单粒蓖麻种子毒蛋白含量测定方法的研究

蓖麻不同部位叶柄毒蛋白含量的测定赵志强;黄凤兰;孙振娜;罗蕊;雷雪;王婕;王文跃;陈永胜【期刊名称】《内蒙古农业科技》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】试验以蓖麻为研究对象,优化从叶柄中提取蛋白的过程,利用BCA试剂盒、UVwin5紫外软件V5.1.0、BandScan蛋白定量分析软件相结合的方法对蓖麻组培苗不同部位的叶柄中毒蛋白的含量进行测定,为研究蓖麻毒蛋白在蓖麻组织培养植株不同部位的分布情况奠定基础.结果表明:从总体上看,蓖麻叶柄中的毒蛋白的含量与叶位呈正比,即随着叶位的升高,叶柄中的毒蛋白含量增加.【总页数】4页(P26-28,33)【作者】赵志强;黄凤兰;孙振娜;罗蕊;雷雪;王婕;王文跃;陈永胜【作者单位】内蒙古民族大学农学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;青岛农业大学生命科学学院,山东青岛266109;内蒙古民族大学农学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学农学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心,内蒙古通辽028000【正文语种】中文【中图分类】S565.6【相关文献】1.毒蛋白 A 链基因被共抑制的蓖麻种子中毒蛋白含量的测定 [J], 黄凤兰;雷雪;赵永;李国瑞;罗蕊;陈晓凤;李跃;孙华军2.不同发育时间蓖麻鲜种子中毒蛋白含量的测定 [J], 黄凤兰;雷雪;朱国立;罗蕊;陈晓凤;赵永;李跃;孙华军3.蓖麻毒蛋白在蓖麻组培苗不同部位叶片中含量的测定 [J], 罗蕊;赵志强;黄凤兰;陈永胜;雷雪;尚雨丝;王超;邱靖;王婕4.单粒蓖麻种子毒蛋白含量测定方法的研究 [J], 雷雪;黄凤兰;孟凡娟;罗蕊;陈晓凤;赵永;李跃;孙华军5.蓖麻不同部位蓖麻碱的含量及其杀虫活性 [J], 刘进进;袁慧慧;王金威;潘铁英;蓝闽波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蓖麻中毒与检测方法的研究进展常春;焦媛媛;方琪;傅强【摘要】Objective To provide a reference for further research of ricinine and ricin s rapid detection and their application in the medical field. Methods Papers, monographs, etc. published in recent years on the extraction and detection of the ricinine and ricin were reviewed and analyzed retrospectively. Results This paper briefly reviewed the physico chemical properties of ricinine and ri cin which are the toxic factors of castor, and methods for their extraction, purification and detection. Conclusion It is quite necessa ry to establish a rapid and effective detection method for ricin poisoning rescue.%目的为进一步研究蓖麻中毒性成分的快检方法及在医药领域中的应用提供参考.方法查阅近年来公开发表的论文、专著等资料,对蓖麻碱和蓖麻毒蛋白的提取检测进行概述.结果明确了蓖麻中毒性成分蓖麻碱和蓖麻毒蛋白的理化性质及提取、纯化方法,总结了这2种毒性物质的提取、分离和检测方法.结论建立快速有效的检测鉴定方法对蓖麻中毒的解救是十分必要的.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2012(027)004【总页数】4页(P394-397)【关键词】蓖麻碱;蓖麻毒蛋白;蓖麻中毒;提取;检测【作者】常春;焦媛媛;方琪;傅强【作者单位】西安交通大学医学院药学系,西安,710061;西安交通大学医学院药学系,西安,710061;西安交通大学医学院药学系,西安,710061;西安交通大学医学院药学系,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R282蓖麻（castor）为大戟科蓖麻属栽培种（Euphorbiaceae ricinus Communis L．），为一年或多年生草本植物，其根、茎、叶、果实在有关行业或领域均有相应的应用。

蓖麻毒蛋白的提取及应用研究熊冬梅;苏小军;熊兴耀【摘要】蓖麻毒蛋白是具有强烈细胞毒性的天然毒素之一,其毒性作用在生物农药、医学抗癌、细胞内转运机理研究、生物防恐等方面得到广泛的应用.简述了蓖麻毒蛋白的性质、结构及作用机理,并对蓖麻毒蛋白不同提取方法进行了比较,对其应用研究进行了介绍.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2013(030)012【总页数】4页(P59-62)【关键词】蓖麻毒蛋白;毒性机理;提取;应用【作者】熊冬梅;苏小军;熊兴耀【作者单位】湖南农业大学湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室,湖南长沙410128;湖南农业大学湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室,湖南长沙410128;湖南农业大学湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室,湖南长沙410128;中国农科院蔬菜花卉研究所,北京100081【正文语种】中文【中图分类】R284.2蓖麻毒蛋白来源于大戟科植物蓖麻，在蓖麻籽中的含量为1%～5%［1］。

蓖麻毒蛋白由两条肽链组成，属于二型核糖体失活蛋白，具有天然植物毒素典型的半毒素结构及强烈的细胞毒性，从而造就了蓖麻毒蛋白的双面性，一方面赋予它在医学抗癌、生物农药、细胞内转运机理研究等方面的潜在作用和优势；另一方面因难以察觉且快速致命的强烈毒性使其成为恐怖袭击者的武器，威胁人类生命安全。

随着蓖麻毒蛋白在医学、农业、军事防控等领域应用的拓展，研究者们对高纯度、高活性的蓖麻毒蛋白的需求进一步增多，因此获得高效提取蓖麻毒蛋白的方法具有重要意义。

1 蓖麻毒蛋白的性质、结构及作用机理蓖麻毒蛋白为无味白色粉末或结晶型固体，不溶于有机溶剂，易溶于稀酸或盐类水溶液，能在饱和硫酸铵溶液中沉淀析出，对热、酸、碱比较稳定，干热处理不易变性［2］。

蓖麻毒蛋白是由效应链RTA和结合链RTB经二硫键结合而成的异源二聚体植物蛋白毒素，RTA由263个氨基酸残基组成，分子量32 000；RTB由259个氨基酸残基组成，分子量34 000。

蓖麻毒蛋白的提取及分析第18卷,第4期2001年7月光谱实验室ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryVo1.18,No.4July,2001蓖麻毒蛋白的提取及分析高宝岩?(天津师范大学化学与生盎科学学院天津甫卫章路241号300074)摘要本文报道了蓖麻毒蛋白的提取和分析,采用琼脂糖(Sepherose4B)分离和纯化,研究了高效蔽相色谱法同时测定蓖麻毒蛋白和蓖麻碱,结果令人满意.关键词蓖麻毒蛋白,蓖麻碱,高效液相色谱仪,琼脂错.中图分类号:0657.72文献标识码:B文章编号:]004—8138(200])04.0429—03 1前言蓖麻是一种重要的经济作物,蓖麻籽是蓖麻成熟的果实,含有45左右的油,其油可作为重要的化工原料,生产高级润滑油,油漆,表面话性剂等.脱脂后的饼粕含有35N左右的蛋白质,但其中含有少量蓖麻毒素,使这部分蛋白质的利用受到限制,如能将蓖麻毒素除去,则可成为饲料工业中蛋白质的重要来源.蓖麻毒蛋白就毒性而言对蛋白质的利用有害,但又可用于研制对肿瘤细胞具有强烈杀伤导向药物,这又使蓖麻毒蛋白找到用武之地,也将使蓖麻这种重要的经济作物得到充分综合利用.然而,所有这些重要的应用离不开对蓖麻毒素的分析.蓖麻毒素主要包括蓖麻毒蛋白,蓖麻碱,过敏性物质.其中蓖麻毒蛋白属于剧毒,蓖麻碱属于中等毒性生物碱,过敏性物质毒性较小,因此对毒素的测定主要着眼于前两种.蓖麻毒素分析目前尚缺乏简单,快速,准确的定量分析方法.通用的方法仅达目视比较半定量分析”,还不适用于工业化规模的产品控制分析,更缺乏同时检出能力.为此,我们研究了使用高效液相色谱法同时测定蓖麻毒蛋白和蓖麻碱,效果令人满意.2实验部分2.1仪器与试剂LC一6A高效液相色谱议(日本岛津公司);超速离心机(美国贝克曼公司),食品粉碎机(天津).乙腈(色谱纯),醋酸(分析纯)~NaAc(分析纯);NaCI(分析纯);D一半乳糖(分析纯);亚沸重蒸蒸馏水;Sepharose4B(购自天津华美分公司).2.2蓖麻毒蛋白的纯化2.2.1粗蓖麻毒蛋白的提取适量去壳蓖麻籽和石油醚加人到食品粉碎机中进行粉碎脱脂,过滤除去石油醚,用乙醚洗涤滤饼,所得脱脂蓖麻粉置于用醋酸调整pH=3.8的醋酸水溶液中浸取12h,所得上清液对蒸馏水透析?联系人,电话:(0Z2)24452577(宅),(022)23540284(办)作者简介:高~(1942--)?男,天律甫人.天津师范大学副教授,从事仪器分析教学和研究工作收稿日期;Z000-12-05光谱宴验室第18卷24h,然后对pH一6.5磷酸缓冲溶液透析24h,透析液经25000r/rain超速离心30rain,上清液为蓖麻毒蛋白粗提液.2.2.2蓖麻毒蛋白的枉层析分离纯化蓖麻毒蛋白粗提液的纯化参考文献[2]进行.50mL酸式滴定管内装Sepharose4B,用10mIla_o|/LpH6.5的磷酸缓冲溶液平衡,然后将粗毒蛋白溶液柱头进样,以0.25m[/rain流速缓缓流过层析柱,再用10mmol/LpH6.5的磷酸缓冲溶液洗脱杂蛋白,洗尽杂蛋白的层析柱用lOmmol/IpH5.0HAc—NaAc缓冲溶液再次平衡,然后用含0.2mol/LD-半乳糖pH5.0HAc—NaAc缓冲溶液洗脱毒蛋白.每5mL收集一个试管,随时用紫外光谱仪测定吸光度,以吸光度对体积作出毒蛋白流出曲线,当洗尽毒蛋白后在洗脱液中再加入NaCI,使之浓度达0.14mmol/LNaCI,可洗脱出血凝集素2.3蓖麻碱的提取蓖麻碱的提取按文献[33进行.2.4高效液相色谱分析色谱条件色谱柱150×4.6mm,5m键合c.固定相,水,乙腈混合流动相,流速lmL/min,紫外检测器测定渡长280nm.3结果与讨论3.1纯化蓖麻毒蛋白流出曲线被亲和吸附在Sepharose4B层析柱上蓖麻毒蛋白用台0.Zmol/LD-半乳糖,lOmmol/LpH5.0HAc—NaAc缓冲溶液洗脱,流出曲线见图1中峰,洗尽毒蛋白后在洗脱液中加入NaCI,使含0.14mmol/LNaCI的洗脱液洗脱出血凝集素,见图1中6峰.3.2高效液相色谱分析结果纯化毒蛋白进样液相色谱流出曲线见图2中,纯化血凝集素进样液相色谱流出曲线见图图1sephrose4B层析柱上蓖麻毒蛋白和血凝集紊流出曲线2中b,毒蛋白粗提液进样液相色谱流出曲线见图2中c,蓖麻碱进样液相色谱流出曲线见图2中d.3.3讨论从图1中可以看出,毒蛋白粗提液经琼脂糖Sepharose4B分离可得纯品.经高效液相色谱分析(见图2中n),可以看出该流出曲线只有一个峰(保留时间I.97rnin),将图l6所分离的血凝集素进样也只流出一个单峰(见图2中6),保留时间1.446min.说明毒蛋白粗提液经Sepharose4B层析柱分离相当完全将毒蛋白粗提液直接进样(见图2中c)则出三个峰,分别是血凝集素,杂蛋白,蓖麻毒蛋白(保留值分别是?1996t21(4)-22一蹦-[.]张振华.应文斌,王庚诚.用琼脂糖亲和层析一步纯化蓖麻毒蛋白[刀.生轴化学,1989?5(6)486—490[3]高宝岩.霍建中,等蓖麻碱的提取及光谱研究[刀.克谱彝赣主?2000,17(i)8B一9O-ExtractionandAnalysisofRicinO203.0GAOBao-Yan(CollegeofCh~istryamtLif.Seienc~?Tianfinl~ormalUnivers~y,No-1Weijkalu’Ti~jin300074,PR?C/u’~)AbsttactWereportthemethodofextrationandanalysisofriein.Rieinwasbeenseparated andpurificatedbysepharose4B.Rieinandricinineweredeterminedsimultaneouslybyhighperf ormanceliquidchr0matography(HPLC)wjthsatisfactoryresults.KeywordsRicin,Ricinine,HighPerformanceLiquidChr0matogfaphy,Sepharose 4B.欢迎使用电子信箱为缩短出版周期,作者向本刊投稿.可将论文以纯文本文件(即后缀为TXT的文件),Word文件,北大方正小样文件等形式同时发送到如下5个电子信箱:(1)gpsysh@public.sti.a’cI(2)gpsys@f(3)gpsys81@’(4)gpss@.c;(5)gpsys81@hotmail-co rn?为避免电子邮件发生故障而延误收稿,请作者发了电子邮件后,要打电话通知编辑部?以便及时查询,电话(010)62183031.’光碍实验室)蝙辑部。

蓖麻毒蛋白的研究与应用
孙媚华;陈迁;宋光泉;刘勇;杜建军
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2009(36)9
【摘要】蓖麻毒蛋自(Ricin)是一种核糖体失活蛋白,由A、B两个肽链以二硫键共价相连接,其A链在B链的协助下,容易穿过细胞膜,破坏核蛋白体60S亚单位,抑制蛋白质的合成,导致细胞死亡.Ricin几乎对所有真核细胞具有很强的毒害作用,被认为是一种新型的很有希望的抗癌药物以及具有极大潜力的生物农药.Ricin能抑制昆虫的蛋白质合成,而植物自身能免受毒害,因此利用Ricin开发生物农药具有广阔前景.文章简述了Ricin的分离纯化方法、结构及性质,毒性作用机理,及其在医学,生物农药,军事等方面的应用.
【总页数】3页(P144-145,162)
【作者】孙媚华;陈迁;宋光泉;刘勇;杜建军
【作者单位】仲恺农业工程学院,广东,广州,510225;中国科学院,广州生物医药与健康研究院,广东,广州,510663;仲恺农业工程学院,广东,广州,510225;仲恺农业工程学院,广东,广州,510225;仲恺农业工程学院,广东,广州,510225
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.蓖麻毒蛋白免疫毒素的制备及其体外靶向抗肿瘤效应 [J], 陈海霞;陈祥胜;黄婧;祝香芝
2.抗CD71单抗与蓖麻毒蛋白A链免疫毒素的制备及其体外抗肝癌细胞效应的研究 [J], 申苏建;郑波;蔡振寨;徐昌隆;薛战雄
3.蓖麻毒蛋白作用的研究进展 [J], 聶伟;殷切;刘小华
4.蓖麻毒蛋白在细胞内的转运过程研究进展 [J],
5.蓖麻毒蛋白的研究与应用进展 [J], 陈志慧
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蓖麻种子毒蛋白抗癌活性及热稳定性的探讨张洪;敬永升;陈元;王聪;刘纯纯;郭书杰;李申;王富茹;王洪涛【期刊名称】《河南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(030)001【摘要】目的:了解蓖麻毒蛋白(Ricin)及从大戟科植物蓖麻种子中提取出来的一种核糖体失活蛋白的热稳定性和抗肿瘤活性.方珐:利用亲和层析的方法纯化蓖麻种子毒蛋白,并通过SDS-PAGE电泳和MTT染色法等方法检测其热稳定性、抗肿瘤性.结果:Ricin在37℃的缓冲液中保温60 h,没有明显的降解;能有效地杀死食管癌细胞EC109.结论:Ricin是有前途的蛋白类抗肿瘤药物.【总页数】4页(P47-50)【作者】张洪;敬永升;陈元;王聪;刘纯纯;郭书杰;李申;王富茹;王洪涛【作者单位】河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004;河南大学药学院分析化学实验室,河南,开封,475004;河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004;河南大学药学院分析化学实验室,河南,开封,475004;河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004;河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004;河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004;河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004;河南大学生命科学学院生物工程研究所,河南省重点学科动物转基因与细胞工程开放实验室,河南,开封,475004【正文语种】中文【中图分类】R285.6【相关文献】1.蓖麻毒蛋白的改性与抗癌活性 [J], 蒋旭红2.毒蛋白 A 链基因被共抑制的蓖麻种子中毒蛋白含量的测定 [J], 黄凤兰;雷雪;赵永;李国瑞;罗蕊;陈晓凤;李跃;孙华军3.不同发育时间蓖麻鲜种子中毒蛋白含量的测定 [J], 黄凤兰;雷雪;朱国立;罗蕊;陈晓凤;赵永;李跃;孙华军4.单粒蓖麻种子毒蛋白含量测定方法的研究 [J], 雷雪;黄凤兰;孟凡娟;罗蕊;陈晓凤;赵永;李跃;孙华军5.蓖麻种子毒蛋白的高效凝胶过滤色谱分析 [J], 陆益民;宋光泉;贺铁山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蓖麻毒蛋白的研究进展
苏雅拉图;黄凤兰;张继星;李国瑞;呼和;吴俊华
【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2010(025)004
【摘要】蓖麻毒蛋白是从蓖麻的种子中提取的一种植物糖蛋白,是迄今为止所知天然毒素中最毒的一种.对蓖麻毒蛋白的结构、氨基酸组成、作用机理以及抗肿瘤、生物农药等多个方面的研究进展进行简述.
【总页数】4页(P419-422)
【作者】苏雅拉图;黄凤兰;张继星;李国瑞;呼和;吴俊华
【作者单位】内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心,内蒙古,通辽,028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心,内蒙古,通辽,028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心,内蒙古,通辽,028000;内蒙古民族大学医学院,内蒙古,通辽,028000;中共通辽市科尔沁区委宣传部,内蒙古,通辽,028000
【正文语种】中文
【中图分类】TQ93
【相关文献】
1.蓖麻毒蛋白研究进展 [J], 赵丹;谢达平
2.蓖麻毒蛋白研究进展 [J], 李国瑞;陈永胜;黄凤兰;萨日娜;姚远
3.蓖麻毒蛋白作用的研究进展 [J], 聶伟;殷切;刘小华
4.蓖麻毒蛋白在细胞内的转运过程研究进展 [J],
5.蓖麻毒蛋白的研究进展 [J], 李楠;黎继烈;朱晓媛
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蓖麻子毒蛋白结构蓖麻子毒蛋白，也称为“蓖麻素蛋白质”（Ricin Protein），是一种极具毒性的天然毒素。

蓖麻子毒蛋白主要存在于蓖麻（Ricinus communis）的种子中，尤其是在种子的胚乳中含量最高。

蓖麻子是一种广泛分布于全球的植物，其种子含有高达25％蓖麻毒蛋白。

这种蛋白质是蓖麻子种子中最重要的毒性成分之一。

蓖麻子毒蛋白的结构特点是由两个亚单位组成的二聚体。

每个亚单位包含两个功能相近但结构不同的部分，它们分别是A链（A chain）和B链（B chain）。

A链是蓖麻子毒蛋白的活性链，其主要负责对细胞进行毒杀作用；B链则是蓖麻子毒蛋白的结合链，主要负责与细胞膜上的受体结合，使得毒素能够进入细胞。

A链是一条由267个氨基酸组成的多肽链，它的分子量约为32kDa（千道尔顿）。

A链含有一个油脂酶（RTA）活性中心，能够水解核糖体RNA的第一个链（即A链）。

蓖麻子毒蛋白的毒性主要来自于A链对核糖体的油脂酶活性，它能够剪切细胞核糖体RNA，导致蛋白质合成终止和细胞死亡。

B链是一条由262个氨基酸组成的多肽链，它的分子量约为34 kDa。

B链主要负责与细胞膜上的受体结合，使得毒蛋白能够进入细胞。

蓖麻子毒蛋白的B链结构为一个四重螺旋状结构，它与细胞膜上的受体特异性地结合，使得整个毒蛋白能够被细胞“吞噬”进入细胞质。

在生物体内，蓖麻子毒蛋白通常是作为一种前毒素存在的，即一个非活性的原始形态。

在人体内，原始的蓖麻毒蛋白被转化为活性的蛋白质（带有毒性的A链和结合B链）是通过氨基酸蛋白酶进行的。

这种转化过程通常发生在胃酸的环境下，尤其是当蓖麻子被误食进入胃肠道时。

当蓖麻子毒蛋白进入人体细胞后，B链能够结合到细胞表面特定的受体上。

这种受体通常存在于许多不同类型的细胞上，因此蓖麻子毒蛋白可以影响到多种细胞类型。

一旦与细胞膜上的受体结合，整个毒蛋白被细胞“吞噬”进入细胞质。

在细胞质中，蓖麻子毒蛋白A链的活性被释放出来，开始剪切核糖体RNA，以阻断蛋白质的合成。