高效液相色谱法法测定不同产地淫羊藿中淫羊藿苷的含量

收稿日期:2008 02 5; 修订日期:2008 08 21
基金项目:国家自然科学基金 国家 十五!科技攻关项目(N o .
2001BA701A36 20)
作者简介:朱 升(1976 ),男(汉族),安徽凤阳人,现任浙江瑞康生物技术有限公司工程师,学士学位,主要从事植物提取物的研究与开发工作.
高效液相色谱法法
测定不同产地淫羊藿中淫羊藿苷的含量
朱 升,欧海军,赵淑儿,左华庭,祝金龙
(浙江瑞康生物技术有限公司,浙江宁波 315800)
摘要:目的比较不同产地、
不同品种的淫羊藿中淫羊藿苷含量差异。

方法建立新的H PLC 检测方法,测定其淫羊藿苷的含量。

结果陕西汉中的淫羊藿中淫羊藿苷含量较高,朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量最高,达到1.33%,是同产地的淫羊
藿的1.8倍。

结论不同产地淫羊藿中淫羊藿苷的含量存在较大的差异,产地及品种影响淫羊藿药材的质量。

关键词:淫羊藿; 淫羊藿苷; 高效液相色谱法中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008 0805(2008)09 2080 02
Deter m ination of Icariin Epim ediu m fro m D ifferent H aital in China by HPLC
ZHU S heng ,OU H
ai j u n ,Z HAO S hu er ,ZUO H ua ti n g ,ZHU J in l o ng (Zhejiang N e w covery B iotech Co .,L td,Zhejiang N ingbo 315800,China)
Abst ract :O bjective T o compare the conten ts of icarii n i n ep i
m ed i u m fro m d ifferent hab ita l and variety .M e thods Establi sh the ne w H PLC ex a m i nati on m ethod ,determ i ne the content of i car ii n .R esu lts T he content i s h i gh i n H anzhong of Shanx i prov i nce ,
and t he content o f ica rii n w hich achiev es 1.33%,is the h i ghest i n N o rt h K orea s '.the conten t o f ica riin is 1.8ti m es of the sa m e hab itat .Con clusi on T he contents o f i car ii n fro m different hab i tats are si gnificantly d ifferen t .H abita ts and var i e ty Effect the quali ty of herbs .K ey w ords :Ep i
m ed i u m; Icar iin ; H PLC 淫羊藿是小檗科淫羊藿属植物淫羊藿的地上部分,具有 补肾阳,强筋骨,祛风湿!的作用。

淫羊藿具有较高的药用和保健价值,我国淫羊藿资源相当丰富,其药用价值和应用领域的拓宽,具有广阔的前景。

1995版∀中国药典#收载了5种淫羊藿植物作为正品淫羊藿药用,分别为心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、巫山淫羊
藿、柔毛淫羊藿和朝鲜淫羊藿[1]。

淫羊藿苷(Icar ii n),分子式为C 13H 40O 15,分子量为676。

它不仅是淫羊藿的主要成分,也是评价淫羊藿质量的重要指标之一。

对于改善心血管系统功能、调节内分泌、增强免疫、抗肿瘤等均表现出生理活性,其次还具有延缓衰老、抗疲劳和耐缺氧等
作用[2]。

1 器材
1.1 仪器与试剂岛津Sh i m adzu V p LC 10AT 高效液相色谱仪,KQ 318T 超声波清洗器。

乙腈为色谱纯(天津四友生物有限公司),甲醇、乙醇、醋酸为分析纯。

1.2 原料淫羊藿苷标准品,自制,纯度为98.6%,国家生物类标准样品证书,证书编号GSB128 2002。

淫羊藿药材,为从陕西、四川、贵州、湖北、湖南、吉林等省的不同区域采集的13个样品,委托浙江大学植物学潘远江教授作品种鉴定。

2 方法
2.1 色谱条件色谱柱为Shi m pack V p OD S(150mm ∃4.6mm I .D );流动相为乙腈、0.2%醋酸水溶液梯度洗脱;流速1.0m l/m i n ;检测波长270nm ;柱温30%;进样量10 l 。

2.2 标准曲线的制备[3]
精密称取淫羊藿苷标准品10.00m g ,置入100m l 容量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成0.10m g /m l 的标准品母液。

精密量取1,2,3,4,5m l 分别置10m l 容量瓶中,
加甲醇至刻度,摇匀。

分别精密吸取10 l,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定色谱峰面积。

2.3 精密度实验以淫羊藿苷50%的样品为考察对象,精密吸取样品溶液(0.60mg /m l)10 ,l 重复进样6次,测定淫羊藿苷的峰面积。

2.4 样品的制备[4]药材粉碎,称取500m g ,加70%酒精100m ,l 回流浸提30m i n ,趁热过滤,冷却后定容到100m l 。

取浸提液适量,过0.45微米孔径的滤膜,成为液相色谱试样。

取试样10 ,l 重复进样3次,取面积平均值,从线性方程计算含量。

3 结果
3.1 样品峰的定性[5~7]淫羊藿苷标准品峰保留值19.98m i n ,药材淫羊藿峰保留值20.17m i n 。

见图1~2。

图1
淫羊藿苷标准品
图2 湖南淫羊藿
2080 时珍国医国药2008年第19卷第9期LISH IZ HEN M EDI C I NE AND MATERI A M ED I CA RESEARCH 2008VOL.19NO.9
3.2 标准曲线以样品浓度为横坐标,色谱峰面积(3次进样平均值)为纵坐标,得线性回归方程:Y=399441X-14515,r= 0.9996(单位mg/m l)。

通过精密度实验,结果表明精密度较好, RSD小于1.5%。

3.3 样品中淫羊藿苷的含量测定[8~10]根据线性方程,测试过的药材与提取物的淫羊藿苷含量见表1。

从表1中可见,药材品质、提取物品质,差别都是较大的。

表1 药材样品淫羊藿苷含量%样品号品名产地淫羊藿苷1朝鲜淫羊藿安徽亳州0.74
2淫羊藿安徽亳州0.51
3淫羊藿安徽亳州0.31
4朝鲜淫羊藿吉林通化0.26
5淫羊藿甘肃0.35
6淫羊藿湖南0.45
7朝鲜淫羊藿陕西汉中 1.33
8淫羊藿陕西汉中0.75
9朝鲜淫羊藿陕西安康0.51
10淫羊藿陕西丹凤0.44
11朝鲜淫羊藿陕西商洛0.36
12箭叶淫羊藿四川巫山0.58
13淫羊藿重庆0.82
4 讨论
4.1 流动相选择流动相选择时,试验了以下4种方法:A 乙腈与0.2%醋酸梯度洗脱,B 甲醇与0.2%醋酸水梯度洗脱,C 甲醇与乙腈水梯度洗脱,D 甲醇与水梯度洗脱。

经比较发现,A条件下样品中淫羊藿苷主峰与杂质峰分离度最佳,且与其它条件下色谱图有较大差异。

相同试液分别在4种条件下测定,最终提取物中淫羊藿苷的含量出入很大,原因是B, C,D条件下分离效果不好,把朝藿定C并入淫羊藿苷,使结果偏高。

4.2 色谱分离效果本法对淫羊藿药材中的各种物质分离良好,除了淫羊藿苷主峰保留值较稳定之外,朝藿定类、金丝桃苷等复现性良好。

本法的药材色谱上出现了很多峰,便于对各种成分进行分离、也便于做指纹图鉴别[11]。

4.3 与新版∀中国药典#中色谱方法的对比∀中国药典#规定的方法,主峰与朝藿定不易分离,而且各峰的保留时间很小,非专业色谱工作者很难鉴别。

图3是淫羊藿药材按∀中国药典#条件检测的,各组分的分离效果明显不良[13]。

图3 现行药典方法检测图谱
4.4 产地对淫羊藿苷含量的影响安徽、吉林、甘肃、湖南、陕西、四川、重庆等地产的淫羊藿,其含量均有较大的差别,从表3中可以看出,陕西汉中朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量最高,达到1.33%,分析原因可能是不同的气候、土壤等环境对淫羊藿苷的积累有较大影响。

4.5 品种对淫羊藿苷含量的影响从表3中可以看出,朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量较高,比同产地的淫羊藿中淫羊藿的含量高,说明了品种对药材的有效成分影响较大。

参考文献:
[1] 郭宝林,肖培根.中药淫羊藿主要种类评述[J].中国中药杂志,
2003.28(4):303.
[2] 张璟霞,苏智先,刘守江.淫羊藿研究进展(英文)[J].西华师范大
学学报(自然科学版),2003,24(2):160.
[3] 国家药典委员会.中国药典,&部[S].北京:化学工业出版
社,2005.
[4] 朱春林,高素琴.淫羊藿的提取工艺优选[J].时珍国医国药,
2001,12(8):687.
[5] Barri n D,Ibrahi m R K,A Isoprenyl ated flavonoi ds-asurvey[J].phy
toche m i stry.1996,43(5):956.
[6] 杨文波,段玉梅.高效液相色谱法测定壮肾安神片中淫羊藿苷的含
量[J].黑龙江医药,2006,26(12):1082.
[7] 韩 昱,刘莲英,郭耀武.H PLC法测定益肾灵胶囊中淫羊藿苷的含
量[J].中国药品标准,2004,5(1):42.
[8] 李绍平,张 平,夏 泉,等.反相高效液相色谱法测定淫羊藿总黄
酮胶囊中淫羊藿苷含量[J].时珍国医国药,2003,14(2):65. [9] 王明权,毕志明,李 萍,等.高效液相色谱法测定淫羊藿中淫羊藿
定C和淫羊藿苷的含量[J].中国中药杂志,2003,28(11):1025. [10] 郭宝林,王春兰,肖培恩,等.箭叶淫羊藿的黄酮类成分分析和质量
评价[J].中草药,1996,27(10):585.
[11] 黄朝瑜,赵陆华,梅玲华,等.淫羊藿药材HpLC指纹图谱的研究
[J].中国天然药物,2003,01(3):146.
[12] H arborne J B et a.l Th e Flavonoi da-Asvan ces i n R esearch S i nce1986
[M].London:Chap m an orH al,l1994.
(上接第2079页)
[3] 刘德育,罗 曼,谢冰芬,等.蛇葡萄素的抗肿瘤作用研究[J].癌
症,2001,20:1372.
[4] 杨秀芬,王乃平,曾繁典.中药有效成分对药物代谢酶的影响[J].
中国中药杂志,2002,27:325.
[5] Yang XF,W ang NP,Lu WH,et a.l E ff ects of G i nkgo b iloba extract
and t ans h i none on cytochro m e P-450is ozy m es and g l utat h ione tran s
f erase i n rats[J].Acta Phar macol S i n,2003,24:1033.
[6] 杨秀芬,王乃平,曾繁典.银杏内酯对大鼠肝细胞色素P450基因
表达的影响[J].中国中药杂志,2005,30:1009.
[7] Yang XF,W ang NP,Zeng FD.Tobacco-s m ok i ng-rel ated f act ors,
cytochro m e P-450pol ymorph is m s,cyt ochrom e P-450i nh i b i tors and
l ung cancer.As i an Journa l ofPhar macodyna m ics and Ph ar m acok i neti cs
[J].A si an Jou rnal of Phar m acodyna m i cs and Phar m acok i neti cs.
2007,7(1):49.
[8] Yang XF,W ang NP.Sm all i nterf eri ng RNA and m i RNA:A re cyto
c h ro m e P-450their t argets[J].As i an Journal of Phar m acodyna m i cs
and Ph ar m acok i netics,2008,8(1):31.
[9] 叶少梅,黄天来,欧卫平,等.补骨脂内酯对戊巴比妥钠及巴比
妥钠所致小鼠睡眠时间的影响[J].新中医,1998,30
(10):39.
[10] 徐月萍.细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用[J].中国药
物与临床,2003,3(2):141.
[11] 李焕冰,钟 文,李铁军,等.灯盏细辛和灯盏花素对戊巴比妥钠
致小鼠催眠的影响[J].药学实践杂志,2007,25(2):85.
[12] 曹 曦,明 亮,李 静,等.冬虫夏草发酵液的镇静催眠作用
[J].安徽医科大学学报,2005,40(4):314.
2081
L I SH I Z H EN M EDIC I NE AND M ATER I A M ED I CA RESEARCH2008VOL.19NO.9时珍国医国药2008年第19卷第9期。