苏州大学基因工程（02级生物技术专业）试题（A卷）
（2005.12）
姓名学号得分
一名词解释（4分/题，共20分）
1．重叠基因
不同基因的核苷酸序列有时为相邻两个基因共用，将核苷酸彼此重叠的两个基因称为重叠基因
2．.锌指结构
由两个半胱氨酸（Cys）残基和两个组氨酸（His）残基通过位于中心的锌离子结合成一个稳定的指状结构, 并以锌辅基敖合形成的环状结构作为活性单位, 在指状突出区表面暴露的碱基及其极性氨基酸与DNA结合有关
3．.ScFv
它是由抗体重，轻链的可变区基因(V
H 、V
L
)之间通过一段编码连接肽基因，拼接
后表达形成的重组蛋白。是一种具有抗原结合能力的最小抗体片段，可在一些不需Fc段效应功能的实际应用中开展研究和应用。其优点是分子量小，易于穿透组织到达靶器官发挥功效，易于构建和生产，但易于被清除。
4．.基因置换
是指将致病基因整个地被有功能的正常基因所置换，使致病基因永久地得到更正。
5．基因敲除
基因敲除是向正常生物个体内引入某个突变的基因位点而选择性地使某特定基因功能失活的技术。
二填空题（3分/题，共15分）
1. 细菌的移动基因存在着三种类型的转位因子包括插入序列、转位子、噬菌体Mu和D108。
2. Klenow酶在有dNTP 情况下，呈现DNA聚合酶活性，在没有dNTP
情况下呈现外切酶活性。
3. 外源基因在原核细胞中表达，常用的启动子有乳糖启动子、Trp启动
子、Tac启动子、噬菌体的P
L 和P
R
启动子、脂蛋白启动子。
4. 在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为阴性克隆。
5. 基因序列经碱基替代，缺失或插入后，可使遗传信息产生三种不同的后果，
分别为同义突变、错义突变、无义突变。
三是非判断题（2分/题，共10分）
1.DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。（×）
2.质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（×）
3．COS位点，COS质粒，COS细胞它们均含有用于自身环化的12个碱基的互补粘性末端。（×）
4.入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。（√）
5.原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。（×）
四．不定项选择题（3分/题，共15分）
1. 下列生物体的细胞基因组哪些会有断裂基因（AB ）
A.动物
B.人
C.细菌
D.噬菌体
2. 真核细胞基因表达的特点为（AD ）
A.单顺反子
B.多顺反子
C.转录和转译连续进行 D .转录和转译分开分步进行
3. 识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（ B ）
A.同工酶
B.同尾酶
C.同裂酶
D.同位酶
4. pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（ABD ）
A.AmP r和Tet r
B.ori复制子
cZ标记
D.多克隆位点
5. λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（ D ）
A.小于λ噬菌体DNA的50%
B. 小于噬菌体DNA的75%
C.大于λ噬菌体DNA的105%
D.为λ噬菌体DNA的75%～105%五问答题（8分/题，共40分）
1真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为
什么？不能，为什么？
不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生物必须有相应的原核RNA聚合酶可识别原核细胞的启动子, 以催化
RNA的合成。
基因表达是以操纵子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。因此在构建原核表达载体时必须有1个强的原核启动子及其两侧的调控序列。
2质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？
目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如EcoRI）消化酶切后, 两者的两端均具有相同的粘性末端, 称为单酶切点的粘性末端, 又称全同源性粘性末端
⑴高背景
载体经单一限制性核酸内切酶切割后, 载体分子易于自我环化, 既不利于目的基因的重组连接, 大大降低阳性克隆效率, 又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5’-P以抑制DNA的自我环化。在连接反应中, 具有5’-P，的目的基因DNA片断可有效地与去磷酸化质粒DNA载体通过粘性末端发生互补连接, 尽管产生的重组DNA分子于连接点含有两个缺口的开环分子,尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环, 但转化大肠杆菌后,在菌体内其缺口可获得修复。如第二章图2-6
⑵双向插入
经单一限制核酸内切酶（如EcoRI）切割的目的基因和载体, 因二者的粘性末端是相同的, 因此在连接反应中, 目的基因可发生双向插入, 载体对目的基因表达是有方向的, 而目的基因可双向与之相连, 这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响, 若以表达为目的, 我们就要对插入的片段进行方向鉴定, 因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的, 一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的mRNA。若构建表达DNA 重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组, 以便定向克隆。
3真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？
顺式作用元件为一些能与DBP结合的特定序列的DNA片段, 决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应,按功能可分为启动子、增强子、沉默子、衰减子和终止子等DNA序列片段。
⑴启动子
真核基因启动子是基因表达时与基因转录起始有关的5'端DNA序列,包括在-30bp区富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA box）和在-70～-80bp区域（在TATA box上游）启动元件。前者是引导RNA聚合酶Ⅱ在正确起始位点转录mRNA
