布病病原学及血清学咸阳.

双相血培养瓶培养方法
1.将瓶子水平放置用肉汤冲洗琼脂5-10分钟以接种琼脂； 2.37℃直立培养。每隔一天观察一次结果，如未长菌，可
通过冲洗再接种一次。30天未出菌，可定为阴性，其血培 养瓶经高压灭菌处理；如长菌，4℃冰箱保存。 3.培养后观察肉汤和琼脂：出现下列一种或更多现象者为 阳性结果： 琼脂上：出现菌落或产生气体。 肉汤中：出现浑浊、沉淀或溶血。
2.1.2 双相血培养瓶
采集对象：对急性期和慢性活动 期病人未用药前进行血液采集 。 采样方法： 1.使培养瓶恢复至室温、编号； 2. 去掉培养瓶的保护帽，用酒精或碘消毒瓶塞； 3. 用注射器无菌静脉穿刺采集血液5mL，注入血培养瓶； 4. 再次消毒瓶塞和保护帽，盖好保护帽； 5. 从一侧到一侧倾斜培养瓶数次，混匀血液和肉汤。
PFGE等
羊种布氏菌噬菌体裂解
PCR检测
AMOS-PCR检测方法 提取DNA——PCR扩增——电泳
2.2 血清学检验
3.2.1 诊断标准
（1）流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物、畜产品、

布氏菌培养物等或生活在疫区内的居民
（2）临床症状和体征
（3）实验室检查：病原菌分离、试管凝集试验、
2013年，我省分离出3株布鲁氏菌，2014年共分离出20
株（绥德7、延川3、定边2、子长2、旬阳2、宝塔区延长 宜川麟游各1株）；1991年以前流行优势种型为羊1、2型， 1996年后则为羊1、3型 。
陕西省是以羊型菌为主，牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫 区，流行优势种随时间推移发生了变化。
形态和培养特征
布氏菌属细菌是一组微小的球杆状革兰氏阴性菌， 可被所有的碱性染料所着色，吉姆萨染色成紫红色； 无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。
营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最 适温度为37℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-
30天（双相培养基）才能长出菌落。
布氏菌对物理、化学因子的抵抗力
布氏菌的毒力

从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次
之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。

由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临床表
现也不完全一样。羊种布鲁氏菌患者中毒症状严重，
多有典型的发烧、多汗、乏力、关节肿痛、肝脾及
睾丸肿大等急性症状。
布病发病过程
布氏菌的实验室检验
23.1 细菌学检验
陕西省疾病预防控制中心
布氏菌概述
布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属 （Brucella）的细菌侵入机体，引起的人畜共患传染－ 变态反应性传染病，简称布病,是《中华人民共和国传 染病防治法》规定报告的乙类传染病。
1887年英国军医Bruce首先从死于“马耳他热”的英 国士兵的脾脏中分离出羊种布氏菌。
2008年，德国和捷克科学家报道了一个新布鲁氏菌种-田 鼠种布鲁氏菌(B.microti)。
2010年德国人Holger C.Scholz等从具有临床症状的乳房 移植感染的71岁病人身上分离到一株布氏菌，鉴定结果 为一个布鲁氏菌新种，为湖浪种(B.inopinata)。目前尚 未得到布鲁氏菌分类小组委员会承认。
了绵羊附睾种布氏菌、沙林鼠种布氏菌和犬种布氏菌。
1994年，Foster在英国从海洋哺乳动物体内分离到布 鲁氏菌，后来在地中海、南美、澳洲等世界许多地方 的海洋哺乳动物体内分离到布鲁氏菌，表明其分布是 世界性的。与其它布鲁氏菌种一样，也能引起动物流 产，并可感染人。根据其表型和分子生物学特性分成2 个种，鲸种布鲁氏菌(B.ceti)和鳍种布鲁氏菌 (B.pinnipedialis)
1994年分离出的2个海洋种和2008年分离的田鼠种 已列入分类，即目前为9个生物种，22个生物型。
生物种
生物型
常见宿主
羊种 牛种 猪种 沙林鼠种 绵羊附睾种 犬种 鲸种 鳍种 田鼠种 【9种】
1~3 1~7,9 1~5 1 1 1 1 1 1 【22型】
绵羊和山羊 牛
猪、野兔、鹿、鼠类 沙林鼠 绵羊 犬 海洋哺乳动物 海洋哺乳动物 豚鼠
县镇村组
来源及编号：绥德县1号 姓名：张三 采血时间：2015年7月1日
布氏菌特异的油滴样菌落
布氏琼脂布鲁氏菌菌落
血平皿 布氏菌菌落
布氏菌革兰氏染色
3.1.4 布氏菌菌株鉴定
布氏菌诊断血清凝集试验 H2S产生试验，CO2培养依赖试验 染料抑菌试验(硫堇，碱性复红) 单项特异性血清A、M凝集试验 粗糙型（R）血清凝集试验 噬菌体裂解试验 PCR检测 其他方法检测 生化测定 脂肪酸分析

补体结合试验、抗人球蛋白试验

具备（1）、（2）和（3）项中的任何一项检查阳性

即可确定为布病病人
3.2.2 布氏菌的血清学诊断方法
虎红玻片凝集试验 (RBPT) 试管凝集试验 (SAT) 抗球蛋白试验 (Coomb`s试验) 含巯基化物处理血清后的凝集试验（2ME 试验） 补体结合试验 (CFT) 乳环凝集试验 (MRT) 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 金标法 荧光偏振方法 （FPA）
1887年，英国军医Bruce从马耳他岛死于“马耳他热” 的士兵脾脏中首次分离到羊种布氏菌；1897年丹麦学者和 1914年美国学者又分别从流产母牛的羊水和猪流产胎儿中 分别分离到牛种布氏菌和猪种布氏菌。

最近半个世纪以来，在布病诊断、免疫、预防和治疗
等方面都有较深的发展，1953、1956和1966年又分别发现
实验室要求：

布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来
说为第二类病原微生物。布氏菌的分离培养要在生
物安全二级以上实验室中进行。
样品采集
Leabharlann Baidu
培养分离
菌株鉴定
种型鉴定
2.1.1 布氏菌培养检查材料：
人或动物的全血 动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、胃内容物） 动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等 新鲜乳汁
不同环境中的抵抗能力
环境名称 水 土 粪 尿
畜舍及周围 衣服
生存时间 5 天～4 个月 4 天～4 个月 8 天～4 个月 4 天～5 个月以上 4 天～5 个月以上
30～80 天
环境名称 腌肉 皮毛
鲜牛奶 酸奶 奶酪 冻肉
生存时间 20 天～45 天 45 天～4 个月 2 天～18 个月
2～30 天 25～67 天 14～47 天