仪器分析[第六章高效液祖色谱分析法]山东大学期末考试知识点复习

第17章HPLC法17.1 内容提要17.1.1 基本概念高效液相色谱法──在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱(GC)的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，使之发展成为高分离速率、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法，易称为现代液相色谱法。

高效液相色谱仪──采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。

梯度洗脱──用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续的改变流动相的浓度、配比和极性，使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰的操作技术。

也称为梯度淋洗。

低压梯度──又称外梯度，特点是先混合后加压。

它是采用在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱系统，易称为泵前混合。

高压梯度──又称内梯度，特点是先加压后混合。

它有两台高压输液泵、梯度程序器(或计算机及接口板控制)、混合器等部件组成。

两台泵分别将两种极性不同的溶剂输入混合器，经充分混合后进入色谱柱系统，是一种泵后高压混合形式。

柱外效应──由色谱柱以外的因素引起的色谱峰形扩展的效应。

柱外因素常指从进样口到检测器之间，除色谱柱以外的所有死时间，如进样器、连接管、检测器等的死体积，都会导致色谱峰形加宽、柱效下降。

液固吸附色谱法──以固体吸附剂为固定相，吸附剂表面的活性中心具有吸附能力，样品分子被流动相带入柱内，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争吸附性。

K值大的强极性组分易被吸附，K值小的弱极性组分难被吸附，样品组分因此被分离。

液液分配色谱法──根据物质在两种互不相溶(或部分互溶)的液体中溶解度的不同，有不同的分配，从而实现分离的方法。

分配系数较大的组分保留值也较大。

正相分配色谱法──流动相极性低而固定相极性高的称为正相分配色谱法。

反相分配色谱法──流动相极性高而固定相极性低的称为反相分配色谱法。

化学键合相──利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一、牢固的单分子薄层而形成的各种性能的固定相。

高效液相色谱习题一、填空题1.高效液相色谱分析是将流动相用高压泵输送，使压力高达 5 MPa以上，并采用新型的化学键合固定相，是分离效率很高的液相色谱法。

2.高效液相色谱法的特点是分离性能高、分析速度快、检测器灵敏度高、应用范围广。

3.高效液相色谱法和气相色谱法的共同之处是分离功能、分析功能、在线分析。

4.高效液相色谱分析根据分离机理不同可分为四种类型，即液固色谱、液液色谱、键合相色谱、凝胶色谱。

5.高效液相色谱中的液一液分配色谱采用的新型固定相叫化学键合相，它是利用化学方法将固定液官能团键合在载体表面上的。

6.通常把固定相极性大于流动相极性的一类色谱称为正相色谱。

反之称为反相色谱。

7.高效液相色谱仪通常由储液器、输液泵、梯度淋洗器、进样器、色谱柱、检测器、色谱工作站七部分组成。

8.高效液相色谱仪中使用最广泛的检测器为紫外检测器，另外还有折光检测器、荧光检测器等等。

9.高效液相色谱主要用于分析沸点高的、分子量大的、受热易分解的以及具有生理活性物质的分析。

二、判断题√、√、⨯、⨯、√、√、⨯、√、⨯、√、⨯、√、√、⨯、√、⨯、⨯、√、⨯、√、√、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、√、⨯1．液一液色谱流动相与被分离物质相互作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的改变。

（√）2．利用离子交换剂作固定相的色谱法称为离子交换色谱法。

（√）3．紫外吸收检测器是离子交换色谱法通用型检测器。

（×）4．检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。

（×）5．高效液相色谱适用于大分子，热不稳定及生物试样的分析。

（√）6．高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。

（×）7．键合固定相具有机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。

（√）8．在液相色谱中为避免固定相的流失，流动相与固定相的极性差别越大越好。

（×）9．正相分配色谱的流动相极性大于固定相极性。

高效液相色谱习题一：选择题1.在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（D ）A.提高柱温B.降低板高C.降低流动相流速D.减小填料粒度2.在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进下列那种操作（C ）A. 改变固定液的种类B.改变栽气和固定液的种类C. 改变色谱柱温D.改变固定液的种类和色谱柱温3.在液相色谱中，范第姆特方程中的哪一项对柱效的影响可以忽略（ B ）A.涡流扩散项B.分子扩散项C.流动区域的流动相传质阻力D.停滞区域的流动相传质阻力4. 在高固定液含量色谱柱的情况下，为了使柱效能提高，可选用 (A )A.适当提高柱温B.增加固定液含量C.增大载体颗粒直径D.增加柱长5. 在液相色谱中, 为了提高分离效率, 缩短分析时间, 应采用的装置是 ( B )A. 高压泵B. 梯度淋洗C. 贮液器D. 加温7. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力？（ C ）A. 组分与流动相B. 组分与固定相C. 组分与流动相和固定相D. 组分与组分8. 在液相色谱中, 通用型检测器是 (A )A.示差折光检测器B.极谱检测器C.荧光检测器D.电化学检测器9. 在液相色谱中, 为了获得较高柱效能, 常用的色谱柱是 (A )A.直形填充柱B.毛细管柱C.Ｕ形柱D.螺旋形柱10. 纸色谱的分离原理, 与下列哪种方法相似？ ( B)A.毛细管扩散作用B.萃取分离C.液-液离子交换D.液-固吸附二：简答题1. 在液相色谱中，色谱柱能在室温下工作，不需恒温的原因是什么？答：由于组分在液-液两相的分配系数随温度的变化较小，因此液相色谱柱不需恒温三：计算题1. 一液体混合物中，含有苯、甲苯、邻二甲苯、对二甲苯。

用气相色谱法，以热导池为检测器进行定量，苯的峰面积为1.26 cm2。

甲苯为0.95 cm2，邻二甲苯为2.55 cm2，对二甲苯为1.04 cm2。

求各组分的百分含量？（重量校正因子：苯0.780，甲苯0.794，邻二甲苯0.840．对二甲苯0.812）。

仪器分析练习题A一、单项选择题1 Lambert-Beer定律适用于下列哪种情况A. 白光、均匀、非散射、低浓度溶液B. 单色光、非均匀、散射、低浓度溶液C. 单色光、均匀、非散射、低浓度溶液D. 单色光、均匀、非散射、高浓度溶液2．双波长分光光度计的输出信号是A. 试样吸收与参比吸收之差B. 试样λ1和λ2吸收之差C. 试样在λ1和λ2吸收之和D. 试样在λ1的吸收与参比在λ2的吸收之和3．气液色谱中，色谱柱使用的上限温度取决于A. 试样中沸点最高组分的沸点B. 固定液的最高使用温度C. 试样中各组分沸点的平均值D. 固定液的沸点4. 如果试样比较复杂，相邻两峰间距离太近或操作条件不易控制稳定，要准确测量保留值有一定困难时，宜采用的定性方法为A. 利用相对保留值定性B. 利用文献保留值数据定性C. 加入已知物增加峰高的办法定性D. 与化学方法配合进行定性5. 按照光吸收定律，对透光率与浓度的关系，下述说法正确的是A. 透光率与浓度成正比B. 透光率与浓度成反比C. 透光率与浓度的负对数成正比D. 透光率负对数与浓度成正比6. 若某待测溶液中存在固体悬浮颗粒，则测得的吸光度比实际吸光度A. 减小B. 增大C. 不变D. 以上三种都不对7. 使用紫外可见分光光度计在480nm波长下测定某物质含量时，最适宜选用A. 氢灯，石英吸收池B. 钨灯，玻璃吸收池C. 氘灯，玻璃吸收池D. 空心阴极灯，石英吸收池8. 原子吸收法所采用的光源为A. 复合光B. 线光源C. 连续光源D. 以上三种都不对9.下列方法中，哪个不是气相色谱定量分析方法A．峰面积测量 B．峰高测量C．标准曲线法 D．相对保留值测量10. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力A、组分与流动相B、组分与固定相C、组分与流动相和固定相D、组分与组分二、名词解释1. 半峰宽;2. 分配系数;3. 死时间;4. 基峰丰度。

高效液相色谱法知识汇总大全集（最新最值得收藏的资料整理）HPLC应用一、样品测定1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。

所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。

弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。

2．样品配制：①溶剂；②容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。

某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此必要时应将玻璃容器进行硅烷化处理。

3．记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度、理论板数及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。

4．进样量：药品标准中常标明注入10ml，而目前多数HPLC系统采用定量环（10ml、20ml 和50ml），因此应注意进样量是否一致。

（可改变样液浓度）5．计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。

6．仪器的使用：①流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤维。

有请重新滤过。

②柱在线时，增加流速应以0.1ml/min的增量逐步进行，一般不超过1ml/min，反之亦然。

否则会使柱床下塌，叉峰。

柱不线时，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率递增上去（或下来），勿急升（降），以免泵损坏。

③安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙。

④样品液请注意滤过（注射液可不需滤过）后进样，注意样品溶剂的挥发性。

⑤测定完毕请用水冲柱1小时，甲醇30分钟。

如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）冲洗过夜（注意水要够量），不须冲洗甲醇。

色谱分析法定义:色谱(chromatography)分析法：以试样组分固定相(stationary phase )和流动相(mobile phase )间的溶解、吸附、分配、离子交换或其它亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离分析方法称色谱分析法即利用物质的物理及物理化学性质的差异，将多组分混合物进行分离测定的一种分析方法。

色谱分析法是仪器分析常用的方法之一。

应用对象：主要是混合物中有机成分的分离和分析1.色谱法的由来2.固定相和流动相的变化3.色谱柱、分离机制的变化高效液相色谱仪色谱分析法的分类❖1、按两相的聚集状态流动相固定相类型❖2、按分离的原理分类❖吸附色谱：吸附性能的差异气固液固❖分配色谱：分配系数的不同溶解度液体❖离子交换色谱：分离组分与固定相离子进行可逆交换离子交换树脂❖空间排阻色谱：分子筛葡聚糖凝胶❖3、按固定相的材料和使用方式❖柱色谱(玻璃、不锈钢、石英) 气固液固❖纸色谱液液❖薄层色谱(硅胶、聚酰胺) 液固❖4、按色谱动力学过程分类❖冲洗法、顶替法、迎头法❖5、按色谱技术分类色谱分析法的特点和局限性一、特点1、选择性好1理论塔板数高2固定相、流动相3操作温度a沸点相近的混合物b同位素c同分异构体d对映异构体2、分离效率高，分析速度快1气相色谱a气体黏度小b长色谱柱2高效液相色谱a高压泵b多色谱填料3、灵敏度高、样品用量少检测器a热导池检测器b氢火焰离子化检测器c电子俘获检测器d火焰光度检测器4、应用范围广1气相色谱a气体b易挥发的有机物c沸点高d热裂解2高效液相色谱a不易挥发、高沸点b不稳定c糖类、大分子化合物d药物分析3石油工业、环境保护、临床化学、药物与药剂、农药、食品、卫生防疫理化检验、司法检验二、局限性❖给不出定性结果，需要已知的标物质作对比，或将样品的数据与标准物质的数据进行对比，与质谱、红外等波谱鉴定仪器联用❖定量时需要标准物质❖对个别异构体和固体物质分析能力差色谱图和相关术语❖1、色谱图(chromatogram)：进样后检测仪器记录下来的检测器响应信号随时间或载气流出体积分布的曲线图。

仪器分析期末考试题及参考答案一、填空题(共 20分, 1分 /题1、测定溶液 pH 时,先用 pH=6.84的标准缓冲溶液对仪器“定位”, 然后调节“斜率”。

2、 Ag-AgCl 参比电极的电极电位取决于电极内部溶液中的 Cl -浓度。

3、摩尔吸光系数与吸光物质的性质、入射光波长、溶液的温度和溶剂等因素有关,而与溶液浓度及液层厚度无关。

4、分光光度分析中,当吸光度 A = 0.434 时,测量的相对误差最小。

5、原子吸收光谱法中的物理干扰可用标准加入法方法消除。

6、产生 1%吸收时对应的待测元素的浓度称为特征浓度。

7、气相色谱常用检测器中,属于质量敏感型检测器的有 FID和 FPD 。

8、影响热导检测器灵敏度的最主要因素是桥电流。

9、每次新安装了色谱柱后,为了使固定液牢固及除去固定液中易挥发的成分应对色谱柱进行老化处理。

10、反相键合相色谱法常用的流动相主体是水。

11、梯度洗脱可分为高压梯度和低压梯度。

12、正相分配色谱可用于分析极性化合物样品,被分离组分分子极性越强, 在柱中停留的时间越长。

13、傅立叶变换红外光谱仪的核心部件是迈克尔逊干涉仪。

14、中红外区可大致分为特征谱带区和指纹区。

二、单选题(共 20分, 2分 /题1、下列方法中可用于确定电位滴定法滴定终点的方法是(AA. 二阶微商法B. 外标法C. 内标法D. 二点校正法2、 pH 玻璃电极在使用前,应在蒸馏水中浸泡(BA. 12小时B. 24小时C. 数分钟D. 数秒种3、摩尔吸光系数很大,则说明(CA. 该物质的浓度很大B. 光通过该物质溶液的光程长C. 该物质对某波长光的吸收能力强D. 测定该物质的方法的灵敏度低4、校准曲线的斜率常因温度、试剂、仪器条件的变化而变化。

在测定样品的同时绘制校准曲线的最佳方法是(CA. 先绘制工作曲线后测定样品B. 先测定样品后绘制工作曲线C. 工作曲线与样品测定同时进行D. 根据需要灵活运用5、空心阴极灯灯电流选择的原则是在保证放电稳定和有适当光强输出的情况下,尽量选择(C 的工作电流。

《仪器分析》复习题第一章绪论仪器分析主要有哪些分析方法？请分别加以简述？第二章色谱学基础1.色谱分析法的最大特点是什么?它有哪些类型?2.绘一典型的色谱图,并标出进样点t m、t R、t‘R，h、w1/2、W、σ和基线。

3.试述塔板理论与速率理论的区别和联系。

4.从色谱流出曲线上通常可以获得哪些信息?5.在色谱峰流出曲线上,两峰之间的距离取决于相应两组分在两相间的分配系数还是扩散速率?为什么?6.试述速率方程式中A、B、C三项的物理意义。

7.为什么可用分辨率R作为色谱柱的总分离效能指标。

8.能否根据理论塔板数来判断分离的可能性？为什么？9.色谱定性的依据是什么，主要有哪些定性方法。

10.色谱定量分析中为什么要用校正因子？在什么情况下可以不用?11.用公式分析理论塔板数n、有效塔板数n有效与选择性和分离度之间的关系。

12.样品中有a、b、c、d、e和f六个组分,它们在同一色谱柱上的分配系数分别为370、516、386、475、356和490,请排出它们流出色谱柱的先后次序。

13.衡量色谱柱柱效能的指标是什么?衡量色谱柱选择性的指标是什么?14.某色谱柱柱长5Om,测得某组分的保留时间为4.59min,峰底宽度为53s,空气峰保留时间为30s。

假设色谱峰呈正态分布,试计算该组分对色谱柱的有效塔板数和有效塔板高度。

15.为什么同一样品中的不同组分之间不能根据峰高或峰面积直接进行定量分析?16.名词解释：精密度、准确度，灵敏度、检出限、线性范围等17.指出下列哪些参数的改变会引起相对保留值的改变:①柱长增加;②更换固定相;③降低柱温;④加大色谱柱内径；⑤改变流动相流速。

18.对某一组分来说,在一定柱长下,色谱峰的宽窄主要取决于组分在色谱柱中的:①保留值;②分配系数;③总浓度;④理论塔板数。

请你选择正确答案，并说明原因。

19.组分A流出色谱柱需15min,组分B流出需25min,而不与固定相作用的物质C流出色谱柱需2min,计算:（1）组分B在固定相中所耗费的时间（2）(2)组分B对组分A的选择因子α。

仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。

它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。

仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。

流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。

高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。

与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。

同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。

因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。

在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。

通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。

例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。

在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。

通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。

在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。

通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。

在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。

气相色谱基本原理：借在两相间分配原理而使混合物中各组分分离。

气相色谱就是根据组分与固定相与流动相的亲和力不同而实现分离。

组分在固定相与流动相之间不断进行溶解、挥发（气液色谱），或吸附、解吸过程而相互分离，然后进入检测器进行检测。

载气系统、进样系统、色谱柱与柱箱、检测系统、记录与数据处理系统。

气相色谱仪具有一个让载气连续运行，管路密闭的气路系统．进样系统包括进样装置和气化室．其作用是将液体或固体试样，在进入色谱柱前瞬间气化，然后快速定量地转入到色谱柱中．固定液：是一些高沸点的有机化合物，例如，角鲨烷，作为固定相被均匀地涂抹在担体上。

担体：多孔，比表面积大，表面无吸附性，是用来承担固定液的物质。

例如：硅藻土。

气相色谱法的特点：高选择性（复杂混合物，有机同系物、异构体。

手性异构体）高灵敏度（可以检测出μg.g-1(10-6)级至(10-9)级的物质量）高效能、快速、应用范围广(气:沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析)(液:高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析）缺：被分离组分的定性较为困难。

分配过程：组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程 分配系数：在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度（单位：g / mL ）比，K 分配比:在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比(容量因子\容量比) k k 容量因子越大，保留时间越长。

β为相比。

β= VM/VS V M 为流动相体积,即柱内固定相颗粒间的空隙体积;V S 为固定相体积,气-液色谱柱(为固定液体积);气-固色谱柱:为吸附剂表面容量r 21 = t ´R2 / t ´R1= V ´R2 / V ´R1= α 滞留因子=质量分数ω： u s ：组分在色谱柱内的线速度； u ：流动相在色谱柱内的线速度 塔板理论的假设:在每一个平衡过程间隔内，平衡可以迅速达到；将载气看作成脉动（间歇）过程；试样沿色谱柱方向的扩散可忽略；每次分配的分配系数相同。

仪器分析期末试题及答案# 仪器分析期末试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 原子吸收光谱法中，基态原子吸收的是什么光？A. 可见光B. 紫外光C. 红外光D. 激光答案：B2. 高效液相色谱法中，固定相通常是：A. 气体B. 液体C. 固体D. 离子答案：B3. 紫外-可见分光光度法中，样品的吸光度与样品浓度的关系遵循：A. 比尔-朗伯定律B. 斯托克斯定律C. 普朗克定律D. 波尔兹曼定律答案：A4. 气相色谱法中，常用的检测器类型不包括：A. 热导检测器B. 火焰光度检测器C. 电子捕获检测器D. 紫外-可见检测器答案：D5. 质谱分析中，分子离子峰通常出现在：A. 质量数较低的区域B. 质量数较高的区域C. 质量数中等的区域D. 不确定区域答案：B二、填空题（每空2分，共20分）6. 原子吸收光谱分析中，常用的原子化方法有______和______。

答案：火焰原子化；石墨炉原子化7. 高效液相色谱法中，色谱柱的固定相可以是______、______或______。

答案：化学键合相；离子交换树脂；凝胶8. 在紫外-可见分光光度法中，样品的吸光度与溶液的浓度和______成正比。

答案：光程长度9. 质谱仪中，分子离子的质荷比通常用来确定分子的______。

答案：分子量10. 核磁共振波谱法中，化学位移的单位是______。

答案：ppm（parts per million）三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述原子吸收光谱法的基本原理。

答案：原子吸收光谱法是一种基于基态原子对特定波长的光进行选择性吸收的分析方法。

当原子吸收了与原子能级差相对应的光能后，原子从基态跃迁到激发态。

通过测量基态原子吸收的光强度，可以定量分析样品中元素的含量。

12. 解释什么是高效液相色谱法的色谱峰。

答案：高效液相色谱法中，色谱峰是指样品在色谱柱中经过分离后，不同组分在检测器上产生的信号峰。

色谱峰的面积或高度与样品中相应组分的浓度成正比，可以用来定量分析样品中的组分。

第六章吸收光谱法吸收光谱法是利用吸收光谱来研究物质的性质和含量的方法。

它是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，因此又称吸光光度法或分光光度法。

该方法具有灵敏度高、操作简便、快速、设备简单、应用广泛、准确度高等特点，是测定微量及痕量组分的常用方法。

一、光的选择性吸收溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的吸光质点(分子或离子)选择性吸收某种颜色的光所引起的。

当日光通过某一均匀溶液时，若该溶液对可见光波段都不吸收，即入射光全部透过，则溶液无色透明；若各种波长的光呈选择性吸收，则溶液呈现的是与主要吸收的光成互补色光的颜色；若各种波长的光全部被吸收，则溶液呈黑色。

例如硫酸铜溶液因吸收了白光中的黄光而呈蓝色，高锰酸钾溶液因吸收了白光中的绿色而呈紫色。

二、吸收曲线物质对不同波长的光有不同的吸收，如果以不同波长的光依次射人被测溶液，并测出不同波长时溶液的吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，所得曲线称为光吸收曲线。

从光吸收曲线可知，在可见光区，任一物质的溶液对各种波长的单色光都有选择性地吸收，在某一波长处有一最大吸收，这一波长称为最大吸收波长，即λ。

不同浓度的含同一吸光质点的溶液，光吸收曲线的形状相似，最大吸收波长max也相同，因此，光吸收曲线可作为物质定性分析的依据；不同浓度的同一物质的溶液，在一定波长处其吸光度随溶液浓度的增大而增加，因此这个特性可作为物处测定吸光度值，其灵敏度最高，因此，光质定量分析的依据。

测量时，在λmax吸收曲线是吸光光度法中选择测量波长的依据。

三、光吸收定律(朗伯一比尔定律)溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比，即朗伯一比尔定律。

其数学表达式为A＝Kbc入射光的波长及温度等因素有关。

1．值得注意的是：K值随b，C所取单位不同而不同，当b以cm为单位，C以g·L-1为单位时，K以a表示，a称为吸光系数，单位为L·g-1·cm-1，光的吸收定律为A＝abc。

⾼效液相⾊谱法习题答案讲解学习⾼效液相⾊谱法思考题和习题1．简述⾼效液相⾊谱法和⽓相⾊谱法的主要异同点。

相同点：均为⾼效、⾼速、⾼选择性的⾊谱⽅法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测不同点：分析对象及范围流动相的选择操作条件GC能⽓化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20%流动相为有限的⼏种“惰性”⽓体，只起运载作⽤，对组分作⽤⼩加温常压操作HPLC溶解后能制成溶液的样品，⾼沸点、⾼分⼦量、难⽓化、离⼦型的稳定或不稳定化合物，占有机物的80%流动相为液体或各种液体的混合。

它除了起运载作⽤外，还可通过溶剂来控制和改进分离。

室温、⾼压下进⾏2．离⼦⾊谱法、反相离⼦对⾊谱法与离⼦抑制⾊谱法的原理及应⽤范围有何区别？离⼦⾊谱法(Ion Chromatography) ：⽤离⼦交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相。

以电导检测器为通⽤检测器。

试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离⼦交换⾊谱法相同。

离⼦⾊谱法是溶液中阴离⼦分析的最佳⽅法，也可⽤于阳离⼦分析。

反相离⼦对⾊谱法(IPC或PIC) ：反相⾊谱中，在极性流动相中加⼊离⼦对试剂，使被测组分与其中的反离⼦形成中性离⼦对，增加k和t R，以改善分离。

适⽤于较强的有机酸、碱。

反相离⼦抑制⾊谱：在反相⾊谱中，通过加⼊缓冲溶液调节流动相pH值，抑制组分解离，增加其k和t R，以达到改善分离的⽬的。

适⽤于极弱酸碱物质（pH=3~7弱酸；pH=7~8弱碱；两性化合物）3．速率理论⽅程式在HPLC中与在GC中有何异同？如何指导HPLC实验条件的选择？解:液相⾊谱中引起⾊谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动的流动相传质、滞留的流动相传质以及柱外效应。

在⽓相⾊谱中径向扩散往往⽐较显著，⽽液相⾊谱中径向扩散的影响较弱，往往可以忽略。

另外，在液相⾊谱中还存在⽐较显著的滞留流动相传质及柱外效应。

在⾼效液相⾊谱中，对液液分配⾊谱，V an Deemter⽅程的完整表达形式为由此，HPLC的实验条件应该是：①⼩粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。

14. 不是咼液相色谱仪中的检测器是（ ）A 、10 〜30cm 、 20 〜 50m C 、 1〜2m 、 2 〜 8. 在液相色谱中 , 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（ A 组分与流动相B 、组分与固定相C 组分与流动相和固定相D 组分与组分 9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（）的操作 A 改变柱长 、改变填料粒度C 改变流动相或固定相种类D 改变流动相的流速高效液相色谱习题及参考答案 一、单项选择题 1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（ ）。

A 、分配色谱法 B 、排阻色谱法 C 离子交换色谱法 D 、吸附色谱法 2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离。

A 、检测器 B 、记录器 C 色谱柱 D 、进样器 3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜 A 、e m B 、口 m C>g m D 、口 m 4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作 A 、 改变流动相的种类或柱子 B 、 改变固定相的种类或柱长 C 改变固定相的种类和流动相的种类 D 改变填料的粒度和柱长 5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（ ） A 、甲醇 / 水（83/17 ） B 、甲醇 / 水（57/43 ） C 正庚烷/异丙醇（93/7） D 乙腈/水（） 6. 下列用于高效液相色谱的检测器， （ ）检测器不能使用梯度洗脱。

A 、紫外检测器 B 、荧光检测器 C 蒸发光散射检测器 D 、示差折光检测器 7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（ ）范围内。

10. 液相色谱中通用型检测器是（ ）A 、紫外吸收检测器B 、示差折光检测器C 热导池检测器D 、氢焰检测器11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器A 、荧光检测器B 、示差折光检测器A 、提咼柱温 、降低板高C 降低流动相流速D 、减小填料粒度C 电导检测器D 、吸收检测器12. 在液相色谱法中， 提高柱效最有效的途径是（13. 在液相色谱中， 不会显着影响分离效果的是（A、改变固定相种类 B 、改变流动相流速C改变流动相配比 D 、改变流动相种类14. 不是咼液相色谱仪中的检测器是（）A 1 和 4B 2 和3C 5 和6D 2 和 3A 、紫外吸收检测器B 、红外检测器C 差示折光检测D 、电导检测器15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（ ）A 、恒温箱B 、进样装置C 程序升温D 、梯度淋洗装置16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（ ）A 、贮液器B 、输液泵C 检测器D 、温控装置17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（）水 A.国标规定的一级、二级去离子水 B .国标规定的三级水C. 不含有机物的蒸馏水 D .无铅（无重金属）水18. 高效液相色谱仪与普通紫外－可见分光光度计完全不同的部件是（） A 、流通池 B 、光源C 分光系统D 、检测系统19. 下列哪种是高效液相色谱仪的通用检测器A 、紫外检测器B 、荧光检测器C 安培检测器D 、蒸发光散射检测器20. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括 A 、贮液器B 、高压输液泵C 过滤器D 、梯度洗脱装置E 、进样器二、判断题：1.液相色谱分析时，增大流动相流速有利于提高柱效能。

高效液相色谱习题及参考答案一、单项选择题1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（）。

A、分配色谱法B、排阻色谱法C、离子交换色谱法D、吸附色谱法2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。

A、检测器B、记录器C、色谱柱D、进样器3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜A、μmB、μmC、μmD、μm4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作A、改变流动相的种类或柱子B、改变固定相的种类或柱长C、改变固定相的种类和流动相的种类D、改变填料的粒度和柱长5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（）A、甲醇/水（83/17）B、甲醇/水（57/43）C、正庚烷/异丙醇（93/7）D、乙腈/水（）6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（）检测器不能使用梯度洗脱。

A、紫外检测器B、荧光检测器C、蒸发光散射检测器D、示差折光检测器7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（）范围内。

A 、10～30cm B、 20～50mC 、1～2m D、2～5m8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（）A、组分与流动相B、组分与固定相C、组分与流动相和固定相D、组分与组分9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（）的操作A、改变柱长B、改变填料粒度C、改变流动相或固定相种类D、改变流动相的流速10. 液相色谱中通用型检测器是（）A、紫外吸收检测器B、示差折光检测器C、热导池检测器D、氢焰检测器11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器A、荧光检测器B、示差折光检测器C、电导检测器D、吸收检测器12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（）A、提高柱温B、降低板高C、降低流动相流速D、减小填料粒度13. 在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（）A、改变固定相种类B、改变流动相流速C、改变流动相配比D、改变流动相种类14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（）A、紫外吸收检测器B、红外检测器C、差示折光检测D、电导检测器15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（）A、恒温箱B、进样装置C、程序升温D、梯度淋洗装置16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（）A、贮液器B、输液泵C、检测器D、温控装置17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（）水A．国标规定的一级、二级去离子水 B．国标规定的三级水C．不含有机物的蒸馏水 D．无铅(无重金属)水18. 高效液相色谱仪与普通紫外－可见分光光度计完全不同的部件是（）A、流通池B、光源C、分光系统D、检测系统19. 下列哪种是高效液相色谱仪的通用检测器A、紫外检测器B、荧光检测器C、安培检测器D、蒸发光散射检测器20. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括A、贮液器B、高压输液泵C、过滤器D、梯度洗脱装置E、进样器二、判断题：1. 液相色谱分析时，增大流动相流速有利于提高柱效能。

高效液相色谱习题及参考答案一、单项选择题1。

在液相色谱法中，按分离原理分类,液固色谱法属于（）。

A、分配色谱法B、排阻色谱法C、离子交换色谱法D、吸附色谱法2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在( ）中被分离。

A、检测器B、记录器C、色谱柱D、进样器3。

液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？A、0。

5μmB、0.45μmC、0。

6μmD、0。

55μm4. 在液相色谱中,为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？A、改变流动相的种类或柱子B、改变固定相的种类或柱长C、改变固定相的种类和流动相的种类D、改变填料的粒度和柱长5。

一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（）A、甲醇/水（83/17）B、甲醇/水（57/43）C、正庚烷/异丙醇（93/7）D、乙腈/水（1。

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5）6. 下列用于高效液相色谱的检测器,（ )检测器不能使用梯度洗脱。

A、紫外检测器B、荧光检测器C、蒸发光散射检测器D、示差折光检测器7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在( ）范围内。

A 、10～30cm B、 20～50mC 、1～2m D、2～5m8. 在液相色谱中，某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（）A、组分与流动相B、组分与固定相C、组分与流动相和固定相D、组分与组分9。

在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（）的操作A、改变柱长B、改变填料粒度C、改变流动相或固定相种类D、改变流动相的流速10。

液相色谱中通用型检测器是( )A、紫外吸收检测器B、示差折光检测器C、热导池检测器D、氢焰检测器11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器A、荧光检测器B、示差折光检测器C、电导检测器D、吸收检测器12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（）A、提高柱温B、降低板高C、降低流动相流速D、减小填料粒度13。

在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（）A、改变固定相种类B、改变流动相流速C、改变流动相配比D、改变流动相种类14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（）A、紫外吸收检测器B、红外检测器C、差示折光检测D、电导检测器15。

第一章绪论问答题1. 简述仪器分析法的特点.第二章色谱分析法1．塔板理论的要点与不足是什么？2．速率理论的要点是什么？3．利用保留值定性的依据是什么？4．利用相对保留值定性有什么优点？5．色谱图上的色谱流出曲线可说明什么问题?6．什么叫死时间?用什么样的样品测定? ．7．在色谱流出曲线上，两峰间距离决定于相应两组分在两相间的分配系数还是扩散速率？为什么？8．某一色谱柱从理论上计算得到的理论塔板数n很大，塔板高度H很小，但实际上柱效并不高，试分析原因。

9．某人制备了一根填充柱，用组分A和B为测试样品，测得该柱理论塔板数为4500,因而推断A和B在该柱上一定能得到很好的分离，该人推断正确吗?简要说明理由。

10．色谱分析中常用的定量分析方法有哪几种?当样品中各组分不能全部出峰或在组分中只需要定量其中几个组分时可选用哪种方法？11．气相色谱仪一般由哪几部分组成?各部件的主要作用是什么?12．气相色谱仪的气路结构分为几种?双柱双气路有何作用？13．为什么载气需要净化？如何净化?14．简述热导检测器的基本原理.15．简述氢火焰离子化检测器的基本结构和工作原理。

16．影响热导检测器灵敏度的主要因素有哪些？分别是如何影响的?17．为什么常用气固色谱分离永久性气体?18．对气相色谱的载体有哪些要求？19．试比较红色载体和白色载体的特点。

20．对气相色谱的固定液有哪些要求?21．固定液按极性大小如何分类?22．如何选择固定液？23．什么叫聚合物固定相？有何优点?24．柱温对分离有何影响?柱温的选择原则是什么?25．根据样品的沸点如何选择柱温、固定液用量和载体的种类?26．毛细管色谱柱与填充柱相比有何特点?27．为什么毛细管色谱系统要采用分流进样和尾吹装置?28．在下列情况下色谱峰形将会怎样变化？(1）进样速度慢；(2）由于汽化室温度低，样品不能瞬间汽化;(3)增加柱温；(4）增大载气流速;(5)增加柱长；（6）固定相颗粒变粗。