TFAP4在肝细胞癌中表达及其与预后的关系
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AP-4在恶性肿瘤中的表达和意义苏娜;乌日罕;孙秀威【摘要】Malignant tumors are a large class of diseases characterized by cell proliferation and metastasis, its development and progression are associated with regulations of multiple genes and factors. Served as a member of AP family of transcription factors, activator protein 4 (AP-4) is reported to be overexpressed in various malignant tumors. AP-4 binds to its recognition motif CAGCTG to regulate target gene expression. It is considered to be involved in the regulative processes of apoptosis, proliferation, angiogenesis, metastasis and DNA repair of malignant tumors. In this article, the mechanism of AP-4 action, as well as its expression and significance in malignant tumors (e.g. gastric cancer and colorectal caner ) were summarized.%恶性肿瘤是以细胞增殖和转移为特点的一大类疾病,其发生、发展与多基因、多因素的调节有关.激活蛋白4(AP4)作为转录因子AP家族的一员,在多种恶性肿瘤中呈过表达,通过识别和结合CAGCTG序列调控靶基因表达,参与恶性肿瘤细胞凋亡、增殖、血管生成、转移、DNA修复等的调节.本文就AP-4的作用途径及其在胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤中的表达和意义作一综述.【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2012(017)005【总页数】4页(P314-317)【关键词】肿瘤;转录因子AP-4;细胞凋亡;细胞增殖;新生血管化,病理性;肿瘤转移;预后【作者】苏娜;乌日罕;孙秀威【作者单位】哈尔滨医科大学附属第三医院消化内科一病区 150040;哈尔滨医科大学附属第三医院消化内科一病区 150040;哈尔滨医科大学附属第三医院消化内科一病区 150040【正文语种】中文随着人口的老龄化、人口数量的增长以及发展中国家不良生活方式的普及,全球恶性肿瘤负荷呈持续大幅上升趋势。
第42卷第5期2021年9月Vol.42No.5September2021中山大学学报(医学科学版)JOURNAL OF SUN YAT⁃SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)泛素特异性蛋白酶44在肝细胞癌中的表达及预后价值王随境1,赖杰怡1,张丽红1,李孜孜2,张新科1,陈杰伟1(1.华南肿瘤学国家重点实验室//中山大学肿瘤防治中心病理科,广东广州510060;2.中山大学附属第五医院病理科,广东珠海519000)摘要:【目的】探讨泛素特异性蛋白酶44(USP44)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理学意义。
【方法】运用免疫组化方法,检测USP44蛋白在161例肝细胞癌中的表达水平,统计分析其与临床病理参数之间的相关性及其预后价值。
【结果】在161例HCC患者中,98例(60.9%)高表达USP44蛋白,Pearson′s卡方检验结果显示USP44在HCC中的表达水平与临床分期(χ2=14.44,P<0.001)、肿瘤单灶及多灶性(χ2=8.04,P=0.005)显著相关;Kaplan-Mei⁃er分析结果显示,低表达组患者平均生存时间59.6个月,显著低于高表达组患者的平均生存时间185.0个月(Log-rankχ2=20.77,P<0.001);多因素Cox比例风险模型揭示USP44是HCC患者的独立预后危险因素。
【结论】USP44蛋白高表达的HCC患者具有良好的生存期,检测其蛋白表达可作为筛选预后良好的肝细胞癌患者的一种手段。
关键词:泛素特异性蛋白酶USP44;肝细胞癌;免疫组化;预后中图分类号:R735.7文献标志码:A文章编号:1672-3554(2021)05-0746-10DOI:10.13471/ki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0513Expression of USP44in Hepatocellular Carcinoma and Its Correlation with the Prognosis WANG Sui-jing1,LAI Jie-yi1,ZHANG Li-hong1,LI Zi-zi2,ZHANG Xin-ke1,CHEN Jie-wei1(1.State Key Laboratory of Oncology in South China//Department of Pathology,Sun Yat-Sen University Cancer Center,Guangzhou510060,China;2.Department of Pathology,the Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Zhuhai519000,China)Correspondence to:CHEN Jie-wei;E-mail:chenjiew@Abstract:【Objective】To investigate the expression of Ubiquitin specific protease44(USP44)and its clinical signifi⁃cance in hepatocellular carcinoma(HCC).【Methods】Immunohistochemistry was used to detect the expression of USP44 protein in161cases of hepatocellular carcinoma.The correlation between the expression of USP44protein and clinicopath⁃ological parameters,and its prognosis value were analyzed.【Results】Immunohistochemical analysis showed USP44dis⁃played elevated expression in98HCC cases out of161cases.Pearson′s chi-square test indicated the expression of USP44 in HCC was significantly correlated with clinical stage(χ2=14.44,P<0.001)and tumor multiplicity(Unifocal or Multifocal)(χ2=8.04,P=0.005).Kaplan-Meier analysis indicated patients with low USP44expression correlated with poor overall sur⁃vival(Log-rankχ2=20.77,P<0.001).The overall mean survival time was59.6months in low USP44expression patients and185.0months in high USP44expression patients.The Cox proportional hazard model analysis showed USP44was an in⁃dependent prognostic risk factor for HCC patients.【Conclusion】USP44is an independent prognostic risk factor for HCC patients,and the expression of USP44protein could be used to screen patients with good prognosis for HCC.Our study may provide evidence for USP44as a potential therapeutic target for HCC patients.Key words:ubiquitin specific protease44;hepatocellular carcinoma;immunohistochemistry;prognosis[J SUN Yat⁃sen Univ(Med Sci),2021,42(5):746-755]·临床研究·收稿日期:2021-05-18基金项目:国家自然科学基金(81902420);广东省食管癌研究所科技计划项目(Q201903)作者简介:王随境,技师,研究方向:肿瘤标记物,E-mail:wangsj@;陈杰伟,通信作者,副主任技师,研究方向:肿瘤标记物,E-mail:chenjiew@第5期王随境,等.泛素特异性蛋白酶44在肝细胞癌中的表达及预后价值原发性肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,发病率排世界第6位,是全球第3大癌症致死原因[1]。
TLR4在肝细胞癌中表达活化后对细胞增殖的影响及
其相关机制研究中期报告
目前尚未进行肝细胞癌中TLR4表达活化后对细胞增殖的影响及其相关机制的研究。
本研究旨在通过检测肝细胞癌组织与正常组织中TLR4的表达水平,探究其与肝细胞癌的关系并深入研究其活化后对肝细胞癌细胞增殖的影响及其相关机制。
方法:采用免疫组织化学法检测肝细胞癌组织与正常组织中TLR4的表达水平,并采用Western blotting和Real-time PCR检测TLR4表达活化对肝细胞癌细胞增殖相关因子的影响。
预期结果:预计在肝细胞癌组织中TLR4的表达水平高于正常组织,而TLR4表达活化后可明显抑制肝细胞癌细胞增殖。
进一步探究其机制发现,TLR4表达活化可抑制Wnt/β-catenin通路的活化,降低细胞增殖相关因子如c-Myc、cyclinD1等的表达水平,而通过下游信号通路如MAPK 和PI3K/Akt通路,以及转录因子如NF-κB等的激活也参与到其中。
结论:本研究初步发现肝细胞癌中TLR4的表达呈现高表达状态,而TLR4表达活化后抑制肝细胞癌细胞增殖,并且可通过多个信号通路参与其中,为TLR4在肝细胞癌治疗中的应用提供理论基础。
[收稿日期]2020-07-23 [修回日期]2021-12-30[作者单位]沈阳积水潭医院神经外科,辽宁沈阳110027[作者简介]王忠海(1973-),男,主任医师.[文章编号]1000⁃2200(2023)05⁃0610⁃04㊃临床医学㊃AP4在人脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭的影响王忠海,李铁柱,周金鑫,杨培培[摘要]目的:探讨激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)在人脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭的影响㊂方法:收集29例神经胶质瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学技术㊁RT⁃qPCR 技术㊁Western blotting 检测AP4在胶质瘤组织和癌旁组织中的表达㊂采用小干扰RNA(siRNA)构建AP4敲除的U251和U87细胞系,采用CCK⁃8实验㊁细胞划痕实验㊁Transwell 实验检测胶质瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的改变㊂结果:AP4蛋白在胶质瘤组织中阳性表达率为72.41%(21/29),明显高于癌旁组织中的31.03%(9/29)(P <0.01)㊂Ⅰ+Ⅱ级㊁Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤组织中AP4mRNA 和蛋白表达水平均明显高于相应癌旁组织(P <0.01),且Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤组织中AP4mRNA 和蛋白表达均高于Ⅰ+Ⅱ级(P <0.05)㊂AP4敲除后,U251和U87细胞增殖能力均明显下降(P <0.01),迁移和侵袭能力亦均明显降低(P <0.01)㊂结论:AP4在神经胶质瘤组织和细胞中高表达,且与胶质瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭能力密切相关,可能成为神经胶质瘤不良预后的重要参考指标㊂[关键词]胶质瘤;激活增强子结合蛋白4;增殖;迁移;侵袭[中图法分类号]R 739.41 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2023.05.013Expression of AP4in human glioma tissue and its effect on the proliferation ,migration and invasion of glioma cellsWANG Zhong⁃hai,LI Tie⁃zhu,ZHOU Jin⁃xin,YANG Pei⁃pei(Department of Neurosurgery ,Shenyang Jishuitan Hospital ,Shenyang Liaoning 110027,China )[Abstract ]Objective :To investigate the expression of activating enhancer binding protein 4(AP4)in human glioma tissue and its effect on the proliferation,migration and invasion of glioma cells.Methods :Tumor and adjacent tissues from 29patients with gliomas were collected.The expression of AP4in glioma tissues and adjacent tissues were measured by immunohistochemistry,RT⁃qPCR and Western blotting.Further,the AP4knockout U251and U87cell lines were constructed using small interfering RNA(siRNA).The effect of AP4knockdown on the proliferation,migration and invasion of glioma cells were detected by CCK⁃8,wound healing and Transwell test.Results :The positive expression rate of AP4protein in glioma was 72.41%(21/29),which was significantly higher than that in adjacent tissues [31.03%(9/29)](P <0.01).The expression levels of AP4mRNA and protein in grade Ⅰ+Ⅱand Ⅲ+Ⅳgliomas were significantly higher than those in adjacent tissues(P <0.01),and the expression levels in grade Ⅲ+Ⅳgliomas were higher than those in grade Ⅰ+Ⅱ(P <0.05).After AP4knockout,the proliferation,migration and invasion of U251and U87cells decreased significantly(P <0.01).Conclusions :The expression level of AP4is aberrant upregulated in glioma tissues and cells,and is closely related to the proliferation,migration and invasion of glioma cells.It can be a potential reference index for the poor prognosis.[Key words ]glioma;activating enhancer binding protein 4;proliferation;migration;invasion 神经胶质瘤是中枢神经系统常见㊁致死率较高的一种原发恶性肿瘤,约占该系统恶性肿瘤的47.1%[1]㊂因其生长速度快,无限增殖,肿瘤细胞与正常脑组织分界不清,具有高度侵袭性[2],胶质瘤的预后并不理想,中位生存时间仅为12~15个月[3]㊂研究[4]发现,许多基因的异常表达与胶质瘤发生㊁发展密切相关,为胶质瘤预后以及治疗提供了新的研究方向㊂激活增强子结合蛋白4(activatingenhancer binding protein 4,AP4)是一种c⁃MYC 调节的转录因子,参与细胞增殖与分化㊁细胞周期等[5],尤其在肿瘤细胞增殖和转移过程中发挥重要作用[6]㊂AP4诱导细胞增殖主要通过作用c⁃MYC 促进DNA 复制,显著上调CDK2等蛋白表达,下调p21和p16蛋白表达,影响细胞周期过程中的G2/M 期和S 期[6]㊂在胃癌中发现miR⁃144能够靶向结合在AP4的3′UTR 区域,从而抑制AP4表达,抑制胃癌细胞增殖㊁迁移和侵袭[8]㊂但目前尚少见关于AP4在胶质瘤中的作用研究㊂本研究检测AP4在胶质瘤组织中的表达情况,同时在体外检测AP4对胶质瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响,以期为神经胶质瘤预后评估提供实验支持㊂现作报道㊂1 资料与方法1.1 一般资料 收集2018年8月至2019年8月我院手术切除胶质瘤标本29例和对应的癌旁组织29例㊂其中男18例,女11例;年龄53~88岁;体质量45~77kg;胶质瘤Ⅰ㊁Ⅱ级15例,Ⅲ㊁Ⅳ级14例㊂病人均为初发脑胶质瘤㊂将标本置于0.9%氯化钠溶液中,去除血污后,置于液氮保存待用㊂本研究经本院伦理委员会审核批准,参与研究者均知情同意并签署知情同意书㊂1.2 方法 1.2.1 免疫组织化学法检测AP4蛋白表达 将胶质瘤组织和癌旁组织各29例切片后,于60℃烘箱中烘烤20min,随后二甲苯脱蜡两次,每次5min,梯度乙醇进行脱水处理㊂3%双氧水甲醇处理切片,抑制内源性过氧化物酶活性㊂羊血清封闭组织切片2h㊂抗AP4的抗体1:500处理切片,4℃过夜㊂第2天PBS洗3次,加入二抗,随后二氨基联苯胺显色㊂1.2.2 RT⁃qPCR技术检测AP4mRNA表达 将胶质瘤组织和癌旁组织各29例组织样本剪碎后取25mg置于EP管中,按照100μL氯仿/1mL Trizol 加入氯仿,振荡混匀15min,离心后吸取上层水相,至另一RNase⁃free离心管中,加入异丙醇混匀,静置10min后离心,RNA沉于管底部㊂采用反转录试剂盒进行反转录,获得cDNA㊂采用SYBR试剂盒进行RT⁃PCR,PCR反应体系进行40个循环㊂引物序列见表1㊂表1 引物序列基因正向反向AP4AAC AGG GGC AGA GTG AGT TG⁃GGG AAG TGC CTT CGA CAG TG GAPDH ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA1.2.3 Western blotting检测AP4蛋白表达 将胶质瘤组织和癌旁组织各29例组织样本按照细胞全蛋白提取试剂盒说明书进行蛋白提取,并以Bradford法测定蛋白浓度后-70℃保存备用㊂用15%SDS⁃PAGE分离40μg总蛋白,电转至NC膜,用TBST配置5%的脱脂奶粉封闭1h㊂加入1∶1000稀释的抗体AP4,4℃孵育过夜,然后取出NC膜,TBST室温洗3次,每次5min㊂加入二抗室温孵育1h,洗膜3次,每次5min㊂在暗室按照1∶1比例混合发光底物A㊁B液㊂取出膜放入Bio⁃Rad显像仪㊂1.2.4 细胞培养㊁分组和细胞转染 人胶质瘤细胞系U251和U87细胞购自ATCC公司,培养于含10%FBS DMEM培养基,37℃㊁5%CO2培养箱中培养,待细胞进入对数生长期进行实验㊂将U251和U87细胞各分为2组:阴性对照组,即NC⁃siRNA组(转染无义序列NC)和AP4⁃siRNA组(转染si⁃AP4),由上海生工生物工程股分有限公司合成,参照Lipofectamine2000说明书进行转染,放置37℃㊁5%CO2培养箱中培养6h后,更换完全培养基,培养48h后待用㊂1.2.5 细胞增殖实验 将消化后的细胞制成2×104/mL细胞悬液,按每孔100μL接种于96孔板,按照转染试剂的说明书进行细胞转染㊂分别在转染后24㊁48㊁72㊁96h进行检测,检测前4h在每个孔内加入5μL CCK⁃8溶液,检测前弃培养液,在酶标仪测定波长450nm处吸光度值㊂每组3个复孔㊂1.2.6 细胞划痕实验 培养转染后U251(NC⁃siRNA组)㊁U251(AP4⁃siRNA组)㊁U87(NC⁃siRNA 组)㊁U87(AP4⁃siRNA组)细胞48h,待细胞达到95%汇合后,每层细胞用无菌10μL吸管尖划伤刺激,用PBS冲洗3次,去除细胞碎片,继续无血清培养基孵育㊂分别在0㊁24㊁48h用数码相机(Canon,日本)拍摄照片㊂细胞迁移率=各时间点细胞致伤区距离/原始细胞致伤区距离㊂1.2.7 Transwell实验 以上4组细胞取1×106/ mL接种于8μm的含有基质凝胶的transwell小室中(Corning,美国),小室内加入无血清DMEM,下室加入含10%FBS DMEM,孵育48h后,将细胞膜上表面擦掉,并用0.1%结晶紫(Sigma,美国)染色㊂通过穿过人工基底膜数细胞数量观察细胞侵袭能力㊂1.3 统计学方法 采用t检验㊁方差分析㊁q检验和χ2检验㊂2 结果2.1 AP4在胶质瘤和癌旁组织中的表达 免疫组织化学结果显示,胶质瘤组织中AP4蛋白表达阳性率为72.41%(21/29),明显高于癌旁组织的31.03%(9/29)(χ2=9.94,P<0.01);且AP4蛋白在Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤组织中阳性表达率为85.71% (12/14),明显高于Ⅰ+Ⅱ级的60.00%(9/15)(Fisher′s确切概率法,P<0.01)㊂RT⁃qPCR和Western blotting结果显示,Ⅰ+Ⅱ级㊁Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤组织中AP4mRNA和蛋白表达水平均明显高于相应癌旁组织(P<0.01),且Ⅲ+Ⅳ级神经胶质瘤组织中AP4mRNA和蛋白表达水平均高于Ⅰ+Ⅱ级(P<0.05)(见表2)㊂ 表2 AP4在早期和晚期胶质瘤组织㊁癌旁组织标本中表达情况(x±s)分组n AP4mRNA AP4蛋白Ⅰ+Ⅱ级胶质瘤 癌旁组织150.82±0.0300.08±0.003 胶质瘤组织15 2.92±0.002 2.23±0.001 t 270.512633.20 P <0.01<0.01Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤 癌旁组织140.33±0.018*0.12±0.008* 胶质瘤组织14 3.71±0.001* 4.82±0.005* t 701.521864.09 P <0.01<0.01 组内配对t检验:*P<0.052.2 AP4敲除后对胶质瘤细胞增殖的影响 Western blotting结果显示,转染AP4⁃siRNA后,U251和U87细胞中AP4表达均明显降低(P<0.01)(见表3)㊂CCK⁃8实验结果显示,U251和U87细胞转染AP4⁃siRNA后,在48㊁72㊁96h时,细胞增殖均较NC⁃siRNA组明显下降(P<0.01)(见表4)㊂表3 U251和U87细胞中AP4敲除效果检测(x±s)分组n U251U87 NC⁃siRNA组3 1.67±0.006 1.28±0.003 AP4⁃siRNA组30.01±0.0000.01±0.001 t 479.13695.91P <0.01<0.01 2.3 AP4敲除后U251和U87细胞迁移和侵袭能力变化 划痕实验和Twanswell实验结果显示,48h 时,U251㊁U87细胞AP4⁃siRNA组细胞迁移率和穿过人工基底膜细胞数均明显小于NC⁃siRNA组(P< 0.01)(见表5)㊂3 讨论 神经胶质瘤是常见的恶性肿瘤,发病率为十万分之六,根据组织病理学将胶质瘤分为Ⅰ~Ⅳ级,目前治疗方法主要是手术切除和术后放化疗相结合[8],但是术后复发及转移情况严重限制了其临床效果,病人总体中位生存期较短㊂利用更多的生物标志物来评估胶质瘤的预后,有助于提高神经胶质瘤患者生存率[9]㊂ 表4 U251和U87细胞不同时点细胞增殖情况比较(n i= 3;x±s)分组24h48h72h96h U251 NC⁃siRNA组0.27±0.015 1.04±0.0022.11±0.0063.15±0.002 AP4⁃siRNA组0.35±0.0260.67±0.0001.41±0.0051.91±0.002 t 4.62320.45155.24759.34 P<0.01<0.01<0.01<0.01 U87 NC⁃siRNA组0.31±0.038 1.18±0.0012.30±0.0013.51±0.011 AP4⁃siRNA组0.93±0.0060.85±0.0041.25±0.0021.66±0.06 t27.91138.63813.3352.53 P<0.01<0.01<0.01<0.01表5 各细胞不同时点迁移和侵袭能力比较(n i=3;x±s)分组细胞迁移率 24h 48h 穿过人工基底膜细胞数 24h 48h U251 NC⁃siRNA0.98±0.0310.03±0.00176.2±0.064196.6±0.658 AP4⁃siRNA0.91±0.0120.56±0.00271.3±3.610103.8±0.477 t 3.65410.54 1.34114.10 P<0.05<0.01>0.05<0.01 U87 NC⁃siRNA0.99±0.0570.02±0.00082.2±2.359238.2±0.264 AP4⁃siRNA0.93±0.0310.65±0.00069.4±4.28593.1±0.305 t 1.6010911.92 2.62359.00 P>0.05<0.01>0.05<0.01 研究[10]发现,胶质瘤的发生㊁发展与复杂的基因相互作用和分子调控网络密切相关㊂LIU等[11]在多形性胶质母细胞瘤中发现MALT1异常表达,其通过参与EGFR诱导活化NF⁃κB的过程,调控GBM 细胞的增殖㊁存活㊁迁移和侵袭过程,且能够通过抑制多个细胞周期相关蛋白的表达阻滞细胞周期G1期㊂贾国萍等[12]研究发现,Glypican⁃1在人脑胶质瘤组织中高表达,且分布于细胞膜表面的表达水平与肿瘤分级有关,表达水平越高,病人的总生存期越短㊂转录因子AP4蛋白分子结构中有5个结构域,分别是1个碱性区域㊁1个螺旋-环-螺旋结构㊁2个亮氨酸模体㊁1个TIV区域,活化的AP4易形成同源二聚体,穿过核膜进入细胞核内,特异性结合下游靶基因启动子区域E⁃box模式元件CAGCTG序列,从而导致激活或抑制下游靶基因的转录和表达[13-14]㊂AP4在胶质瘤组织中呈现高水平表达,相关文献[6-7]报道,AP4在多种肿瘤发生㊁发展中发挥重要作用,尤其是在肿瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭的过程中㊂YANG等[15]在大肠癌组织中发现AP4蛋白异常表达,且AP4高表达病人的总生存时间明显低于AP4低表达者,AP4异常表达与大肠癌细胞的增殖㊁迁移和侵袭相关,可作为大肠癌患者预后不良的评价指标㊂刘兴华[16]研究发现,胃癌肿瘤组织中AP4阳性表达率明显高于癌旁正常组织,且其表达水平与T㊁N㊁M分期和pTNM分期呈正相关关系,与病人不良预后相关㊂另有研究[17]显示,非小细胞肺癌组织中AP4mRNA和蛋白表达亦均较癌旁正常组织明显升高,miR⁃145通过靶向作用调控AP4能够显著抑制A549细胞的迁移与侵袭能力㊂本研究结果显示,与癌旁正常组织相比,AP4蛋白在胶质瘤组织中的阳性率明显升高,且其表达水平与病人的病理分级相关,推测AP4蛋白高表达可能在神经胶质瘤的发生㊁发展进程中发挥重要作用㊂同时,本研究通过采用AP4⁃siRNA降低AP4在胶质瘤细胞中的表达,从而检测AP4对肿瘤细胞生物学功能的影响,体外实验结果显示,AP4蛋白表达与神经胶质瘤细胞的增殖㊁迁移和侵袭密切相关㊂综上,AP4与胶质瘤的级别和临床预后相关,可能可成为潜在的临床不良预后的标记物,且其能够调控胶质瘤细胞的增殖㊁迁移和侵袭,在胶质瘤的恶性进程中具有关键作用㊂接下来本课题组将会针对AP4参与胶质瘤增殖㊁迁移和侵袭的作用机制进行研究,为胶质瘤的发生发展机制及药物治疗靶点选择提供实验数据㊂[参考文献][1] JIANG Y,ZHOU JP,ZHAO JS,et al.MiR⁃18a⁃downregulatedRORA inhibits the proliferation and tumorigenesis of glioma usingthe TNF⁃α⁃mediated NF⁃κB signaling pathway[J].EBioMedicine,2020,52:2352.[2] WANG XL,FENG HR,DONG W,et al.Hsa_circ_0008225inhibits tumorigenesis of glioma via sponging miR⁃890andpromoting ZMYND11expression[J].J Pharmacol Sci,2020,DOI:10.1016/j.jphs.2020.02.008.[3] 郑兰,王馨悦,韩安娜,等.神经胶质瘤中NQO1高表达在预后评估中的意义[J].临床与实验病理学杂志,2020,36(1):20.[4] 杨如意,赵普学,许自强,等.人脑胶质瘤组织中HMGB1㊁TLR4的表达[J].郑州大学学报(医学版),2018,53(2):213.[5] 赵文铖,王兆松,许世磊.转录因子AP4研究进展[J].生命的化学,2016,36(3):341.[6] JACKSTADT R,HERMEKING H.AP4is required for mitogen⁃and c⁃MYC⁃induced cell cycle progression[J].Oncotarget,2014,5(17):7316.[7] MUSHTAQ F,ZHANG JP,LI JS.miR⁃144suppresses cellproliferation and invasion in gastric cancerthrough downregulationof activating enhancer⁃binding protein4[J].Oncol Lett,2019,17(6):5686.[8] 张帆,房绍英,印晓星.冰片对吉西他滨在脑胶质瘤模型大鼠体内药动学的影响[J].徐州医科大学学报,2021,41(5):324.[9] 陈悦,李琴,张洁,等.TRIM5高表达与胶质瘤患者不良预后和免疫浸润的相关性研究[J].生物医学工程学杂志,2020,37(3):469.[10] DONG ZQ,GUO ZY,XIE J.The lncRNA 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TF、TFPI与血液恶性肿瘤的相关性研究的开题报告一、研究背景及意义:TF(Tissue Factor)是一种膜表面磷脂,是血液凝血过程中最重要的起始剂,被认为在血液恶性肿瘤的发生、发展及转移中发挥了关键作用。
TFPI(Tissue Factor Pathway Inhibitor)是一种自然抑制剂,具有抑制TF起始剂活性的能力。
目前,越来越多的研究表明TF与TFPI在血液恶性肿瘤的生物学行为中发挥着重要作用。
但是,TF和TFPI对血液恶性肿瘤的关系研究欠缺系统性、深入性,仅仅停留在理论与实验室的层面,在临床应用方面几乎没有被应用。
因此,本研究旨在探讨TF、TFPI在血液恶性肿瘤中的表达及其与临床特征、预后的相关性,为临床治疗提供科学依据。
二、研究方法:1.对象:选择经过严格诊断的血液恶性肿瘤患者,以健康人为对照组。
2.检测方法:采用免疫组织化学和ELISA方法检测血液恶性肿瘤患者、对照组的血清和组织中TF、TFPI的表达。
3.临床资料统计:收集血液恶性肿瘤患者的个人基本资料、临床病理特征、治疗方案及预后情况,并分析TF、TFPI的表达与临床病理特征及预后的相关性。
三、预期结果:1.在血液恶性肿瘤患者的血清和组织中检测出TF、TFPI的表达水平,为深入研究TF、TFPI在血液恶性肿瘤中作用提供基础。
2.探讨TF、TFPI与血液恶性肿瘤的临床病理特征和预后的相关性,为制定临床治疗方案提供科学依据。
3.本研究的预期结果有望为进一步研究血液恶性肿瘤及其治疗提供指导和参考,促进临床治疗的进步和发展。
四、研究意义:本研究对TF、TFPI与血液恶性肿瘤的相关性进行探讨,具有一定的临床参考价值,可为实现个性化诊疗提供思路,并为构建合理的治疗方案提供临床指导。
Dll4高表达与肝细胞癌不良预后有关的开题报告一、选题背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,亚洲地区尤其普遍。
根据统计数据,HCC的发生率和死亡率均排名前三的癌症之一。
预测联合国发布的关于癌症死亡的预测报告中,肝癌将是未来最大的死亡原因之一。
Dll4(Delta-like ligand 4)是Notch信号通路的一个重要成员,参与调节不同细胞之间的关系和信号传递。
Dll4在很多恶性肿瘤中高表达,特别是HCC中,高表达与预后不良和肿瘤侵袭性增强有关。
研究Dll4在HCC中的表达与预后不良之间的关系,对于HCC患者的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
二、研究目的本研究旨在探讨Dll4在HCC中的表达率和患者的临床病理特征之间的关联,并分析Dll4表达与HCC患者的预后相关性。
三、研究内容与方法1. 研究内容(1)收集HCC患者的临床病理资料,包括年龄、性别、肝硬化程度、病理分期、肿瘤大小、转移情况等。
(2)采集HCC组织样本,并通过免疫组织化学方法检测Dll4的表达,并计算阳性表达率。
(3)对Dll4表达率与临床病理特征进行相关性分析。
(4)对Dll4表达与HCC患者预后的相关性进行统计分析。
2. 研究方法(1)实验组:拟选择2020年1月至2021年6月在某医院住院治疗的初诊HCC患者,共计100例。
(2)收集组织标本:从上述100例HCC患者的手术切除样本中采集肝癌组织标本,并经组织学检查确诊为HCC。
(3)免疫组织化学检测:使用抗Dll4的一抗和二抗,利用免疫组织化学染色方法检测肝癌组织中Dll4的表达情况,并计算阳性表达率。
(4)数据分析:采用SPSS 26.0统计软件,对数据进行相关性分析和生存分析。
四、研究意义Dll4在很多恶性肿瘤中高表达,同时与预后不良和肿瘤侵袭性增强有关,在HCC中也存在类似情况,但目前研究HCC的Dll4表达与预后之间的关系仍不清楚。
KLF4与肝细胞癌发生的关系的开题报告一、选题背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种高度恶性的肝癌,其发病率不断增加,目前已成为全球第五大癌症。
尽管研究表明肝细胞癌的发生和发展与多种因素相关,但其发病的机理仍未完全阐明。
在最近的研究中,发现了某些转录因子在HCC的发生中发挥了重要作用。
KLF4是Krüppel-like family成员之一,是一个转录因子,在多个不同类型的癌症中发挥着重要功能。
然而,至今为止,关于KLF4在肝细胞癌中的作用及其调控机制仍然不清楚。
因此,本研究将重点探讨KLF4与肝细胞癌发生的关系,为进一步阐明肝细胞癌的发生和发展提供理论和实验依据。
二、研究内容本研究将从以下方面展开:1. KLF4在肝细胞癌中的表达及其调控机制;2. KLF4对肝细胞癌细胞增殖、迁移能力的影响;3. KLF4在肝细胞癌中的作用机理研究。
三、研究方法本研究将采用多种实验方法,包括细胞培养、Western blotting、免疫组化、实时荧光定量PCR、细胞增殖分析、细胞迁移实验等。
四、预期结果本研究预期通过分析KLF4在肝细胞癌中的表达及其调控机制,揭示KLF4在肝癌形成过程中的作用,探究其调控机制;通过分析KLF4对肝细胞癌细胞增殖、迁移能力的影响,探讨其在肝细胞癌发生和发展中的作用;通过分析KLF4在肝细胞癌中的作用机理,揭示其可能的分子机制,为其在肝癌治疗中的潜在应用提供证据和指导。
五、研究意义本研究将深入探讨KLF4在肝细胞癌中的作用,在揭示肝癌的分子机制和治疗策略方面具有重要意义。
同时,本研究可以为肝细胞癌的诊断、预后、治疗提供新的思路和方法。
肝癌患者免疫状况与预后的关系摘要】目的:研究肝癌组织和癌旁组织中的T淋巴细胞不同亚群的数量及分布特征,分析他们与病人预后之间的关系。
方法:通过免疫组织化学的方法检测肝癌组织和癌旁组织中的T淋巴细胞的不同亚群(CD4+、CD8+T淋巴细胞)的数量及分布特征,分析他们与肝癌患者预后的关系。
结果:原发性肝细胞肝癌患者癌中CD4+T和CD8+T细胞的数量均低于癌旁,差别有统计学意义(P<0.05)。
癌中CD8+T细胞的数量及癌旁CD4+T细胞和患者的预后相关,呈明显正相关,(P<0.05),而癌中CD4+、癌旁CD8+、癌中及癌旁CD4+/CD8+和预后均无明显相关(P >0.05)。
结论:CD4+和CD8+T阳性细胞在癌旁中量显著高于癌巢中的,癌中CD8+T细胞和癌旁CD4+T细胞的数量与肝癌患者的预后呈明显正相关。
【关键词】原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞预后【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2014)18-0385-02近年来,肝癌的发病率在世界范围内都有所上升,在我国更是已经成为恶性肿瘤第2位的杀手。
肝癌病人免疫功能低下,特别是局部免疫微环境异常,导致机体免疫防御反应不能有效进行,是肝癌产生免疫逃避、容易转移复发的重要因素。
目前关于肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在原发性肝癌微环境中作用及其机制、数量分布状况和患者的临床病理特征的关系研究在国内外较少报道。
本实验通过免疫组织化学的方法检测肝癌组织以及癌旁组织中TIL的数量及分布特征,以揭示肝癌组织中TIL在肝癌局部免疫的作用,以及与预后之间的关系,为肝癌免疫治疗提供新的治疗思路。
材料与方法1 研究对象30例患者均为揭阳市人民医院住院手术病人,所有标本全部经病理学证实,所有患者术前均未接受任何其它治疗。
30例患者中,男23例,女7例。
所有患者电话随访至2013年12月31日,随访内容主要是肿瘤复发及生存情况。
2 方法:组织切片经免疫组化染色后,在40xl0倍下分别计数癌巢和癌旁组织CD4和CD8阳性细胞数量。
Oct4蛋白在肝细胞癌中的表达及意义阿斯楞;赵建国;林靖【摘要】目的:检测 Oct4蛋白在肝细胞癌组织中的表达,并探讨其与临床病理因素的相关性。
方法:收集60例病人手术切除的肝细胞癌组织及对应的癌旁组织标本,应用免疫组织化学方法检测 Oct4蛋白的表达。
结果:肝细胞癌组织 Oct4蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(81.67% vs.15.0%)(P 〈0.05);肝细胞癌组织中 Oct4蛋白的表达与肿瘤大小、血管侵犯及 TNM 分期有关(P 〈0.05)。
结论:Oct4蛋白在肝细胞癌的发生发展中发挥重要作用,可作为判断预后有价值的分子标记物。
【期刊名称】《内蒙古医科大学学报》【年(卷),期】2015(037)006【总页数】4页(P506-509)【关键词】肝细胞癌 Oct4 蛋白【作者】阿斯楞;赵建国;林靖【作者单位】[1]内蒙古医科大学附属医院普外科,内蒙古呼和浩特010050;[2]内蒙古医科大学附属医院重症医学科【正文语种】中文【中图分类】R378肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,发病率和病死率较高。
近年来提出的肿瘤干细胞理论认为肿瘤的发生和进展与干细胞关系密切[1]。
八聚体结合转录因子4(Oct4)[2]是新近发现的干细胞特异性标记物,是最重要的转录因子之一,不仅特异性表达于胚胎干细胞,而且在体细胞肿瘤中也发现有阳性表达[3]。
本研究采用免疫组织化学方法检测肝细胞癌和相应癌旁组织中Oct4蛋白的表达情况,同时探讨其与临床病理因素间的关系,为研究肝细胞癌的发生发展和判断预后提供新的分子标记物。
1.1 标本资料收集内蒙古医科大学附属医院2013-08~2014-12手术切除肝细胞癌的癌组织和对应癌旁组织标本60例,所有病例均经病理证实,其中男34例,女26例;年龄:32~75岁,中位年龄为59岁。
所有病例均未见远处转移,术前均未接受化疗和放疗。
手术切除标本后,经10%福尔马林液固定,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片。
APOF和IGFALS基因在原发性肝癌组织中的表达及临床意义何盼;范倪;陈思;唐艳萍;李科志;杨春;黄小青;曹骥【摘要】目的探讨载脂蛋白F(apolipoprotein F,APOF)和人胰岛素样生长因子酸不稳定亚基(the insulin-like grouth factor binding protein acid labile subunit,IGFALS)在原发性肝癌组织中的表达及临床意义.方法选取2014年1月1日至2015年12月30日于广西医科大学附属肿瘤医院经手术切除及病理确诊为原发性肝癌88例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测88例肝癌组织及其相应癌旁组织和6例正常肝组织中POF基因和IG FA LS基因mRNA的相对表达量,并分析两者表达与肝癌患者临床病理特征的关系.结果肝癌组织中APOF mRNA相对表达量低于癌旁组织和正常肝组织(0.156±0.019 vs 0.971±0.010,P<0.001;0.156±0.019vs 81.140±0.092,P<0.001);肝癌组织中IGFALS mRNA相对表达量亦低于癌旁组织及正常肝组织(0.111±0.016 vs 1.090±0.054,P<0.001;0.111±0.016 vs 1.101±0.211,P<0.001).APOF mRNA表达与门静脉侵犯相关(P=O.004);IGFALS mRNA表达与肿瘤分化程度、门静脉侵犯相关(P<0.05).APOF mRNA表达水平与IGFALS mRNA表达水平呈正相关(r=0.332,P<0.01).结论 APOF和IGFALS基因在肝癌组织中表达下调,二者表达呈正相关,且与门静脉侵犯有关,可能参与了肝癌的发生发展.【期刊名称】《中国癌症防治杂志》【年(卷),期】2018(010)003【总页数】4页(P212-215)【关键词】肝肿瘤;载脂蛋白F;胰岛素样生长因子酸不稳定亚基;实时荧光定量PCR;基因表达【作者】何盼;范倪;陈思;唐艳萍;李科志;杨春;黄小青;曹骥【作者单位】530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;530021南宁广西医科大学研究生院;530021南宁广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部;区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤,发病率与死亡率居高不下,但目前发病机制未明确[1]。
生长抑制因子4表达水平与肝癌肝移植术后复发转移及预后的关系罗来邦;李新长;张友福;徐志丹;张锡泉【期刊名称】《器官移植》【年(卷),期】2014(5)2【摘要】目的探讨生长抑制因子4 (ING4)表达水平与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后复发转移及预后的关系.方法选取2003年5月至2007年12月在江西省人民医院器官移植科实施肝癌肝移植手术的30例患者作为研究对象.组织标本取自手术切除的肝癌组织和相应癌旁1 cm外的癌旁肝组织(PCLT).采用免疫组织化学(免疫组化)方法对肝癌组织和PCLT中ING4蛋白的表达进行定性检测,比较两者ING4蛋白的阳性表达率及表达强度的差异.采用蛋白质印迹法检测上述两组织ING4蛋白的表达水平.根据蛋白质印迹法结果,计算肝癌组织和PCLT的ING4蛋白表达量之比,以比值0.48为界,将30例患者分为ING4低表达组(15例)和ING4高表达组(15例),分析两组患者临床病理特征、肝癌肝移植术后复发转移和预后情况.结果免疫组化结果显示肝癌组织的ING4阳性表达率为63% (19/30),PCLT为93%(28/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).肝癌组织的ING4强阳性表达率为27% (8/30),PCLT为63% (19/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).蛋白质印迹法结果显示肝癌组织的ING4蛋白阳性率为70% (21/30),PCLT为97%(29/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).PCLT的ING4蛋白表达水平高于肝癌组织(197±31比109±24,P<0.05).30对标本中有25对ING4表达水平在肝癌组织中下调,下调率为83%.在临床病理学特征方面,ING4低表达组和ING4高表达组在肿瘤结节数目(P =0.025)、静脉浸润(P=0.035)、肝外转移(P =0.017)和分化程度(P =0.025)的差异具有统计学意义.ING4高表达组的累计术后复发转移率低于ING4低表达组,生存率高于ING4低表达组(均为P<0.05),ING4高表达组中位生存时间长于ING4低表达组(720 d比540 d P<0.05).结论 ING4蛋白水平在肝癌组织中表达下调,且与肝癌肝移植术后复发转移有关,影响肝癌肝移植患者预后.【总页数】6页(P113-118)【作者】罗来邦;李新长;张友福;徐志丹;张锡泉【作者单位】330006南昌,江西省人民医院器官移植中心;330006南昌,江西省人民医院器官移植中心;330006南昌,江西省人民医院器官移植中心;330006南昌,江西省人民医院器官移植中心;330006南昌,江西省人民医院器官移植中心【正文语种】中文【中图分类】R617【相关文献】1.CD44,CD90的表达与肝癌肝移植术后复发转移的关系 [J], 杨杰;曹毅;江艺;潘凡;杨和君;吕立志2.Vasohibin-2与肝癌肝移植术后复发转移及预后的关系 [J], 罗来邦;杨华;罗丽芳;徐志丹;罗文峰;龙成美;张友福;李新长3.肝细胞肝癌组织中Bcl-2核表达及MMP-2和MMP-9表达与术后复发转移及预后的关系 [J], 孙涛;孙保存;赵秀兰;赵楠;古强;车娜;董学易;池嘉栋TN-1和VEGF-C表达水平与肝癌肝移植术后复发转移及预后的关系 [J], 曹毅;吕立志;江艺;潘凡;杨和君5.miR-602、miR-452表达与肝癌术后复发转移及预后的关系研究 [J], 靖洁因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
基础研究TFAP 4在肝细胞癌中表达及其与预后的关系黄涛 沈露俊 陈奇峰 李旺 吴沛宏【摘要】目的 探讨转录因子激活增强子结合蛋白4(TFAP 4)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与患者预后的关系。
方法 标本来源于2007年12月至2014年12月中山大学肿瘤防治中心的116例术后病理检查确诊为HCC患者。
患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。
其中男103例,女13例;年龄22~75岁,中位年龄44岁。
免疫组化法检测HCC组织TFAP 4的表达量,TFAP 4蛋白表达与临床病理参数之间的关系分析采用χ2检验。
生存分析采用Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验。
Cox比例风险回归模型分析TFAP 4在HCC组织中的表达与预后的关系。
结果 TFAP 4高表达者54例,低表达者62例,其表达与患者临床病理参数无相关性(P>0.05)。
TFAP 4高表达患者的无瘤生存和总体生存均更差(χ2=11.030,4.269;P<0.05)。
Cox回归分析显示,HBsAg阳性是影响HCC患者无瘤生存的独立危险因素(HR=4.722,95%CI:1.469~19.446,P<0.05),而TFAP 4高表达是影响HCC患者无瘤生存和总体生存的独立危险因素(HR=2.437,2.598;95%CI:1.352~4.394,1.036~6.515;P<0.05)。
结论 TFAP 4高表达是影响HCC患者无瘤生存和总体生存的独立危险因素,TFAP 4高表达患者预后较差。
TFAP 4可作为判断HCC患者预后的生物学标志物。
【关键词】癌,肝细胞;TFAP4;预后;免疫组织化学TFAP 4 expression in hepatocellular carcinoma and its relationship with clinical prognosis Huang Tao,Shen Lujun, Chen Qifeng, Li Wang, Wu Peihong. Department of Minimally Invasive Intervention, State KeyLaboratory of Oncology in South China, Collaborative Innovation Center for Cancer Medicine, Sun Yat-senUniversity Cancer Center, Guangzhou 510060, ChinaCorresponding author: Wu Peihong, Email: wuph@【Abstract】Objective To investigate the expression of transcription factor activating enhancer-binding protein 4 (TFAP 4) in hepatocellular carcinoma (HCC) and its relationship with the clinical prognosisof HCC patients. Methods The tissue specimens were obtained from 116 HCC patients diagnosed by pathological examination in Sun Yat-sen University Cancer Center from December 2007 to December2014. The informed consents of all patients were obtained and the local ethical committee approval wasreceived. Among 116 patients, 103 were male and 13 were female, aged 22-75 years with a median age of44 years. The expression of TFAP 4 in HCC tissues was measured by immunohistochemical staining. The relationship between the expression of TFAP 4 protein and clinicopathological parameters was analyzed byChi-square test. The survival analysis was conducted by Kaplan-Meier survival curve and Log-rank test.The relationship between TFAP 4 expression and clinical prognosis of HCC patients was analyzed by Cox's proportional hazards model. Results TFAP 4 was highly expressed in 54 patients and lowly expressed inDOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2019.01.017基金项目:广东省公益研究与能力建设专项资金项目(2014A020212532)作者单位: 510060 广州,中山大学肿瘤防治中心微创介入科 华南肿瘤学国家重点实验室 肿瘤医学协同创新中心通信作者:吴沛宏,Email: wuph@肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病死率高,外科手术切除是早期HCC有效的治疗方式[1-3]。
然而,手术切除后HCC患者往往存在较高的复发和转移风险,患者的长期生存及预后并不乐观,早期发现和治疗是提高患者预后的重要手段。
虽然目前已有部分肿瘤生物标志物已经被用来诊断和预测HCC患者的预后,但其预测能力十分有限[4-8]。
转录因子激活增强子结合蛋白4(transcription factor activating enhancer binding protein 4,TFAP 4)广泛参与调节细胞的增殖和分化,在肿瘤的发生发展中起着重要的作用[9-10]。
近年来,TFAP 4高表达已在胃癌、结直肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤中报道,且与更差的预后相关[11-14]。
然而,TFAP 4在HCC中的表达及其与预后的关系有待进一步探讨。
材料与方法一、一般资料标本来源于2007年12月至2014年12月中山大学肿瘤防治中心的116例术后病理检查确诊为HCC患者的组织标本。
其中男103例,女13例;年龄22~75岁,中位年龄44岁。
入选标准:患者符合肝癌根治性切除手术指征;原发肿瘤术后病理证实为HCC;有完整的临床病理及随访资料。
排除标准:合并其他原发肿瘤;合并重要器官功能不全;术后合并致死性并发症;术后病理检查证实为胆管细胞癌或混合细胞癌。
所有患者均签署由医院伦理委员会批准的患者知情同意书,符合医学伦理学规定。
二、随访所有患者在术后6个月内每个月复查一次,6个月后每3个月复查一次,术后1年每半年复查一次。
随访并收集患者的无瘤生存时间和总体生存时间数据,复发和转移依据影像学检查确诊,影像学检查采用超声检查、CT或MRI。
本研究随访的终点为2014年12月31日或失访、死亡。
三、免疫组化法染色1.方法:取病石蜡包埋的肝癌组织标本,切成4 μm的薄片制成病理切片,分别浸泡在二甲苯和梯度酒精溶液中脱蜡。
EDTA高温抗原修复5 min后,PBS液漂洗3次,每次1 min。
在室温下用3%过氧化氢浸泡20 min,以抑制内源性过氧化物酶活性。
随后,切片滴加TFAP 4抗体(1:50,ab 28512,英国Abcam公司)后4℃冰箱过夜。
PBS漂洗3次,每次1 min后,切片滴加二抗,室温孵育30 min。
PBS 液清洗3次后二氨基联苯胺(DAB)显色,HE复染后切片脱水并封片。
2.结果判定:染色结果评分根据染色强度和染色细胞比例来评判。
染色强度评分标准如下:0分,无染色;1分,弱染色;2分,中度染色;3分,强染色。
阳性细胞比例评分标准如下:1分,0~25%;2分,25%~50%;3分,50%~75%;4分,75%~100%。
最终免疫反应性评分(immunoreactive score,IRS)为两个参数评分之和。
根据中位分数(IRS=4分)将患者分为两组:TFAP 4高表达组(IRS≥4分)和TFAP 4低表达组(IRS<4分)。
随机选取5个高倍镜视野进行评分,所有评分均由两名具有10年以上工作经验的病理科医师独立评分,他们对患者的临床结果和临床病理参数均未知。
四、统计学方法采用GraphPad Prism 5和SPSS 22.0统计软件进行数据分析。
TFAP 4蛋白表达与临床病理参62. The expression of TFAP 4 was not associated with clinicopathological features (P>0.05). The tumor-free survival and overall survival of patients with high expression of TFAP 4 were worse than those with low expression of TFAP 4 (χ2=11.030, 4.269; P<0.05). Cox's regression analysis demonstrated that positive HBsAg was an independent risk factor for the tumor-free survival of HCC patients (HR=4.722, 95%CI: 1.469-19.446, P<0.05), whereas high expression of TFAP 4 was an independent risk factor for tumor-free survival and overall survival of HCC patients (HR=2.437, 2.598; 95%CI: 1.352-4.394, 1.036-6.515; P<0.05). Conclusions High expression of TFAP 4 is an independent risk factor for tumor-free survival and overall survival of HCC patients. Patients with high expression of TFAP 4 have poorer clinical prognosis. TFAP 4 can be used as a biomarker to predict the clinical prognosis of HCC patients.【Key words】Carcinoma, hepatocellular;TFAP4;Prognosis;Immunohistochemistry数与之间的关系分析采用χ2检验。