几条随机克隆的香菇顺式因子特性分析

香菇135菌株特异ＳＣＡＲ标记的分布和遗传特性摘要：用香菇(Lentinula edodes)135菌株的特异SCAR (Sequence Characterized Amplified Region)引物135F/R（扩增601bp的条带）对135菌株的58个原生质体单核体和97个孢子单核体的基因组DNA进行扩增，检验此特异标记在单核体中的分布和遗传规律。

原生质体单核体分为两种交配型A1B1和A2B2，此标记仅存在于后一种核中；另外，此标记在四种交配型的孢子单核体后代中随机分布，显示这个SCAR标记可以稳定遗传到后代，而且与交配型A、B因子之间没有连锁关系。

关键词：遗传规律；香菇；交配型；特异SCAR标记香菇(L. edodes)具有很高的食药用价值，在我国的栽培面积很广，世界年产量居第二位。

尽管它的经济价值如此重要，但我们仍然没有标准的菌株鉴定方法，假种错种问题直接导致农民经济损失，育种进程受阻，制约了我国香菇产业的发展。

所以，快速准确的鉴定香菇菌种是当前研究的重点。

近年来，已有很多SCAR标记被应用于香菇菌株的鉴定。

其中135菌株的一个SCAR特异标记的建立已在生产实践中应用并取得了良好的效果［1］。

135菌株的子实体菇体结实，菇盖圆整，质量好且容易形成花菇，因而在国内广受好评，栽培面积很广。

虽然135菌株特异SCAR标记的可行性和可信度已经得到证实，但是这个标记在135菌株的两个核中是否均匀分布，在有性繁殖过程中是否能够稳定遗传还需要进一步探索。

本实验中，我们利用135菌株的58个原生质体单核体和97个孢子单核体对此标记的特性进行了研究，现将结果报告如下。

1 材料和方法1.1菌株来源135菌株（庆元135）由上海农科院食用菌研究所菌种保藏中心提供。

1.2原生质体的制备以135菌株为材料制备原生质体［1,2］。

将菌丝接种在PDA平板上活化约10 d后，将表面菌丝刮下，置于均质仪中，加入约50 mL的PD液体培养基，高低速间隔打碎约30 s，分别倾倒在两个盛有25 mL PD培养基的三角瓶中，每瓶约倒20 mL，25 ℃静置培养。

20株香菇菌株的ISSR和F—MSAP分析作者：肖冬来张迪林衍铨杨菁来源：《福建农业学报》2018年第08期摘要：利用简单序列重复区间扩增多态性（inter-simple sequence repeat，ISSR）和荧光标记甲基化敏感扩增多态性（fluorescence-labeled methylation-sensitive amplified polymorphism，F-MSAP）分子标记技术对收集到的20株香菇Lentinula edodes菌株进行遗传及甲基化多样性分析。

ISSR结果表明，8对引物共可扩增出98条稳定清晰可辨的条带，其中多态性条带89条，多态性比率为90.82%，样品间的遗传相似系数范围为0.520 4～0.989 7。

F-MSAP结果表明，15对引物共扩增产生13 487个CCGG位点。

在全部检测位点中，半甲基化位点为1 704个，平均半甲基化率12.6%；全甲基化位点为1 865个，平均全甲基化率13.8%。

进一步将MSAP数据分为甲基化敏感多态性（methylation sensitive polymorphism，MSP）和甲基化不敏感多态性（methylation insensitive polymorphism，MISP）。

Mantel检测结果表明，ISSR与MISP分子标记的分析结果有显著的相关性，但ISSR与MSP分子标记的分析结果无显著相关性。

说明香菇不同株系间广泛存在DNA甲基化多样性，在育種中具有重要的应用价值。

关键词：香菇；ISSR；甲基化；MSAP中图分类号：S 646文献标识码：A文章编号：1008-0384（2018）08-794-05Abstract： The inter-simple sequence repeat （ISSR） and fluorescence-labeled methylation-sensitive amplified polymorphism （F-MSAP） markers were used to evaluate the genetic diversity of 20 Lentinula edodes strains. Ninety-eight bands were detected by 8 ISSR primers， of which90.82% were polymorphic. The coefficient of pairwise genetic similarity ranged from 0.520 4 to 0.989 7.A total of 13 487 CCGG sites were detected using 15 selected primer pairs. Among the sites， 1 704 were of hemi-methylation with an average rate of 12.63%， and 1 865 of full-methylation with an average rate of 13.83%. The MSAP data were further divided into methylation sensitive polymorphisms （MSP） and methylation insensitive polymorphisms （MISP） groups. A significant correlation between ISSR and MISP was found by the Mantel test， while none between ISSR and MSP. It appeared that there was a significant methylation diversity among various L. edodes which could be of value for the breeding purpose.Key words： Lentinula edodes； ISSR； methylation； MSAP简单序列重复区间扩增多态性（inter-simple sequence repeat，ISSR）是基于简单重复序列扩增多态性（simple sequence repeat， SSR）建立的一种分子标记技术[1]。

香菇编码线粒体中间肽酶的基因片段的克隆及序列测定摘要：在担子菌中，编码线粒体中间肽酶(mitochondrial intermediate peptidase, MIP) 的基因普遍与交配型A因子紧密连锁。

通过mip基因来定位和分离交配型A因子将是一种有效的研究食用真菌交配型的途径。

本研究通过简并PCR法克隆得到一段531 bp的香菇mip基因片段。

经序列比对分析，该序列与已知的担子菌的mip基因之间有很高的同源性。

关键词：香菇；交配型基因；A因子；mip基因担子菌交配型系统的特点是每个交配型基因的位点上都有很多等位基因。

如灰盖鬼伞的A位点含有160个特异因子，B位点含有79个特异因子[1] 。

林芳灿等（2003）的研究结果认为中国香菇自然群体中约存在121个A特异因子,151个B特异因子[2] 。

不同的等位基因的DNA序列相互之间存在着较大的差异，这种多态性为研究担子菌交配型基因带来了很大的困难。

比如缺少高度保守序列，因而很难设计合适的简并引物用于扩增交配型基因的片段。

由于这方面的原因，担子菌交配型基因的研究进展很慢，特别是在广泛栽培的食用真菌中，如香菇、平菇、金针菇等，目前还没有完整的交配型基因的全长被克隆的报道。

签于此，有必要寻找不同的分子生物学研究路径来克隆食用真菌的交配型基因。

对灰盖鬼伞和裂褶菌的交配型A因子分子结构的研究表明，A位点都与编码线粒体中间肽酶(mitochondrial intermediate peptidase, MIP) 的基因紧密连锁，而且距离不到1000 bp[3,4] 。

A位点和mip基因这种紧密连锁的特性也被进一步证明较普遍地存在于其它伞菌中[5] 。

由于mip基因为单拷贝基因，在担子菌中有很高的保守性[5] ，所以通过mip基因来定位并分离A交配型基因将会是一种有效的研究食用真菌交配型基因的途径。

本研究通过简并PCR的方法从广泛栽培的香菇菌株中扩增出mip基因中的保守片段，并与已有的担子菌mip基因序列相比对，以判定扩增结果的准确性。

香菇菌株出菇性状与产量的相关分析董辉;尚晓冬;曹晖;张旬旬;刘瑞娜【摘要】[Objective]The aim of this research was to explore correlationship among fruiting traits of Lentinus edods strains, which will provide reference and guidance for mushroom cultivation. [Methods] Sixty-eight Lentinus edods strains were cultivated for fruiting and twenty trait indicators were measured. The SPSS 17.0 software was used for factor and path analysis of data. [ Result ]The variance analysis showed significant difference among 20 fruiting indices (P<0.01). From factor analysis, six factors were obtained including the production efficiency factor, single mushroom quality factor, structure factor, the factor of insertion and cropping times, nutrition & growth factor and mycelia mushroom stick interaction effect factor, which accounted for 73.22% of the total information by factor analysis. Three fruiting trait indicators including the mushroom number of single stick, pileus diameter and contamination rate were directly or indirectly found related to single stick yield by path analysis. The results showed that the degree level between independent variables and dependent variable was: mushroom number of single stick > pileus diameter> contamination rate. [Conclusion]The information of fruiting traits in 68 Lentinus edods strains may be characterized by using six factors. Further, the multiple regression equation featuring the relationship between trait index and single-stick yield was y=-96.616+5.389x1+3.087x2+131.744x3.%[目的]探究不同香菇菌株各出菇性状间的关系,以期得出可推及香菇菌株性状间联系的一般性结论,为香菇栽培提供参考.[方法]以68支香菇菌株进行栽培出菇管理,测定20个性状指标,采用SPSS 17.0对数据进行因子分析和通径分析.[结果]对20个出菇指标的方差分析表明性状指标间差异极显著(P＜0.01).通过因子分析将出菇性状指标按照因子得分归纳为6个因子成分,包括产效因子、单菇质量因子、结构因子、着生及潮次因子、营养生长因子和菌丝菌棒互作效应因子,可以解释73.223％的性状变量信息.通过通径分析得到单棒菇数、菌盖直径、污染率等3个出菇性状指标对单棒产量有直接作用和间接作用的量化结果,分析结果表明自变量与因变量关联程度大小为单棒菇数＞菌盖直径＞污染率.[结论]68支香菇菌株出菇性状的信息可以用6个因子成分表征,性状指标与单棒产量之间关系的多元回归方程为y＝-96.616+5.389x1+3.087x2+ 131.744x3.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2012(043)006【总页数】4页(P810-813)【关键词】香菇菌株;出菇性状;产量;因子分析;通径分析;多元回归分析【作者】董辉;尚晓冬;曹晖;张旬旬;刘瑞娜【作者单位】上海市农业科学院食用菌研究所,上海201400;上海海洋大学食品学院,上海201306;上海市农业科学院食用菌研究所,上海201400;上海市农业科学院食用菌研究所,上海201400;上海市农业科学院食用菌研究所,上海201400;上海海洋大学食品学院,上海201306;上海市农业科学院食用菌研究所,上海201400【正文语种】中文【中图分类】S646.12【研究意义】香菇［Lentinus edods（Berk）Sing］是一种重要的食药用栽培真菌。

基于香菇全基因组序列开发的部分SSR标记多态性分析与品种鉴定初探利用香菇（Lentinula edodes）全基因组序列信息开发的35个香菇SSR （simple sequence repeat）分子标记用于中国25个香菇品种的鉴定。

所选SSR 标记共检测出174个条带，各引物检测到的条带数量变化范围为2～12。

筛选出的7对SSR引物组合显示了良好的品种特异性鉴定能力，可以有效地鉴定部分国审香菇品种。

香菇；全基因组序列；SSR；品种鉴定简单序列重复（simple sequence repeat，SSR），又称微卫星DNA，是以2～6个碱基为重复基元的串联重复序列，广泛存在于高等生物的基因组中。

在众多的分子标记方法中，基于PCR的SSR标记具有位点特异、共显性、复等位、基因组中分布广泛等特点，成为构建连锁遗传图谱、研究群体遗传学、绘制品种指纹图谱、筛选目标性状分子标记及分子标记辅助育种等的理想工具。

在未知基因组序列信息的情况下，一般可从EST序列[1]或通过构建微卫星文库[2，3]开发SSR标记。

此过程需构建文库并测序，步骤繁琐、耗时长、开发的标记数量少、难度大、成功率低[4]，限制了SSR技术的普遍应用。

与ESTSSR相比，基于全基因组信息开发的SSR类型更多、多态性更高、分布更广泛[5]。

随着下一代全基因组测序技术的普及，获得全基因组信息进而开发SSR已经变得十分快捷，其开发与应用将会越来越多。

香菇（Lentinula edodes）是我国十分重要的栽培食用菌，近年来栽培地域、季节得到快速拓展，产量增长较快。

香菇栽培的快速发展需要多品种支撑，目前通过国审的香菇品种已经超过20个，各地还有许多同种异名或同名异种的品种在大量使用。

为满足不同栽培需求而进行的多品种配套使用很容易造成菌只炻遥现厥被嵊跋煜愎秸I踔辆惹行枰焖佟⒆既返木帧安啊奔ǚ椒ā；谙愎交蜃樾蛄械腟SR标记的开发对于我国香菇资源的遗传结构分析，分子标记辅助育种，我国主栽香菇品种的亲缘关系理清具有重要应用价值。

文章编号 :1001－4829(2015 02－0713－05DOI :10．16213/j．cnki．scjas．2015．02．048收稿日期 :2014－04－25基金项目 :国家食用菌产业技术体系毛木耳和药用菌栽培岗位、金针菇毛木耳育种与菌种繁育岗位、成都综合试验站 ; 财政基因工程 (2011JYGC09-025 ; 国家食用菌产业技术体系四川食用菌创新团队作者简介 :贾定洪 (1977－ ,男 , 在读博士 , 副研究员 , 主要从事食用菌分子生物学和遗传育种研究 , *为通讯作者。

香菇 gpd 启动子的克隆及序列分析贾定洪 1, 2,王波 1, 彭卫红 1, 甘炳成 1, 黄忠乾 1, 郑林用1, 2*(1．四川省农业科学院土壤肥料研究所 , 四川成都 610066; 2．四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室 , 四川成都 610064摘要 :以香菇 L26菌株为材料 , 采用 Promoter predictions 、Web Signal Scan Program 及 Gardiner-Garden 方法对 gpd 扩增序列进行启动子及 CpG 岛预测 , MEGA4软件构建与其它食用真菌系统发育树。

结果发现该序列(GenBank :KF972468．1 具有 TAT-box 、 CAAT-box 、 IBOXCOＲE和 CpG 岛等特征位点 , 与 GenBank 中多个食用真菌 gpd 启动子序列同源性较高 , 基本证实该序列为香菇 gpd 启动子 , 可为转基因研究等提供参考。

关键词 :香菇 ; 启动子 ; 基因转化中图分类号 :S646．1+2文献标识码 :ACloning and Sequence Analysis of gpd Promoter in Lentinus edodesJIA Ding-hong 1, 2, WANG Bo 1, PENG Wei-hong 1, GAN Bing-cheng 1, HUANG Zhong-qian 1, ZHENG Lin-yong 1,2*(1．Soil and Fertilizer Institute , Sichuan Academy of Agricultural Sciences , Sichuan Chengdu 610066, China ; 2．Key Laboratory of Bio-re-source and Bio-environment , College of Life Sciences , Sichuan University , Sichuan Chengdu 610064, ChinaAbstract :Lentinus edodes L26was studied to analyze its putative cis-acting regulatory elements and CpG islands with Promoter predictions , Web Signal Scan Program and Gardiner-Garden , and construct their phylogenetic tree with other mushrooms using MEGA4software．Ｒesultsshowed that the sequence of Lentinus edodes L26contained the specific sites of TAT-box , CAAT-box , IBOXCOＲE, CpG island etc．, was deposited in GenBank (GenBanK :KF972468．1 , and showed high identity with other mushrooms , which was proved to be gpd promoter , and these ought to pave the way for the study of functional gene , transformation , and so on．Key words :Lentinus edodes ; Promoter ; Transformation香菇 (Lentinus edodes 是世界上最主要的食用菇类栽培品种之一 , 在食用菌的产量构成中占有重要地位 , 由于其味美质嫩和具有增强人体免疫功能的特殊作用 , 已成为全球性备受欢迎的功能食品[1]。

香菇信息素受体编码基因片段的克隆摘要：根据担子菌信息素受体编码基因中的保守区域设计简并引物，通过简并PCR法从香菇的原生质体单核体中扩增出508 bp的DNA片段。

通过同源比对分析，推定该片段包含3个长度分别为56 bp，51 bp和50 bp的内含子，可以编码1段含有117个氨基酸残基的蛋白质序列。

这段氨基酸序列与灰盖鬼伞（Coprinus cinereus）和裂褶菌（Schizophyllum commune）两种担子菌的信息素受体中的同源片段均有65%的相同性和82%的相似性。

关键词：香菇；信息素受体；简并PCR文献标识码：S646.1; Q523.8A香菇（Lentinula edodes）是我国食用菌产业中栽培最广泛、生产量最大的品种。

对香菇所进行的深入和广泛的研究也使得其成为食用菌学科中的模式菌种。

交配型基因的研究是香菇遗传学研究中的一个重要方面，经典遗传学的研究表明，香菇属于四极性交配型系统，由互不联锁的A因子和B因子组成。

构成A 因子和B因子的交配型基因控制着单核菌丝间的亲和反应，参与有性繁殖过程的调控[1]。

香菇交配型基因变异非常大，在不同菌株之间存在众多等位基因，具有很高多态性。

这就为运用分子生物学手段克隆香菇的交配型基因带来很大困难[2]。

从现代分子遗传学角度对香菇交配型基因进行系统研究的报道还非常少。

不少研究结果证明，担子菌交配型B因子的基因由编码信息素和信息素受体基因组成[3]。

信息素是一种信号肽，一般由20多个氨基酸残基构成。

编码信息素的基因很短，变异很大。

信息素受体是一种7次跨膜蛋白，可以将与之亲和的信息素由细胞外传递到细胞内[4]。

编码信息素受体的基因中存在着保守区域，这为利用简并PCR方法从香菇中克隆编码信息素受体的基因片段提供了可能。

本研究通过简并PCR法从香菇的栽培菌株中扩增出信息素受体编码基因Lercb1-B2中的保守片段，并与已登录的担子菌信息素受体编码基因的同源序列相比对，以判定扩增结果的准确性。

基于全基因组序列的香菇商业菌种SSR遗传多样性分析及多位点指纹图谱构建的研究香菇（Lentinula edodes）是世界主要栽培食用菌之一，香菇菌种的准确鉴定是香菇大规模生产和菌种知识产权保护的重要前提。

本研究基于香菇全基因组序列开发200对SSR标记用于25份常用香菇栽培菌种的遗传多样性分析和菌种鉴定。

结果表明：供试材料的遗传相似性较高，遗传相似系数平均值为0.776，最小值为0.567，最大值为1。

基于遗传多样性分析结果，筛选出7对带型清晰且重复性好的SSR标记，并成功构建了11份香菇商业菌种的多位点SSR指纹图谱。

这11份菌种分别为：Cr02、闵丰1号、香菇2414、森源1号、森源8404、香九、广香51号、华香5号、L952、L9319、L808。

香菇；简单重复序列；商业菌种；遗传多样性；指纹图谱香菇（Lentinula edodes）是我国十分重要的栽培食用菌。

自上世纪70年代以来，随着品种改良以及代料栽培技术的推广，我国香菇总产量有了极大的提高，逐渐占到世界总产量的70%以上[1]。

据中国食用菌协会统计，2012年我国香菇总产量达到400万吨，仅次于糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus），是我国第二大栽培食用菌。

随着香菇栽培规模的逐步扩大，香菇栽培菌种的使用数量也越来越多，目前已有25份香菇菌种通过了国家品种审定委员会的认定，用于大规模的商业生产。

对于香菇产业来说，优质的菌种对香菇产量和质量的贡献至关重要。

目前，我国的香菇栽培正逐步从分散的小农小户生产向着专业化、分工化、规模化的方向发展，对香菇栽培菌种的质量和真实性要求越来越严格。

由于缺乏简洁高效的菌种检测手段，生产上假菌种、退化菌种时常冒充优良商业菌种流通于市场，导致菌种供应者和香菇生产者遭受巨大经济损失，迫切需要研制简便、快速、准确的菌种鉴定技术，以保证生产用种的准确无误。

菌种的真实性常通过基于表型分析的DUS（Distinctness，Uniformity and Stability）测试来鉴定。

用SSR分子标记分析香菇原生质体单核体的遗传多样性吴锦荣;鲍大鹏【摘要】运用根据香菇全基因组设计的104对S S R引物,对香菇21株原生质体单核体进行了遗传多样性分析,有58对S S R引物表现出多态性,多态性引物比例为55.8%,获得了430条扩增条带,其中多态性条带占298条,多态性条带比例达69.3%.运用N T S Y S-pc21软件分析了供试菌株之间的遗传相似性,研究表明:栽培品种和野生菌株之间存在明显的遗传差异性,但具有很高的相似系数的栽培品种之间则存在很近的亲缘关系;同一双核体得到的两个原生质体单核体菌株之间存在非常近的遗传关系.【期刊名称】《发酵科技通讯》【年(卷),期】2017(046)004【总页数】5页(P233-237)【关键词】香菇;原生质体单核体;SSR标记;遗传多样性【作者】吴锦荣;鲍大鹏【作者单位】新疆大学科学技术学院 ,新疆阿克苏 843000;上海农业科学院食用菌研究所 ,农业部南方食用菌资源利用重点实验室 ,上海 201403;上海农业科学院食用菌研究所 ,农业部南方食用菌资源利用重点实验室 ,上海 201403【正文语种】中文【中图分类】S646中国是香菇栽培的发源地，距今已有近900 年的香菇栽培历史.香菇在我国食用菌产业链中占有举足轻重的地位.香菇是世界第二大人工栽培食用菌，其产量仅次于双孢蘑菇.香菇产业的发展对香菇育种工作提出许多新的要求，香菇菌株遗传多样性分析是育种工作中一项非常重要的基础性研究,目前已经有很多学者对我国香菇自然种质资源和栽培品种的遗传背景进行了研究[1-5]，我国香菇野生品种拥有丰富的多样性，但是栽培品种的亲缘关系很近，遗传背景单一，多样性不丰富.香菇属于四极性异宗结合担子菌，有性生活史中绝大部分是以双核体菌丝体形式存在.目前对香菇遗传多样性的研究都是以双核体为研究材料，因而所获得的遗传差异是两个可亲和的细胞核的共同表现.而在香菇的杂交育种中，杂交亲本通常是单核体菌株.原生质体单核体菌株在杂交育种中的优点表现为：单核体直接来源于营养菌丝体，无减数分裂过程，从而有利于保存和稳定表达亲本优良性状；直接从菌丝体中获得单核体，减少了育种工作量，也缩短了育种时间；拓宽了无法形成子实体的野生菌质的杂交亲本基因型.1995年，杨岱筠等[6]得到金针菇菌丝体单核体，并分析了其遗传特性；1993年，潘迎捷[7]在异宗结合食用菌原生质体制备的研究中发现，单核体是重要的遗传材料，为食用菌育种开辟新的道路；1999年，上海市农科院以香菇栽培菌种Le1和野生菌种0426单核体为亲本，杂交选育出了申香8号菌种，相比亲本增产24%～30%[8].2002年，焦海涛等[9]进行了香菇单核体杂交试验研究，研究显示:杂交双核菌丝生长速度明显快于其亲本单核体；2008年，宋春艳等进行单核体杂交试验时，以单核体香菇939和中19为亲本，考查杂交体和亲本菌种子实体性状，研究结果表明：10 个杂交体的子实体与亲本有明显差异，且杂交后代的性状与亲本的交配类型有一定的关联性[10].所以，对香菇单核体菌株的遗传多样性的研究不仅能够对品种资源有更加深入的了解，而且能够有助于选择杂交亲本，以及有助于了解品种的遗传背景，开展品种溯源研究.笔者选取了7 对栽培品种的原生质体单核体和7 个野生菌株的原生质体单核体作为供试材料，采用基于香菇全基因组中发掘的SSR分子标记对这些单核体的遗传多样性进行分析.研究表明：21株香菇原生质体单核体间存在遗传差异性，相互之间存在一定的遗传多样性.这是首次对香菇单核体之间的亲缘关系进行报道.供试香菇菌株共21 株(表1)，均为原生质体单核体，其中9 对菌株分别来源于同一香菇双核体菌株，Xd2-6-1，Xd2-3-1和Xd3-3-1菌株分别来源于3个不同亲本.根据香菇全基因组数据(http://172.17.21.49/)，运用Primer primer 5软件设计SSR引物，并由上海生工生物技术公司合成.采用改进的CTAB法[11]提取香菇单核菌丝体中的基因组DNA.10 μL PCR反应体系中含有：1 μL的基因组DNA(50～100 ng/μL)，1 μL10×PCR缓冲液，0.2 μL dNTP(10 nmol/L)，1 μL MgCl2(25 nmol/L)，0.1 μL Taq DNA聚合酶(5 U/μL，Takara公司)，引物(10 μmol/L)各0.75 μL，5.2 μL ddH2O.PCR反应程序为：94 ℃下5 min；然后在94 ℃下50 s，55 ℃下50 s，72 ℃下50 s，共30 个循环；最后72 ℃保持5 min.PCR扩增产物加入6 μL加样缓冲液，混合均匀后在95 ℃下变性5 min，然后置于冰水混合物中冷却3 min，取3 μL于6%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，电泳缓冲液为1×TBE，电泳条件为：电压1 000 V，电流200 mA，功率200 W，电泳时间为45 min.电泳结果银染显色后拍照，进行数据分析.根据电泳结果，有扩增条带记为1，无条带记为0，生成距阵，利用NTSYS-pc软件对数据进行ΜPGMA聚类分析[12].根据香菇全基因组序列设计了共显性、稳定性、多态性和易操作性高，具有扩增产物的104 对SSR引物，经对21 个单核体菌株的遗传多样性分析，其中有58 对引物表现出多态性，占总数的55.8%，如表2所示.在具有多态性的58 对SSR引物标记中，以遗传稳定、多态性高和可靠性强的重复单位二核苷酸和三核苷酸的类型最多，分别为18 个和22 个，分别占总数的31.0%和37.9%.即不采用单拷重复位点进行扩增，从而有效地提高原生质体单核体遗传多样性的鉴定成功率.上述58 对多态性SSR引物在21 个单核体菌株中共扩增出430 条条带，其中多态性条带为298 条，比例达69.3%.应用NTSYS-pc21软件对21 个供试香菇单核体菌株进行遗传聚类分析(图1)，以0.58相似性为切割点，供试菌株可以分为三大类群：类群一为4 株来自湖南张家界的野生菌株的单核体；类群二为3 株来自四川喜德县野生菌株的单核体；类群三为14 株来自栽培菌种的单核体.其中2 株单核体亲本为日本栽培菌株.试验发现在相似系数很高的点，约为0.78，有一个聚集类群，即来自于国内的7 个(表1中的菌株编号为1，2，3，4，5，6，7)栽培菌株的原生质体单核体，从而揭示出它们之间很相似的遗传背景.遗传背景最相似的是源自亲本L66、申18、241及9015菌株的单核体，它们之间存在着最高的相似系数，约为0.88.这一现象暗示了它们可能有比较近的共同祖先，也表明来自相同亲本的单核体间得到的亲本遗传物质较丰富且稳定.已经有很多学者对香菇栽培品种和野生菌株的遗传多样性进行了研究，对亲本的遗传多样性进行研究是育种工作的基础，成功选育优良性状的菌种，关键在于正确选择杂交亲本，在杂交过程中将亲本的优良性状保留并传递下去.迄今为止，所开展的香菇遗传多样性研究都是以双核体菌株为供试材料，导致发生遗传距离偏向于双核菌种中某一单核受体亲本的情况.而以单核体为供试材料的香菇遗传多样性研究则不会出现这种状况.本文的供试原生质体单核体与孢子单核体完全不同：一是依靠原生质体单核化技术得到；二是双核菌丝体未经减数分裂阶段.因最终获得的单核体未经基因重组阶段，因此供试菌株的杂交遗传背景被纯粹、完整和准确地反映出来.此次研究的21 株供试单核体的聚类分析结果表明：所试香菇的栽培与野生菌株之间具有较大的遗传距离，栽培菌株之间的亲缘关系非常相近，与之前对香菇双核体的遗传多样性的研究结果相一致[13-14].本研究首次对香菇单核体的遗传多样性进行了报道，为以后对香菇遗传多样性的研究开辟了一条新路径.笔者的研究方法助推了今后对香菇杂交亲本遗传背景的全面、细致地解剖与了解.在本研究的聚类分析中一个比较有趣的结果：来自同一亲本的两个原生质体单核体多数聚集在一个小类群中，具有相似性，表明它们之间具有很近的亲缘关系.这种现象不仅表现在栽培菌株中，如L66-1和L66-2，武香1号-1和武香1号-2，44-1和44-2，而且也表现在野生菌株中，如L321-1和L321-2，L391-1和L391-2.可以将这个结果称之为“亲本近缘”现象，虽然目前所获得的实验数据尚不足以充分证明“亲本近缘”这一结论，但这种自然现象的发现值得进一步开展研究，并从中揭示新的自然规律，有意识地引入外来类型和野生菌株等重要的种质资源，拓宽育种基础，为香菇杂交育种工作提供新的理论指导.【相关文献】[1] 宋莹,刘娜,肖千明,等.十五个香菇菌株遗传特异性研究[J].北方园艺,2014,22(18):163-166.[2] 宋莹,张忠伟,刘俊杰,等.香菇辽抚4号遗传差异性分析[J].育种驯化,2016,38(5):19-20.[3] 罗海凌,邹龙玉,方雪婷,等.香菇遗传多样性研究进展[J].北方园艺,2014,24(21):185-187.[4] 巫萍,章炉军,张丹,等.利用SSR标记鉴定香菇单核体及杂交后代[J].微生物学通报,2016,43(2):444-455.[5] 刘靖宇,宋秀高,叶夏,等.香菇菌株遗传多样性ISSR、RAPD和SRAP综合分析[J].食用菌学报,2011,18(3):1-8.[6] 杨岱筠,张丕奇,郑美媛,等.白色金针茹原生质体单核菌系的建立及其遗传特性分析[J].食用菌学报,1995,2(4):18-21.[7] 潘迎捷.异宗结合食用菌的原生质体单核化[J].上海农业学报,1993,9(2):1-5.[8] 谭埼,潘迎捷,等.用单核原生质体杂交育成香茹新菌株申香8号[J].食用菌学报,1999,6(2):3-6.[9] 焦海涛,杨先新,周伟,等.香茹原生质体单核体杂交方法试验[J].中国食菌,2002,21(6):8-10.[10] 宋春艳,尚晓冬,谭琦,等.香茹原生质体单核体杂交后代性状变异初探[J].食用菌学报,2008,15(3):1-6.[11] 张红,秦莲花,谭琦,等.用改进的CTAB法提取香菇基因组DNA[J].上海大学学报(自然科学版),2006,12(5):547-550.[12] JAIN N, JAIN S, SAINI N, et a1. SSR analysis of chromosome 8 regions associated with aroma and cooked kernel elongation in Basmati rice[J]. Euphytica, 2006,152(2):259-273.[13] 龚利娟,李玉,刘淑艳.香菇品种遗传多样性RAPD分子标记的研究[J].菌物研究,2005,3(1):17-21.[14] 刘春滟,李南羿,张玉琼.香菇EST-SSR标记的开发及应用[J].食用菌学报,2010,17(2):1-6.。

草菇ｇｐｄ基因的克隆、序列分析和其启动子的推测以及冷诱导对其表达方式的影响草菇3-磷酸-甘油酯脱氢酶（GPD）基因全长1489 bp，含有9个内含子。

gpd 全长cDNA 含有1157核苷酸，包含1个编码337个氨基酸的1011 bp开放阅读框和1个95 bp 3’端非翻译区。

在1220 bp 的5’端侧翼区内检测到启动子元件，该元件含有2个TATA框和3个CAAT框，分别位于开始密码子ATG上游第80、559、333、340和406 bp位点。

Southern 杂交分析表明，草菇基因组含有1个拷贝的gpd 基因。

Northern杂交分析表明，gpd 基因的表达不受冷胁迫诱导。

冷胁迫；基因表达；3-磷酸-甘油酯脱氢酶基因；调控因子；草菇S646.130.1A3-磷酸-甘油酯脱氢酶（gpd）是糖酵解和葡糖异生代谢的关键酶，催化3-磷酸-甘油酯氧化磷酸化产生1，3-二磷酸-甘油酯。

gpd基因通常可持续较高水平表达[1,2]。

在几种食用菌中，gpd的侧翼调控序列被用于构建高效转化系统[3~6]。

此外，gpd 基因在植物和真菌中的表达受非生物因素胁迫诱导，已被用于研究环境信号在拟南芥[7]、钩巢曲霉[8,9]和凤尾菇[10]中对基因转录的调控。

草菇是一种味道鲜美，营养价值高的食用菌，在中国和其他亚洲国家倍受青睐。

有研究报道,草菇子实体和菌丝体的不同分离成分具有增强免疫力、抗肿瘤、降血胆固醇等药用活性[11]。

然而，由于缺乏降解培养料中木质素的关键酶，草菇子实体产量较其他栽培食用菌低得很多[12]。

草菇4 ℃储藏时，菌丝快速自溶，子实体也容易变质[13]，此特性大大限制了该食用菌的贮藏和运输，进而影响了经济效益。

因此，更好地了解草菇低温敏感性机制，开拓将优良性状导入食用菌的有效转化体系具有重要意义。

根据已报道的其他物种gpd基因，我们开展了草菇gpd基因的克隆和测序工作，并对其进行了启动子元件推测和冷胁迫条件下该基因表达方式的研究。

4个香菇品种的AFLP分子标记研究1.研究材料与方法1.1 研究材料本研究选取了4个香菇品种作为研究材料，分别为平菇、杏鲍菇、香菇、牛肝菌。

这4个品种是目前市场上常见的香菇品种，具有较高的经济和食用价值。

1.2 DNA提取与AFLP分子标记采用CTAB法从各个品种的幼嫩菌丝中提取总DNA，提取的DNA经过质量检测后，进行AFLP分子标记。

AFLP分子标记的主要步骤包括DNA限制性内切酶切割、连接酶连接、PCR扩增等，最终得到AFLP分子标记图谱。

1.3 数据分析将AFLP分子标记图谱的数据录入计算机，利用专业的分子标记分析软件进行数据的统计和分析，包括多样性指数、主成分分析以及聚类分析等。

2.研究结果与分析2.1 香菇品种的遗传多样性分析通过AFLP分子标记技术，对4个香菇品种进行遗传多样性分析。

结果显示，4个品种的遗传多样性水平均较高，其中平菇的遗传多样性最丰富，牛肝菌的遗传多样性最低。

这表明香菇品种之间存在较大的遗传差异，为进一步的遗传改良和育种提供了丰富的遗传资源。

2.2 主成分分析利用主成分分析方法对4个香菇品种进行分析，结果显示，前三个主成分累计贡献率达80%以上，说明主成分分析能够较好地反映4个品种之间的遗传差异。

通过主成分分析，可以较为清晰地区分出4个香菇品种，表明它们在遗传水平上存在明显的差异。

2.3 聚类分析将AFLP分子标记数据进行聚类分析，利用UPGMA方法构建聚类树。

结果显示，4个香菇品种呈现出明显的聚类关系，其中平菇和杏鲍菇聚为一类，香菇和牛肝菌聚为一类。

这些聚类关系与实际的遗传关系基本吻合，说明AFLP分子标记技术对香菇品种的遗传关系分析具有较高的准确性和可靠性。

3.研究结论AFLP分子标记技术在香菇品种的遗传多样性研究中具有较高的应用前景，并且对于其他食用真菌的遗传多样性分析也具有一定的借鉴意义。

今后的研究工作可以进一步扩大样本量，结合其他分子标记技术，深入探讨香菇品种间的遗传差异和亲缘关系，为香菇种质资源的保护和利用提供更多的科学依据。

F4菌毛FaeG基因的克隆与序列分析任士飞;张林吉;汪鹏旭【摘要】[目的]克隆F4菌毛FaeG基因,并对其进行序列分析.[方法]利用PCR方法从6株标准F4菌株中扩增FaeG基因片段,测序后用DNAStar软件进行分析和拼接,并与已发表的F4菌毛基因序列进行分析和比较,绘制基因进化树,比较它们之间的同源性和进化关系.[结果]试验成功扩增出FaeG基因片段;所扩增的6株已知血清变异型F4大肠杆菌与标准F4菌株同属于各自基因型,且F4ab与F4ac间的进化关系比与F4ad菌株间的近.[结论]通过该研究可推测F4菌株3个血清变异型的检测不仅可用单因子血清,而且可从DNA水平上进行检测.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(000)018【总页数】3页(P7790-7791,7795)【关键词】PCR克隆;FaeG基因;序列分析【作者】任士飞;张林吉;汪鹏旭【作者单位】徐州生物工程职业技术学院,江苏徐州221006;徐州生物工程职业技术学院,江苏徐州221006;徐州生物工程职业技术学院,江苏徐州221006【正文语种】中文【中图分类】S188由产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)引起的仔猪、犊牛和羔羊腹泻是幼畜的一种最常见病，在世界范围造成了严重的经济损失。

ETEC菌株的致病前提是通过细菌表面的黏附素与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合，从而在该局部组织定居、繁殖、产生毒素或侵入深部损伤或破坏组织，引起疾病或造成隐性感染[1]。

在引起猪腹泻的ETEC中，F4菌毛是较为常见的。

据此，笔者根据已发表的F4菌株FaeG基因序列设计引物，用PCR扩增法从6株标准F4菌株中扩增出FaeG基因序列，并比较它们之间的同源性和进化关系，旨在为ETEC免疫诊断试剂和基因工程疫苗的研制奠定基础。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株。

E.coli C83901(O8:K87，F4ab)、E.coli C83903(O141:K85，F4ab)、E.coli C83600(O8:K87，F4ac)、E.coli C83906(O147:K89，F4ac)、E.coliUP001(O8:K87，F4ad)、E.coli 56/190(O8:K87:H19，F4ad)由徐州生物工程职业技术学院教研室保存。

香菇L808菌株自交子代在变温培养中菌丝生长速度的分化摘要：以香菇（Lentinula edodes）L808菌株为亲本，用多孢自交方法取得164个自交子代菌株，连同亲本分别于填充木屑培养料的大试管中进行6个梯度的变温培养[25、30、32、34、25（恢复）、25 ℃（生长），每个温度培养5 d]，考察变温处理下菌丝生长速度的变化和分化。

结果表明，菌丝生长速度明显受到变温的影响，30～34 ℃的高温对所有菌株造成了不同程度的刺激，返回25 ℃后菌株的恢复和恢复后的生长等均呈现明显分化，供试群体中没有表现完全相同的个体，反应了菌丝生长速度这一性状背后复杂的基因调控体系；而且变温培养的菌丝生长速度应该和恒温培养的菌丝生长速度一样成为菌株特性评价的重要指标。

关键词：香菇；菌丝生长速度；分化；变温处理虽然近年来已对一些种类的食用菌进行了全基因组测序，但我们对食用菌的生长调控、遭遇环境变化时的应答反应等还是缺乏基本了解；描述不同种类食用菌的农艺性状大多局限于子实体方面，菌丝阶段的性状相对较少，仅限于生长速度，菌丝/菌落形态、无性孢子和色素等；在常见的栽培种类中，菌丝生长速度常常作为早期的重要指标广泛应用于菌种特性评价和育种筛选工作中。

此前的研究经常选择在不同的恒温条件下确定菌丝生长的温度范围和最适生长温度，以恒温培养状态下的最快生长速度代表菌丝的生长能力。

笔者之前的实验数据表明恒温下菌丝生长速度（MGR）相同的香菇（Lentinula edodes）和黑木耳（Auricularia auricula）菌株在经历不同的变温培养后生长速度表现出不同程度的分化，基于此，可以推测MGR应该受到多个基因影响，且这些基因在不同温度下的调控应答表现出多样性。

香菇（L. edodes）属低温、变温结实性菌类，非工厂化的栽培模式中生产周期较长（代料栽培4～6个月，段木栽培2～3年），期间不可避免要经历季节和温度的变化，不同温度条件下的菌丝生长和菌丝状态就尤为重要。

香菇交配型因子次级重组体的鉴定李安政;林芳灿【期刊名称】《菌物研究》【年(卷),期】2006(4)3【摘要】对13个香菇菌株的担孢子后代进行了交配型分析,其中8个菌株非亲和反应与亲和反应之比与预期的3:1的比例无显著差异.另外5个菌株非亲和反应与亲和反应之比不符合3:1,其中4个菌株在0.05显著水平的X2值仅略高于理论值,而另一菌株HL01具有特殊的表现,其单核体132个随机配对的非亲和反应与亲和反应之比为82:50,X2值显著偏离3:1的临界值.用4个标准测试菌株鉴定了来自HL01同一子实体的189个孢子单核体的交配型,在189个单核体中,161个单核体归于4种正常交配型(A1B1,A2B2,A1B2,A2B1)之一.而另外28个可能源于次级重组的单核体可分成另外4个类群.通过以所有可能的组合进行配对杂交,进一步分析了28个单核体的交配型.结果表明,次级重组同时在A因子和B因子中发生,重组值分别为8.5%和11.6%.A因子至少由2个亚基组成而B因子可能由不止2个亚基组成.随后的出菇试验表明,至少含有1个重组体的所有可亲和配对均具有结实能力.【总页数】7页(P20-26)【作者】李安政;林芳灿【作者单位】华中农业大学应用真菌研究所,湖北,武汉,430070;华中农业大学应用真菌研究所,湖北,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】Q94【相关文献】1.细胞质因子对香菇交配型因子分离比例的影响 [J], 程水明;徐学锋2.培养基转换法下香菇交配型的准确鉴定 [J], 李安政;林芳灿3.利用OWE-SOJ技术鉴定香菇单核体重组型交配型的研究 [J], 林范学4.基于SNP分型的香菇交配型AS-PCR鉴定 [J], 张美彦;宋春艳;于海龙;谭琦;徐珍;王瑞娟;章炉军;尚晓冬5.OWE-SOJ技术及核迁移试验在香菇交配型因子鉴定中的应用 [J], 林芳灿;汪中文;熊再明;代江红;闵家顺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

4个香菇品种的AFLP分子标记研究
随着分子生物学技术的发展和应用广泛，越来越多的分子标记方法被用于研究植物的
遗传多样性和进化关系。

AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism，扩增片段长
度多态性）是一种简单、高效的分子标记方法，在遗传多样性研究中得到了广泛的应用。

香菇是一种重要的食用菌类，具有广泛的药用和食用价值。

为了研究香菇的遗传多样
性并进行分类和育种工作，许多研究人员利用AFLP方法对不同香菇品种进行了分子标记研究。

本文主要介绍了利用AFLP方法对四个香菇品种进行的分子标记研究。

研究人员收集了四个香菇品种的不同部分组织，如菌盖、菌柄等，并进行了基因组DNA的提取。

接下来，
采用AFLP方法，将DNA进行扩增和分离，得到不同长度的DNA片段。

然后，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，将扩增的DNA片段进行分离和测量。

通过AFLP方法得到的结果表明，四个香菇品种在分子水平上存在一定的差异和相似性。

基于AFLP分析结果，研究人员进行了系统发育分析，构建了四个香菇品种的进化树，揭示了它们之间的亲缘关系。

研究人员还利用AFLP方法分析了四个香菇品种的遗传多样性。

通过计算遗传相似性系数和聚类分析等方法，揭示了不同品种之间的遗传多样性水平和亲缘关系。

香菇EST-SSR标记的开发及应用刘春滟;李南羿;张玉琼【期刊名称】《食用菌学报》【年(卷),期】2010(017)002【摘要】从NCBI中下载了12 184条香菇(Lentinula edodes)表达序列标签(expressed sequence tag,EST)序列,处理后得到全长3 681 177 bp的4 684个Unigene.在其中共发掘出142个简单重复序列(simple sequence repeat, SSR),分布于120条EST中,分布频率为2.99% (平均分布距离:25.924 kb).其中,单、二、三核苷酸重复是主要的重复类型,A/T,AG/CT,ACG/CTG是单、二、三核苷酸的主要重复基序,分别占所有EST-SSR的23.23%、21.83%和10.56%.利用引物设计软件PrimerPremier5.0设计了40对引物,并利用6%变性聚丙烯酰胺凝胶在18个香菇品种中进行检测.其中,22对引物为多态性引物,多态率为55%.应用NTSYS软件的聚类方法分析表明,18份材料遗传相似系数范围为0.375～0.984,与前人研究结果相符.【总页数】6页(P1-6)【作者】刘春滟;李南羿;张玉琼【作者单位】安徽农业大学生命科学院,安徽合肥,230036;浙江林学院农业与食品学院,浙江临安,311300;安徽农业大学生命科学院,安徽合肥,230036【正文语种】中文【相关文献】1.偃麦草EST-SSR标记开发及应用 [J], 王瑞晶;李培英;张延辉2.利用EST-SSR通用性和EST数据库筛选三叶草EST-SSR分子标记 [J], 高雪;王秀华;石香雪;李家丽;赵岩3.兰属植物EST-SSR标记开发及应用 [J], 孙叶;刘红;马辉;单东方;曹宏;包建忠;陈秀兰;赵国琦4.白皮松EST-SSR分子标记的开发及应用 [J], 杨雄;杨宁;袁启华;赵贵娟;李国雷;贾黎明;陈仲5.菠菜性别相关EST-SSR标记的开发及应用 [J], 邓传良;高俊;曹莹;秦瑞云;高武军;卢龙斗因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。