液相色谱定量方法原则

• ♦死体积(dead volume，V0)—由进样器进样口到检测器流动池未被固
定
相所占据的空间。V0＝F×t0〔F为流速〕
• ♦保存时间(retention time，tR)—从进样开场到某个组分在柱后出现浓 度极大值的时间。
• ♦保存体积(retention volume，VR)—从进样开场到某组分在柱后出现浓 度极大值时流出溶剂的体积，又称洗脱体积。VR＝F×tR。
可用下式计算： A ＝ 1.065h× b× tR 〔相对计算可略去1.065和常
数b〕 〔4〕剪纸称重法 对于不对称或别离不完全的峰，可将峰剪下，以
质量代其面积，使用较少。
5 峰面积 A 的测量方法〔三〕
（5）自动积分法 • 将记录仪与自动积分仪连接，可直接准确、快
速地测出峰的面积。 （6）以峰高代替峰面积定量法 • 当各种实验条件严格保持不变时，一定进样范
A ＝ 1.065 h ×w1/2（相对计算可略去前面系 数） （2）峰高乘平均峰宽法
不对称峰不能作前述近似，可于峰高0.15及 0.85处测得峰宽，取其平均值进行计算：
A = h× (w0.15+w0.85)/2
5 峰面积 A 的测量方法〔二〕
〔3〕峰高乘保存时间法 难以量度半峰宽的狭窄峰或半峰宽以上重叠的峰
• 前面：mi ＝ fi Ai 即：fi ＝ mi / Ai
6 定量校正因子〔二〕
• fi 称绝对校正因子，定量分析中常用的是相对校正因 子f 'i，定义为组分的绝对校正因子与标准物质的绝 对校正因子之比：
f fi / fs mi / Ai Asmi 1 ms / As Aims S i
• 定量限〔LOQ〕：是指样品中被测物能被定量测定的 最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精细度。 定量限表达了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力 。检测限（LOD）：系指试样中的被测物能被检查的最低 量，是鉴别试验的灵敏度指标。其越低，反应的灵敏度 越高。
3 液相色谱的定性分析
• 1、与物直接对照 • 2、物峰高增加法 • 3、二极管阵列检测器的三维图谱定性 • 4、与其他仪器联用定性
• ♦调整保存时间(adjusted retention time，t'R)—扣除死时间后的保存时间 。在实验条件〔温度、固定相等〕一定时，t'R只决定于组分的性质，因 此t'R〔或tR〕可用于定性。t'R＝tR－t0
• ♦调整保存体积(adjusted retention volume，V'R)—扣除死体积后的保存 体积V'R＝VR－V0或V'R＝F×t'R
号的曲线 • 基线噪声〔N〕:由各种因素所引起的基线波动 • 基线漂移(Baseline drift):基线随时间定向的缓慢变化
1 有关色谱峰的根本概念〔二〕
2 通过测量和计算得到的色谱参数〔一〕
• ♦死时间(dead time，t0)—不保存组分的保存时间，即流动相〔溶剂〕 通
• 过色谱柱的时间。
f fi / fs mi / Ai Asmi 1 ms / As Aims S i
7 常用的几种定量测定方法〔一〕
（1）归一法 当试样中的全部组分都出峰（即都反映在
色谱图上）时，可以从校正后每峰峰面积占全部 色谱峰总面积的分数，求得该组分的质量分数。
x i% =
fi过测量和计算得到的色谱参数(二〕
• 柱效能：色谱柱在别离过程中主要有动力学参数 决定的别离效能。通常用理论板数或有效板数表 示。
• 理论板数：
• 假设应用调整保存时间 tR′计算理论塔板数， 所得值称为有效理论塔板数( n有效或 neff )
• 有效板数：
2 通过测量和计算得到的色谱参数(三〕
4 色谱法定量的依据
在一定的操作条件下，检测器的响应 信号〔色谱峰的峰面积或峰高〕与进入检 测器组分的量成正比。
即：mi = fi Ai 或 mi = fi hi
式中：mi－组分的量 fi－比例常数 这就是色谱法定量的依据。
5 峰面积 A 的测量方法〔一〕
（1）峰高 h 乘半峰宽 w1/2 法
将色谱峰视为等腰三角形，得到的面积为 实际面积的0.94倍，故实际面积应为：（适合 于对称峰）
别离度：两个相邻色谱峰的别离程度 ，以两个组分保存值之差与其平均峰 宽之比表示。
别离度图示
2 通过测量和计算得到的色谱参数(四）
• 响应值：组分通过检测器系统产生的信 号值。
• 相对响应值：单位量物质与单位量参比 物质的响应值之比。
2 通过测量和计算得到的色谱参数(五）
• 校正因子〔f〕：相对响应值的倒数，它与峰面积的乘 积正比于物质的量。
❖ mi、ms用质量单位时，f 'w称相对质量校正因子 ❖ mi、ms用摩尔为单位时，f 'M称相对摩尔校正因子 ❖ 注意：应用中一般地略去“相对”两字
6 质量校正因子的测定方法〔三〕
• 准确称取一定量待测组分的纯物质和标准物 质的纯物质混和后，取一定量〔在检测器的 线性范围内〕在实验条件下注入色谱仪，出 峰后分别测出两者峰面积，由前式可求得校 正因子。
液相色谱定量方法原那么
1 有关色谱峰的根本概念〔一〕
• 峰底(CD):峰的起点与终点之间连接的直线 • 峰高(h):峰最大值到峰底的距离 • 峰宽(KL):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 • 半顶峰宽(W1/2):通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两
侧相交两点之间的距离 • 峰面积〔A〕:峰与峰底之间的面积,又称响应值 • 拖尾峰〔Tailing peak〕:后沿较前沿平缓的不对称峰 • 前伸峰〔Leading peak〕:前沿较后沿平缓的不对称峰 • 基线〔Baseline):在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信
i1
（可以为质量百分含量或摩尔百分含量）
围内色谱峰的半峰宽不变，即可用峰高代替峰 面积定量，特别对于狭窄的峰，较面积定量法 更为准确。
6 定量校正因子〔一〕
• 检测器对不同物质的响应值不同，故一样质 量的不同物质通过检测器时，产生的峰面积 不等，因而不能直接应用峰面积计算组分含 量。
• 为此引入“定量校正因子〞以校正峰面积， 使之能更真实地反映组分含量。