几种提取黄瓜果实中超氧化物歧化酶方法的比较

sod在食品工业中的应用及提取工艺
SOD（超氧化物歧化酶）是一种重要的酶类物质，具有强大的抗氧化作用，可以有效地清除体内自由基，保护细胞不受氧化损伤。

在食品工业中，SOD主要应用于保健食品、功能性食品以及肉制品等方面，其应用可以增强食品的抗氧化能力，延长食品的保质期。

SOD的提取工艺主要有以下几种方法：
1.超声波法提取：将含有SOD的物质加入适量的水中，利用超声波的作用将SOD 分离出来。

2.酸解法提取：将含有SOD的物质加入酸性溶液中，利用酸性条件下SOD的不稳定性，将SOD进行分离。

3.酶解法提取：将含有SOD的物质加入酶解液中，通过酶的作用将SOD分离出来。

4.离子交换法提取：利用离子交换树脂对含有SOD的物质进行分离，从而得到纯度较高的SOD。

目前，在食品工业中常用的SOD提取方法是酸解法和酶解法，这两种方法提取的SOD纯度较高，且产量较大，适用于商业生产。

生化技术综合实验报告设计（论文）题目植物超氧化物歧化酶(SOD)的提取2012年 6 月摘要超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase简称SOD）是一种新型酶制剂，别名肝蛋白、奥谷蛋白。

是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。

本次实验主要是从黄瓜中粗提SOD，采用热变性沉淀法、等电点沉淀法、45%，90%，100%硫酸铵分级沉淀法、DEAE-纤维素离子交换色谱来去除杂蛋白，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测所提蛋白的组分，以及鉴定是否含有SOD。

结果说明，我们小组提到的粗酶液中含有SOD和很多杂蛋白。

关键词：植物超氧化物歧化酶（SOD）；SOD提取方法；SDS-PAGE一、实验目的意义：本实验是从黄瓜中粗提SOD,因为SOD是人体内的垃圾清道夫，它被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。

SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。

并且通过多种方法运用到实际中[1]。

在实验操作的过程当中，进一步熟悉并掌握热变性沉淀法的基本原理和操作、硫酸铵分级沉淀法的基本原理和操作、等电点沉淀法的基本原理和操作；掌握细胞破碎技术及选择破碎方法的依据；回顾离心机的使用方法，并会正确操作；掌握透析技术以及检测透析效果的方法和步骤；掌握离子交换色谱技术，并学会操作DEAE-纤维素离子交换色谱；了解AKTA purifier蛋白纯化，分离系统的原理和操作方法；掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的原理与操作步骤；标准蛋白Marker测定样品的组分原理及鉴定。

二．实验原理:1.1热变性沉淀法的基本原理：热变性沉淀法主要是利用生物大分子对热的稳定性不同，加热破坏某些组分，而保留另一些组分。

SOD是一种热稳定性很好的酶，当温度低于80℃时，短时间的热处理，酶活力不会有明显的变化。

而一般的杂蛋白在高于55℃就易变性沉淀[3]，则我们可以采用热变性沉淀法来去除杂蛋白。

超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，简称SOD）的测定方法2009年12月08日 16:17法适用于以各类鲜活的动植物组织器官及初加工品（如生鱼片、动物血等初加工肉制品）、乳制品、各类水果蔬菜、果汁等食品中超氧化物歧化酶活性的测定。

超氧化物歧化酶是催化以下反应的金属酶，测酶活方法很多，本文介绍氮蓝四唑法与连苯三酚自氧化法。

（一）氮蓝四唑法1. 方法提要在电子供体如甲硫氨酸存在下，核黄素受光激发，与电子供体反应被还原。

在氧气中，还原的核黄素与氧化反应产生，将无色（或微黄）的氮蓝四唑还原为蓝色的不溶性僭，SOD通过催化歧化反应，生成O2与H2O2，从而抑制蓝色形成。

按抑制蓝色特形成的50%为一酶活单位。

酶活力越高，抑制50%蓝色形成所需酶量越少。

2. 仪器荧光灯管。

离心机。

分光光度计。

pH计。

3. 试剂（1）磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O），磷酸二氢钾（KH2PO4），甲硫氨酸（Met），氮蓝四唑（NBT），核黄素，乙二胺四乙酸（EDTA），以上试剂均为分析纯级；所用水为离子水或同等纯度蒸馏水。

（2）pH7.8, 5.0×10-2mol/L的K2HPO4- KH2PO4缓冲液（于冰箱中保存）。

4. 测定步骤（1）酶液的制备：称取5~10g样品，加预先在冰箱中放置的上述K2HPO4- KH2PO4缓冲液，缓冲液的量为所用样品的10倍以上，在4℃条件下或冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤，滤液经4000r/min离心20min，取上清液用于酶活测定。

（2）酶反应酬体系液的制备：取上述K2HPO4- KH2PO4缓冲液30ml，依次溶入Met，NBT，核黄素与EDTA，使它们的浓度分别为1.3×10-2mol/L, 6.3×10-5mol/L, 1.3×10-6mol/L与1×10-4mol/L，放冰箱中避光保存。

（3）测酶活在暗光下，取上述酶反应体系液3mL，移入试管中，试管放在一反应小室中，反应小室壁上贴锡箔纸，应将每个试管摆放在照光后所接受光强一致的位置。

黄瓜基因组DNA的提取方法筛选与优化研究黄瓜基因组DNA的提取方法繁多，不同提取方法具有不同的优劣点。

本节将介绍常见的几种黄瓜DNA提取方法的优缺点：（1）CTAB法CTAB法是常用的植物DNA提取方法之一，具有操作简单、提取效果稳定等优点。

在提取黄瓜基因组DNA时，可通过调节CTAB浓度、NaCl浓度、乙醇沉淀时间等参数的方法，使得提取得到的黄瓜基因组DNA纯度高、量大、质好。

然而，该方法需要处理大量植物样本时，操作起来较为费时且成本较高。

（2）SDS法（3）捕获柱法针对上述提取方法的优缺点，研究人员还需对其进行优化研究。

本节将着重介绍对黄瓜DNA提取过程中的几个关键环节的优化研究：（1）提取物预处理在进行黄瓜DNA提取前，通常需要对提取物进行一定的预处理操作，以达到更好的提取效果。

比如，在CTAB法中，可预处理植物样品，削减样品中的多糖、脂蛋白等有机物，从而避免在DNA提取过程中造成的干扰。

（2）电泳分离在黄瓜DNA提取过程中，提取物的离心和乙醇沉淀等操作容易产生分离不彻、沉淀不干净等问题，从而影响DNA提取效率。

因此，一定程度上，可通过电泳分离的方法来提高提取物的纯度。

（3）酶切消化在常规DNA提取过程中，可能存在RNA、RNA酶等杂质，进而影响DNA的质量。

因此，在进行DNA酶切消化时，一些研究者考虑将RNase酶加入样品中，先行消除RNA等RNA酶，再进行DNA消化等后续步骤，以此提高DNA质量。

3.实验流程示意为更直观地展示黄瓜DNA提取方法的筛选与优化研究，下面给出一个简化的黄瓜DNA 提取实验流程示意，不同方法和步骤的选择根据实验要求和设备情况进行取舍：（1）准备试剂和设备，包括CTAB、NaCl、RNase等试剂，离心管、明胶等容器，理化平衡器、离心机等设备。

（2）取一部分黄瓜幼苗根茎叶为样品，切碎后进行预处理，如加醋酸、氮气气化等。

（3）根据不同方法的要求，将样品加入含有不同浓度试剂的体系中，如CTAB、SDS等，进行下一步操作。

实验六黄瓜叶片组织超氧化物酶活性的测定一、实验目的与要求用氮蓝四唑法测定黄瓜叶片中SOD的含量二、原理SOD普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。

SOD的活性测定是根据光照时，体系中产生氧自由基使硝基四唑蓝还原成蓝色（在560nm 处有吸收峰），而超氧化物歧化酶作为氧自由基的清除剂可抑制此反应。

一个酶活单位定义为将硝基四唑蓝的还原抑制到对照一半时所需的酶量。

三、植物材料、仪器设备及试剂1.植物材料：15盆（3组完全液，3组100mg/L铅处理，3组300mg/L铅处理，3组500mg/L铅处理，3组700mg/L铅处理）黄瓜叶片2.仪器设备：冰箱，光照箱，低温离心机，电子天平，分光光度计，试管架，普通玻璃试管，移液枪，剪刀，离心管，研钵，吸球，洗瓶等3.试剂（1）提取介质——50mmol/L(PH7.8)磷酸缓冲液（内含1%不可溶聚乙烯吡咯烷酮）（2）反应介质——50mmol.L（PH7.8）磷酸缓冲液（内含77.12μmol/L硝基四唑蓝，0.1mmol/L EDTA,13.37mmol/L蛋氨酸）（3）80.2μmol/L核黄素溶液：用含有0.1mmol/L EDTA的50mmol/L(PH2.8)的磷酸缓冲液配制。

（4）SOD反应混合液：390ml反应介质，加入10 ml 80.2μmol/L核黄素溶液。

四、实验步骤及注意事项1.酶液提取：将黄瓜叶片剪细——混合均匀——称0.5g（用保鲜膜包好放入冰箱中预冻1小时）——置于预冻的钵体中，加入2ml冰冷的0.05mol/LPH7.8磷酸缓冲液，研磨均匀后，将匀浆倒入聚乙烯离心管中——低温（0~4℃）下，4800xg离心10min——上清液即为酶液，将上清液倒入小青霉瓶，低温下贮存，供SOD活性测定。

2.SOD活性测定：取23支干燥的，玻璃质量一致的普通玻璃试管，1号参比管加入40μL酶液，4mlSOD反应混合液。

2号对照管，加入40μL提取介质，4mLSOD反应混合液。

专利名称：一种从红树莓果实中提取超氧化物歧化酶的方法专利类型：发明专利
发明人：张惠文,吕英杰,李旭,张成刚
申请号：CN200810012460.0
申请日：20080723
公开号：CN101633918A
公开日：
20100127
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物技术领域，特别涉及利用生物技术从红树莓果实中提取超氧化物歧化酶(SOD)的方法。

具体为以红树莓果实为原料，经抽提、盐析、柱层析和金属螯合亲和层析，制备出稳定的高活性的SOD。

本发明所述红树莓果实中SOD的提取工艺，具有工艺简单、成本低、提取率高、对SOD产品活性损伤程度小、无环境污染且适合工厂化生产等特点。

应用该方法提取的SOD具有活性高和稳定性好等特点，在医药、保健品及化妆品工业中具有巨大的应用潜力。

申请人：中国科学院沈阳应用生态研究所
地址：110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路72号
国籍：CN
代理机构：沈阳科苑专利商标代理有限公司
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一种从植物茎叶中提取超氧化物歧化酶的方法超氧化物歧化酶（SOD）是一种重要的抗氧化酶，可以有效地降低保护细胞免受自由基损伤的能力。

它可以在生物体内形成一种“天然抗氧化剂”的防护网，可以充分发挥其保护活性以防止氧化反应引起的细胞损伤。

因此，SOD的研究受到了抗衰老、预防疾病和延长寿命等诸多领域的关注。

目前SOD已被广泛用于医药、食品、农药、护肤品等诸多产品中。

然而，如何从植物中安全有效地提取SOD仍然是一个考验研究者的问题。

一般来说，植物中的SOD均体现在植物的茎和叶中，但它们本身所含的抗氧化物质也比较多，这使得其他抗氧化物质和SOD之间的差异难以体现。

因此，有必要研究一种能够有效提取植物茎叶中SOD的方法。

本文提出了一种用于从植物茎叶中提取SOD的有效方法，包括植物茎叶的采集、粉碎、提取、溶解、浓缩、纯化等步骤。

首先，采集新鲜的植物茎叶，将其粉碎，用热水提取，以获得SOD的初步提取物；然后，将提取物溶解在适当的浓缩剂中，通过层析或蒸馏进行浓缩，以获得更高浓度的SOD；最后，采用不同类型色谱以及离子交换树脂、吸附树脂等进行纯化，以实现植物茎叶中SOD的有效提取。

已有的实验结果表明，本研究方法的提取效率可达到90%以上，而且抗氧化性能比其他抗氧化物质更强，具有更高的安全性。

此外，本研究还从植物茎叶中提取了其他的抗氧化物质，例如维生素C、多酚、花青素等，具有较好的抗氧化效果。

总之，本文提出的一种从植物茎叶中提取超氧化物歧化酶的方法不仅提取效率高，而且抗氧化性也很强，在保护细胞免受自由基损伤方面具有重要意义。

但是，本研究仍有一定局限性，例如植物品种和区域等因素影响植物茎叶中SOD的含量。

因此，未来还需要针对不同植物品种和不同地区进行进一步的研究。

综上所述，本文提出的一种从植物茎叶中提取超氧化物歧化酶的方法具有较高的抗氧化性和提取效率，可有效降低保护细胞免受自由基损伤的能力，具有重要的实际意义。

从植物中提取超氧化物歧化酶的方场下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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一种从植物茎叶中提取超氧化物歧化酶的方法超氧化物歧化酶（SOD）是一种抗氧化酶，它可以有效地降低有害的单氧自由基的水平，从而维护植物的生长和发育。

由于SOD对植物的健康和发育具有重要的影响，因此提取SOD是一个重要的任务。

本文旨在介绍一种从植物茎叶中提取SOD的方法。

首先，需要准备一些植物用于提取超氧化物歧化酶。

为减少污染，最好选择一种有着优良品质的植物。

然后，要准备一些处理植物样本的试剂和仪器，并建立一个无菌实验室。

接下来，将准备好的植物样本放入一个容器中，并用适量的生理盐水提取植物的提取物。

然后，将植物提取物加入一个柱子中，并用生物膜吸附超氧化物歧化酶。

最后，用适当的洗脱液洗脱，收集洗脱液中的超氧化物歧化酶，分离并浓缩，以获得高质量的SOD产品。

超氧化物歧化酶的提取技术不仅有助于处理植物样品，同时也实现了SOD的纯化。

这种提取技术不仅可以有效地提取SOD，同时也有助于检测和分析SOD的生物活性。

此外，这种提取技术还可以实现超氧化物歧化酶的质量控制，以保证SOD产品的质量。

一种从植物茎叶中提取超氧化物歧化酶的方法可以有效地提取有效的SOD，并且易于操作和控制，从而满足植物的生长和发育需要。

因此，植物茎叶提取超氧化物歧化酶的技术不仅可以提高提取效率，而且还可以更有效地利用植物资源，从而有助于植物的健康和生长。

总之，一种从植物茎叶中提取超氧化物歧化酶的方法是一种简单、可靠的技术，它既可以提取SOD，又可以分离和浓缩SOD，以获得高质量的SOD产品。

此外，它还可以有效地提高植物生长和发育的效率，从而增加植物的健康和发育。

因此，植物茎叶提取超氧化物歧化酶的技术可以为植物的健康和发育做出贡献。

氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性一、实验目的1、了解氮蓝四唑（NBT）法测定植物体内超氧化物歧化酶（SOD）活性的基本原理。

2、掌握氮蓝四唑（NBT）法测定植物体内超氧化物歧化酶（SOD）活性的基本操作方法。

二、实验原理超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。

本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。

在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大吸收。

而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制了甲腙的形成。

于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。

据此可以计算出酶活性大小。

三、材料、仪器设备及试剂（一）材料水稻或小麦等植物叶片。

（二）仪器设备高速台式离心机，分光光度计，微量进样器，荧光灯（反应试管处照度为4000Lx），试管或指形管数支。

（三）试剂（1）0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）。

91.5ml0.05MNa2HPO4+8.5ml0.05M NaH2PO4 。

（2）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。

（3）750mol/L氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。

氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性（4）100mol/LEDTA-Na2溶液：称取0.03721g EDTA-Na2，用磷酸缓冲液定容至1000ml。

（5）20 mol/L核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml，避光保存。

四、实验步骤1、酶液提取取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.52g于预冷的研钵中，加1ml预冷的磷酸缓液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为4ml。

黄瓜化学成分的提取与研究
黄瓜作为夏季美食，常常被消费者们喜爱，而其中维生素、矿物质和黄瓜化学成分更是受到人们的广泛关注。

比较研究根据不同物性条件来提取不同成分，可以帮助我们了解黄瓜中化学成分的复杂性及具体组成情况。

黄瓜化学成分的提取有多种方法，其中热溶剂抽提是其中一种最常见的方法。

这种方法的做法是将所提取的物质先调整为某一物性条件，采用溶剂抽取的方法进行提取。

一般而言，物质要先调整为热量低、高比重、低溶解度和低渗透率。

然后可以采用一定溶剂抽取指定物质，并将其分离出来。

此外，也可以采用冷凝法或液相色谱分离来提取黄瓜化学成分。

其原理主要是将物质溶于某种溶剂，利用溶剂的冷却后使物质凝而成固，然后按照物质熔点不同或者结晶条件来进行提取与收集。

而在做液相色谱的时候，通常使用液体为介质和惰性气体作为柱内混合气体，利用色谱法把不同成分之间的区别发挥到极致，进行精确提取，以较好地实现成分分离。

提取黄瓜化学成分之后，还要对其进行详细的研究和分析，以获取化学成分的具体含量数据。

在含量分析上，可以采用质谱仪、气相色谱仪、热重分析仪、X射线衍射仪等多项仪器对黄瓜中化学成分的含量进行准确测定和分析，从而得出有效数据。

黄瓜中化学成分的提取与研究，不仅可以帮助人们加深对黄瓜的认知，也为今后对黄瓜食品的开发和加工提供了科学依据，让美食中的黄瓜更加健康安全。

黄瓜幼果发育过程中矿质元素及生理指标的动态变化作者：***来源：《河南农业·教育版》2020年第07期关键词：黄瓜;果实生长发育;矿质元素;动态变化瓜类蔬菜在蔬菜供应和国民经济中占有极其重要的地位，它以果实为食用器官，其果实生长发育分为三个阶段，即座果前的以细胞分裂为主的子房发育阶段、坐果后的以细胞增大为主的果实膨大生长阶段和生长停止后的果实成熟阶段。

果实的正常坐果和膨大生长是复杂的生理生化变化过程，受到很多因素的影响，自然情况下，只有经过良好的授粉受精才能坐果，然后进入果实膨大生长阶段。

但是在农业生产上特别是设施栽培中经常会受到阴雨天气、低温弱光或缺少雄花等因素的影响而授粉不良，最终导致果实败育，严重影响瓜类的高产及效益。

因此，研究瓜类作物果实膨大生长机制，改变瓜类作物结果习性、促进单性结实，对于增加瓜类作物产量、提高生产效益具有重要意义。

大量研究发现，充足有效的营养供应是果实产量和品质形成的基础，适宜的各种矿质营养水平及其平衡关系是保证果实高产优质的前提。

而土壤中的矿质营养水平并不能代表植物体或果实中的营养丰缺，即在土壤矿质元素并不缺乏的条件下，植物体或果实仍可能表现出缺素症状。

因此，分析果实发育中的矿质营养吸收规律有助于了解调控果实发育的机理。

目前相关研究仅局限于植株对氮、磷、钾、钙、镁等几种大量和中量元素的吸收或矿质元素在植株生长的某个时期及某些部位的积累，而很少有对果实发育前期膨大生长的报道。

目前，对植物的营养诊断几乎都是利用叶片分析技术结合土壤分析进行，而利用果实或其他器官作测定材料的研究很少。

黄瓜子房下位，个体大，生长快，是研究果实发育的好材料。

因此，本实验以温室黄瓜为研究材料，于黄瓜果实发育前期的幼果为材料，分别测定了B、K、Ca、Mg、Mn、Fe、zn、Cu等元素的含量，旨在探讨黄瓜果实发育过程中各营养元素含量的变化及不同时期果实营养水平状况，探索黄瓜果实生长发育的机理，以期为黄瓜的生产管理和合理施肥提供依据。