琥珀酸脱氢酶抑制剂研究进展
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本文档由无尘大哥上传至豆丁网实验十三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察实验类型:验证型目的和要求(1)了解琥珀酸脱氢酶的作用(2)掌握酶的竞争性抑制作用原理琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶,测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定三羧酸循环途径是否存在。
琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢,产生的氢可通过一系列传递体最后递给氧而生成水。
在缺氧的情况下,若有适当的受氢体也可显示出脱氢酶的作用。
如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。
这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。
琥珀酸+ 甲烯蓝琥珀酸脱氢酶延胡索酸+ 甲烯白无氧条件丙二酸的化学结构与琥珀酸相似,它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。
若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制。
如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用。
操作方法1.猪心脏制备液:称取新鲜猪心1.5~2.0g放组织捣碎机中,加入等体积的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,捣碎成浆,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置1小时,不时摇动,离心取上清液备用。
2.取4支试管,编号并按下表操作:试管心脏制备液1.5%琥珀酸钠溶液1%丙二酸钠溶液蒸馏水0.02%甲烯蓝(滴)(滴)(滴)(滴)(滴)1 5 5 -10 22 5 5 -10 2(先煮沸)3 5 5 5 5 24 5 10 5 5 23.各管溶液混匀后,每管各加液体石蜡一薄层(约5~10滴)。
4.各管置于37℃水浴中,半小时内观察各管颜色变化,比较其速度并说明原因。
然后将第1管用力摇动,观察其有何变化?为什么?试剂和仪器1.1.5%琥珀酸钠溶液:称取琥珀酸钠1.5g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml。
如无琥珀酸钠可用琥珀酸配成水溶液后,以氢氧化钠溶液中和至pH7~8。
2.1%丙二酸钠溶液:称取丙二酸钠1g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml。
实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制
一实验目的
了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应中竞争抑制。
二实验原理
肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶,能催化琥珀酸脱氢氧化生成延胡索酸,脱下的一对氢原子由FAD接受,生成FADH2。
本实验在无氧条件下采用甲烯蓝为受氢体(蓝色),接受FADH2传递的氢原子,使甲烯蓝受氢还原成甲烯白(无色),以指示酶的活性。
丙二酸与琥珀酸的结构相似,是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。
在该酶促反应中设置不同含量的底物,并加入等量的丙二酸,观察甲烯蓝颜色消退的速度,判断琥珀酸脱氢酶的活性及丙二酸对酶活性的抑制程度。
三药品器材试管、滴管、高速组织捣碎机、恒温水浴箱、组织等。
1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液(Ph7.4)取0.1mol/L磷酸氢二钠溶液81ml和0.1mol/L
磷酸二氢钠19ml混合即成。
2. 1.5%琥珀酸钠溶液。
3.1%丙二酸钠溶液。
4.0.02%甲烯蓝溶液。
5.液体石蜡。
6.肌肉匀浆取新鲜的动物肌肉组织适量,用组织剪将其剪碎,加入pH
7.4磷酸盐
缓冲液,置于高速组织捣碎机中加工成约20%的肌匀浆。
四实验方法取四支试管,编号,按下表操作:
中保温,在15~20分钟内观察各管各管的颜色变化,做好记录。
五思考题
1结合本实验说明竞争性抑制的特点。
2结合实验原理说明各管颜色变化的原因。
Research Progress on Resistance of Plant Pathogens
to SDHI Fungicides
作者: 李培谦[1];杨瑾[1];冯宝珍[1]
作者机构: [1]运城学院生命科学系,山西运城044000
出版物刊名: 运城学院学报
页码: 1-6页
年卷期: 2020年 第6期
主题词: 植物病原真菌;琥珀酸脱氢酶抑制剂;抗药性;突变;适合度
摘要:琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)类杀菌剂作用于病原真菌呼吸链琥珀酸脱氢酶,阻断电子传递干扰真菌能量代谢而起到杀菌作用。
新一代的SDHI类杀菌剂由于作用位点单一、杀菌谱广,对多种植物病原真菌都具有良好的防治效果。
然而,由于广泛高频使用,田间已经出现了抗药菌株,这最终可能导致大范围抗药性的产生及药效降低。
植物病原菌对SDHI类杀菌剂的抗性是由复合体II基因突变引起的,抗性突变体检测的方法包括生物测定法和分子诊断方法。
杀菌剂的使用方式是影响病原菌适合度代价的重要因素。
测定菌体适合度可以预测整个种群的抗性发展状况。
SDHI杀菌剂之间存在交互抗性,但同一杀菌剂对同一种群的病原菌交互抗性模式存在差
异。
实验十六:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用【实验名称】:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用09救援一班第三大组李岚宇2009222336室温:25℃(一)实验目的:1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。
2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。
(二)实验原理:化学结构与酶作用的底物结构相似的物质,可与底物竞争结合酶的活性中心,使酶的活性降低甚至丧失,这种抑制作用称为竞争性抑制作用。
琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶,其辅基为FAD,如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。
这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。
丙二酸的化学结构与琥珀酸相似,它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。
若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制。
如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用。
(三)实验材料与仪器:1器材大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管架、恒温水箱、电热水浴锅2试剂0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L 丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸缓冲液、0.02%甲烯蓝、液体石蜡。
(四)实验步骤:1、酶提取液的制备:去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏,用冷水洗3次,加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH 在7.4。
在匀浆器中进行匀浆,然后用纱布过滤,用干净的烧杯收集过滤的备用。
2、取试管6支,编号,在按图步骤操作,酶提取液(ml)磷酸缓冲液(ml)0.2mol/L琥珀酸(滴)0.02mol/L琥珀酸(滴)0.2mol/L丙二酸溶液(滴)0.02mol/L丙二酸溶液(滴)蒸馏水(滴)甲烯蓝(滴)褪色时间(分钟)试管1 2 - 8 - - - 8 3 3分33秒试管2 2 - 8 - - 8 - 3 5分30秒试管3 2 - 8 - 8 - - 3 6分04秒试管4 2 - - 8 8 - - 3 7分28秒试管5 - 2 8 - - - 8 3 无限大试管6 2 - 8 - - - 8 3 无限大试管6,在酶提取液先在100℃的水浴加热煮沸5min。
琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制
一、实验原理
在化学结构上与底物类似的抑制剂,能与底物竞争酶分子的活性中心,从而抑制酶的活性。
抑制程度随抑制剂浓度的改变而改变。
如果底物浓度不变,酶活性的抑制程度随抑制剂浓度的增加而增加。
反之,如抑制剂浓度不变,则酶活性随底物浓度增加而逐渐回复,这种类型的抑制称竞争性抑制。
琥珀酸脱氢酶是一种含铁的黄酶,它可以催化琥珀酸脱氢酶,生成延胡索酸,在有氧的情况下,脱下的氢经呼吸链的传递,与氧化合成水。
肝中含有丰富的琥珀酸脱氢酶,体外实验在隔绝空气的情况下,琥珀酸脱下的氢可被人工受氢体一甲烯蓝接受还原成甲烯白。
因此我们可以用甲烯蓝被还原褪色的速度和程度,来了解不同底物浓度,不同抑制剂浓度时酶活性的改变。
二、实验步骤与结果
2.将上述各试管摇匀,于夜面上加液体石蜡10滴,放37℃水浴中保温,随时比较,观察
各试管颜色变化。
3.结果
经观察,各个试管的褪色时间顺序为:1>4>2>3
三、结论
底物浓度、抑制剂浓度影响了酶的竞争性。
琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制实验报告的心得体会
琥珀酸脱氢酶(SDH)是一种酶,参与生物体内的三羧酸循环。
SDH的主要功能是将琥珀酸氧化为富能的丙酮酸和二氧化碳,为细胞提供能量。
SDH的活性受到一些物质的影响,例如甲肝灵等药物就可以抑制SDH的活性。
竞争性抑制实验是在SDH的底物琥珀酸中加入不同浓度的抑制剂,观察SDH的活性变化。
实验的结果可能呈现出以下几个情况:抑制剂呈现剂量依赖性的抑制作用,活性呈线性的降低;抑制剂对SDH的抑制作用存在饱和点,但达到饱和点后,SDH的活性降低幅度逐渐增加;抑制剂对SDH的抑制作用存在饱和点,但在饱和点后活性降低趋于不变。
实验者可以通过这些结果,得到抑制剂的半数抑制浓度(IC50),进而评价抑制剂的效果。
在实验中,我们观察到抑制剂呈现剂量依赖性的抑制作用,且具有饱和点。
这说明抑制剂与SDH结合的速度是有限的。
从实验结果中可以看出,IC50值比较低,这表明抑制剂的效果比较好。
实验结果为我们提供了有关SDH的一些基本信息,也有助于我们更好地理解如何控制相关疾病,比如心肌缺血。
在这个实验中,我深刻认识到了科学研究的重要性,同时也学会了如何进行实验和如何分析实验结果。
这些经验对于我的学习和未来的研究都有一定的启示作用。
SDHI类杀菌剂的合成策略以及防治病害
HEC农业科学
前言:琥珀酸脱氢酶抑制剂类 (SDHIs) 杀菌剂是杀菌剂的重要组成部分,2016 年,该类杀菌剂的全球销售额为16.91亿美元,占564.52亿美元全球农药市场的 3.0%,占152.68 亿美元杀菌剂(包括非作物用杀菌剂) 市场的 11.1%。
2011—2016年其复合增长率最高 (23.8%),超过了甲氧基丙烯酸酯类及三唑类等老牌杀菌剂,截至2019 年,共有23 个琥珀酸脱氢酶抑制剂类(SDHIs) 杀菌剂已经上市,该类杀菌剂是农化领域研发的热点。
在这些化合物中2003年巴斯夫开发的啶酰菌胺(boscalid)是该类杀菌剂的转折点,它是史上第1 个广谱性的SDHIs杀菌剂。
目前已经有氟唑菌酰胺、氟唑环菌胺、苯并烯氟菌唑、氟唑菌酰羟胺等重磅产品上市。
1、基本骨架
2、设计策略
SDHI类杀菌剂擅长防治担子菌、子囊菌和半知菌引起的病害,例如担子菌引起的锈病、黑穗病、黑粉病、纹枯病、小麦纹枯病、棉花立枯病、黄瓜立枯病);
子囊菌引起的油菜菌核病、白粉病、霉病、赤霉病;
半知菌引起的黄萎病、花生白绢病、稻曲病、马铃薯黑痣病、草坪褐斑病、番茄、马铃薯早疫病、灰霉病、番茄叶霉病、辣椒炭疽病、马铃薯黑痣病、香蕉黑星病;
线虫
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【精品文献】琥珀酸脱氢酶的提取与活力测定的研究进展论文范文题目:琥珀酸脱氢酶的提取与活力测定的研究进展编辑:司马小【摘要】琥珀酸脱氢酶是线粒体的一种标志酶~是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一~可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子~其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标。
本文从琥珀酸脱氢酶的提取、纯化及活性检测方法等几方面介绍了琥珀酸脱氢酶的研究进展情况。
【关键词】琥珀酸脱氢酶线粒体三羧酸循环琥珀酸脱氢酶,Succinate dehydrogenase~简称SDH,~黄素酶类~是线粒体内膜的结合酶~属膜结合酶~是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一~可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子~为线粒体的一种标志酶。
作为参与三羧酸循环的关键酶~琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶,marker enzyme,之一~其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标~对于评价精子线粒体功能、研究致奶牛酮缺乏症病理过程等具有重要意义[2,3]。
本文从琥珀酸脱氢酶的提取、纯化、性质及其测定方法等几方面回顾并介绍了琥珀酸脱氢酶的研究进展情况。
1 琥珀酸脱氢酶的提取与生理意义琥珀酸脱氢酶存在于所有有氧呼吸细胞~和线粒体膜牢固结合~是三羧酸循环中唯一与内膜结合的酶~是脱氢酶中最重要的酶。
迄今为止~已从多种原核和真核组织中分离纯化出这种酶~为该酶的酶学研究奠定了基础。
作为膜内酶~琥珀酸脱氢酶与具有脂双层结构的线粒体膜结合得比较紧密~很难溶解下来~而且其一旦离开膜后~暴露在空气中会很快失活~因此其提纯难度很大。
1950年我国著名生物化学家王应睐、邹承鲁、汪静英等开展对膜蛋白琥珀酸脱氢酶的研究~经过反复实验最后以正丁醇抽提法成功地把琥珀酸脱氢酶从鼠肝组织线粒体膜上溶解下来~得到了高纯度的水溶性琥珀酸脱氢酶~其活力比同期国外报道者高出1倍以上~从而奠定了我国在琥珀酸脱氢酶研究领域的领先地位。
琥珀酸脱氢酶抑制剂杀菌原理琥珀酸脱氢酶抑制剂是一种有效的杀菌剂,能够防止细菌在必需的代谢路径中产生能量。
它是一种选择性毒性剂,可以杀死细胞而不会对宿主组织造成伤害。
下面,我们将分步骤地介绍琥珀酸脱氢酶抑制剂的杀菌原理。
第一步,琥珀酸脱氢酶抑制剂的作用机理。
细菌需要通过氧化代谢产生能量,而氧化代谢的过程中,琥珀酸脱氢酶是一个关键的酶。
它将琥珀酸转换为丙酮酸和CO2,并在这个过程中产生能量。
琥珀酸脱氢酶抑制剂能通过阻碍琥珀酸脱氢酶的作用,抑制细菌的能量产生,从而杀死细菌。
第二步,琥珀酸脱氢酶抑制剂的种类。
琥珀酸脱氢酶抑制剂有两种类型:苯二甲酰肼和氟喹诺酮类。
苯二甲酰肼是一种杀革兰氏阳性细菌的抑制剂。
而氟喹诺酮类则是一种杀革兰氏阴性细菌和某些革兰氏阳性细菌的抑制剂。
第三步,琥珀酸脱氢酶抑制剂的应用范围。
琥珀酸脱氢酶抑制剂在医药、食品、农业等领域都有广泛的应用。
在医药领域,它常被用于治疗细菌感染,如泌尿道感染、呼吸道感染、肺炎等。
在食品领域,它可以用来保护食品,防止腐败;在农业领域,它可以用来控制植物病害。
第四步,琥珀酸脱氢酶抑制剂的副作用。
尽管琥珀酸脱氢酶抑制剂是一种有效的杀菌剂,但它也有一些副作用。
使用不当可能导致药物耐药性的产生,甚至会引起一些严重的过敏反应。
总之,琥珀酸脱氢酶抑制剂是一种有效的杀菌剂,可以在医药、食品、农业等领域得到广泛的应用。
正确地使用它将有助于控制细菌感染和保护食品。
然而,使用前要注意药物的副作用,并遵循正确的使用方法。
琥珀酸脱氢酶抑制剂实验报告摘要:本实验旨在研究琥珀酸脱氢酶抑制剂对琥珀酸脱氢酶活性的影响。
通过测定不同浓度的抑制剂对琥珀酸脱氢酶反应速率的影响,确定其抑制效果。
实验结果表明,琥珀酸脱氢酶抑制剂能显著降低琥珀酸脱氢酶的活性,为进一步研究琥珀酸脱氢酶的底物特异性提供了依据。
引言:琥珀酸脱氢酶是催化琥珀酸脱氢反应的关键酶,参与细胞内能量代谢过程中的三羧酸循环。
琥珀酸脱氢酶抑制剂作为一类能够抑制该酶活性的化合物,被广泛应用于相关疾病的治疗研究中。
本实验将通过测定不同浓度的抑制剂对琥珀酸脱氢酶活性的影响,评估其抑制效果。
材料与方法:1. 实验仪器:分光光度计、琥珀酸脱氢酶抑制剂、琥珀酸脱氢酶底物、缓冲液等。
2. 实验步骤:a. 准备不同浓度的琥珀酸脱氢酶抑制剂溶液。
b. 将一定量的琥珀酸脱氢酶溶液加入含有底物的试管中。
c. 在不同时间段内测定琥珀酸脱氢酶反应的吸光度。
d. 计算反应速率并与不加抑制剂的对照组进行比较。
结果与讨论:通过测定实验数据,得到不同浓度琥珀酸脱氢酶抑制剂对琥珀酸脱氢酶活性的影响。
实验结果显示,随着抑制剂浓度的增加,琥珀酸脱氢酶的活性逐渐降低。
在最高浓度的抑制剂下,琥珀酸脱氢酶的活性几乎被完全抑制。
这表明琥珀酸脱氢酶抑制剂对琥珀酸脱氢酶具有显著的抑制效果。
进一步分析发现,琥珀酸脱氢酶抑制剂的抑制效果呈浓度依赖性。
随着抑制剂浓度的增加,琥珀酸脱氢酶活性下降的幅度逐渐增大。
这可能是由于抑制剂与琥珀酸脱氢酶结合形成复合物,阻碍了底物的结合和催化反应的进行。
本实验结果提示琥珀酸脱氢酶抑制剂能够有效抑制琥珀酸脱氢酶的活性,为进一步研究琥珀酸脱氢酶的底物特异性提供了依据。
通过进一步研究不同底物与琥珀酸脱氢酶的结合能力,可以揭示底物识别机制和催化机理,为开发新型药物和治疗相关疾病提供理论依据。
结论:本实验研究了琥珀酸脱氢酶抑制剂对琥珀酸脱氢酶活性的影响。
实验结果表明,琥珀酸脱氢酶抑制剂能够显著降低琥珀酸脱氢酶的活性。
SDHIs和QoIs杀菌剂抗性研究进展
高静;周明国
【期刊名称】《现代农药》
【年(卷),期】2022(21)5
【摘要】使用选择性杀菌剂防治农作物重大病害是保证农产品高产、稳产和优质的重要手段之一。
琥珀酸脱氢酶抑制剂类(SDHIs)和甲氧基丙烯酸酯类(QoIs)杀菌剂是当前用量较大的杀菌剂,但是随着用药年限延长、用药量增加和用药范围的不断扩大,田间开始出现杀菌剂抗性问题,时常突发性暴发造成防治失败,使农业安全生产面临了严峻挑战。
本文从抗性现状、抗性机制、抗性监测和抗性治理等4个方面概述了SDHIs和QoIs 2类杀菌剂的抗性研究进展,旨在为有害生物的可持续高效防控、抗药性治理及延长药剂使用寿命提供理论依据。
【总页数】7页(P7-12)
【作者】高静;周明国
【作者单位】南京农业大学植物保护学院
【正文语种】中文
【中图分类】TQ455
【相关文献】
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2.几种QoIs和DMIs杀菌剂对山东不同地区黄瓜白粉病菌的毒力差异及年度间的防效变化
3.QoI类杀菌剂环
境风险浅析4.植物病原菌对SDHI类杀菌剂抗性研究进展5.江苏丘陵地区草莓灰霉病菌(Botrytis cinerea)对QoIs类杀菌剂的抗药性研究
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一、实验目的1. 理解琥珀酸脱氢酶在细胞代谢中的作用。
2. 掌握琥珀酸脱氢酶的活性测定方法。
3. 观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。
二、实验原理琥珀酸脱氢酶(SDH)是三羧酸循环(TCA循环)中的一个关键酶,其主要功能是催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,同时将脱下的氢传递给电子传递链。
本实验采用比色法测定琥珀酸脱氢酶的活性,通过观察甲烯蓝的脱色时间来反映酶的活性。
丙二酸作为竞争性抑制剂,其化学结构与琥珀酸相似,可以与琥珀酸竞争酶的活性中心,从而抑制琥珀酸脱氢酶的活性。
三、实验材料与仪器实验材料:1. 大肠杆菌2. 琥珀酸钠3. 甲烯蓝4. 磷酸缓冲液5. 丙二酸溶液6. 液体石蜡实验仪器:1. 试管2. 吸量管3. 电热水浴锅4. 恒温水浴箱5. 移液器四、实验步骤1. 菌液制备:将大肠杆菌接种于斜面培养基,37℃培养24小时,用无菌移液器取菌苔,加入5ml磷酸缓冲液,振荡混匀后,在离心机上以2500 r/min离心5分钟,弃去上清液,加入6ml磷酸缓冲液重悬菌体。
2. 酶活性测定:a. 取试管3支,分别编号为A、B、C。
b. 向A管中加入1ml菌液,B管中加入1ml菌液和1ml丙二酸溶液,C管中加入1ml菌液和1ml磷酸缓冲液。
c. 向各管中加入0.5ml琥珀酸钠和1ml甲烯蓝溶液。
d. 将试管放入恒温水浴箱中,在37℃下保温5分钟。
e. 将各管取出,立即在离心机上以5000 r/min离心5分钟,取上清液。
f. 用分光光度计在波长620nm处测定各管的吸光度值。
3. 计算酶活性:a. 计算A管和C管的平均吸光度值。
b. 计算A管和C管的吸光度比值。
c. 根据标准曲线计算琥珀酸脱氢酶的活性。
五、实验结果与分析1. 通过实验,成功制备了大肠杆菌菌液,并测定了琥珀酸脱氢酶的活性。
2. 加入丙二酸溶液的B管与未加丙二酸溶液的C管相比,吸光度值明显降低,说明丙二酸对琥珀酸脱氢酶具有竞争性抑制作用。
3. 通过计算,得出琥珀酸脱氢酶的活性为X单位。
实验三-丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用引言:琥珀酸脱氢酶(SDH)是一种重要的蛋白质,其在三羧酸循环中起着关键的作用。
SDH 能够催化琥珀酸脱氢反应,将琥珀酸氧化为富含能量的丙酮酸。
在人体中,SDH的异常通常会导致疾病的发生,如甲状腺疾病、糖尿病、肝脏疾病等。
因此,SDH的调节和控制是非常重要的。
在本实验中,我们将研究丙二酸对SDH的竞争性抑制作用,以期了解其在细胞代谢中的作用。
实验目的:2、了解SDH在细胞代谢中的作用。
实验原理:SDH是一种酸性蛋白质,其催化反应式为:琥珀酸+辅酶Q+OH-→丙酮酸+辅酶QH2。
SDH活性的测定一般采用酶联免疫吸附法(ELISA)。
在实验前,需要将SDH标准品稀释至一定浓度。
然后,将SDH标准品加入到孔板中,与不同浓度的丙二酸预先混合,测定SDH 的活性。
根据SDH催化反应的特点和丙二酸的特异性竞争性抑制作用,可确定丙二酸的浓度和SDH的活性之间的关系。
实验步骤:1、将SDH标准品稀释至一定浓度,取适量的SDH标准品分别加入到不同的孔板中。
2、根据实验需求,添加不同浓度的丙二酸到不同孔板中,混合均匀。
3、放置孔板至37℃恒温箱内,反应30分钟。
4、加入反应液至各个孔位中,搅拌均匀。
5、测定不同孔板的OD值。
6、据此根据SDH活性的公式,计算SDH活性值。
7、根据SDH活性值和丙二酸的浓度,确定丙二酸浓度与SDH活性之间的关系。
实验结果:见附件1。
讨论:通过实验,我们发现丙二酸对SDH的竞争性抑制作用比较显著。
丙二酸的浓度与SDH 的活性呈明显的负相关关系。
这说明丙二酸可能在细胞代谢中扮演着重要的角色,其可以阻碍SDH的催化反应,从而影响三羧酸循环中能量代谢的正常进行。
本实验结果表明,丙二酸具有竞争性抑制SDH的能力,说明丙二酸在细胞代谢中的作用非常重要。
这为进一步探讨丙二酸在细胞代谢中的作用提供了有价值的参考和思路。