或污染； 不适宜的存放条件； 保护包装纸破损或污染； 未达到质量控制标准（阳性/阴性控制结果以及质控条 带出现与否等标志）。 建议 每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测 量大于50份样品，至少应做2次质控。
抗凝血的采集
用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取 静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇， 分离血浆和血细胞备用。 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/ CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸 櫞酸钠；HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选 用K3EDTA或枸櫞酸钠。 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在 4~8h内分离PBMC和血浆，否则应在24~48h内 分离血浆和血细胞。
职业暴露药物预防及方案

根据暴露的类型及暴露源的状况，确定是 否需要进行药物预防，及采取何种暴露后 预防（PEP）方案。



如果不清楚暴露源的HIV感染状况，不论少量还 是大量暴露，一般不需要PEP；如果源病例有 HIV感染的危险因素，可考虑使用基本PEP方案。 如果不清楚暴露物的来源，一般不需要PEP； 如果源病例有HIV感染的危险因素，可考虑使用 基本PEP方案。 如果可以肯定暴露源为HIV阴性，不论少量还是 大量暴露，都不需要PEP。
建立质量控制图
关键是对控制限的选择。
— 在常规条件下，对同一批血清连续测定20次或20次以上，获得一组数据， 求均数和标准差，20个数据中超出2S或3S的数据不应删除。
— 将均值和标准差分别在质控框架图中标示出来。每个质控对照的OD值 /Cut-off比值（S/CO，S为样品A值，CO为Cut-off值）作纵座标（Y轴）， 每一次（天）实验作横座标（X轴）建立质控图 —从第21次起，每次检测的质控血清的结果依次点入该质控框架图中，检 验进入质控状态。

质量控制图建立和分析的注意要点




发现全部对照值剧烈位移，立即报告室主管，分析原 因是试剂盒质量问题，立刻通知厂家。 外部和内部阴性对照质控血清出现高值倾向，应该注 意试剂，技术或设备出现问题（如洗板机等）。 实验室配制新批次的外部对照质控或变动外部对照质 控的值时，必须重新计算均值和标准差，建立新的质 控图。 操作者在测定质控血清时，发现质控血清数据违背了 控制规则，应填写失控报告单，上交室负责人，由室 负责人决定是否发出检验报告。
质控血清

外部对照质控血清的来源和制备 —通过向有关机构购买获得 —通过实验室制备获得 混合HIV抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟 离心15分钟，用0.2um生物滤膜过滤除菌后再进行 56℃30分钟加热灭活处理.弱阳性对照可以通过使用 HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体强阳性 血清并经标定后得到.弱阳性对照的OD值以该试剂盒 临界值Cut-off的2~3倍为宜。
外部对照质控血清的保存 一次制备量应该足够本实验室使用一年； 均一、无菌； 标定后等量分装，每份应足够一周实验使用； 分类作好标记，使用不同颜色的标签； 存放在—70℃ ，如无条件则存在非自动除霜的— 20℃冰箱； 一旦融解以后应该存放在2-8 ℃，一周后必须弃 去，不能重新冻存。
建立质控图

质控图 把检验性能数据与计算出的“控制 线”进行比较的图。
质量控制图建立和分析的注意要点

如果改用新批号试剂盒，必须重新制定质控框架图，并建议对新旧 两批试剂盒进行平行性试验，平行性试验包括外部对照质控血清和 前一批试剂盒中的内部对照质控血清。这种平行性试验有利于质量 控制和分析。 要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图。对同一 批质控物连续测定得到20个数据，求均值和标准差，超出2S或3S的 数据不应删除。 由专人负责建立质控图，每月定期召开质量控制会，讨论本月检测 的质量控制情况，检验人员在每次检验之前，了解一个质控图的结 果，做到心中有数。


质量控制图建立和分析的注意要点

建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒。由于 不同厂家生产的ELISA试剂盒所使用的HIV抗原的构 成以及使用比例不同，因此对同一标本的反应会有 差异，表现在A值相差较大，对外部对照质控血清结 果的分析造成困难。 使用新批号或使用不同厂家的试剂盒都必须在质控 图上注明使用日期。原则上，更换不同厂家生产的 试剂盒后，结果偏离程度较大时，必须重新计算均 值和标准差并建立新的质控图。
解读《全国艾滋病检测技术 规范（2009年修订版）》
齐齐哈尔市疾病预防控制中心 2011.7.20
样品的采集


根据检测项目的具体要求，确定采集样品的 种类、处理、保存及运输的时限和方法，按 照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物 安全要求。 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定 量静脉血，室温下自然放置1-2h待血液凝固， 血块收缩后经3000r/min离心15min，吸出血 清备用。
筛查试验呈阳性反应样品的转送
如需送上级实验室进行复检，需要核对身 份，必须补充个人信息（姓名和身份
证号码）并同时填写 HIV抗体筛报 告和 复检单 送当地艾滋病筛查中心实
验室，或直接送确证实验室复检。（必要 时采集第二份血样）
HIV抗体检测


目的 ： 监测、诊断、及血液筛查的HIV抗体检测 要点： 筛查试验阳性不能出阳性报告； 严格遵守实验室标准操作程序； 严格按照试剂盒说明书操作； 注意防止样品间交叉污染。 HIV抗体筛查试验的方法 ELISA 快速检测（RT）：明胶颗粒凝集试验（PA）； 斑点EIA或斑点ELISA（dot-EIA）； 斑点免疫胶体金（胶体硒）快速试验； 艾滋病唾液检测卡；其他。
生物危害

人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物， 第一类、第 二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。 应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL—2）要求的艾滋病检测 实验室中进行：
HIV抗体检测（筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测；

HIV核酸提取和检测； HIV阳性样品的保存，包括全血、血清、血浆和其他组织 （液）、核酸提取物。

应在符合Ⅲ级生物安全实验室（BSL—3）要求的艾滋病检测 实验室中进行： HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其他 需要应用活病毒的研究工作； HIV病毒株的保存。


职业暴露原则 及时处理原则，报告原则，保密原则， 知情同意原则 局部急救处理 对暴露感染的危险进行评估：
对暴露的评估（轻度暴露、重度暴露）； 对暴露源的评估（HIV阳性1类、HIV阳性2类）


检测方法和试剂选择 应使用经国家食品药品监督管理局注册批准的 试剂。总的原则是敏感性高，特异性好。 各实验室更换试剂批号时，应进行平行试验， 即新批号试剂在测定质控品（已知结果）时能 够获得与原试剂相同的结果。所有试剂盒须严 格按要求条件保存。试剂盒拆封时，要记录拆 封时间，所有试剂严格控制在有效期内使用。
检测信息的上报

各级艾滋病检测实验室所在结构每月应填 写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》 并于每月10日前完成网络直报。未开展网 络直报的单位，由县级疾病预防控制结构 收集信息后统一上报。
质量控制


质量控制具体内容：指将质控品和检测标本一 起实验操作，从质控值了解分析实验过程的质 量情况。为了便于观测和概括，又使用了一些 统计学方法进行归纳和分析。 质量控制贯穿实验的整个过程 实验前的准备 实验中的操作 实验后数据的整理
质控图的判定分析
质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出 分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系 统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误 差检出，并具有低的假失控概率。要求：


出现一次2S范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是 否可以继续检测需要进一步观察。 出现下列情况时，应暂停检测查找原因： 出现一次3S范围的变化。 连续两次出现同一方向2S范围的变化。 连续四次出现同一方向的1S范围的变化。 连续10次结果都在1S范围内，但落在均值线的同一侧。
样品保存



用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下， 短期（1周）内进行检测的样品可存放于2－8℃。 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃ 以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置 于-80℃。 用于CD4+/ CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存， 样品采集时间超过48h则不可检测。 艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证 实验室，筛查阴性样品可根据具体需要决定保存时间，建 议至少保存1~2个月。特殊用途或专项项目的样品根据具 体要求确定保存时间。 艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结 果任何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专 项项目的样品根据具体要求确定保存时间。