病证结合动物模型判定标准的建立

基于“病证结合”理论探讨溃疡性结肠炎脾肾阳虚证动物模型建立与评价目前，“病证结合”理论已在实验动物模型的建立与评价中被广泛运用，基于该理论，采用复合法建立的溃疡性结肠炎脾肾阳虚证动物模型，在宏观表征上要求突出“病”与“证”两者的特点，同时结合微观生物学指标及以方测证对模型进行综合评价。

但该病证结合模型在建立与评价过程中凸显的病证关联性不强、模型多重性、评价标准局限等问题阻碍了其进一步发展。

因此，进一步改进该模型建立及评价体系，对溃疡性结肠炎脾肾阳虚病证结合动物模型的完善有着十分重要的意义。

Abstract：Theory of “combination of disease with syndrome” has been widely used in the establishment and evaluation of experimental animal models. The ulcerative colitis animal models with spleen-kidney yang deficiency pattern were established based on the theory according to complex factors. These models were not only required to show the features of “disease” and “syndrome” at the macro characterization，but also combined with microscopic biological indicators and prescription test so as to make comprehensive evaluation. But the problems in the establishment and evaluation of “combination of disease with syndrome” models hindered further development，such as the weak connection between disease and syndrome，multiplicity of models，and limitations in evaluation standards. Therefore，further improvement in the establishment and evaluation of models will make great sense to better ulcerative colitis animal models with spleen-kidney yang deficiency pattern.Key words：ulcerative colitis；spleen-kidney yang deficiency；combination of disease with syndrome；animal models溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种病因尚不十分清楚的直肠与结肠慢性非特异性炎症性疾病。

疾病模型动物的建立与应用研究随着现代医学不断发展，疾病模型动物已经成为了疾病研究和药物筛选的重要手段之一。

疾病模型动物是通过在动物体内模拟疾病的发生和发展，来研究疾病机制以及测试药物疗效的一种方法。

在这篇文章中，我们将探讨疾病模型动物的建立与应用研究。

一、疾病模型动物的建立方法疾病模型动物的建立必须遵循严格的科学规范和伦理标准。

建立疾病模型动物的方法很多，主要包括以下几种：1. 基因敲除/敲入技术这种方法通过人为干预或加强基因的表达，使动物模型表现出类似于人类疾病的特征。

2. 化学诱导或物理刺激这种方法可以通过注射化学物质或施加物理刺激，诱发或加剧疾病的发生和发展。

3. 病原菌感染这种方法将病原菌注入动物体内，让它们发生感染并导致疾病，从而模拟人类感染疾病的情况。

不同的疾病模型动物建立方法适用于不同的疾病类型，在选择合适的建立方法时需要考虑到疾病机理、动物品系、实验条件等因素。

二、疾病模型动物的应用疾病模型动物的应用范围非常广泛，涵盖了许多疾病类型，如肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病、血液疾病等。

下面我们就以糖尿病和阿尔茨海默病两种疾病为例，来介绍疾病模型动物的应用场景。

1. 糖尿病模型动物糖尿病是一种常见的代谢疾病，其主要特征是血糖浓度的升高。

目前，糖尿病相关研究的模型动物主要有高脂饮食诱导的糖尿病模型、胰岛素抵抗型糖尿病模型和胰岛素缺乏型糖尿病模型等。

通过建立糖尿病模型动物，可以研究糖尿病发病机制、探讨新型药物的治疗效果以及制定针对该疾病的预防和治疗策略。

此外，糖尿病模型动物还被广泛应用于胰岛移植和胰岛细胞治疗等生物技术研究领域。

2. 阿尔茨海默病模型动物阿尔茨海默病是一种常见的老年性疾病，其主要特征是记忆力减退和认知功能障碍。

目前，阿尔茨海默病相关研究的模型动物主要有转基因小鼠模型和脑损伤模型等。

通过建立阿尔茨海默病模型动物，可以研究该疾病的病理机制、探讨新型药物的治疗效果以及制定预防和治疗策略。

中医动物模型的研制方法中医动物模型是根据中医理论，对人类疾病原型的某些特征进行模拟复制，创造出的人工疾病和证的实验动物。

通过对动物模型的研究，探讨证的实质，提示辨证论治的基本规律，规范中药及复方的使用，使实验中医学与临床有机地结合，才能使中医理论的发展有所突破，从而有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生、发展规律和研究防治措施。

中医动物模型的建立，其造模方法的选择至关重要，造模方法大致可归纳为如下三种类型。

一、模拟中医传统病因建立动物模型此类模型是依据中医传统理论，以研制开发“纯”中医病证动物模型为目的，一般不与现代医学疾病模型相等，造模方法有单因素和复合因素两种。

1. 单因素造模：如根据中医“恐伤肾”原理，采用猫吓孕鼠法，得到子代先天肾虚模型；用耗气破气理论，以中药(大黄、厚朴、枳实)灌喂大鼠，塑造脾气虚动物模型；以寒邪伤阳、迟脉主寒证的原理，用寒冷刺激法(大鼠在零下15C的冷环境中，持续4H左右)，复制“迟脉”模型，然后应用温阳活血中药(附子、党参、丹参、红花等)使其复健。

2. 复合因素造模：用睡眠剥夺的小站台法，模拟中医理论的“惊”和“劳”等病因，在大鼠身上建立心虚证模型；用中医先天不足和后天失养的病因，复制仔兔体弱易感动物模型，以“捋捏、三揉、三里求”的按摩手法复健，表明此法具有扶正祛邪的作用；采用麻黄汤发汗复加风寒刺激和高温发汗复加风寒刺激制作小鼠卫气虚动物模型，玉屏风散对此模型具有纠正作用；根据血虚证其因不外生血少和耗血多两个方面的理论，用放血和限制饮食法复制“血虚”动物模型；采用饥饿、酒醋及大黄等综合方法塑造“脾虚证”大鼠模型，并经四君子汤在辰、戌两时治疗，结果提示，戌时比辰时治疗效果好。

二、采用西医病因病理复制动物模型此种模型多是在特定的化学、生物、机械和物理的致病因素作用下，复制出西医或中医病名的动物模型，或再用中药或中医疗法观察疗效及监测病理改变，其在造模时重视动物组织、器官或全身的病理损害，这是目前应用最广泛的一种实验形式。

ʌ实验研究ɔ基于 病证结合 构建与评价一种新的抑郁症肝郁脾虚证小鼠模型❋童㊀萍1,2,李玉芳1,2,李睿博3,刘㊀晶3,卜㊀平1,2ә,孔桂美2ә(1.扬州大学临床医学院,江苏扬州㊀225001;2.扬州大学医学院,江苏扬州㊀225001;3.大连医科大学,辽宁大连㊀116044)㊀㊀摘要:目的:基于 病证结合 原则,复合运用慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress ,CUMS )和大黄灌胃构建抑郁症肝郁脾虚证的小鼠模型,探索模型小鼠血浆γ氨基丁酸(GABA )代谢的变化,为抑郁症肝郁脾虚证的研究提供参考㊂方法:将29只成年雄性小鼠随机分为对照组14d 和实验组15d ,对实验组连续14d 施行CUMS ,自第15天开始除每天CUMS 外增加大黄灌胃(15%,0.5ml /d )直至28d 造模结束,对照组不做任何处理㊂观察比较小鼠的体质量增加㊁行为学改变及大便性状的改变和血浆GABA 代谢相关特征㊂结果:2组小鼠在体质量增加㊁行为学改变㊁粪便性状和血浆GABA 代谢的改变方面差异显著㊂结论:CUMS 合并大黄灌胃构建小鼠模型符合抑郁症肝郁脾虚证表现,可应用于抑郁症肝郁脾虚证的基础与临床研究㊂㊀㊀关键词:抑郁症;肝郁脾虚证;病证结合;小鼠模型;GABA ;GAD ;CUMS ;大黄灌胃㊀㊀中图分类号:R749.4㊀㊀文献标识码:B㊀㊀文章编号:1006-3250(2021)01-0050-04Construction and evaluation of a new mouse model of depression with liver depression andspleen deficiency syndrome based on "combination of disease and syndrome"TONG Ping 1,2,LI Yu-fang 1,2,LI Rui-bo 3,LIU Jing 3,BU Ping 1,2ә,KONG Gui-mei 2ә(1.School of Clinical Medicine,Yangzhou University,Jiangsu,Yangzhou 225001,China;2.Medical College of YangzhouUniversity,Jiangsu,Yangzhou 225001,China;3.Dalian Medical University,Liaoning,Dalian 116044,China)㊀㊀Abstract :Objective :To construct a mouse model of depression of liver depression and spleen deficiency syndrome by Chronic Unpredictable mild stress CUMS and Rhubarb gavage based on the principle of combining disease with syndrome ,and the changes of plasma GABA metabolism in the model mice were explored to provide reference for the study of depression with liver depression and spleen deficiency syndrome.Methods :29adult male mice were randomly divided into control group (n =14)and experimental group (n =15).CUMS was administered to experimental group for 14consecutive days ,and Rhubarb gavage (15%,5ml /d )was increased in addition to daily CUMS from day 15until the end of modeling on day 28.The control group did not receive any intervention.And the weight gain ,behavior change and fecal character change of two groups were compared.Results :There were significant differences between the two groups in weight gain ,behavioral changes ,fecal traits and concentration of plasma GABA /GAD65/GAD67.Conclusion :The mouse model of depression of liver depression and spleen deficiency syndromes constructed by CUMS combined with Rhubarb gavage conforms to the manifestation of depression of liver-depression and spleen-deficiency syndromes ,and has clinical and basic research value.㊀㊀Key words :Major depressive disorder ;Liver depression and spleen deficiency syndrome ;Combination of disease and syndrome ;Mouse model ;GABA ;GAD ;CUMS ;Rhubarb gavage❋基金项目:国家自然科学基金资助项目(81673736)-基于ENS-ICC-SMC 网络探讨GERD 复发患者中虚气逆证及中药干预机制作者简介:童㊀萍(1976-),女,江苏扬州人,讲师,博士研究生,从事中西医结合基础与临床研究㊂ә通讯作者:孔桂美(1978-),女,江苏泰州人,副教授,博士研究生,从事中西医结合基础研究,Tel :137****7280,0514-********,E-mail :gmkong@ ;卜㊀平(1955-),男,江苏泰州人,教授,主任医师,博士研究生,从事中西医结合临床与基础研究,Tel :180****0005,0514-********,E-mail :boping@ ㊂㊀㊀抑郁症(major depressive disorder ,MDD )因其较高的发病率㊁致残率㊁自杀率和较低的治愈率,影响着全球3亿多人的健康[1-2]㊂抑郁症是一种高度异质性的疾病,由于缺乏确切的现象学标准和神经生物学基础[3],使诊疗过程复杂,或常因缺乏个体差异性导致治疗效果不佳[4-5]㊂中医学在诊疗过程中强调 辨证论治 ,同样的疾病可表现不同的证型㊂流行病学调查发现,抑郁症肝郁脾虚证最为常见[6]㊂然而至今,基于 病证结合 的抑郁症肝郁脾虚证动物模型的建立及外周血液特征性指标的探索,国内外鲜有报道㊂本研究采用西医病因病理复制疾病的动物模型,联合中医病因病机复制证候的模型,建立抑郁症肝郁脾虚证小鼠模型,并初步研究血浆GABA 代谢的变化,现报道如下㊂1㊀材料与方法1.1㊀动物ICR成年雄性小鼠30只,购自扬州大学比较医学中心,体质量25~29g,动物生产许可证号SCXK (苏)2017-0007㊂于扬州大学中西医结合系实验动物房适应性饲养1周(适应过程中死亡1只)㊂动物房环境温度20~26ħ,湿度40%~60%㊂1周后完成体质量㊁旷场实验㊁蔗糖偏好实验㊁悬尾实验和强迫游泳实验以及粪便性状的基线水平测量,随后将小鼠分为对照组14只和实验组15只㊂为避免造模过程中小鼠之间的相互啮咬,每笼只饲养1只小鼠㊂本实验已通过扬州大学实验动物伦理委员会审查(SYXK(苏)2017-0044)㊂1.2㊀药物10%水合氯醛㊁1%(w/v)的蔗糖溶液㊁生大黄粉㊂1.3㊀试剂及仪器小鼠γ氨基丁酸(GABA)㊁谷氨酸脱羧酶65 (GAD65)和谷氨酸脱羧酶67(GAD67)抗体检测试剂盒(购自上海酶联生物科技有限公司),Rayto RT -6100酶标仪㊁电子计数称㊁秒表㊁计时器㊁悬挂支架,动物行为视频分析系统,1ml注射器,9号灌胃针头㊂1.4㊀造模方法CUMS(Chronic unpredictable mild stress)[7-8]是经典的构建抑郁症动物模型的方法,是指以持续温和不可预知的刺激诱导动物出现和抑郁症患者类似的行为表现;大黄灌胃[9-11]法是以大黄模拟苦寒败胃㊁肝郁日久㊁木郁乘土㊁肝郁脾虚的病理演变过程来构建肝郁脾虚证方法㊂利用病证结合的原则,复合运用CUMS和大黄灌胃进行造模㊂1.4.1㊀抑郁症的造模方法㊀参照CUMS模型,对实验组施行断水断食24h,夹尾1min,10ħ冰水游泳5min,水平摇晃1次/s,持续5min,灯光刺激24h,湿垫料24h,倾斜鼠笼45ʎ,持续24h㊂每天随机选择1种刺激,每种刺激平均使用4次,连续刺激28d㊂1.4.2㊀肝郁脾虚证的造模方法㊀于实验组行CUMS造模第15天开始,同时对实验组给予15%大黄粉悬液0.5ml灌胃(分3次,早0.2ml,中0.15 ml,晚0.15ml),连续14d,于CUMS造模28d结束㊂1.5㊀观察指标及方法造模前和造模后完成2组小鼠的体质量测量㊁行为实验和粪便收集,造模结束后采集小鼠血浆㊂为避免顺序对观察指标的影响,实验组与对照组交叉进行㊂1.5.1㊀抑郁症的观察㊀旷场实验(open field test,OFT)㊁蔗糖偏好实验(sucrosepreference test, SPT)㊁悬尾实验(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FWT)是常用的评价实验动物抑郁症模型的指标㊂本实验以旷场实验中的活跃度和平均速度㊁蔗糖偏好指数(蔗糖水消耗量/ (蔗糖水消耗量+纯水消耗量)ˑ100%)㊁悬尾和强迫游泳不动时间来评估模型小鼠的抑郁程度㊂1.5.2㊀肝郁脾虚证的观察㊀表1示,本研究以小鼠体质量和粪便性状作为评估肝郁脾虚指标㊂Bristol Stool Form Scale(BSFS)常常被用来评估相应的粪便性状并以此来评估肝郁脾虚证的严重程度[12-13]㊂实验前一天和实验结束后一天中午将小鼠置于观察盒内,收集第一粒粪便,根据BSFS的分级标准,按照粪便分型的1~7型分别记为1~7分并进行分类评估㊂表1㊀Bristol粪便量表组别性状分值种类1干硬便㊁成粒状1分种类2干硬便㊁成条状2分种类3条状便㊁表明不平㊁稍干3分种类4条状软便㊁表明光滑4分种类5软便㊁偏烂5分种类6大便稀烂㊁不成形6分种类7水样便7分㊀㊀1.5.3㊀血浆GABA浓度的检测㊀造模结束后,以ELISA法测定小鼠血浆GABA㊁GAD65和GAD67浓度㊂10%水合氯醛腹腔注射(0.04ml/10g),小鼠麻醉后摘眼球取血3ml,置于EDTA抗凝管中混合15min后离心20min(3000r/min),收集上清分装于1.5ml离心管,-80ħ冰箱冻存待检,检测过程按试剂盒步骤进行㊂1.6㊀统计学方法采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析,计量资料以均数ʃ标准差( xʃs)表示,2组间比较采用两独立样本t检验,同组造模前后指标比较采用配对样本t检验,以Pearson相关分析检验相关性,P< 0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀造模对小鼠行为的影响2.1.1㊀造模前后2组小鼠行为指标差异㊀表2示,对造模前后2组小鼠的旷场实验㊁蔗糖偏好实验㊁悬尾实验和强迫游泳实验结果分别进行独立样本t检验和配对样本t检验㊂结果显示,造模使小鼠的平均速度和活跃度降低(P<0.01),小鼠活动受限,蔗糖偏好指数下降(P <0.01),快感缺失,悬尾实验中不动时间延长(P< 0.05),强迫游泳时放弃挣扎时间延长(P<0.01),呈现绝望样抑郁状态㊂2.1.2㊀实验组小鼠行为指标相关性分析㊀表3示,对实验组小鼠的行为指标进行Pearson相关分析,反应活跃程度的指标如平均速度㊁活跃度,与反应快感的指标如蔗糖偏好指数之间呈显著正相关(P<0.01);反应绝望程度的指标如强迫游泳不动时间㊁悬尾不动时间之间呈显著正相关(P <0.05);反应活跃程度的指标与反映绝望程度的指标之间呈显著负相关(P <0.01)㊂结果显示,造模致实验组小鼠的抑郁样行为相关性高,结果稳定一致㊂表2㊀2组小鼠造模前后行为学指标比较(x ʃs )组别鼠数时间旷场实验平均速度(mm /s )活跃度蔗糖偏好指数(%)悬尾不动时间(s )强迫游泳不动时间(s )对照组14造模前15.24ʃ2.1018.34ʃ2.2769.05ʃ7.4179.07ʃ22.1257.24ʃ11.42造模后14.95ʃ1.9818.71ʃ2.6367.91ʃ2.3480.04ʃ15.7358.81ʃ13.81实验组15造模前14.71ʃ2.1417.91ʃ2.9471.31ʃ5.9085.74ʃ19.0057.96ʃ10.91造模后10.90ʃ3.21һһ##14.33ʃ3.55һһ##58.72ʃ6.91һһ##98.27ʃ34.03һ##77.01ʃ16.62һһ##㊀㊀注:与本组造模前比较:һP <0.05,һһP <0.01;与对照组造模后比较:##P <0.01表3㊀实验小鼠各行为指标的相关性比较指标平均速度(mm /s )活跃度蔗糖偏好指数(%)悬尾不动时间(s )强迫游泳不动时间(s )平均速度(mm /s )10.84∗∗0.54∗∗-0.53∗∗-0.68∗∗活跃度 1.000.62∗∗-0.44∗∗-0.74∗∗蔗糖水(%)偏好指数 1.00-0.58∗∗-0.59∗∗悬尾不动时间(s ) 1.000.30∗强迫游泳不动时间(s )1.00㊀㊀注:∗P <0.05,∗∗P <0.01㊀㊀2.2㊀造模对小鼠体质量和粪便的影响表4示,对2组小鼠体质量和粪便BSFS 得分分别进行独立样本t 检验和配对样本t 检验㊂造模降低小鼠体质量增加的幅度(P <0.05),使小鼠粪便含水量增加(P <0.01),出现大便溏薄及类似肝郁脾虚证的表现㊂表4㊀2组小鼠造模前后体质量和粪便性状比较( x ʃs )组别鼠数时间体质量(g )BSFS (分)对照组14造模前33.54ʃ3.62 3.62ʃ0.68造模后37.25ʃ2.69һһ3.47ʃ0.69实验组15造模前34.45ʃ2.67 3.65ʃ0.69造模后36.28ʃ2.06һһ#5.99ʃ0.57һһ##㊀㊀注:与本组造模前比较:һP <0.05,һһP <0.01;与对照组造模后比较:#P <0.05,##P <0.012.3㊀造模对小鼠血浆GABA 代谢的影响㊀表5示,对2组小鼠造模后血浆GABA ㊁GAD65和GAD67浓度进行独立样本t 检验㊂结果显示,造模致小鼠血浆GABA ㊁GAD65和GAD67浓度显著下降(P <0.01)㊂表5㊀2组小鼠造模后血浆GABA ㊁GAD65及GAD67比较( x ʃs )组别鼠数GABA(Umol /ml )GAD65(ng /ml )GAD67(ng /ml )对照组14 5.69ʃ0.797.60ʃ1.1913.07ʃ0.51实验组154.98ʃ10.13##5.63ʃ0.82##9.98ʃ2.02##㊀㊀注:与对照组比较:##P <0.013㊀讨论抑郁症的症状异质性大,其差异性直接影响治疗的结局[4]㊂诊疗的个体化及独特症状的识别与预后有关[14-15]㊂中医的 辨证论治 和 整体观 强调诊治的个体差异,是通过综合体征㊁症状与脉象㊁舌象等多方面信息进行辨别诊治的过程㊂不同证型的疾病,需要根据个体差异进行有针对性的治疗[16]㊂动物模型是研究抑郁症发病机制的重要手段[17]㊂目前,有关抑郁症不同中医证型的动物模型大都借用抑郁症造模方法,往往通过观察总结中医证型[18]或根据中药治疗效果反推可能的证型[19],但存在滞后性和缺乏特异性,影响研究结果的临床转化[20]㊂血液特征性指标异常的发现对于快速诊断疾病意义重大㊂研究发现,GABA 能系统地与抑郁症的发病高度相关[21-23],且可通过调整GABA 及其受体功能调整肝脾的消化功能[24-25]㊂GABA 在体内是由兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu )经谷氨酸脱羧酶(GAD )脱羧而来,GAD 包含2种同工酶GAD65和GAD67[26]㊂研究发现,GABA 能系统功能与肝郁脾虚证密切相关[27-28]㊂基于此,本研究运用 病证结合 理论原则,在CUMS 的基础上联合大黄灌胃,构建抑郁症肝郁脾虚证的小鼠模型㊂模型小鼠表现活动速度减慢㊁活跃度下降㊁蔗糖偏好指数降低㊁悬尾不动时间和强迫游泳不动时间延长等典型的抑郁症状;同时,模型小鼠出现纳差㊁体质量增长缓慢㊁大便稀溏的肝郁脾虚症状,说明模型小鼠具备抑郁症肝郁脾虚证的症状学表现[29-30]㊂本研究以血浆GABA ㊁GAD65和GAD67浓度为指标,探索抑郁症肝郁脾虚证小鼠的外周GABA 代谢情况,以期为抑郁症肝郁脾虚证寻找特征性病理指标,结果提示 病证结合 造模方式削弱了模型小鼠GABA 的代谢㊂病证结合 动物模型在中医药现代化研究中具有明显优势[31]㊂该模型可克服西医辨病与中医辨证局限,使诊疗过程更加具有个体差异,使临床医疗行为更加精准[32]㊂本研究结果显示, 病证结合 构建的抑郁症肝郁脾虚证小鼠具备成功模拟抑郁症病与肝郁脾虚证的临床表型,符合其精神紧张㊁忧郁恼怒,致肝气郁结㊁肝失疏泄㊁横逆犯脾,或思虑伤脾㊁土虚木乘㊁脾失健运㊁气机升降失常[36]的病机,可作为抑郁症肝郁脾虚证的病机㊁治疗的进一步研究,血浆GABA代谢指标可作为佐证指标㊂当然,样本量和小鼠性别的选择是本研究的不足之处,新模型仍需扩大样本量,挖掘并验证更多客观指标㊂本课题组将会继续探究其机制与稳定性,促进中医证候模型的深入研究,不断挖掘病证结合动物模型在中医药现代化研究中的价值和应用㊂参考文献:[1]㊀CHANG C C,TZENG N S,KAO Y C,et al.The relationships ofcurrent suicidal ideation with inflammatory markers and heart ratevariability in unmedicated patients with major depressive disorder[J].Psychiatry Res,2017,258:449-456.[2]㊀LUCAS N,HUBAIN P,LOAS G,et al.Treatment ResistantDepression:Actuality and Perspectives in2017[J].Rev MedBrux,2017,38(1):16-25.[3]㊀DRYSDALE AT,GROSENICK L,DOWNAR J,et al.Resting-state connectivity biomarkers define neurophysiological subtypesof depression[J].Nat Med,2017,23(1):28-38.[4]㊀VAN EEDEN W A,VAN HEMERT A M,CARLIER I V,et al.Severity,course trajectory and within-person variability ofindividual symptoms in patients with major depressive disorder[J].Acta Psychiatr Scand,2018,Accepted Author Manuscript.Doi:10.1111/acps.12987.[5]㊀方倩,郭蓉娟,王嘉麟,等.基于脑电图非线性分析探索肝郁脾虚抑郁症认知功能特征[J].中华中医药杂志,2016,31(2):687-691.[6]㊀相田园,李跃华,金京南,等.91例肝郁气滞及肝郁脾虚型抑郁症患者脑功能S-ET临床研究[J].中国中西医结合杂志,2010,30(1):96-99.[7]㊀WILLNER P.Validity,reliability and utility of the chronic mildstress model of depression:a10-year review and evaluation[J].Psychopharmacology,1997,134(4):319-329.[8]㊀LIU Y N,PENG Y L,LIU L,et al.TNFαmediates stress-induceddepression by upregulating indoleamine2,3-dioxygenase in amouse model of unpredictable chronic mild stress[J].EurCytokine Netw,2015,26(1):15-25.[9]㊀王玉良.中医 脾虚 证动物模型实验研究的进展[J].辽宁中医杂志,1984,15(4):43-46.[10]㊀王晔,王建伟,王纪元,等.中医脾虚证动物模型研究的探析[J].中医药学报,2005,33(3):67-68.[11]㊀唐洪梅,廖小红,房财富,等.肝郁脾虚型大鼠肠易激综合征模型的建立及评价[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(6):138-140.[12]㊀LEWIS S J,HEATON K W.Stool form scale as a useful guide tointestinal transit time[J].1997,32(9):920-924.[13]㊀陈宏雷,宋清,陈佳敏.逍遥丸加减联合心理疗法在肝郁脾虚型肠易激综合征的应用[J].中华中医药学刊,2012,30(6):1428-1430.[14]㊀YU J S,XUE A Y,REDEI E E,et al.A support vector machinemodel provides an accurate transcript-level-based diagnostic formajor depressive disorder[J].Transl Psychiatry,2016,6(10):e931.[15]㊀FUNAKI K,NAKAJIMA S,SUZUKI T,et al.Early Improvementsin Individual Symptoms to Predict Later Remission in MajorDepressive Disorder Treated With Mirtazapine[J].J ClinPharmacol,2016,56(9):1111-1119.[16]㊀YEUNG W F,CHUNG K F,ZHANG N L W,et al.Identificationof Chinese medicine syndromes in persistent insomnia associatedwith major depressive disorder:a latent tree analysis[J].ChinMed,2016,11(1):4-14.[17]㊀DEMIN KONSTANTIN A,SYSOEV MAXIM,CHERNYSHMARIA V,et al.Animal models of major depressive disorder andthe implications for drug discovery and development[J].ExpertOpin Drug Discov,2019,DOI:10.1080/17460441.2019.1575360[18]㊀李君玲.基于慢性不可预知温和应激大鼠模型的 肝主疏泄生物学基础研究[D].北京:北京中医药大学,2016. [19]㊀袁清洁,郭建友,王建伟,等.基于皮质酮-炎性反应-线粒体网络研究抑郁症肝郁脾虚病机及醒脾解郁方干预效应[J].中华中医药杂志,2017,32(5):2241-2245.[20]㊀江虎军,冯锋,董尔丹.模式动物与人类疾病的动物模型[J].生命科学,2011,23(3):234-238.[21]㊀MA K,XU A,CUI S,et al.Impaired GABA synthesis,uptakeand release are associated with depression-like behaviors inducedby chronic mild stress[J].Transl Psychiatry,2016,6(10):e910.[22]㊀DUBIN MARC J,MAO XIANGLING,BANERJEE SAMPRIT,etal.Elevated prefrontal cortex GABA in patients with majordepressive disorder after TMS treatment measured with?protonmagnetic resonance spectroscopy[J].J Psychiatry Neurosci,2016,41(3):E37-45.[23]㊀丁迎,戢汉斌,陈钰,等.Toll样受体4拮抗剂厄立特兰对抑郁症大鼠前额叶和海马神经元发生和γ-氨基丁酸谷氨酸平衡的影响[J].实用医学杂志,2018,34(23):3893-3897. [24]㊀黄育生.基于BDNF/JAK2/STAT3/GABA_AR通路探讨疏肝健脾方对肝郁脾虚IBS-D大鼠的作用机制[D].广州:广州中医药大学,2017.[25]㊀STRANDWITZ PHILIP,KIM KI HYUN,TEREKHOVADARYA,et al.GABA-modulating bacteria of the human gutmicrobiota[J].Nat Microbiol,2019,4(3):396-403. [26]㊀SCHNORBUSCH KATHY,LEMBRECHTS ROBRECHT,PINTELON ISABEL,et al.GABAergic signaling in thepulmonary neuroepithelial body microenvironment:functionalimaging in GAD67-GFP mice[J].Histochem Cell Biol,2013,140(5):549-566.[27]㊀张可,任路,李丹,等.电针对肝郁型功能性消化不良大鼠代谢组学的影响[J].辽宁中医药大学学报,2016,18(6):110-114.[28]㊀许亚辉,吴佳佳,李杰,等.肝郁脾虚证与肠道菌群相关研究[J].世界科学技术-中医药现代化,2018,20(11):1958-1963.[29]㊀黄越燕.病证结合动物模型的研究现状与思考[J].世界中西医结合杂志,2018,13(10):1459-1462.[30]㊀章正祥,曹克刚,高永红.从临床到基础:硝酸甘油实验性偏头痛大鼠模型信度和效度评价[J].中国实验动物学报,2009,17(4):312-314.[31]㊀李晓娟,白晓晖,陈家旭,等.中医动物模型研制方法及展望[J].中华中医药杂志,2014,29(7):2263-2266.[32]㊀蔡定芳.论病证结合临床诊疗模式[J].中国中西医结合杂志,2019,39(2):133-135.[36]㊀周仲瑛.中医内科学[M].北京:中国中医药出版社,2003:245-253.收稿日期:2020-05-22。

动物模型构建成功的标准动物模型在科学研究中起着重要的作用，可以帮助科学家们更好地理解和探索人类和动物的生理、病理以及各种疾病的发生和发展机制。

构建出合适的动物模型对于研究的准确性和可靠性具有重要意义，因此需要具备一定的标准。

首先，一个成功的动物模型需要选择适当的物种。

不同的物种在形态结构、生理功能和代谢特征上存在差异，因此在选择动物模型时需要根据目标研究内容的相关性来确定最合适的物种。

比如，研究心血管疾病可以选择小鼠、大鼠或猪等动物，而研究神经系统疾病则可以选择猕猴、大鼠等。

其次，动物模型在构建过程中需要具备与目标疾病相似的临床表现。

动物模型应能够产生与目标疾病相似的病理损伤和症状，以便科学家们能够准确地观察和研究疾病的发生和发展过程。

比如，构建阿尔茨海默病模型时需要模拟神经细胞退化和脑血管纤维化，构建癌症模型时需要模拟肿瘤的生长和转移。

此外，动物模型在构建过程中还需要注意其可操作性和实验重复性。

一个成功的动物模型应具备较好的操作性，即能够在实验室中进行相关操作和研究，并且能够得到稳定可靠的结果。

在动物模型的构建过程中，需要制定标准的操作流程和实验设计，以确保实验结果的有效性和可靠性。

另外，动物模型的构建还需要考虑动物福利和伦理问题。

身为有机体的动物，它们也有生命和福利需要被尊重和保护。

科学家们在构建动物模型时应该尽量减少动物的痛苦、压力和伤害，并严格遵守相关的伦理规范和动物保护法律法规。

最后，一个成功的动物模型需要具备与人类的相关性。

动物模型的最终目的是为了更好地理解和预测人类的生理和疾病机制，因此需要确保动物模型与人类之间存在一定的相似性和相关性。

研究人员需要注意动物模型在生理结构、代谢途径、基因表达等方面与人类之间的相似性，确保所构建的动物模型能够为人类疾病研究提供有效的参考和启示。

综上所述，一个成功的动物模型应具备选择适当的物种、具有与目标疾病相似的临床表现、具备操作性和实验重复性、考虑动物福利和伦理问题，以及具备与人类的相关性等标准。

医学实验动物模型的建立与应用一、背景介绍在医学领域中，为了研究疾病的发展机制、探索治疗方法以及评估药物安全性，科学家经常需要利用动物模型来进行实验。

医学实验动物模型是通过选择合适的动物种类，仿真人类体内的生理和病理过程，从而实施针对性的实验。

本文将重点讨论医学实验动物模型的建立和应用。

二、医学实验动物模型的建立1. 动物选择：选择合适的动物种类是建立有效且可靠的医学实验动物模型至关重要。

通常情况下，小鼠、大鼠以及非人灵长类动物如猕猴等被广泛应用于医学实验。

其选择取决于所需研究问题的特性和目标。

2. 动物品系选择：除了选择适当种类的动物外，还需要考虑到选用具有特定遗传背景、易于复制和稳定传代等特征的品系。

这有助于减少不同个体之间遗传差异对结果造成影响，并提高数据的可靠性。

3. 动物模型的建立：一般来说，医学实验动物模型可分为两种类型，即自然发病模型和人工诱导模型。

自然发病模型是指利用已存在的某种疾病在动物中自行发生，并与人类类似的动物发展特征进行研究。

而人工诱导模型则是通过给予动物特定的药物、遗传操作或其他干预手段来引起某种特定疾病状态。

这样的建立方法可以精确控制实验条件以及所要求出的结果。

三、医学实验动物模型的应用1. 疾病机制探索：通过构建特定的医学实验动物模型，科学家可以深入了解引起某种疾病的基本机制。

例如，在肿瘤领域，建立小鼠肿瘤移植模型可以帮助科学家揭示不同治疗策略对癌细胞增殖、转移等方面的影响。

这些信息有助于寻找新的治疗靶点以及开发更有效和安全的抗癌药物。

2. 药效评价：医学实验动物模型也被广泛用于评估药物的疗效和安全性。

通过给予动物特定药物并观察其对预先建立的疾病模型的影响，可以了解药物的作用机制以及治疗效果。

这些数据对于进行临床前试验、制定用药方案以及预测药物在人体内的代谢和排泄过程非常重要。

3. 新技术验证：医学实验动物模型也是验证新技术或新治疗方法有效性的重要工具。

例如，在基因编辑领域，科学家们可以利用CRISPR-Cas9系统来改变动物基因组中的有害突变，并观察对应的表型变化。

疾病模型动物的建立与鉴定技术研究在医学研究领域，疾病模型动物的建立及其鉴定技术一直是一个备受关注的热点问题。

疾病模型动物是指具有相同或类似生理与病理特征的动物，被用于对人类疾病的研究。

这些动物模型是疾病研究及新药研发的关键工具。

因此，在动物模型的建立和鉴定方面的研究也显得尤为重要。

一、动物模型建立的方法1. 基因工程法：这种方法是利用基因工程技术对动物的染色体进行改造，从而得到特定的突变基因，并通过检测和观察动物行为和症状来确定其是否符合所使用的疾病模型标准。

2. 化学诱导法：这种方法是通过给予动物特定的化学物质，诱发它们产生特定的症状或疾病，然后根据对该疾病的了解来做出判断。

3. 传染病模型法：这种方法是通过给动物注射一定的传染病菌或病毒，使其感染并出现特定的症状，也可以用来建立疾病模型。

二、动物模型鉴定技术1. 组织学鉴定：这种鉴定技术是通过对动物组织进行观察和分析，来判断其是否符合所使用的疾病模型标准。

常用于通过活体或尸检的方式进行。

2. 生物学特性鉴定：这种鉴定技术是指通过分子、细胞、生化等手段来检测动物是否具有相应的生物学特性，是否表现出与该疾病相符合的生化或代谢异常。

3. 生理学鉴定：这种鉴定技术是指通过对动物的身体机能进行观测和检测，判断其是否符合所使用的疾病模型标准。

常用于观察动物的运动、代谢率、血压、心率和呼吸等生理指标。

三、疾病模型动物的应用疾病模型动物在医学研究中应用广泛，包括研究疾病的发病机制、诊断和治疗方法的开发、药物研发等领域。

1. 研究机制和治疗方法：使用疾病模型动物可以帮助我们了解特定疾病的发病机制，为未来的治疗提供关键信息。

2. 药物研发：疾病模型动物也经常被用于药物研发过程中，作为检测新药疗效的工具。

3. 诊断：疾病模型动物也被用于疾病诊断。

比如，使用特定的基因改造技术，可能可以提高特定疾病的早期诊断率。

总之，建立和鉴定疾病模型动物是进行医学研究的基础，通过这些动物模型的研究，可以为未来的临床应用提供更有效和精准的治疗方案。

病证结合动物模型拟临床研究思路与方法以病证结合动物模型拟临床研究思路与方法为题，本文将介绍如何结合病证与动物模型进行临床研究的思路和方法。

一、引言病证结合动物模型是一种常用的临床研究方法，通过模拟人体疾病状态，利用动物模型进行实验研究，可以更好地理解疾病的发生机制、评估治疗方法的有效性和安全性。

本文将从研究设计、动物模型的选择、病证模拟和数据分析等方面介绍病证结合动物模型的临床研究思路与方法。

二、研究设计1. 确定研究目的：明确所研究疾病的目标，例如治疗效果、安全性评估等。

2. 确定研究类型：根据研究目的确定是前瞻性研究还是回顾性研究，以及实验设计的类型，如随机对照试验、队列研究等。

三、动物模型的选择1. 确定疾病特征：了解所研究疾病的特征，包括病理生理变化、临床表现等。

2. 选择适当的动物模型：根据疾病特征选择合适的动物模型，例如小鼠、大鼠、猪等。

同时考虑动物模型的易操作性、成本和伦理等方面的因素。

四、病证模拟1. 模拟疾病特征：根据所选动物模型的特点，通过操作、药物处理等方式模拟人体疾病的特征，如病理生理变化、临床表现等。

2. 确定治疗方案：根据研究目的，设计合适的治疗方案，包括药物治疗、手术治疗等。

3. 实施治疗：按照治疗方案进行操作，例如给药、手术等。

五、数据收集与分析1. 数据收集：收集实验过程中的相关数据，包括动物的生理指标、病理变化、临床表现等。

2. 数据分析：对收集到的数据进行统计学分析，包括描述性统计分析、方差分析、回归分析等，以评估治疗效果和安全性。

六、结果解读与讨论1. 结果解读：根据数据分析的结果，得出治疗效果和安全性的结论。

2. 讨论：对研究结果进行讨论，评价研究的优缺点、局限性，提出改进和进一步研究的建议。

七、结论病证结合动物模型是一种重要的临床研究方法，通过模拟人体疾病状态，利用动物模型进行实验研究，可以更好地了解疾病的发生机制、评估治疗方法的有效性和安全性。

在进行研究时，需要合理设计研究方案、选择适当的动物模型、模拟疾病特征，并进行数据收集和分析。

动物疾病模型的建立与应用动物疾病模型是现代生物医学研究中不可或缺的工具之一。

通过模拟人类疾病在动物身上的表现和病理过程，科学家能够更好地理解疾病的机制，评估潜在的治疗方法，并为新药的研发提供有效的平台。

这篇文章将探讨动物疾病模型的建立和应用，并讨论其在生物医学研究中的重要性。

一、动物疾病模型的建立在建立动物疾病模型之前，科学家需要详细了解该疾病的病理生理特征以及其潜在的致病因素。

常见的建模动物包括小鼠、大鼠、猪、狗等。

建立动物疾病模型的方法有多种，如基因突变技术、药物处理和遗传的方式等。

1. 基因突变技术在一些疾病中，特定基因突变被认为是病变发生的原因。

科学家可以通过基因编辑技术如CRISPR/Cas9等将特定基因突变导入动物细胞或胚胎中，从而建立疾病模型。

这种方法使得动物能够表现出与人类疾病相似的特征，如阿尔兹海默病和帕金森病等。

2. 药物处理一些药物可以引起特定疾病的病理生理改变。

通过注射或饮食添加这些药物，科学家能够在动物身上建立类似的疾病模型。

例如，使用链霉菌素可以诱导糖尿病，而使用D-半乳糖可以引起肠易激综合征。

3. 遗传方式一些疾病具有遗传性，科学家可以利用这一特点来建立动物疾病模型。

通过选择具有特定基因突变的动物进行繁殖，科学家可以获得携带该突变基因的后代，这些后代将表现出类似于人类遗传疾病的特征。

二、动物疾病模型的应用动物疾病模型在许多领域有着广泛的应用。

下面将介绍几个重要的应用领域。

1. 疾病机制研究通过建立动物疾病模型，科学家能够深入了解疾病的发病机制和病理过程。

通过观察动物模型中的病理变化和分子途径的改变，科学家可以揭示出导致疾病发生的关键因素和分子机制。

例如，在肿瘤研究中，使用小鼠模型可以探索肿瘤形成的分子途径，并为治疗策略的开发提供靶点。

2. 新药筛选和评估动物疾病模型也被广泛用于新药的筛选和评估。

研究人员可以通过给动物模型提供潜在药物，观察其对疾病的治疗效果，从而评估药物的疗效和副作用。

疾病模型动物的建立与治疗研究疾病一直是困扰人类的难题，许多疾病的治疗和预防也一直是研究的热点。

近年来，疾病模型动物的建立和治疗研究成为了一个备受关注的领域，它为人类对疾病的认识和治疗提供了有力的支持。

疾病模型是指通过模拟某种疾病的临床表现和分子机制来研究该疾病的机制和治疗方法的一种方法。

建立疾病模型需要选择一个合适的动物模型，该模型需要表现出疾病的典型症状和病理特征。

常见的疾病模型包括阿尔茨海默病、帕金森病、肝炎等。

疾病模型动物的建立对于研究疾病的发病机制和治疗方法具有重要意义。

例如，阿尔茨海默病是老年人群中常见的疾病，其病理特征包括神经元死亡和β-淀粉样蛋白的沉积。

目前，通过基因敲除或突变等技术建立的小鼠阿尔茨海默病模型已成为研究该疾病的主要工具之一。

这些模型能够准确地模拟阿尔茨海默病的特征，为研究其病理机制提供了宝贵的研究材料。

此外，通过疾病模型动物的建立，还可以筛选和评估新的治疗方法和药物，加速药物研发进程。

在疾病模型动物的治疗研究中，药物筛选是其中重要的一环。

药物筛选需要依靠有效的检测技术和模型动物，通过检测药物对模型动物的影响来评估药物的疗效。

常见的药物筛选方法包括体内和体外实验。

其中体内实验通常使用小鼠或大鼠作为疾病模型动物，通过观察其生理和行为特征来评估药物的疗效。

体外实验则依靠细胞培养技术，通过对细胞生长、代谢和细胞信号传递的影响来评估药物的疗效。

除了药物筛选外，疾病模型动物的治疗研究还包括治疗方法的探索与优化。

例如，在阿尔茨海默病治疗研究中，一些研究表明，光照和声波可以改善疾病患者的认知和行为功能。

这些治疗方法也被应用到小鼠阿尔茨海默病模型中，结果显示它们可以提高小鼠的认知和空间记忆能力。

这为新的阿尔茨海默病治疗方法的开发提供了启示。

总之，疾病模型动物的建立和治疗研究对于研究疾病的发病机制和治疗方法具有重要意义。

通过建立合适的疾病模型动物，可以更准确地模拟疾病的特征，为研究其病理机制提供有力支持；通过药物筛选和治疗方法的探索，可以快速发现新的治疗方法和药物，加速治疗方法的研发进程。

病证结合动物模型的制作、评价与展望【摘要】从病证结合动物模型的制备和评价两个大方面，对病证结合模型的研究进展进行综述。

对病证结合模型的研究意义；模型制备中，病证种类的选择，造模动物的选择，造模因素的选择等环节；模型评价中的评价方法和标准等方面分别进行了阐述。

指出病证结合模型研究中存在的问题，并提出相应建议。

【关键词】病证结合模型；模型制备；评价方法Abstract：This article summarized the study progress in two main aspects of establishment and evaluation methods of integration of disease and syndrome animal models，elaborated the significance of the research of integration of disease and syndrome animal models; the selection of Chinese medicine syndromes，the dieases，the animals for making models，and the facts for making models.Manifest the methods and standards for evaluating the models.Meanwhile point out the problems and give some ideas on the direction of research in the future.Key words：integration of disease and syndrome model; establishment method; evaluation criterion“病证结合”动物模型既有西医疾病的特点，又有中医证候的特征，它将有助于中药药理学研究和中药药效的评价，有利于更全面、客观地认识中药的科学内涵，对于探讨疾病病理生理变化与中医证候特征之间的关系，更是显示出较大的优势。

动物模型构建成功的标准
动物模型构建成功的标准通常取决于研究目的和需求。

以下是一些常见的标准：
1. 模拟疾病特征：如果动物模型是用于模拟特定疾病状态，例如癌症、心血管疾病等，那么成功的标准通常是模型能够复制并表现出所研究疾病的特征，如肿瘤形成、血压升高等。

2. 生理学和病理生理学指标：根据研究需求，常见的成功标准可能包括体重、血液生化指标、组织形态学变化等生理学和病理生理学指标的变化。

3. 药理学效应：如果用来评估药物疗效，动物模型的构建成功则可能取决于疾病症状的改善、疾病进展的延缓等药理学效应。

4. 有效性和可重复性：动物模型的成功还应考虑到研究结果的有效性和可重复性。

模型构建成功的标准也应该包括对研究结果的可靠性和可重复性的评估。

总的来说，动物模型构建成功的标准应该是基于研究目的以及科学严谨性而设定，并且应该由相应的专业人士和研究团队共同制定。

病证结合动物模型的制作、评价与展望
纪冬琛;李昌煜
【期刊名称】《浙江中医药大学学报》
【年(卷),期】2010(034)004
【摘要】从病证结合动物模型的制备和评价两个大方面,对病证结合模型的研究进展进行综述.对病证结合模型的研究意义;模型制备中,病证种类的选择,造模动物的选择,造模因素的选择等环节;模型评价中的评价方法和标准等方面分别进行了阐述.指出病证结合模型研究中存在的问题,并提出相应建议.
【总页数】4页(P615-618)
【作者】纪冬琛;李昌煜
【作者单位】浙江中医药大学,杭州,310053;浙江中医药大学,杭州,310053
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.基于“病证结合”理论探讨溃疡性结肠炎脾肾阳虚证动物模型建立与评价 [J], 郑洁;曹泽标;朱莹
2.试论多因素复合制作病证结合动物模型思路 [J], 赵辉;王键
3.2型糖尿病气阴两虚病证结合动物模型的制备及评价指标的建立 [J], 张译心;王鑫;刘博;纪凤兰;温富春;丁涛;徐惠波
4.妇产科病证结合动物模型研究的现状及展望 [J], 蒋哲;雷磊
5.肾阳虚型心力衰竭病证结合动物模型的建立和评价 [J], 冼绍祥;欧明
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

病证结合子宫内膜异位症动物模型探讨病证结合子宫内膜异位症动物模型不仅为子宫内膜异位症的中医辨证论治研究提供了实验手段，同时也可验证子宫内膜异位症中医病因病机学说，为临床工作提供理论支持。

本文就子宫内膜异位症病证结合动物模型的建立方法、结局检验、存在的局限性及解决措施进行探讨。

标签：中医；证候；子宫内膜异位症；动物模型子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）是指具有生长功能的的子宫内膜组织在宫腔以外的部位出现、生长、浸润、周期性出血，引发疼痛、不孕和结节包块为特点的一种具有侵袭性的妇科常见病、多发病。

近年来，EMs发病率明显上升，复发率高居不下，严重影响患者的生活质量。

以往动物模型的成功构建，为EMs的病因病机、作用机理研究作出了很大贡献，但病证结合EMs动物模型目前应用尚少。

病证结合模型体现中医特色，对于阐述中医病因病机、指导临床辨证论治有一定的意义。

为此，笔者就目前病证结合EMs动物模型的研究进行探讨。

1 病证结合子宫内膜异位症动物模型研究的必要性目前，病证结合动物模型多是根据西医理论复制疾病模型，根据中医理论复制证候模型，再将两者结合起来。

因此，大多数模型是在西医疾病模型的基础上，利用人为干预手段或施加因素，如用西药处理，或采用物理、化学等方法使动物生活环境、条件改变（如进食量、温度、运动等）造成同时具备相应证候的模型。

该类模型既符合中医理论，又符合临床实际。

中医药在缓解EMs主要症状、提高妊娠率及降低复发率等方面疗效确切，且有不良反应少、不影响正常生理周期的独特优势。

目前，临床研究已取得很好疗效，但在中医病因病机、辨证论治等方面缺乏基础研究的理论支持。

EMs相关的实验研究多采用单纯西医EMs动物模型，无法体现中医证候、辨证论治的中医特色，故有必要开展病证结合EMs动物模型的研究。

病证结合EMs动物模型既有明确的疾病诊断和微观、量化和客观的指标，又可体现辨证诊治的特色，对疾病证候的基础研究很有价值。