菠萝蛋白酶分离方法(精)

菠萝蛋白酶的提取方法：（1）沉淀法沉淀法是粗提酶蛋白的方法之一，主要用于前期酶的初步分离和浓缩，常用的方法有盐析法，有机溶剂沉淀法，聚乙二醇沉淀法，等电点沉淀法等。

用新型吸附洗涤沉淀法和单宁沉淀法也可以提取菠萝蛋白酶，操作简单，产率也较高，但酶的产量与单宁的用量密切相关，而且所含单宁有毒，导致这种方法逐渐被淘汰了。

以酒精为沉淀剂提取菠萝蛋白酶时，酒精的加入量会对菠萝蛋白酶产生较大的影响，酒精的浓度太低时，不能使菠萝蛋白酶沉淀下来，浓度太高容易使酶变性失活。

酒精的浓度为80%时，酶的收率最高。

从茶叶中提取的多酚类物质茶多酚也可用于菠萝蛋白酶的分离，用0.5%的茶多酚提取物对菠萝汁中菠萝蛋白酶进行沉淀最多可达78%，其最大沉淀率明显比单宁法高。

（2）离子交换色谱法离子交换色谱层析法是蛋白质研究领域内比较高效的纯化技术，目前国外用于分离菠萝蛋白酶常用的离子交换剂有Sephacryl S-200柱、Mono S阳离子交换剂、S-Sepharose、弱酸性阳离子交换树脂、CM-纤维素阳离子交换柱、Q阴离子交换柱。

国内常用的有羧甲基纤维素（CMC）、二乙胺乙基纤维素（DEAE），酶的纯化过程通常是将若干色谱纯化技术联合使用来实现的。

Ota最早用SephadexG-75结合CM-SephadexC-25柱层析分离得到5种茎酶的组分。

用DEAE-52离子交换柱层析结合Sephadex G-75分子筛柱层析色谱法纯化果酶，能获得比活力为12.5U/mg的单一电泳纯酶制剂。

（3）固定化金属离子亲和色谱法固定化金属离子亲和色谱法是以普通凝胶作为载体，连接上合适的螯合配体和足够暴露的金属离子，制成亲和吸附剂，进行分离纯化蛋白质的方法。

此法介于高特异性的生物亲和分离法和低特异性的离子交换色谱法之间，对组氨酸基团有特异性。

Huali Nie 等（2008）首次应用固定化金属亲和膜（IMAM）—肽-尼龙膜，这是一种将七肽共价固定到复合膜上作为配体的新型尼龙膜，用其从菠萝中分离和提纯菠萝蛋白酶，可使菠萝蛋白酶纯化15.4 倍，回收率达94.6%，而且不会造成任何变性。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种有机物，也称为溶菌酶或蛋白水解酶。

它的特点是可以分解蛋白质，具有较强的酸性和碱性环境适应能力，因此，广泛应用于医疗、食品、化妆品等领域中。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一项艰巨的任务。

以下是一些步骤：第一步是采集新鲜的菠萝果肉。

必须选用成熟度好的金丝菠萝果肉。

应选择外皮金黄色、果肉红黄相间的菠萝果肉。

第二步是制备浸出液。

将新鲜的菠萝果肉去皮、去核，切成小块，加入适量的水，搅拌并煮沸，经过静置、过滤，即可得到浸出液。

第三步是提取菠萝蛋白酶。

将制备好的浸出液冷藏，待其沉淀，将上层的冰冷水慢慢倒出，留下沉淀。

然后，在沉淀中加入适量的酸性酶解剂，轻轻摇晃，放置几小时。

第四步是酶活测定。

将提取的菠萝蛋白酶放在适宜的酶活测定条件下，如适宜的温度和酸碱度等，测定其活性或浓度。

以上是从菠萝中提取菠萝蛋白酶的一些步骤。

菠萝蛋白酶的应用范围广泛，可用于肉制品、啤酒、乳制品、水产品等食品中。

同时，它还能被用于医疗和化妆品领域，例如用于抗肿瘤、消炎、增加皮肤弹性等。

因此，菠萝蛋白酶的提取十分重要，细节决定了酶的纯度和活性，也影响到菠萝蛋白酶在不同领域中的应用。

菠萝蛋白酶浓缩分离设备技术工艺2020年8月26日菠萝蛋白酶广泛存在于菠萝的果实、芽、叶、茎中，从菠萝的果实中提取的成为果菠萝蛋白酶，从菠萝的茎中提取的成为茎菠萝蛋白酶。

菠萝蛋白酶的分子量为33kDa，是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质、肽、酯、酰胺。

它水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高10倍以上，因此有着广泛的用途。

它作为食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清，还可用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。

提取菠萝蛋白酶的传统工艺有3种：有机溶剂沉淀法、单宁沉淀法和高岭土吸附法。

这三种方法虽然生产工艺简单、投资少，但是工艺周期长，菠萝汁容易变质。

而且，单宁和有机溶剂会使酶变性，产品活性不高;高岭土吸附法的生产工艺和操作都很复杂，原材料消耗量大，酶的活性和总收率较低，且高岭土的产地对吸附法有着很大的影响。

超滤法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括以下几步：压榨：将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05%的苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。

可采用压滤法或离心法去除杂质;超滤浓缩分离：将澄清汁液在超滤设备中浓缩分离，使体积浓缩至原体积的1/5;沉淀：将浓缩液降温至0-4℃，边搅拌边加入-20℃95%的乙醇，直至混合液中的乙醇浓度为50%，静置使酶沉淀，移出上清液，即得湿酶;干燥：将湿酶在0℃下减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。

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从菠萝中提取菠萝蛋白酶的实训任务一从菠萝汁中提取菠萝蛋白酶【提取工艺】1、选取70%-80%成熟度菠萝的果皮，榨汁，用四层纱布过滤得鲜果皮汁。

2、称取1kg制备好的鲜菠萝果皮汁，加5%苯甲酸钠溶液10ml，搅拌均匀。

3、4000r/min离心7min，取上清液倒入干净的烧杯中。

4、在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液，边加边搅拌约15min，可见沉淀析出。

静置40min。

5、除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4000r/min离心5min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。

6、把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中，加0.1%EDTA溶液100ml搅匀，再把1.5%氯化钠溶液200ml倒入烧杯中搅匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。

7、将洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%乙酸锌溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；加0.06%抗坏血酸溶液30ml，搅拌均匀，静置5min；加1.5%氯化钠溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；最后加0.5%EDTA溶液20ml，静置5min后，以4000r/min 离心7min，把上清液倒掉，得到洗涤剂II酶复合沉淀物。

8、把洗涤剂II酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%硫代硫酸钠溶液20马力，搅拌均匀，静置5min；加1%L-半胱氨酸溶液10ml，搅拌均匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊。

9、把酶糊放入冰室（-12℃），低温冷冻15-20h。

取出解冻，离心得酶膏。

10、把酶膏倒入装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥6～10h，得到的是菠萝酶。

研成粉状，低温保存。

任务二质量鉴定以菠萝蛋白酶活力来标志它的质量。

1、取酶制品0.15g克加入到0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.0）定容至100mL，过滤。

此滤液为溶液酶制剂。

2、取1mL溶液酶加入0.9mL激活剂，于37℃水浴中保温。

3、保温恒定后，加入同样预热的1%酪蛋白溶液，混匀，在37℃下准确反应10min，加入8mL1mol/L氢氧化钠溶液，迅速摇匀，于室温放置半小时。

菠萝蛋白酶的提取、分离纯化及活性测定菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定15食安（1）班张凯摘要：本研究运用硫酸铵沉淀法和透析法并结合考马斯亮蓝G520染色法测定菠萝皮中蛋白酶活性及蛋白质含量，得到同一品种及成熟度的菠萝皮经两种不同的纯化方法处理，菠萝皮中的蛋白酶都能被有效纯化，但是蛋白酶活性会损失一部分。

关键词：菠萝蛋白酶；透析法；分离纯化；酶活性；前言菠萝蛋白酶(bromelain)是从菠萝植株中提取的一类蛋白水解酶的总称,主要存在于菠萝茎和果实中,根据提取部位的不同,分为茎菠萝蛋白酶和果菠萝蛋白酶。

Marcano于1891年研究发现菠萝汁中含有蛋白酶。

随后,人们对菠萝蛋白酶展开了一系列研究,发现其在医药和化工领域有很好的利用价值。

1957年,Heineche等从菠萝茎中提取得到蛋白质水解酶,从而使菠萝蛋白酶实现商品化生产。

目前,菠萝蛋白酶的一些功能成分已得到成功分离,并应用于医药领域。

随着提取纯化技术的不断进步,高活性的菠萝蛋白酶将广泛应用于医药、化工和食品领域。

[1]利用菠萝皮分离纯化菠萝蛋白酶，不仅可充分利用资源，拓展菠萝蛋白酶的获取途径和应用空间，还可降低菠萝加工废料对环境的污染；随着市场对菠萝加工产品需求量的增大，对于菠萝皮的研究与利用就显得尤为重要，尤其对最主要的功能成分蛋白酶的分离、纯化与性质的研究更有意义。

[2]本文通过对菠萝皮蛋白酶的提取，初步分离纯化及活性测定进行了初步研究，探讨影响菠萝蛋白酶活性的影响因素，并解决实验存在的一些问题。

1实验材料与仪器1．1实验材料与试剂新鲜菠萝，透析袋（截留相对分子质量8 000~14 000），0.1mo1/L pH 7.8磷酸缓冲液配制（PBS），0.01mo1/L pH 7.8磷酸缓冲液配制（PBS），1％酪蛋白，激活剂[含20mmo1／L半胱氨酸-盐酸盐、1mmo1/L EDTA-Na2 (乙二胺四乙酸二钠)]，10％三氯乙酸(TCA)。

菠萝蛋白酶的提取和分离朱明英 林文光(云南省热带作物科学研究所　景洪　666100) 菠萝蛋白酶,是菠萝下脚料综合利用的重要产品之一,一种新的生物化学制品。

菠萝蛋白酶有着广泛的用途,在制革、食品、饮料等生产中应用很多,在医学上用之医治炎症等多种疾病,特别对橡胶脱蛋白效果也很显著。

其水解蛋白质的活性大,适应性广。

菠萝蛋白酶的提取和分离方法主要参照文献[1—2]。

本试验在分离和提取工艺上作了一些摸索改进。

1　材料1.1原料:选70%—80%成熟度无刺卡因品种菠萝果皮,榨汁,用4层纱布过滤得鲜果皮汁。

1.2试剂:防腐剂:5%苯甲酸钠溶液。

沉淀剂:0.2%单宁溶液。

洗涤剂Ⅰ:0.1%乙二胺四乙酸二钠。

1.5%氯化钠溶溶洗涤剂Ⅱ:0.5%醋酸锌溶液、0.06%抗坏血酸溶30ml、0.15%氯化钠溶液200ml、0.5% EDT A溶液20m l洗涤剂Ⅲ:0.5%硫代酸钠溶液。

1%L—半胱氨酸溶液10m l(配制方法:称取L—半胱氨酸0.1g加水10ml,加1N盐酸溶液6—8滴助溶解,最后用6N N a OH溶液中和至pH3—4。

)2　方法和步骤2.1菠萝蛋白酶的提取称取1kg制备好的鲜果皮汁,加5%苯甲酸钠溶液10m l搅匀,以4000r/min离心7min,取上清液倒入干净烧杯中。

在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液75ml,边加边拌约15min,沉淀物析出,静止40m in。

虹吸除去上清废液,把酶复合沉淀物倒入离心杯中,以4000r /min离心5min,倒掉上清废液,得到酶糊复合物。

2.2分离、洗涤和保护2.2.1洗涤Ⅰ把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中,加0.1% EDTA溶液100m l搅匀,再把0.15%氯化钠溶液200m l倒入烧杯中搅匀,以4000r/m in离心7min,倒掉上清废液,得到洗涤Ⅰ酶复合沉淀物。

2.2.2洗涤Ⅱ把洗涤Ⅰ酶复合沉淀物倒入烧杯中,加0.5%醋酸锌溶液20ml搅拌均匀,静止5min,加0.06%抗坏血酸溶液30ml搅匀,静止5min;加1.5%氯化钠溶液20m l搅匀,静止5min;最后再加0.5%EDT A溶液20ml搅匀,静止5min以4000r/min离心7m in,把上清废液倒掉,得到洗涤Ⅱ酶复合沉淀物。

菠萝蛋白酶提取摘要：，运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶，对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究，并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定。

关键词：菠萝皮，菠萝蛋白酶，白陶土吸附，盐析法一目的要求：学习盐析法提取菠萝蛋白酶的方法二实验原理菠萝蛋白酶(bromelain)是从菠萝植株中提取的一类蛋白水解酶的总称, 主要存在于菠萝茎和果实中,根据提取部位的不同, 分为茎菠萝蛋白酶和果菠萝蛋白酶。

物理性质：白色至浅棕黄色无定形粉末。

溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。

是一种糖蛋白, 一般提取用的酶源是凤梨，但是价格较贵。

而用菠萝皮，不但可以减少资源的浪费，降低费用，又能减少环境的污染。

蛋白质在水溶液中的溶解度由蛋白质周围。

集聚而沉淀（实验书第3页）盐析法提取菠萝蛋白酶，菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，是一种分子量为33000u的蛋白质，硫酸铵是强电解质，有强烈的水化作用，可破坏蛋白质颗粒表面的水化膜，并能中和蛋白质颗粒所带的电荷，使蛋白质在溶液中凝聚而析出但只有达到蛋白质等电点时，其才易于沉淀对于菠萝蛋白酶来说，使用盐析法提取是比较理想的一种方法，也使用得最广泛。

其基本原理是：因不同的蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同而能分离。

此法简便、安全白色至浅棕黄色无定形粉末。

溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。

属糖蛋白。

三实验材料1试剂70%-80%成熟度的无刺卡因品种菠萝皮20g 高岭土化学纯品(用于作为吸附剂)、95%乙醇无水乙醇碳酸钠饱和溶液硫酸铵粉末14% NaCl溶液0.05%的苯甲酸钠(作为防腐剂)2实验仪器天平，砝码一套100ml量筒一个，50ml烧杯4个，滴管，玻璃棒，离心管2支高速组织捣碎机低速离心机一台四实验方法（1）滤液制备以全班为单位，选取干净的菠萝皮160g，除杂，在清水中漂洗三次，沥干，放入冰箱4℃冷冻备用-------用不锈钢剪刀将菠萝皮剪成碎片，放入高速组织捣碎机中，制备匀浆，打碎后的匀浆用纱布过滤，并150ml 95%乙醇进行第二次浸提、过滤合并两次滤液,滤液添加lml0.05%的苯甲酸钠，实验两人一组，每组取10ml左右于50ml小烧杯中（2）吸附、洗脱滤液置于冰水浴中，不断搅拌，加入汁液量 4%的白陶土搅拌20min，在10℃吸附15~20min ，于冰箱中4℃静置过夜，次日清晨虹吸除去上清液，留下湿陶土，加入冰冷的碳酸钠饱和液调节 PH6.5~7，再加入吸附物重50%的硫酸铵粉末，于冰水浴中振摇 40min进行洗脱，然后压滤，弃去杂物，收集洗脱滤液(3) 待测酶制备将上述洗脱液分装入2支离心管中，每两管天平平衡，3000转离心20min，用吸管吸取下层清液弃去，加入等体积14%NaCl沉淀（盐析），5min后2000r/min 离心10min，弃上清液，用95%乙醇沉淀洗涤一次，2000转离心10min，弃去上清液，用用无水乙醇沉淀洗涤一次，2000转离心10min，弃去上清液，用保鲜膜封口，膜上扎5~10个小孔，放入真空干燥器中干燥。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种常见的蛋白酶，它可以在菠萝中找到。

菠萝蛋白酶可以分解蛋白质，因此在食品、医药和日化等行业中有广泛的应用。

提取菠萝蛋白酶的方法有很多种，其中最常用的是浸提法和萃取法。

浸提法是将菠萝切碎，放入含有酸性物质的溶液中浸泡，使菠萝蛋白酶释放出来。

萃取法则是利用有机溶剂将菠萝中的菠萝蛋白酶提取出来。

提取菠萝蛋白酶后，可以通过一系列的分离纯化步骤来获得高纯度的菠萝蛋白酶。

这些步骤包括超滤、离子交换层析和凝胶过滤等。

除了用于医药和食品工业中，菠萝蛋白酶还可以用于日常生活中，例如在洗涤剂中添加菠萝蛋白酶可以去除衣物表面的蛋白质污渍，同时不会损伤衣物。

因此，提取菠萝蛋白酶对于提高生活质量和促进工业发展来说都具有重要意义。

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菠萝蛋白酶生产工艺
菠萝蛋白酶是一种能够降解蛋白质的酶，广泛应用于食品、酒类、制酶等行业中。

下面我将介绍菠萝蛋白酶的生产工艺。

菠萝蛋白酶的生产工艺主要包括以下几个步骤：原料准备、发酵、分离提纯和产品包装。

首先是原料准备。

菠萝蛋白酶的原料主要是新鲜菠萝。

首先将新鲜菠萝去皮、去核，然后用搅拌机将其搅碎成糊状物。

得到的菠萝糊经浸泡蛋白酶活性稳定剂，以提高蛋白酶的活性和稳定性。

接下来是发酵。

将经过处理的菠萝糊加入到发酵罐中，并加入适量的发酵基质，如糖、氨基酸等。

在适当的温度和pH条件下，接种适量的菌种，进行发酵培养。

发酵过程中需要控制好温度、pH值和搅拌速度等参数，以促进菌种生长和蛋白酶的产生。

发酵完成后，进行分离提纯。

首先对发酵液进行离心，分离出菠萝蛋白酶。

然后采用酒精沉淀、超滤、析出等一系列分离纯化工艺，去除杂质并提高蛋白酶的纯度。

最后是产品包装。

将提纯后的菠萝蛋白酶经过过滤、浓缩等处理，最终得到浓缩度适宜的酶液。

将酶液灌装到容器中，然后进行杀菌、封装等工序，最终得到成品。

总的来说，菠萝蛋白酶的生产工艺是一个较为复杂的过程，需
要进行原料处理、发酵、分离提纯和产品包装等多个步骤。

不同的厂家和工艺流程可能有所不同，但一般都遵循以上的基本流程。

通过科学合理的工艺控制，可以获得高活性和纯度的菠萝蛋白酶产品。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种酶类蛋白质，可分解蛋白质成分。

菠萝是其主要来源之一，因此，从菠萝中提取菠萝蛋白酶成为一种常见的方法。

提取菠萝蛋白酶的方法可以通过多种方式实现，其中包括机械压榨、超声波处理、低温浸泡、固相萃取和酵素技术等。

不同的方法会对提取效果产生不同的影响。

机械压榨是最简单的提取方法之一，通过将菠萝果肉或茎汁挤压后，分离出含有菠萝蛋白酶的液体。

超声波处理则是一种快速、高效的提取方法，它利用超声波能量刺激菠萝细胞释放菠萝蛋白酶。

低温浸泡是一种保留菠萝蛋白酶活性的提取方法，通过在低温下将菠萝浸泡一段时间，可提高菠萝蛋白酶的纯度和活性。

固相萃取是一种常用的精细化提取方法，它将菠萝蛋白酶从其他成分中分离出来，通过针对菠萝蛋白酶特异性的化学反应，可将菠萝蛋白酶浓缩，从而得到纯度高的菠萝蛋白酶。

酵素技术则是利用大肠杆菌等细菌表达人造菠萝蛋白酶，通过纯化酶产物得到菠萝蛋白酶。

总之，从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一种常见的方法，通过不同的提取技术可以得到不同品质的菠萝蛋白酶。

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菠萝蛋白酶的提取纯化工艺研究梁 雪，方欢乐，刘建利（西安培华学院 医学院，陕西西安 710199）摘 要：为降低环境污染，提高菠萝蛋白酶的附加值以及延长菠萝的产业链，以菠萝废弃物为原料，采用盐析浓缩-透析提纯-乙醇有机溶剂沉淀相结合的方法提取菠萝蛋白酶。

实验考察料液比、缓冲液温度、搅拌时间、缓冲液pH值、盐析浓度以及透析时间对菠萝蛋白酶酶活性和酶活回收率的影响。

结果表明，菠萝蛋白酶的最佳工艺条件为料液比1.0∶1.5（m∶v）、缓冲液温度30 ℃、搅拌时间40 min、缓冲液pH值7、盐析浓度30%和透析时间28 h，该条件下菠萝蛋白酶酶活回收率为68.45%。

关键词：菠萝蛋白酶；盐析法；透析提纯；有机溶剂沉淀Study on Extraction and Purification of BromelainLIANG Xue, FANG Huanle, LIU Jianli(Medical College, Xi’an Peihua University, Xi’an 710199, China)Abstract: In order to reduce environmental pollution, increase the added value of bromelain, and extend the industrial chain of pineapple, a method combining salt precipitation concentration dialysis purification ethanol organic solvent precipitation was used to extract bromelain from pineapple waste as raw material. The experiment investigated the effects of material liquid ratio, buffer temperature, stirring time, buffer pH value, salting out concentration, and dialysis time on bromelain enzyme activity and enzyme recovery rate. The results showed that the optimal process conditions for bromelain were material to liquid ratio of 1.0∶1.5（m∶v）, buffer temperature of 30 ℃, stirring time of 40 minutes, buffer pH of 7.0, salt out concentration of 30%, and dialysis time of 28 hours. Under these conditions, the recovery rate of bromelain enzyme activity was 68.45%.Keywords: bromelain; salting out; dialysis purification; organic solvent precipitation菠萝蛋白酶为白色至淡棕黄色无定形粉末，是我国目前大规模生产的植物蛋白酶之一[1]。

菠萝蛋白酶提取方法的研究一、本文概述Overview of this article菠萝蛋白酶是一种从菠萝茎部提取的巯基蛋白酶，具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗水肿、抗凝血、抗肿瘤等作用。

由于其独特的生物活性，菠萝蛋白酶在医药、食品、饲料、纺织、制革、造纸和化妆品等行业中具有广泛的应用前景。

因此，研究菠萝蛋白酶的提取方法对于其工业化生产和应用具有重要意义。

Pineapple protease is a thiol protease extracted from the stem of pineapple, which has a wide range of biological activities, including anti-inflammatory, anti edema, anticoagulant, and anti-tumor effects. Due to its unique biological activity, bromelain has broad application prospects in industries such as medicine, food, feed, textiles, leather making, papermaking, and cosmetics. Therefore, studying the extraction method of bromelain is of great significance for its industrial production and application.本文旨在研究菠萝蛋白酶的提取方法，通过对不同提取方法进行比较和优化，找出最佳提取工艺条件，以提高菠萝蛋白酶的提取效率和纯度。

本文首先介绍了菠萝蛋白酶的基本性质和应用领域，然后详细阐述了各种提取方法的原理、操作步骤和优缺点，包括传统提取方法、超声波提取法、微波提取法、酶解法等。

菠萝蛋白酶提取一．实验目的:1.了解菠萝蛋白酶的基本性质，设计提取方法并测性其蛋白总量及酶活性；2.计算从菠萝中提取菠萝蛋白酶时每步的回收率，判断提取方法的优劣。

二．实验原理：菠萝蛋白酶外观为白色至浅棕黄色无定形粉末；可溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚；属糖蛋白。

主要作用原理是使多肽类水解为低分子量的肽类，尚有水解酰胺基键和酯类的作用。

其作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化,啤酒澄清,还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂,对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。

提取菠萝蛋白酶的传统工艺是高岭土吸附法和单宁沉淀法。

高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,酶活总回收率低,但产品质量较好,纯度较高,单宁沉淀法工艺和操作比高岭土法简单,原材料消耗少,所需设备少,但酶活回收率低。

有些研究用超滤法对传统工艺进行了改革,不仅使菠萝蛋白酶产品更纯,而且酶粉得率比传统工艺高,但超滤法生产工艺和和操作比上述两种方法复杂,工人素质要求高,且设备一次性投资大。

本实验采用新型吸附法提取菠萝蛋白酶,步骤简单,产率比传统方法有所提高,是一种有发展的方法。

在新型吸附沉淀法提取菠萝蛋白酶中,所使用的锌离子对酶有激活作用,乙二胺四乙酸是一种螯合物,可有效地螯合原料中某些重金属离子,以避免其与酶结合而使酶失去活性,抗坏血酸则具有还原性,分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态,从而有效地保持酶活性,其中以EDTA 和L2半胱氨酸组合,效果最佳。

单宁用量多少会直接影响酶产量,一般范围0. 15 %～0. 25 %的浓度。

采用Folin-酚法测定蛋白酶含量，发生双缩脲反应的蛋白中酚基（酪氨酸），在碱性条件下将磷钼酸和磷钨酸还原成钼酸和钨酸，呈蓝色，在650nm和66onm处有最大吸收值。

Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。