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水杨酸在羟基自由基检测中的应用
水杨酸是一种有效的抗氧化剂，广泛用于食品、润滑油、建筑材料、农业等诸多领域，以其抗氧化能力在抗衰老领域具有重要的应用价值。
最近，研究人员发现，水杨酸可用于羟基自由基检测，用于观察细胞中的自由基积累。
羟基自由基是过氧化氢（H2O2）和氢原子（H）的特殊混合物，是生物体最普遍的氧化和还原物质，广泛存在于细胞和体液中，可参与多项生物反应。
它们具有十分强的活性，可以攻击和破坏细胞结构，影响细胞表面活性物质的合成，对生物体有着极其重要和不可忽视的影响。
因此，对羟基自由基积累量精确检测及时采取正确的干预措施对生物体具有重要意义。
传统的羟基自由基检测方法，需要大量的试剂以及长时间的实验流程，效率极其低下。
一些研究人员研究发现，水杨酸可以代替实验中常用的试剂，用于羟基自由基检测，并且该方法较其他检测方法的效率更高、试剂更少。
特别是水杨酸具有明显的k-氧化物抑制作用，研究表明，当水杨酸和一定浓度的过氧化氢一起施加到细胞当中时，可以在较短时间内取得较高回收率。
此外，水杨酸可以利用其自身的氧化效应，在检测中产生一定量的三元羟基酸和醛，实现对有五种自由基的同时检测。
最后，值得一提的是，作为一种绿色、安全的抗氧化剂，水杨酸检测羟基自由基无须任何外部试剂，也无需复杂的步骤，只需涂抹到细胞表面即可完成检测，具有很高的经济价值。
从上述信息可以看出，水杨酸用于羟基自由基检测具有显著优势，整个检测过程可以在较短时间内达到较高回收率，有良好的应用前景。
此外，水杨酸较少的检测试剂及其无害的特性也使它在羟基自由基检测方面受到研究者的广泛关注和追捧。
收稿日期：２００６－１１－３０基金项目：江苏大学微纳米科学技术研究开放基金项目作者简介：吴向阳（１９６５－），男，教授，博士，主要从事天然产物活性成分及其应用研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｌｉｕｑｉｎｇ＠ｕｊｓ．ｅｄｕ．ｃｎ匙羹藤粗多糖的提取及其清除羟自由基活性研究吴向阳１，范群艳２，仰榴青３，马维坤３，朱晓宦２，茆广华２（１．江苏大学化学化工学院，江苏 镇江 ２１２０１３；２．江苏大学食品与生物工程学院，江苏 镇江 ２１２０１３；３．江苏大学药学院，江苏 镇江 ２１２０１３）摘 要：目的：研究匙羹藤粗多糖的水提法优化工艺和清除羟自由基活性。
方法：采用苯酚－硫酸法测定多糖含量，以多糖得率为考察指标，在单因素试验结果的基础上，进行正交试验设计，考察温度、时间、固液比、提取次数等因素对多糖得率的影响。
采用水杨酸法考察匙羹藤粗多糖清除羟自由基活性。
结果：影响多糖得率最主要的因素是温度，其次是提取时间。
水提法优化工艺条件为温度１００℃，时间３ｈ，固液比１：１５，提取次数２次。
此条件下多糖得率达２．２１％，粗多糖中多糖含量为２５．５７％。
匙羹藤粗多糖具有清除羟自由基能力，并且其清除能力与浓度有明显的量效关系，匙羹藤粗多糖浓度为３．５ｍｇ／ｍｌ时清除率达５０％，浓度为１２ｍｇ／ｍｌ时其清除率高达９４．４２％。
结论：该优化工艺可用于匙羹藤粗多糖的提取，高浓度匙羹藤粗多糖具有较好的抗氧化活性。
关键词：匙羹藤；多糖；提取工艺；抗氧化；羟自由基Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ Ｓｃａｖｅｎｇｅ Ｈｙｄｒｏｘｙｌ Ｒａｄｉｃａｌｓ ｆｒｏｍ Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅＷＵ Ｘｉａｎｇ－ｙａｎｇ１，ＦＡＮ Ｑｕｎ－ｙａｎ２，ＹＡＮＧ Ｌｉｕ－ｑｉｎｇ３，ＭＡ Ｗｅｉ－ｋｕｎ３，ＺＨＵ Ｘｉａｏ－ｈｕａｎ２，ＭＡＯ Ｇｕａｎｇ－ｈｕａ２（１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１３， Ｃｈｉｎａ；２． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１３， Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１３， Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｆ Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｈｅｎｏｌ－ｓｕｌｐｈａｔｅ ａｃｉｄ． Ｏｎ ｔｈｅｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｅｓｔｓ， ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｔｉｍｅ， ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｓｐｅｃｔ ｔｈｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｔｏｓｃａｖｅｎｇｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｓ ｔｈｅｍｏｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｕｎｉｔ ｉｓ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ： ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ １００ ℃， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ３ ｈ， ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ １：１５ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ２ ｔｉｍｅｓ．Ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｓ ２．２１％， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ２５．５７％． Ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｈａｖｅ ｇｏｏｄｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｓｃａｖｅｎｇｅ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ． Ｔｈｅｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅ ｉｓ ５０％ ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ３．５ ｍｇ／ｍｌ， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅ ｉｓ ９４．４２％ ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １２ ｍｇ／ｍｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ： Ｔｈｉｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ． Ｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｈａｖｅ ｇｏｏｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ａ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌｓ中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）０１－０１０７－０４匙羹藤（Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ （Ｒｅｔｚ．） Ｓｃｈｕｌｔ，简称ＧＳ）为萝藦科匙羹藤属（Ｇｙｍｎｅｍａ Ｒ．Ｂｒ．）类植物，又称武靴藤、羊角藤、金刚藤，主要含有皂甙、萜类、黄酮、多肽、果胶、生物碱等化学成分，研究表明［１］，匙羹藤叶提取物具有降血糖、降血脂、抗龋齿、抑制甜味和抑制肥胖等作用，可用来防治糖尿病和肥胖症，目前对其主要活性成分三萜皂甙类物质研究较多，而对其它活性成分研究少。
马齿苋粗多糖的提取及清除羟自由基活性作用首席医学网 2007年09月07日 10:34:18 Friday205∙中华临床医师杂志征稿 ∙颅脑解剖技术研修班 ∙肝病学科新进展研修班 ∙心律失常现代诊疗会议 ∙医学类核心期刊征稿 ∙老年疾病循证应用会议 ∙小儿心血管疾病会议 ∙第13届国际急诊学大会 ∙临床检验及设备展览会 ∙白内障人工晶状体会议 ∙全国疑难重症肝病大会 ∙四届长城国际男科论坛 ∙2010世界心脏病学大会 ∙泌尿外科学临床研修班 ∙ 股骨头坏死修复论坛作者：朱晓宦 吴向阳 仰榴青 范群艳 茆广华 作者单位：江苏大学食品与生物工程学院； 化学化工学院； 药学院，江苏 镇江 212013加入收藏夹《航空航天医药》由中华人民共和国科学技术部、...中华现代临床护理学杂志征稿[白内障患者术前术后护理][银翘散方小议]·参松养心胶囊胺碘酮治心律失常疗效比较·外固定器结合植骨治尺桡骨骨折后骨不连·中西医结合治疗消化性溃疡53例疗效分析·子宫瘢痕部位穿透性植入胎盘致引产出血·溃疡性结肠炎外科治疗体会真菌性鼻窦炎护理杂志：诚信征稿、发表快[腰椎术后并发症预防护理][中医心理疗法]·写作技巧| 医学论文结果部分的写作技巧·快讯| 《中国医药导刊》杂志征稿函【摘要】目的：研究马齿苋粗多糖的水提法优化工艺和清除羟自由基活性作用。
方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，以多糖提取率为考察指标，进行单因素实验，考察固液比、温度、时间、提取次数等因素对提取率的影响。
在此基础上，进行正交试验，优化水提法工艺条件。
采用水杨酸法考察马齿苋粗多糖清除羟自由基活性。
结果：温度是影响粗多糖提取率的重要因素。
水提法优化工艺条件为温度100 ℃、时间2 h、固液比1∶15、提取次数4次，此条件下多糖提取率达94.26%，粗多糖得率为15.50% ，多糖含量为22.60%。
芳香开窍中药精油配方与风油精醒神功效比较杨淑芬;王海颖【摘要】目的对自拟配方一号(薄荷、白芷、冰片、栀子花)和配方二号(石菖蒲、肉桂、冰片、桂花)的精油喷雾,与市场已有的醒神剂"风油精"三者促醒功效的强弱对比研究.方法以0.5%戊巴比妥钠诱导小鼠入睡,设计同等精油剂量的配方一号组、配方二号组、风油精组和空白对照组,在4个相对密闭小鼠箱内用精油气雾吸入方式促醒小鼠,以翻正反射出现作为小鼠清醒标志,记录每组小鼠睡眠时间和睡眠潜伏期.结果配方一号、配方二号和风油精均不使豚鼠过敏.配方一组和配方二组均能较风油精组缩短小鼠睡眠时间(均P<0.01),配方一组较风油精组能延长睡眠潜伏期(P<0.05),而配方二组和风油精组较空白组睡眠潜伏期延长(P<0.05).配方二组和风油精组比较,睡眠潜伏期差别不大(P>0.05).结论配方一组和配方二组的醒神功效优于风油精,可能与冰片、白芷、石菖蒲对中枢神经影响有关.%Objective:To compare the awakening effect of Wind Medicated Oil with Group1(formula composi-tion:field mint,angelica dahurica,borneol and gardenia savona)and Group 2(formula composition:dwarf sedge, Chinese cinnamon,borneol and fragrans). Methods:Mice were induced to sleep with 0.5% pentobarbital sodium. Group 1,group 2,Wind Medicated Oil group and the blank control group took the same dose of corresponding drugs.In four relatively closed boxes,the mice were awakened by inhalation of essential oil mist. Reversal reflex was used as a sign of mouse sobriety.The sleep time and sleep latency of each group were recorded. Results:All groups did not cause allergic reaction on guinea pigs. Group 1 and Group2 could shorten the duration of sleep of mice compared with WindMedicated Oil group(P<0.01).And Group 1 could prolong the sleep latency compared with Wind Medicated Oil group (P<0.05),while Group2 and Wind Medicated Oil group just led to longer sleep latency than the blank group (P<0.05). Group 2 and Wind Medicated Oil group had few difference in sleep la-tency(P>0.05).Conclusion:The awakening effect of Group1 and Group2 is better than that of Wind Medicated Oil group,which may be concerned with the influence of borneol,angelica dahurica andwarf sedge to central ner-vous system.【期刊名称】《中国中医急症》【年(卷),期】2018(027)002【总页数】3页(P300-302)【关键词】芳香开窍;醒神;精油;风油精【作者】杨淑芬;王海颖【作者单位】上海中医药大学,上海201203;上海中医药大学,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R282.7芳香开窍类中药性温，味辛，擅走窜，归于心肺二经。
用清除羟基自由基法评价大蒜、生姜、洋葱水提物抗氧化能力王征帆
【期刊名称】《中国调味品》
【年(卷),期】2012(037)011
【摘要】实验以罗丹明B作显色剂测定了羟基自由基的生成量,大蒜、生姜、洋葱水提物可以清除羟基自由基,发挥抗氧化作用.结果表明,大蒜、生姜、洋葱水提物对羟基自由基具有较强的清除作用,其中生姜对羟基自由基的清除能力最强.据此评价了大蒜、生姜、洋葱水提物的抗氧化能力大小顺序为:生姜＞洋葱＞大蒜.
【总页数】3页(P89-90,102)
【作者】王征帆
【作者单位】渭南师范学院化学与生命科学学院,陕西渭南714000
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.1
【相关文献】
1.大蒜、生姜、洋葱水提物抗氧化活性的比较 [J], 张强;周正义;王松华;蔡传杰;张晓龙
2.用清除有机自由基DPPH法评价市售腐乳提取物的抗氧化能力 [J], 汪立君;李里特;范俊峰;齐藤昌义
3.用清除羟自由基法评价竹叶提取物抗氧化能力 [J], 郭雪峰;岳永德;孟志芬;汤锋;王进;姚曦;荀航;孙嘏
4.用清除有机自由基DPPH法评价竹叶提取物抗氧化能力 [J], 郭雪峰;岳永德;汤
锋;王进;姚曦
5.用清除超氧阴离子自由基法评价竹叶提取物抗氧化能力 [J], 郭雪峰;岳永德;汤锋;王进;姚曦
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5种中药提取物清除自由基的体外抗氧化活性研究郭新颖; 史玉坤; 陈峰; 陆娟【期刊名称】《《化学工程师》》【年(卷),期】2019(033)009【总页数】4页(P74-77)【关键词】羟自由基; 荧光强度; 抗氧化; 中药【作者】郭新颖; 史玉坤; 陈峰; 陆娟【作者单位】南通市疾病预防控制中心江苏南通 226007【正文语种】中文【中图分类】R284.1羟自由基（hydroxyl radical，·OH）作为生物体内活性氧毒性最强、危害最大的一种自由基，在人体新陈代谢过程中产生，与衰老、肿瘤、水污染等密切相关。
因此，羟自由基的产生、清除、检测与研究对生命科学和环境科学具有重要意义。
天然抗氧化剂具有天然、高效、低毒的特点，中药作为一种天然自由基清除剂，对人类健康的贡献备受关注。
由于中药的抗辐射损伤通过抗氧化作用实现，从中药中寻找自由基消除剂成为现代医药和保健行业的研究热点。
目前，研究物质抗自由基的方法主要有分光光度法[1]、化学发光法[2]、电子自旋共振法[3]和高效液相色谱法[4，5]等，但有的方法仪器昂贵，难以普遍适用和基层推广。
本文通过荧光光度法测定羟自由基的产生，将其应用于中药抗氧化活性的测定。
该方法设备简单、试剂便宜，可为开拓现代食药用途、开发功能性保健药物提供理论和技术基础。
1 实验部分1.1 仪器与试剂F96型荧光分光光度计（上海棱光技术有限公司）；930型荧光光度计（上海第三分析仪器厂）；FA2004型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
5.0 ×10-5mol·L-1曙红B溶液（上海新中化学试剂厂）；5.0×10-4mol·L-1 FeSO4溶液（批号 20140630 国药集团化学试剂有限公司）；2.0×10-3mol·L-1硫脲溶液（批号 96-12-02上海试剂一厂）；2.0×10-3mol·L-1抗坏血酸溶液（批号L-8754-50 Sigma试剂公司）；0.002%H2O2溶液（批号10011218国药集团化学试剂有限公司）；1.0×10-4mol·L-1 H2SO4溶液（批号20061204上海试剂四厂昆山分厂）。
作者： 王福海;徐慧琴;谢彩霞
作者机构： 内江师范学院化学化工学院;河南省轻工业学校
出版物刊名： 萍乡学院学报
页码： 22-24页
年卷期： 2014年 第6期
主题词： 果皮渣提取物 羟基自由基 分光光度法
摘要：本实验采用分光光度法测定十种常见果皮渣提取物的羟基自由基消除能力,并对测定结果进行了分析研究。
发现常见的果皮渣提取物中含有大量抗氧化物质,它们对羟基自由基都有较强的消除能力。
在所测定的十种果皮中,香蕉皮的羟基自由基消除能力最强,西瓜皮次之。
水杨酸在羟基自由基检测中的应用管荷兰;王永顺;林国华【摘要】对近二十年来国内外有关水杨酸为捕捉剂的羟基自由基的测定方法,包括高效液相色谱法及其联用法、比色法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等进行了综述,引用文献25篇.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2010(046)003【总页数】3页(P333-335)【关键词】水杨酸;羟基自由基;检测【作者】管荷兰;王永顺;林国华【作者单位】镇江船艇学院,镇江,212003;镇江船艇学院,镇江,212003;镇江船艇学院,镇江,212003【正文语种】中文【中图分类】O657.7羟基自由基(·OH)是一种氧化能力很强的自由基,它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用,造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤,使细胞坏死或突变;将其应用于环境污染物的处理,可降解环境中大多数有机物,生成二氧化碳和水,无二次污染物产生,且操作条件较容易控制,这些都是许多传统污染治理方法所无法比拟的优点。
因此,·OH参与的各种研究已成为医学、生物学、生物化学和环境化学等领域中重要研究课题。
但由于·OH的反应活性大,寿命短,存在浓度低,给有关的研究和测定造成一定难度。
目前,·OH的测定方法有电子自旋共振法(ESR)[1]、高效液相色谱法(HPLC)[2]、化学发光法[3]、荧光法[4]、分光光度法[56]。
这些方法中大多数都采用·OH的捕捉剂与其结合生成相对稳定的自由基,用新生成的自由基特性来间接测定·OH的表观生成率。
水杨酸又名邻羟基苯甲酸,为无色针状晶体或白色粉末,微溶于水,易溶于极性有机溶剂,如乙醇、丙酮和乙醚等。
其水溶液呈酸性反应,在空气中稳定。
它是重要的精细有机合成中间体,主要用于医药、食品、香料、染料和农药等工业。
国内外实验室常用它作为捕捉剂来测定·OH。
水杨酸甲酯清除羟基自由基活性的研究马建华(集美大学生物工程学院 厦门 361021)马建华 女,48岁,教授,从事有机生物学的研究。
E -mail:ji anhuam1957@国家自然科学基金(30100035)、福建省自然科学基金(C0510029)及福建省教育厅(J A03134)资助项目2005-06-23收稿,2005-10-23接受摘 要 利用脉冲辐解技术研究了水杨酸甲酯清除羟基自由基反应的瞬态吸收谱,测定了水杨酸甲酯与羟基自由基反应的表观速率常数。
辅以常规检测方法,测定了水杨酸甲酯对羟基自由基的清除率。
结果表明,水杨酸甲酯能快速有效清除羟基自由基。
探讨了水杨酸甲酯清除羟基自由基的反应机制。
关键词 水杨酸甲酯 羟基自由基 脉冲辐解Study on the Scavenger Activities of Methyl S alicylateagainst Hydroxyl RadicalMa Janhua(Collegy of Biology Engineerin g ,Jimei Universi ty,Xiamen 361021)Abstract The scavenger activities of methyl salicylate towards the hydroxyl radical and its reaction mechanis m werestudied using pulse radiolytic technique and general test method.The apparent rate cons tan ts for reactions of hydroxyl radical and methyl salicylate were determined by growth trace of transient absorp tions arising from the scavenging of hydroxyl radical by methyl salicylate.Thus methyl salicylate is a good an tioxidant.Key words Methyl salicylate,Hydroxyl radical,Pulse radiolysis活性氧自由基能够引发癌症、自身免疫性疾病、炎症、肿瘤、心肌与脑损伤等性能已被生物医学界所证实,羟基自由基在活性氧自由基中反应活性最强、毒性最大,挖掘开发活性氧自由基清除剂尤其天然活性氧自由基清除剂是多年来医学界的研究热点[1~3]。
水杨酸甲酯天然存在于冬青叶中,是冬青油的主要有效成分,此外,还存在于樱桃、草莓、苹果等,其多种药理功能如消炎、抗菌、止痛等功能已被证实[4]。
目前尚未见其对活性氧自由基反应活性的研究报道。
根据其酚型结构特点,酚羟基脱氢可以形成稳定的酚氧自由基,具有与活性氧自由基反应的结构特点。
本研究通过水杨酸甲酯(MS)对羟基自由基的清除性能研究,证实水杨酸甲酯具有抗活性氧自由基的功能。
1 实验部分1.1 仪器与药品UV -120-02紫外可见分光光度计,10MeV 电子直线加速器。
水杨酸甲酯,硫酸亚铁、过氧化氢、正丁醇、甲苯、吡啶、二甲亚砜、坚牢蓝BB 、硫酸均为分析纯。
试剂用去离子水配制。
1.2 方法1.2.1 毫微秒级脉冲辐解瞬态吸收光谱 将研究对象置于石英样品池内,用脉冲电子束辐照样品池,样品经辐照后产生短寿命瞬态产物,分析光以垂直于电子束的方向通过样品池,经样品以及瞬态产物吸收过的分析光由单色仪分成单色光,再经光电倍增管转变为电信号,电信号由HP54510B 300Hz 瞬态记#228#化学通报 2006年第3期 http:P P 录仪经过A P D 转换成数字信号存于计算机内,最后用计算机处理数据。
所用的石英样品池沿分析光方向长20mm,脉冲电子束方向为10mm,分析光源为500W 氙灯,单色仪型号为44W,瞬态记录仪的频率可调,最高频率为300MHz 。
脉冲辐解实验所使用的加速器为10Me V 电子直线加速器,电子脉冲宽度为8~10ns 可调,单脉冲剂量为10~40Gy 可调,脉冲电流为2~3A,以N 2O 或空气饱和10mmol P L KSC N 水溶液作为化学剂量计,取E (SCN)-2(480nm)=7600L -1#mol -1#cm -1。
1.2.2 羟基自由基的产生与清除率测定[5] 羟自由基的测定方法有电子顺磁共振法、高效液相色谱法和化学发光法等。
这些方法大多需要较昂贵的仪器,操作也较复杂,一般实验室难以应用。
可用二甲亚砜作为水相中#OH 产生的分子探针,定量测定#OH 的产率。
该法的测定原理为:Fe 2++H 2O 2 Fe 3++OH -+#OH(1)C H 3SOC H 3+#OH CH 3SOOH+#CH 3(2)C H 3SOOH +Ar )N N + Ar )NN )S O O CH 3+H +(3)Fenton 反应产生的羟自由基与二甲亚砜反应,生成甲基亚磺酸,再与坚牢蓝BB 盐反应生成偶氮砜,比色法测定其含量可间接测定#OH 的生成量。
在上述体系中加入一定量的水杨酸甲酯,测定吸光度A S ,按下式计算水杨酸甲酯对羟基自由基的清除率:清除率P %=(A o -A S )P A o @100%(4)式中A 0为不加清除剂时测定得到的吸光度,A s 为加入清除剂时测得的吸光度。
2 结果与讨论2.1 水杨酸甲酯与羟基自由基反应的瞬态吸收谱2.1.1 羟基自由基的产生[4] N 2O 饱和的水溶液经电子束辐解后产生的主要初级活性自由基有#OH 、e aq -和#H :H 2O #OH+e aq -+#H(5)e aq -则可被N 2O 转换成#OH:e aq -+N 2O+H 2O #OH+OH -+N 2(6)2.1.2 水杨酸甲酯清除羟基自由基瞬态吸收谱 N 2O 饱和的1@10-4mol #L -1水杨酸甲酯水溶液于电子脉冲结束后在5L s 和15L s 观察到的瞬态吸收谱如图1所示。
在320nm 和380nm 观察到两个宽而强的吸收峰。
320nm 、380nm 吸收峰被归属为水杨酸甲酯酚氧自由基(Ph MS O #),这是羟基自由基进攻水杨酸甲酯分子结构中酚羟基,抽氢所形成[4,6]。
320nm 、380nm 瞬态粒子的产生主要来自以下过程:MS+#OH Ph MS O #+H 2O (7)脉冲辐解N 2O 饱和的1@10-4mol #L -1水杨酸甲酯水溶液(pH 7.3),所产生的Ph MS O #在320nm 、380nm 处观察到的动力学生成曲线如图2所示。
图2显示在10L s 时间内Ph MS O #吸收随时间而上升,约在12L s 基本趋于稳定。
由此动力学生成曲线测得Ph MS O #的表观生成速率常数为4.25@105mol #L -1。
2.2 稳态方法测定水杨酸甲酯对羟基自由基的清除效果羟基自由基的产生:在10mL 刻度具塞试管中,加入2mL 200mmol P L 的二甲亚砜、1mL 0.1m mol P L 的HCl 、215mL 18mmol P L FeSO 4,再加入3mL 80mmol P L 的H 2O 2启动反应。
加去离子水补充至刻度,混匀。
羟基自由基的测定[5]:取1mL 上述混合液,加入2m L 15mmol P L 坚牢蓝BB 盐。
在室温黑暗中反应10min 。
再加1mL 吡啶使颜色稳定,然后加3mL 甲苯P 正丁醇(3P 1)混合液,充分混合,静置分层。
下层相#229#http:P P 化学通报 2006年第3期图1 N 2O 饱和的1@10-4mol #L -1水杨酸甲酯与012m ol #L -1异丙醇水溶液(pH 7.3)于电子脉冲5L s 、15L s 时观察到的瞬态吸收谱Fig.1 The transient absorption spectra from pu ls e radiolysis of1@10-4mol #L -1methyl s alicylate,and 012mol #L -1i -PrOHaqueous solution (pH =7.3),saturated with N 2Oo 5L s,p 15Ls 图2 脉冲辐解N 2O 饱和的1@10-4mol #L -1水杨酸甲酯水溶液(pH 7.3)在320n m 处观察到的Ph MS O #的动力学生成曲线Fig.2 Pulse radiolysis of 1@10-4mol #L -1methyl s alicylate aqueous solution(pH =7.3),s aturated with N 2O ,growth trace of Ph MS O #absorption at 320nm中含有未反应的偶氮盐,用吸管移走弃掉。
甲苯P 正丁醇相用5mL 经正丁醇饱和的水冲洗,移去未反应的偶氮盐,将上清液移到比色皿中,于420nm 测定吸光度A o 。
在上体系中加入一定浓度的水杨酸甲酯,按所述方法测定吸光度A S ,按式(4)计算清除率。
不同浓度水杨酸甲酯对羟自由基的清除率结果见表1。
表1 水杨酸甲酯对羟自由基的清除率测定结果Tab.1 The s cavenger rate of methyl salicylate towards the hydroxyl radical水杨酸甲酯浓度P (mmol #L -1)A S A 0清除率P %0.10.3350.93264.050.20.3270.93264.910.40.3010.93267.700.60.2530.93272.850.80.1630.93282.50水杨酸甲酯微溶于水(<1mmol #L -1),然而表1所示结果表明,反应体系中浓度为0.8m mol #L -1的水杨酸甲酯,其对羟基自由基的清除率就已达到82.5%。
可见,水杨酸甲酯对羟基自由基具有显著的清除效果。
3 结论水杨酸甲酯能快速、高效率地清除羟基自由基。
这一研究结果为水杨酸甲酯具有抗氧化、抗辐射功能提供了有力的证据。
预计水杨酸甲酯作为天然抗氧化、抗辐射剂,将在医学、保健、化妆品等领域得以广泛的应用。
致谢:中国科学院上海原子核研究所苗金玲、林维真与姚思德研究员在脉冲辐解实验中予以指导帮助,在此深表感谢!参考文献[1] R A Floyd.FASEB.J.,1990,4:2587~2597.[2] B N Ames,L S Gold.Mutation Researc h,1991,250:3~16.[3] M J Davies,L G Forni,R L Wills on.J.Biochem.,1988,255(2):512~522.[4] 何坚,孙宝国.香料化学与工艺学)))天然、合成、调合香料.北京:化学工业出版社,1995:401~402.[5] 贾之慎,邬建敏,唐孟成.生物化学与生物物理进展,1995,23(2):184~186.[6] K Steen.Che m.Rev.,1989:503~520.#230#化学通报 2006年第3期 http:P P 。
