20、粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤(6分):1.抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘至恒重,材料干燥至恒重。
2.称取干燥后的材料1-2g,放入研钵中研磨(越细越好)将研磨好的材料用脱脂滤纸包住,用少许脱脂棉擦拭研钵壁上粘的材料及油脂,也一并放入滤纸包. 用棉线拴住滤纸包,将滤纸包放入抽提管,在抽提瓶中加入2/3体积的无水乙醚在70-75℃的水浴上加热,使乙醚回流,控制乙醚回流次数为每小时约10次,共回流约50次,或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。
生物化学实验考核试题库
要求:参加考核的每位学生须从1-6号题中随机抽1题,从7-12号题中随机抽1题,从13-37号题中随机抽1题,从38-46号题中随机抽1题,共计4道考核题进行考核,总分为60分。
一、理论考核题
1盐析和盐溶(3分) 2电泳(3分) 3层析(色谱)(3分) 4酶的活力单位(3分)5比活力(3分) 6分子筛效应(3分) 7电泳的原理(4分)
18、粗脂肪的提取和含量测定的基本原理。:脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸结合成的脂类化合物, 能溶于脂溶性有机溶剂。本实验用重量法,利用脂肪能溶于脂溶性溶剂这一特性,用脂溶性溶剂将脂肪提取出来,借蒸发除去溶剂后称量。整个提取过程均在索氏提取器中进行。通常使用的脂溶性溶剂为乙醚或沸点为30oC -60 oC的石油醚。用此法提取的脂溶性物质除脂肪外,还含有游离脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等,故称为"粗脂肪"。
5、比活力:代表酶制剂的纯度。根据国际酶学委员会规定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示。
6、分子筛效应:凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小"排队,凝胶表现分子筛效应。
7、电泳的原理:电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
(3)当(仅当)操作者错误操作或其他干扰引起微机错误时,应该立即关断主机电源,重新启动,但无须关断灯源电源。
(4)光学器件和仪器运行环境需保护清洁。清洁仪器外表时 ,请勿使用乙醇乙醚等
有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩。
17、蛋白质含量测定的常用方法有那些?:(1)微量凯式定氮法。(2)双缩脲法。(3)folin-酚试剂法。(4)紫外分光光度法。(5)考马斯亮蓝染色法。
8离子交换层析的原理(4分) 9亲和层析的原理(4分)
10凝胶过滤层析的原理(4分)
11吸附层析的原理(4分)
12透析技术的基本原理及其应用(4分)
13聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途(6分)
14按层析过程的机理,层析法分哪四类?按操作形式不同又分哪三类?(7分)
15普通离心机的使用注意事项?(6分)
45配制1L 0.01mol/L的HCl溶液应如何配制(已知浓盐酸比重是1.19g/L,重量百分比浓度为36.5%)?(11分)
46分别配制出10μg/ml,5μg/ml,2μg/ml,1μg/ml的DNA标准溶液,应如何配制?(尽可能节约)(10分)
答案:
1、盐析和盐溶:盐析:在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐(如硫酸氨),使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。盐溶:加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度,即盐溶现象。
2、电泳:带电粒子在直流电场中向着 所带电性相反的电极移动的现象。
3、层析(色谱):用不同物质在不同相态的选择性分配,以流动相对固定相中的混合物进行洗脱,使混合物各组分以不同速度移动,从而达到分离的一种物理方法。
4、酶的活力单位:是指在特定条件下(25℃、最适的pH值和底物浓度),每分钟可催化1微摩尔(10-6摩尔)底物转化所需要的酶量。
R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O
2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4
2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于 H3BO3 溶液中。
反应式为: 2NH4++OH-==NH3+H2O
15、普通离心机的使用注意事项?:
(1).离心机要置水平位置,以保证旋转轴垂直地球水平面。
(2).使用前应检查套环是否平衡(台称)。
(3).离心杯及其外套(离心管套)是否平衡(台称)。
(4).样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡,平衡后把它们放置于转子的对称位置。
16可见分光光度计的使用注意事项?(6分)
17蛋白质含量测定的常用方法有那些?(6分)
18粗脂肪的提取和含量测定的基本原理(6分)
19索氏提取器是由哪几部分组成的?(6分)
20粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤(6分)
21粗脂肪的提取实验中如何减少误差?(6分)
22凯氏定氮法测定总氮量的基本原理(6分)
NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-
3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量。
23、凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些?(6分):凯氏烧瓶 ,容量瓶
凯氏定氮装置 移液管 酸式滴定管 分析天平 电炉 烘箱
②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质,在聚合前可调节单体的浓度比,形成 不同程度交链结构,其空隙度可在一个较广的范围内变化,可以根据要分离物质分子 的大小,选择合适的凝胶成分,使之既有适宜的空隙度,又有比较好的机械性质。一 般说来,含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶,机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质,1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶,而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶,大孔胶易碎,小孔胶则难从管中取出,因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺,以改进凝胶的机械性能。
24、核酸的含量测定常用的方法有哪些?(6分)(1)紫外分光光度法;
(2)定磷法:钼蓝比色法
(3)定糖法:
RNA+盐酸--糠醛+地衣酚--A670,鲜绿色;
8、离子交换层析的原理:离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相,利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。
9、亲和层析的原理:亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。
39凝胶电泳的一般操作步骤(11分)
40普通离心机的使用操作(示范)(10分)
41可见分光光度计的使用操作(示范)(10分)
42如果要105摄氏度干燥某种物质,如何使用干燥箱(示范)?ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ(10分)
43要称取某种药品2.0g,如何使用天平(示范)?(10分)
44要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液应如何配制?(10分)
35提取某种植物组织中的总DNA时,使用的细胞提取液中的主要试剂成分是什么?各有什么作用?(7分)
36如何证明提取到的某种核酸是DNA还是RNA?(6分)
37聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白时,使用的电泳缓冲液PH=8.3,那么样品应点在哪端?为什么?(6分)
二、技能或实验操作考核题
38说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质? 列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。(10分)
23凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些?(6分)
24核酸的含量测定常用的方法有哪些?(6分)
25双倒数法测定米氏常数的基本原理(6分)
26双倒数法测定米氏常数的实验中,决定实验成败的因素有哪些?关键因素是什么?(7分)
27生物细胞的破碎的常用方法有哪些?(6分)
28酶的制备及提取过程中常注意哪些事项?(6分)
10、凝胶过滤层析的原理:一种利用带孔凝胶珠作基质,按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。凝胶过滤层析具有分子筛效应。
11、吸附层析的原理:组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂,各能力不同而进行分离的方法。
12、透析技术的基本原理及其应用:
13、聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途:①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物,没有或很少带有离子的侧基,因而电渗作用比较小,不易和样品相互作用。
1.有机物中的氮在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,消化生成(NH4)2SO4
反应式为: H2SO4==SO2+H2O+[O]
R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3
NH3
3 取出试样,仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完,擦净瓶外壁,将抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干至恒重。
21、粗脂肪的提取实验中如何减少误差?(6分):(1)材料和提取瓶充分干燥。(2)材料尽可能的不损失。(3)提取充分完全。(4)提取后瓶子还要充分的干燥。
22、凯氏定氮法测定总氮量的基本原理(6分):样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫氨.经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液 被中和的程度可计算得样品氮的含量.以甘氨酸为例: