_半乳糖苷结合凝集素_9真核表达载体的构建和鉴定

重组蛋白真核表达系统构建流程蛋白质是生物体内具有重要生物学功能的分子，它们由氨基酸组成，对细胞的结构和功能起着重要的调控作用。

在生物科学研究和生物制药工业中，重组蛋白质的生产和表达是一个重要的研究领域。

真核系统是重组蛋白质表达的一个重要平台，它具有许多优点，如能够实现复杂的蛋白修饰和折叠等。

因此，构建真核表达系统是生物科学研究和生物工程应用中的一个重要课题。

一、选取重组蛋白质的编码序列在构建真核表达系统之前，首先需要选取重组蛋白质的编码序列。

这一步骤通常是通过将目标蛋白质的编码基因进行克隆和序列分析来完成的。

在进行基因克隆过程中，需要选择适当的限制性内切酶和载体，构建一个含有目标基因的重组质粒。

同时，对目标基因的序列进行分析可以帮助确定转录和翻译起始位点、信号肽序列、保守结构域等信息，这些信息对于真核细胞的表达和翻译过程具有重要意义。

二、选择适当的真核表达宿主真核表达系统可以选择多种宿主来进行表达，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母等。

在选择表达宿主时，需要考虑到宿主细胞的生长特性、表达能力、蛋白修饰能力等因素。

不同的宿主对于重组蛋白质的表达和折叠能力有所差异，因此需要根据目标蛋白质的性质和需求来选择合适的宿主。

通常来说，哺乳动物细胞系统是真核表达系统中最常用的宿主之一，它具有较高的蛋白修饰和折叠能力，适合用于表达复杂的蛋白质。

三、构建真核表达载体在选择了合适的宿主后，需要构建一个含有目标基因的真核表达载体。

真核表达载体通常包括启动子、转录终止子、筛选标记基因等功能元件。

通过将目标基因插入到表达载体中，可以实现对目标基因的调控和表达。

同时，表达载体还可以包括一些辅助元件，如信号肽、翻译起始位点、融合标签等，以提高重组蛋白质的表达水平和纯度。

四、转染或转化真核细胞在构建了真核表达载体后，需要将其转染或转化到真核细胞中。

转染是指将外源DNA通过化学方法导入到细胞内，而转化则是通过质粒介导的方式将外源DNA导入到细胞内。

For personal use only in study and research; not for commercial use表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。

一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。

原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。

而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。

（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+（3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段（4）P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。

如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。

载体选择主要考虑下述3点：【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。

如<10kb 选质粒。

（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。

（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。

【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。

综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。

（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。

真核表达质粒的构建与表达1. 真核表达质粒的构建真核表达质粒是一种含有真核基因的质粒，它可以用于在真核细胞中表达外源基因。

真核表达质粒的构建主要包括以下步骤：（1）选择表达载体：首先，需要选择一种合适的表达载体，例如质粒、质杆菌、噬菌体等，以及一种合适的表达系统，例如T7系统、T3系统、SP6系统等。

（2）构建表达质粒：其次，通过合成或克隆技术将外源基因插入到表达载体中，构建表达质粒。

（3）筛选表达质粒：最后，通过PCR、Southern blotting等技术筛选出含有外源基因的表达质粒。

2. 真核表达质粒的表达真核表达质粒的表达是一种细胞内的转录和翻译过程，它可以将外源基因插入真核细胞中，从而实现基因的表达。

表达质粒的表达通常由以下几个步骤组成：首先，将外源基因与表达质粒的启动子序列结合，以形成表达质粒；其次，将表达质粒转染到真核细胞中，以便在细胞中表达外源基因；最后，真核细胞将表达质粒中的基因转录成mRNA，然后翻译成蛋白质，从而实现基因的表达。

此外，表达质粒的表达过程还可以通过调节启动子序列的表达水平来调控基因的表达。

真核表达质粒的稳定性是指质粒在不同的环境条件下，表达量不受外界环境变化的影响，能够保持恒定的表达量。

稳定性的提高可以改善表达质粒的性能，并且能够更好地满足实验要求。

为了提高真核表达质粒的稳定性，一般采用以下几种方法：一是优化质粒的结构特征。

质粒结构特征包括质粒的大小、碱基组成、表达载体的类型等。

优化质粒的结构特征可以有效提高质粒的稳定性，从而改善质粒的性能。

二是改变质粒的表达系统。

质粒的表达系统包括表达调控因子、载体、表达调控序列等。

改变表达系统可以改变质粒的表达量，从而提高质粒的稳定性。

三是改变质粒的表达条件。

质粒的表达条件包括培养基、温度、pH值、溶液浓度等。

改变质粒的表达条件可以改变表达量，从而提高质粒的稳定性。

四是改变质粒的表达调控序列。

表达调控序列是控制质粒表达的关键因素，改变表达调控序列可以改变质粒的表达量，从而提高质粒的稳定性。

表达载体构建1. 背景介绍表达载体是在分子生物学领域中广泛使用的工具，用于将目标基因导入宿主细胞中并使其表达。

构建高效的表达载体对于基因功能研究和基因工程应用具有重要意义。

本文将介绍表达载体的构建方法及其在基因表达中的应用。

2. 表达载体的构建方法构建表达载体的一般步骤包括选择合适的载体骨架、选择适当的启动子和终止子、插入目标基因序列以及进行转染或转化等操作。

下面将详细介绍表达载体的构建方法。

2.1 选择合适的载体骨架常用的载体骨架包括质粒和病毒载体。

质粒是可以在细菌中复制的DNA分子，通常由起始位点、选择标记和多个限制酶切位点组成。

病毒载体包括腺病毒、慢病毒等，具有高效转染特性。

选择适合自己研究的载体骨架是表达载体构建的第一步。

2.2 选择适当的启动子和终止子启动子是基因表达的起始信号，终止子是基因表达的终止信号。

启动子的选择应根据目标基因的表达需求和宿主细胞的特性进行。

常用的启动子包括强启动子（如CMV启动子）、组织特异性启动子等。

终止子则可以选择常规的转录终止信号。

2.3 插入目标基因序列选择合适的酶切位点，在载体DNA上进行限制性内切酶切割，并将目标基因序列与载体连接。

连接的方法可以是经典的限制性酶切连接、PCR扩增连接、Ligase连接等。

连接完成后，应进行酶切鉴定和测序验证，确保目标基因序列插入准确。

2.4 进行转染或转化将构建好的表达载体导入宿主细胞中，实现基因表达。

转染方法包括化学转染、电穿孔转染、病毒介导转染等，转化方法包括细菌的电转化、植物的农杆菌介导转化等。

3. 表达载体的应用表达载体广泛应用于基因功能研究和基因工程应用，具有重要的实验意义和应用前景。

3.1 基因功能研究通过表达载体，可以实现外源基因的高效表达，进而研究基因的功能、调控机制等。

比如可以通过表达载体将目标基因在细胞中过度表达或进行基因敲除等，来研究该基因在细胞或生物体中的功能。

3.2 基因治疗表达载体在基因治疗中具有重要的应用价值。

半乳糖凝集素在妊娠期的表达赵童童，孙礼强，邵丹卉，穆文玉，韩秋峪△【摘要】半乳糖凝集素是一个系统学上保守的凝集素家族，可与β-半乳糖苷特异结合，由15种不同的类型组成，每种类型都有特定的功能。

在人类发现的13种半乳糖凝集素中，7种在胎盘中表达，调节免疫和发育。

半乳糖凝集素通过调节妊娠早期滋养层细胞的发育、迁移和侵袭而促进胎盘形成。

此外，半乳糖凝集素是调节母体对胚胎免疫耐受的关键因子。

近年来，半乳糖凝集素在妊娠相关过程中发挥的作用已引起人们的重视，其表达改变与异常妊娠和不孕有关。

综述近年来半乳糖凝集素在支持孕妇适应妊娠和胎盘发育中的作用、其失调对疾病发展的影响以及在不良妊娠结局的诊断和治疗干预中的应用。

【关键词】半乳糖凝集素类；妊娠；胎盘；免疫耐受；先兆子痫Expression of Galectins in PregnancyZHAO Tong -tong,SUN Li -qiang,SHAO Dan-hui,MU Wen-yu,HAN Qiu-yu.Graduate School,Xuzhou Medical University,Xuzhou 221004,Jiangsu Province,China (ZHAO Tong -tong,HAN Qiu-yu);Department of Obstetrics and Gynecology,The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University,Xuzhou 221002,Jiangsu Province,China (SUN Li-qiang,SHAO Dan-hui,MU Wen-yu)Corresponding author:HAN Qiu-yu,E-mail:***************【Abstract 】Galectins are a phylogenetically conserved family of soluble β-galactoside binding proteins,consisting of 15different types,each with a specific function.Of the 13galectins found in humans,7are expressed in the placenta and regulate immunity and development.Galectins contribute to placentation by regulating trophoblast development,migration,and invasion during early pregnancy.In addition,galectins are critical players regulating maternal immune tolerance to the embedded embryo.Recently,the role of galectins in pregnancy-associated process has gained attention.Altered expression of galectins is associated with abnormal pregnancies and infertility.This review focuses on the role of galectins in pregnancy -associated processes and discusses its relevance as potential therapeutic targets in pregnancy disorders.【Keywords 】Galectins ；Pregnancy ；Placenta ；Immune tolerance ；Pre-eclampsia（J Int Obstet Gynecol ，2021，48：251-254）·综述·作者单位：221004徐州医科大学研究生院（赵童童，韩秋峪）；徐州医科大学附属医院妇产科（孙礼强，邵丹卉，穆文玉）通信作者：韩秋峪，E-mail ：***************△审校者DOI:10.12280/gjfckx.20200706在妊娠期间，孕妇的内分泌、免疫和代谢过程之间建立了一种微妙的相关作用以维持整个妊娠的发展。

半乳糖凝集素-9（Gal-9）介导的免疫调节作用在肝脏疾病中的研究进展凌珺1，2，朱冰2，陈威巍2，王卓然2，余丽梅1，游绍莉21 遵义医科大学附属医院贵州省细胞工程重点实验室，贵州遵义 5630032 中国人民解放军总医院第五医学中心肝病医学部，北京 100039通信作者：余丽梅，***************（ORCID： 0000-0002-3377-1202）；游绍莉，*********************（ORCID： 0000-0001-8689-8509）摘要：半乳糖凝集素-9（Gal-9）是能够特异性识别、结合半乳糖苷的半乳糖凝集素家族成员之一。

近年研究发现，Gal-9在肝脏中高水平表达，有助于维持肝内免疫稳态并在多种肝脏疾病中发挥生物学功能。

本文综述了Gal-9的免疫调节功能及其在不同肝脏疾病中的作用。

Gal-9在不同肝脏疾病中通过多种途径发挥重要的生物学功能，基于对Gal-9具体免疫调节机制和功能的研究，有助于发现Gal-9在肝脏疾病中的治疗作用。

关键词：半乳糖凝集素-9；免疫调节；肝脏疾病基金项目：国家科技重大专项资助（2017ZX10203201）；国家重点研发计划资助（2021YFC2301801）Research advances in the immunomodulatory mechanism of galectin-9 and its role in liver diseasesLING Jun1，2， ZHU Bing2， CHEN Weiwei2， WANG Zhuoran2， YU Limei1， YOU Shaoli2.（1. Guizhou Provincial Key Laboratory of Cell Engineering， Affiliated Hospital of Zunyi Medical University， Zunyi， Guizhou 563003， China； 2. Division of Liver Disease，The Fifth Medical Center of Chinese PLA General Hospital， Beijing 100039， China）Corresponding authors：YU Limei，ylm720@ （ORCID：0000-0002-3377-1202）；YOU Shaoli，youshaoli1972@ （ORCID： 0000-0001-8689-8509）Abstract：Galectin-9 （Gal-9） is a member of the galectin family that can specifically recognize and bind to galactosides. Recent studies have shown that Gal-9 is highly expressed in the liver and can help to maintain intrahepatic immune homeostasis and perform biological functions in various liver diseases. This article reviews the immunomodulatory functions of Gal-9 and its role in different liver diseases. Studies have shown that Gal-9 has important biological functions in different liver diseases through multiple pathways. Research on the specific immunomodulatory mechanisms and functions of Gal-9 may help to discover the therapeutic role of Gal-9 in liver diseases.Key words：Galectin-9； Immunomodulation； Liver DiseasesResearch funding：National Science and Technology Major Project （2017ZX10203201）； Funded Projects of National Key R & D Program （2021YFC2301801）1　半乳糖凝集素-9（galectin-9，Gal-9）基因与分子结构Gal-9是一种分子量为36 kDa的β-D-半乳糖苷哺乳动物凝集素，1997年由Wada和Türeci等［1］从小鼠胚肾和人霍奇金淋巴瘤组织中分离鉴定。

半乳糖凝集素9（Galectin-9）是一种β-半乳糖苷结合蛋白，属于半乳糖凝集素家族。

它由LGALS9基因编码，在哺乳动物中广泛表达，并参与多种生物学过程，包括免疫调节、细胞粘附和信号转导。

LGALS9基因位于人类染色体17q25.3上，其编码的蛋白质分子量约为36 kDa。

人源Galectin-9是一个由两个N端碳水化合物识别区和一个C端尾部区域通过一个连接肽连接起来的双结构域蛋白。

这种蛋白质可以以二聚体或四聚体的形式存在，具有不同的生物活性。

Galectin-9在免疫系统中有重要作用，尤其是与T细胞和自然杀伤细胞的功能密切相关。

它能与细胞表面的TIM-3受体相互作用，影响免疫反应的强度和方向。

此外，Galectin-9还参与肿瘤微环境的调控，影响肿瘤生长和转移。

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常见的用于检测Galectin-9在生物体液（如血清、血浆、细胞培养上清液等）中的浓度的方法。

这些检测试剂盒通常包含一种抗Galectin-9抗体，用于捕获样品中的目标蛋白，然后使用另一种标记有酶的抗Galectin-9抗体来检测和量化被捕获的蛋白。

AbstractHepatic diseases, especially liver cancer, threaten human’s live gravely. The morbidity and mortality of which is higher and higher recently. There are very few opportunities to kill cancer cells because of the low efficacy of anti-cancer drug, and the other weakness is that few carriers could send the drug into the cancer cells. Drug is not targeting, but hepatic targeting drugs carrier can be. It is able to transport anti-cancer drug to the right location and make it to be collected. Besides that, reducing the dose and times, diminishing adverse drug reaction are the advantages of hepatocyte-selective drug delivery system.We started with galactose to synthesis three kinds of galactosyl intermediates: 1, 2, 3, 4, 6-penta-O-acetyl-galactopyranose, 2, 3, 4, 6-tetra-O-acetyl-galactopyranosyl bromide and 2, 3, 4, 6-tetraacetyl-1-(2-bromoethyl) galactopyranoside in different methods. The reaction conditions and mechanisms of different intermediates are analyzed. The optimal conditions of synthesizing of 1, 2, 3, 4, 6-penta-O-acetyl-galactopyranose is 115℃～120℃, 1.5 h. Reatced for 20 h at room temperature away from light is the best conditions for the synthesis of 2, 3, 4, 6-tetra-O-acetyl-galactopyranosyl bromide. And the preferential method of the synthesis of 2, 3, 4, 6-tetraacetyl-1-(2-bromoethyl) galactopyranoside is BF3OEt2 catalyst.Diethylenetriaminepentaacetic acid(DTPA) is a common medical nuclear magnetic contrast agent with five carboxyl groups in the molecule, which have certain hydrophil ic properties. DTPA reacted with 2, 3, 4, 6-tetra-O-acetyl-galactopyranosyl bromide, 2, 3, 4, 6-tetraacetyl-1-(2-bromoethyl) galactopyranoside and long chain amines to synthe size series of DTPA-bisamides, galactosyl, DTPA-bisamides, dodecyl galactosamine, gal actosyl DTPA-dodecylamide. The structures were characterized by MS. And we discus sed the reaction conditions in order to provide guidance for the synthesis of liver targ eting contrast agent dual functional drug carrier.Key words:Hepatic targeting; Galactose; Drug carrier; Diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA); Surfactant.目录摘要 (I)Abstract (II)1 文献综述 (2)1.1 糖在生物体内的生物功能研究 (2)1.1.1糖在生物体内的功能 (2)1.1.2 糖在生物体内的代谢 (3)1.1.3 糖类的药用研究 (5)1.2 肝靶向药物载体的研究进展 (8)1.2.1 药物运载系统的分类 (8)1.2.2常用构建肝靶向药物载体的材料 (10)1.2.3 含半乳糖的肝靶向药物载体 (12)1.3 含糖表面活性剂的合成 (15)1.3.1 单糖类反应中间体的合成 (15)1.3.2 含糖表面活性剂的合成 (17)1.3.3 常用囊泡制备方法 (19)1.4 选题依据和意义 (20)2 半乳糖溴化物反应中间体的合成 (21)2.1 实验部分 (21)2.1.1 主要试剂 (21)2.1.2 主要仪器 (22)2.1.3 1,2, 3, 4, 6-五乙酰基半乳糖的合成 (22)2.1.4 2, 3, 4, 6-O-四乙酰基溴代半乳糖的制备 (22)2.1.5 2, 3, 4, 6-四乙酰基-1-(2-溴乙氧基)半乳糖的制备 (22)2.2 结果与讨论 (24)2.2.1 含半乳糖的反应中间体的合成思路 (24)2.2.2 半乳糖的五乙酰化 (24)2.2.3 溴代半乳糖的合成 (26)2.2.4 2, 3, 4, 6-四乙酰基-1-溴乙氧基半乳糖的制备 (30)2.3 本章小结 (37)3 DTPA、半乳糖溴化物反应中间体、长碳链胺的反应研究 (38)3.1 实验部分 (38)3.1.1 主要试剂 (38)3.1.2 主要仪器 (39)3.1.3 长碳链仲胺的合成 (39)3.1.4 DTPA、EDTA与胺的反应 (39)3.1.5 DTPA酰胺与半乳糖中间体的反应 (40)3.1.6 长链半乳糖胺的合成 (40)3.1.7 DTPAA与长碳链半乳糖胺的合成 (40)3.2 结果与讨论 (40)3.2.1 长碳链仲胺的合成 (41)3.2.2 DTPA、EDTA与胺的反应 (43)3.2.3 DTPA酰胺与半乳糖溴代物中间体的反应 (46)3.2.4 长链半乳糖胺的合成 (49)3.2.5 DTPAA与长碳链半乳糖胺的合成 (50)3.3 本章小结 (52)结论 (53)参考文献 (54)攻读硕士学位期间发表学术论文情况 (58)致谢 (59) (60)引言肝癌是常见恶性肿瘤，且发病率和死亡水平居高不下，对居民生命健康危害极大。

β-galactosidase的原理及其应用β-半乳糖苷酶（ β-galactosidase）是一种酶，其作用是水解半乳糖苷键。

它可以将半乳糖苷化合物分解成半乳糖和另一个单糖或者吡喃糖。

β-galactosidase（的原理：β-galactosidase（在生物体中有多种功能，其中最为人熟知的是在细菌中将乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。

在分子生物学和遗传学中，β-galactosidase（也被广泛应用于对基因表达、细胞定位、蛋白质相互作用等方面的研究。

应用：1.基因表达分析：β-galactosidase（被用作报告基因，将其与感兴趣的基因启动子序列（ promoter）或其它调控序列结合。

通过测定（β-galactosidase（的活性，可以评估这些序列的活性或在不同条件下的表达水平。

2.细胞标记与追踪：β-galactosidase（的基因常被插入到研究对象的基因组中，从而可以通过检测酶活性来标记或追踪特定类型的细胞或细胞中的特定结构。

3.蛋白质相互作用研究：β-galactosidase（与其它蛋白质标签 例如（GFP、Luciferase（等）结合，用于研究蛋白质之间的相互作用或蛋白质的亚细胞定位。

4.蛋白质纯化：β-galactosidase（在蛋白质纯化中作为标记蛋白质的一种手段，通过特定亲和性色谱柱选择性地捕获具有β-galactosidase（标记的蛋白质。

5.糖类化合物测定：β-galactosidase（也可用于测定样品中半乳糖苷类化合物的含量和分析。

β-galactosidase（的应用范围很广泛，特别是在分子生物学和细胞生物学领域。

通过结合其催化作用和检测手段，它成为了研究和应用的重要工具之一。

㊃232㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第2期 L a b M e d C l i n,J a n u a r y2024,V o l.21,N o.2㊃论著㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2024.02.021G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系童小华1,王菁菁2ә1.商洛职业技术学院附属医院/商洛国际医学中心医院病理科,陕西商洛726000;2.陕西省安康市中心医院感控科,陕西安康725000摘要:目的探讨胰腺癌组织中半乳糖凝集素-9(G a l e c t i n-9)㊁钙黏蛋白-11(C a d h e r i n-11)蛋白表达及其与患者临床病理特征㊁预后的关系㊂方法收集2019年1月至2021年12月商洛职业技术学院附属医院107例胰腺癌患者癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11的表达,并分析癌组织中G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11表达与临床病理特征的关系;采用K a p l a n-M e i e r生存曲线分析法探讨G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11表达与预后的关系㊂结果胰腺癌组织中G a l e c t i n-9蛋白阳性合计表达率低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),且不同肿瘤最大径㊁肿瘤分期㊁淋巴结转移癌组织中G a l e c t i n-9蛋白阳性合计表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);胰腺癌组织中C a d h e r i n-11蛋白阳性合计表达率低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),且不同肿瘤最大径㊁分化程度㊁肿瘤分期㊁淋巴结转移㊁脉管浸润㊁神经浸润癌组织中C a d-h e r i n-11蛋白阳性合计表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂随访时间截至2021年12月,107例患者死亡71例,继续生存36例,总生存期3~52个月,平均(20.46ʃ10.60)个月;K a p l a n-M e i e r生存曲线分析结果显示,G a l e c t i n-9阳性患者累积生存率为34.0%,与G a l e c t i n-9阴性患者的33.3%比较,差异无统计学意义(L o g R a n kχ2=0.418,P=0.518);C a d h e r i n-11阳性患者累积生存率为43.9%,明显高于C a d h e r i n-11阴性患者的15.6%,差异有统计学意义(L o g R a n kχ2=10.796,P<0.001)㊂结论 G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11蛋白表达下调可能参与胰腺癌的发生和发展,尤其是C a d h e r i n-11蛋白,其阴性表达可能对胰腺癌预后不良有一定的预测价值㊂关键词:胰腺癌;半乳糖凝集素-9;钙黏蛋白-11;临床病理特征;预后中图法分类号:R735.9文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)02-0232-05E x p r e s s i o n o f G a l e c t i n-9a n d C a d h e r i n-11i n p a n c r e a t i c c a n c e r a n d t h e i rr e l a t i o n s h i p w i t h c l i n i c o p a t h o l o g i c a l f e a t u r e s a n d p r o g n o s i sT O N G X i a o h u a1,WA N G J i n g j i n g2ә1.D e p a r t m e n t o f P a t h o l o g y,t h e A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f S h a n g l u o V o c a t i o n a l a n d T e c h n i c a lC o l l e g e/S h a n g l u o I n t e r n a t i o n a l M e d i c a l C e n t e r H o s p i t a l,S h a n g l u o,S h a a n x i726000,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f I n f e c t i o n C o n t r o l,A n k a n g C e n t r a l H o s p i t a l o f S h a a n x i P r o v i n c e,A n k a n g,S h a a n x i725000,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e x p r e s s i o n o f G a l e c t i n-9a n d C a d h e r i n-11i n p a n c r e a t i c c a n c e r a n d t h e i r r e l a t i o n s h i p w i t h c l i n i c o p a t h o l o g i c a l f e a t u r e s a n d p r o g n o s i s.M e t h o d s A t o t a l o f107c a s e s o f p a n c r e a t i c c a n c e r t i s s u e s a n d a d j a c e n t t i s s u e s w e r e c o l l e c t e d f r o m t h e A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f S h a n g l u o V o c a t i o n a l a n d T e c h n i c a l C o l l e g e f r o m J a n u a r y2019t o D e c e m b e r2021.T h e e x p r e s s i o n o f G a l e c t i n-9a n d C a d h e r i n-11w a s d e-t e c t e d b y i mm u n o h i s t o c h e m i s t r y.T h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e e x p r e s s i o n o f G a l e c t i n-9a n d C a d h e r i n-11i n c a n c e r t i s s u e s a n d c l i n i c o p a t h o l o g i c a l f e a t u r e s w a s a n a l y z e d.K a p l a n-M e i e r s u r v i v a l c u r v e a n a l y s i s w a s u s e d t o e x p l o r e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e e x p r e s s i o n o f G a l e c t i n-9a n d C a d h e r i n-11a n d p r o g n o s i s.R e s u l t s T h e t o-t a l p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e o f G a l e c t i n-9p r o t e i n i n p a n c r e a t i c c a n c e r t i s s u e s w a s l o w e r t h a n t h a t i n a d j a c e n t t i s s u e s,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).T h e t o t a l p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e o f G a l e c-t i n-9p r o t e i n w a s s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t i n t u m o r t i s s u e s w i t h d i f f e r e n t t u m o r d i a m e t e r,t u m o r s t a g e a n d l y m p h n o d e m e t a s t a s i s(P<0.05).T h e t o t a l p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e o f C a d h e r i n-11p r o t e i n i n p a n c r e a t i c c a n c e r t i s-s u e s w a s l o w e r t h a n t h a t i n a d j a c e n t t i s s u e s,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).T h e t o-t a l p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e o f C a d h e r i n-11p r o t e i n i n d i f f e r e n t t u m o r m a x i m u m d i a m e t e r,d i f f e r e n t i a t i o n d e-g r e e,t u m o r s t a g e,l y m p h n o d e m e t a s t a s i s,v a s c u l a r i n v a s i o n a n d n e r v e i n v a s i o n w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t作者简介:童小华,女,主治医师,主要从事病理学方面的研究㊂ә通信作者,E-m a i l:a k j i j i@y e a h.n e t㊂(P<0.05).F o l l o w e d u p t o D e c e m b e r2021,71o f107p a t i e n t s d i e d a n d36s u r v i v e d.T h e o v e r a l l s u r v i v a l t i m e w a s3-52m o n t h s,w i t h a n a v e r a g e o f(20.46ʃ10.60)m o n t h s.K a p l a n-M e i e r s u r v i v a l c u r v e a n a l y s i s s h o w e d t h a t t h e c u m u l a t i v e s u r v i v a l r a t e o f G a l e c t i n-9p o s i t i v e p a t i e n t s w a s34.0%,w h i c h w a s n o t s i g n i f i c a n t l y d i f-f e r e n t f r o m33.3%o f G a l e c t i n-9n e g a t i v e p a t i e n t s(L o g R a n kχ2=0.418,P=0.518).T h e c u m u l a t i v e s u r v i v a l r a t e o f C a d h e r i n-11p o s i t i v e p a t i e n t s w a s43.9%,w h i c h w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n15.6%o f C a d h e r i n-11 n e g a t i v e p a t i e n t s,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(L o g R a n kχ2=10.796,P<0.001).C o n c l u-s i o n T h e d o w n-r e g u l a t i o n o f G a l e c t i n-9a n d C a d h e r i n-11p r o t e i n e x p r e s s i o n m a y b e i n v o l v e d i n t h e o c c u r-r e n c e a n d d e v e l o p m e n t o f p a n c r e a t i c c a n c e r.T h e n e g a t i v e e x p r e s s i o n o f C a d h e r i n-11p r o t e i n m a y h a v e a c e r t a i n p r e d i c t i v e v a l u e f o r t h e p o o r p r o g n o s i s o f p a n c r e a t i c c a n c e r.K e y w o r d s:p a n c r e a t i c c a n c e r; G a l e c t i n-9; C a d h e r i n-11;c l i n i c a l p a t h o l o g y f e a t u r e;p r o g n o s i s胰腺癌是起源于胰腺外分泌腺的消化系统恶性肿瘤,因其极高的恶性程度及病死率,被称为 癌中之王 ㊂近年来,胰腺癌发病率日益攀升,但随着诊疗技术进展,该病生存率并未得到明显改善[1]㊂胰腺癌起病隐匿且发展迅速,多数患者就诊时已处于中晚期,错过了根治性手术机会,多以姑息性化疗为主[2]㊂近年来,新辅助治疗,如新辅助放化疗㊁分子靶向治疗㊁免疫治疗等在胰腺癌治疗中应用越来越多,被认为在降低患者肿瘤分期㊁缩小病灶㊁减小血管侵犯等方面有积极意义,这也为胰腺癌预后改善带来了希望[3]㊂与此同时,探讨新的生物标志物以预测胰腺癌预后㊁指导临床新辅助治疗等也备受关注[4]㊂半乳糖凝集素-9(G a l e c t i n-9)是一种具有趋化嗜酸性粒细胞功能的β-半乳糖苷结合蛋白,其广泛表达于多种生物组织中,可参与免疫炎症反应㊁细胞聚集和黏附㊁肿瘤细胞侵袭和转移等多种生物学行为调节,被认为与恶性肿瘤的发生和发展有关[5]㊂钙黏蛋白-11(C a d h e r i n-11)是一种参与细胞与细胞黏附作用的Ⅱ型经典钙黏蛋白,已有研究发现其可能与肿瘤细胞多种信号通路调节及肿瘤侵袭转移有关[6]㊂不过目前关于胰腺癌组织中G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11蛋白表达及其临床意义尚不明确,为此本研究通过免疫组织化学法检测胰腺癌组织中G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11蛋白表达,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系,旨在为胰腺癌的发生和发展机制分析及预后评估等提供新思路,现报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料收集2019年1月至2021年12月商洛职业技术学院附属医院107例胰腺癌患者癌组织及癌旁组织(距癌组织边缘>2c m)标本㊂纳入标准: (1)患者均经术后病理检查证实为胰腺导管腺癌;(2)术前无任何放化疗或其他辅助治疗;(3)临床㊁病历资料完善;(4)术后均取得预后随访㊂排除标准:(1)肿瘤复发患者;(2)合并其他部位原发性肿瘤患者;(3)患严重免疫系统疾病㊁内分泌疾病患者;(4)缺乏足够可用于免疫组织化学分析的组织标本㊂107例患者中男59例,女48例;年龄36~73岁,平均(60.42ʃ8.84)岁;肿瘤部位:胰头64例,胰尾43例;肿瘤分期[7]:Ⅰ期24例,Ⅱ期38例,Ⅲ期34例,Ⅳ期11例;分化程度:高分化9例,中分化54例,低分化44例;伴淋巴结转移58例,无淋巴结转移49例㊂所有患者术前对肿瘤标本使用均签署知情同意书㊂本研究经商洛职业技术学院附属医院医学伦理委员会审核批准㊂1.2方法1.2.1仪器与试剂主要仪器:免疫组织化学抗原修复盒㊁孵育盒均购自福州迈新生物科技开发公司,显微镜及成像系统购自日本奥林巴斯公司㊂主要试剂:兔抗人G a l e c t i n-9单克隆抗体㊁兔抗人C a d h e r i n-11单克隆抗体均购自美国C S T公司;即用型免疫组织化学检测试剂盒㊁D A B显色剂㊁E D T A抗原修复液均购自福州迈新生物科技开发公司;磷酸盐缓冲液(P B S)购自武汉博士德生物工程有限公司㊂1.2.2免疫组织化学染色步骤将准备好的石蜡切片常规脱蜡㊁水化,采用E D T A修复抗原,然后阻断过氧化氢酶,先加封闭液,然后分别滴加一抗㊁辣根过氧化物酶标记物二抗孵育,采用D A B显色后,切片行苏木素复染5m i n,再次梯度乙醇脱水,以中性树胶封片,晾干,显微镜下观察㊂以已知阳性标本作为阳性对照,以P B S代替一抗作为阴性对照㊂1.2.3免疫组织化学染色评价标准完成染色的切片先于低倍镜下观察整体染色,寻找合适的视野,再于400倍镜下选取5个视野计数,各视野ȡ100个细胞,观察切片染色强度及染色细胞数㊂本研究中G a-l e c t i n-9蛋白以细胞质着色为主,C a d h e r i n-11蛋白以细胞膜着色为主,阳性着色呈棕色或黄色颗粒㊂(1)染色程度:染色程度可分为无着色㊁淡黄色㊁棕黄色㊁黄褐色,分别计0㊁1㊁2㊁3分;(2)阳性细胞数:阳性细胞数ɤ5%㊁6%~25%㊁26%~50%㊁>50%分别计0㊁1㊁2㊁3分㊂染色程度计分ˑ阳性细胞数计分在0~1分为阴性(-),2~3分为弱阳性(+),4或6分为中等阳性(++),9分为强阳性(+++),其中ȡ2分均视为阳性,否则视为阴性㊂染色结果由2名具有丰富经验的病理科医生通过双盲阅片进行判断,结果不一致时协商达成一致㊂1.2.4随访患者采用电话和门诊随访形式,第1㊃332㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第2期 L a b M e d C l i n,J a n u a r y2024,V o l.21,N o.2年内每个月随访1次,其后每2~3个月随访1次,随访时间截至2021年12月,统计患者总生存期㊂总生存期定义为自诊断日起至任何原因所致死亡或至随访截止时间的时间间隔㊂1.3 统计学处理 采用S P S S 21.0统计软件进行数据分析处理㊂计数资料以例数或百分率表示,组间比较采用χ2检验,等级资料比较采用秩和检验;采用K a p l a n -M e i e r 生存曲线进行生存质量分析㊂以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 胰腺癌组织与癌旁组织中G a l e c t i n -9㊁C a d h e r i n -11蛋白阳性表达比较 胰腺癌组织中G a l e c t i n -9㊁C a d h e r i n -11蛋白阳性合计表达率均低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P <0.05)㊂见表1㊂2.2 不同临床病理特征癌组织中G a l e c t i n -9㊁C a d -h e r i n -11蛋白阳性表达比较 不同肿瘤最大径㊁肿瘤分期㊁淋巴结转移癌组织中G a l e c t i n -9蛋白阳性合计表达率比较,差异均有统计学意义(P <0.05);不同肿瘤最大径㊁分化程度㊁肿瘤分期㊁淋巴结转移㊁脉管浸润㊁神经浸润癌组织中C a d h e r i n -11蛋白阳性合计表达率比较,差异均有统计学意义(P <0.05)㊂见表2㊂表1 胰腺癌组织与癌旁组织中G a l e c t i n -9㊁C a d h e r i n -11蛋白阳性表达比较[n (%)]组织nG a l e c t i n -9-++++++阳性合计C a d h e r i n -11-++++++阳性合计癌组织10760(56.07)26(24.30)19(17.76)2(1.87)47(43.93)42(39.25)34(31.78)26(24.30)5(4.67)65(60.75)癌旁组织10732(29.91)25(23.36)42(39.25)8(7.48)75(70.09)14(13.08)37(34.58)39(36.45)17(15.89)93(86.92)Z/χ24.51014.9484.61018.962P<0.001<0.001<0.001<0.001表2 不同临床病理特征癌组织中G a l e c t i n -9㊁C a d h e r i n -11蛋白阳性表达比较[n (%)]临床病理特征nG a l e c t i n -9阳性χ2PC a d h e r i n -11阳性χ2P性别0.1290.7200.2130.645男5925(42.37)37(62.71) 女4822(45.83)28(58.33)年龄(岁)2.6270.1050.9120.340<605227(51.92)34(65.38) ȡ605520(36.36)31(56.36)肿瘤最大径(c m )5.3430.0217.2470.007ɤ23119(61.29)25(80.65) >27628(36.84)40(52.63)肿瘤部位0.1240.7240.7340.392胰头6429(45.31)41(64.06) 胰体尾4318(41.86)24(55.81)分化程度0.4390.5087.3300.007低4421(47.73)20(45.45) 中/高6326(41.27)45(71.43)肿瘤分期9.3910.00217.184<0.001Ⅰ~Ⅱ期6235(56.45)48(77.42) Ⅲ~Ⅳ期4512(26.67)17(37.78)淋巴结转移6.4120.01113.462<0.001是5819(32.76)26(44.83) 否4928(57.14)39(79.59)脉管浸润2.5810.1087.9100.005是4114(31.15)18(43.90) 否6633(50.00)47(71.21)神经浸润1.0780.2996.8300.009是4718(38.30)22(46.81) 否6029(48.33)43(71.67)㊃432㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第2期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .22.3 G a l e c t i n -9㊁C a d h e r i n -11蛋白表达与预后的关系 随访时间截至2021年12月,107例患者死亡71例,继续生存36例,总生存期3~52个月,平均(20.46ʃ10.60)个月㊂K a pl a n -M e i e r 生存曲线分析结果显示,G a l e c t i n -9阳性患者累积生存率为34.0%,与G a l e c t i n -9阴性患者的33.3%比较,差异无统计学意义(L o g Ra n k χ2=0.418,P =0.518,见图1;C a d -h e r i n -11阳性患者累积生存率为43.9%,明显高于C a d h e r i n -11阴性患者的15.6%,差异有统计学意义(L o g Ra n k χ2=10.796,P <0.001),见图2㊂图1 胰腺癌组织中G a l e c t i n -9蛋白表达的生存曲线图2 胰腺癌组织中C a d h e r i n -11蛋白表达的生存曲线3 讨 论胰腺癌病因至今尚未明确,一般认为可能与长期大量吸烟㊁饮酒㊁糖尿病㊁慢性胰腺炎㊁长期化学物质接触及遗传因素等有关[8]㊂有研究显示,胰腺癌5年生存率仅为8%左右,早期诊断和治疗是改善胰腺癌预后的关键,但是因为胰腺癌早期症状体征并不典型,并且胰腺位于人体较深的位置,胰腺癌早期很难被发现,临床上近80%的患者就诊时已处于晚期[9]㊂近年来,随着胰腺癌基础研究领域进展, 基础-临床 转化有可能为突破胰腺癌的诊疗现状带来契机[10],其中探讨与胰腺癌发生㊁发展及预后有关的生物标志物是临床研究的热点之一㊂G a l e c t i n -9为重复串联的半乳糖凝集素,对β-半乳糖苷亲和力很高,正常情况下其在肝脏㊁肾脏㊁小肠㊁胸腺等多种组织器官中广泛分布,可参与机体不同病理生理状态下的免疫调节[11]㊂近年来有研究指出,G a l e c t i n -9在多种恶性肿瘤中呈低表达,并且与肿瘤分期㊁预后有关㊂如C HO I 等[12]报道指出,胃癌患者G a l e c t i n -9阳性表达者总体病死率较阴性表达者降低,G a l e c t i n -9阳性表达可能抑制胃癌肿瘤进展;王辉等[13]报道指出,口腔鳞状细胞癌组织G a l e c t i n -9阳性表达率明显较口腔扁平苔藓和正常口腔黏膜组织下降,且与口腔鳞状细胞癌分化程度㊁淋巴结转移有关㊂当前关于G a l e c t i n -9抗肿瘤机制也有一些研究,如G a l e c t i n -9可通过减少血管内皮生长因子受体3㊁胰岛素样生长因子-1受体磷酸化来调节内皮细胞活化,继而影响肿瘤血管生成[14];G a l e c t i n -9可通过结合肿瘤细胞表面多糖,直接发挥凋亡效应,还能通过调节肿瘤免疫来抑制肿瘤发展[15]㊂有报道认为,G a l e c t i n -9可能促进肿瘤发展,如N A K A J I MA 等[16]研究指出,肿瘤细胞G a l e c t i n -9表达可能通过降低抗肿瘤免疫参与皮肤T 淋巴细胞瘤进展㊂G a l e c t i n -9目前在胰腺癌中的报道较少见,本研究发现,胰腺癌组织中G a l e c -t i n -9蛋白阳性合计表达率较癌旁组织降低,且与肿瘤最大径㊁肿瘤分期㊁淋巴结转移有关,提示G a l e c t i n -9低表达可能与胰腺癌的发生和发展有关,与王武[17]报道相反,这一结果可能受免疫组织化学取材㊁操作等影响,后期可补充目的基因P C R 和蛋白质免疫印迹试验进一步验证㊂本研究结果显示,G a l e c t i n -9表达与胰腺癌患者累积生存率无明显关系,提示其检测对胰腺癌预后判断价值有限㊂C a d h e r i n -11是与细胞-细胞黏附作用有关的膜蛋白,于成骨细胞中被发现,被认为与成骨细胞分化有关,可能参与骨发育和维持[18]㊂近年来有研究发现,C a d h e r i n -11与恶性肿瘤有关,但其在不同类型癌症中的抑癌或致癌功能报道不一㊂如Y U A N 等[19]研究发现,C a d h e r i n -11在结直肠癌中表达下调,其可诱导细胞周期阻滞在G 0/G 1期和凋亡,并通过影响核因子κB 信号通路来抑制肿瘤细胞增殖㊁迁移和侵袭等过程,被认为是结直肠癌中的一种功能性肿瘤抑制基因;S A T R I Y O 等[20]研究指出,C a d h e r i n -11可通过下调β-连环蛋白,使经典W n t 信号通路失活,从而抑制三阴性乳腺癌干细胞样表型和肿瘤生长;而WA N G等[21]研究发现,胃癌肿瘤组织C a d h e r i n -11呈高表达,且与胃癌进展和不良预后有关㊂本研究发现,胰腺癌组织中C a d h e r i n -11蛋白阳性合计表达率较癌旁组织降低,且与肿瘤最大径㊁分化程度㊁肿瘤分期㊁淋巴结转移㊁脉管浸润㊁神经浸润有关,提示C a d h e r i n -11低表达可能与胰腺癌的发生和发展有关㊂不过目前C a d h e r i n -11表达下调与胰腺癌的发生和发展机制并不明确㊂E -钙黏蛋白是维持细胞间连接作用的跨膜糖蛋白,其表达缺失可使细胞与细胞及细胞基质间连接能力下降,使细胞发生转移㊂既往有研究发现,E -钙黏蛋白在胰腺癌组织中表达下调,且与胰腺癌发生㊁转移有关[22]㊂有文献指出,下调C a d h e r i n -11表达后,细胞E -钙黏蛋白表达也下调,这可使细胞间黏㊃532㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第2期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .2附能力下降,侵袭能力增强[23]㊂结合之前研究结果,推测C a d h e r i n-11表达降低可能通过下调E-钙黏蛋白表达参与胰腺癌的发生和发展㊂本研究还发现,C a d-h e r i n-11阳性患者累积生存率高于阴性患者,提示C a d h e r i n-11表达下降可能与胰腺癌不良预后有关㊂秦雯等[24]报道指出,E-钙黏蛋白表达下降可能参与胰腺癌的发生和发展,在一定程度上支持本研究结果;但B I R T O L O等[25]研究发现,人类慢性胰腺炎和胰腺癌组织中C a d h e r i n-11表达明显升高,与胰腺星状细胞激活和胰腺癌转移有关,这与本研究结果恰好相反,但其原因未知,后期可补充目的基因P C R和蛋白质免疫印迹试验进一步验证㊂鉴于G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11在不同恶性肿瘤中致癌或抑癌作用报道不一,且本研究结果与同类研究结果并不完全一致,关于G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11表达与胰腺癌的关系及其是否可作为胰腺癌预后预测指标仍有待后期多中心㊁大样本研究进一步探讨㊂综上所述,胰腺癌组织中G a l e c t i n-9㊁C a d h e r i n-11呈低表达,且均与胰腺癌临床病理特征表现出一定的相关性,尤其是C a d h e r i n-11蛋白,其阳性表达者较阴性表达者累积生存率明显升高,C a d h e r i n-11检测在胰腺癌预后预测中展现出潜在的应用价值㊂参考文献[1]隋宇航,孙备.胰腺癌临床研究的热点问题[J].中国普通外科杂志,2019,28(3):255-259.[2]王珏,孙岩岩,徐晓燕,等.甲磺酸阿帕替尼联合I M R T治疗局部晚期胰腺癌的疗效及对C A19-9㊁细胞免疫功能的影响[J].国际检验医学杂志,2021,42(15):1890-1893.[3]白雪莉,李想,梁廷波.胰腺癌新辅助治疗临床研究进展[J].中华肝胆外科杂志,2020,26(9):645-650. [4]F E N G Y,MO U T I M A,P A U K L I N S.P A F1r e g u l a t e st h e s t e m n e s s o f p a n c r e a t i c c a n c e r s t e m c e l l s[J].G a s t r o-e n t e r o l o g y,2021,160(6):2224-2225.[5]张永欣.G a l e c t i n-9与多种恶性肿瘤的研究进展及作用机制探讨[J].实用肿瘤学杂志,2018,32(2):159-163. [6]S E O H,L E E H W,Y O O N S Y,e t a l.E f f e c t o f C a d h e r i n-11e x p r e s s i o n o n t h e p r o g n o s i s o f a n e w l y d i a g n o s e d p r i-m a r y g l i o b l a s t o m a[J].B r a i n T u m o r R e s T r e a t,2021,9(2):63-69.[7]A L L E N P J,K U K D,C A S T I L L O C F,e t a l.M u l t i-i n s t i-t u t i o n a l v a l i d a t i o n s t u d y o f t h e a m e r i c a n j o i n t c o mm i s s i o n o n c a n c e r(8t h e d i t i o n)c h a n g e s f o r T a n d N s t a g i n g i n p a t i e n t s w i t h p a n c r e a t i c a d e n o c a r c i n o m a[J].A n n S u r g, 2017,265(1):185-191.[8]吕小斌,罗和生.胰腺癌危险因素及其与糖尿病相关性研究进展[J].胃肠病学和肝病学杂志,2020,29(12):1425-1430.[9]朱鑫哲,李浩,徐华祥,等.2021年胰腺癌研究及诊疗新进展[J].中国癌症杂志,2022,32(1):1-12. [10]王奕智,郭俊超.胰腺癌基础研究新进展[J].中华实验外科杂志,2019,36(4):599-602.[11]董頔,杜蓉,薛茜文,等.T i m-3及其配体G a l e c t i n-9在宫颈癌患者中的表达及意义[J].中国免疫学杂志,2020,36(5):577-582.[12]C HO I S I,S E O K W,K O O K M C,e t a l.P r o g n o s t i c v a l u eo f t u m o r a l e x p r e s s i o n o f g a l e c t i n-9i n g a s t r i c c a n c e r[J].T u r k J G a s t r o e n t e r o l,2017,28(3):166-170. [13]王辉,张利娟,杨芳.半乳糖凝集素-9和T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义[J].癌症进展,2020,18(6):576-579.[14]T A K A N O J,MO R I S H I T A A,F U J I HA R A S,e t a l.G a-l e c t i n-9s u p p r e s s e s t h e p r o l i f e r a t i o n o f g a s t r i c c a n c e r c e l l si n v i t r o[J].O n c o l R e p,2016,35(2):851-860.[15]Z HA N G Y,X U E S,HA O Q,e t a l.G a l e c t i n-9a n d P S M B8o v e r e x p r e s s i o n p r e d i c t u n f a v o r a b l e p r o g n o s i s i n p a t i e n t s w i t h AM L[J].J C a n c e r,2021,12(14):4257-4263.[16]N A K A J I MA R,M I Y A G A K I T,K AM I J O H,e t a l.P o s s i-b l e t h e r a p e u t ic a p p l i c a b i l i t y o f g a l e c t i n-9i n c u t a n e o u s T-c e l l l y m p h o m a[J].J D e r m a t o l S c i,2019,96(3):134-142.[17]王武.P D-1㊁P D-L1及G a l e c t i n-9在胰腺癌中的表达及临床意义[D].长春:吉林大学,2020.[18]P E R A N I,D A K S HA N AMU R T H Y S,M C C O Y M D,e ta l.C a d h e r i n11p r o m o t e s i mm u n o s u p p r e s s i o n a n d e x t r a-c e l l u l a r m a t r i x d e p o s i t i o n t o s u p p o r t g r o w t h o f p a n c r e a t i c t u m o r s a n d r e s i s t a n c e t o g e m c i t ab i n e i n m ic e[J].G a s t r o-e n t e r o l o g y,2021,160(4):1359-1372.[19]Y U A N S,L I L,X I A N G S,e t a l.C a d h e r i n-11i s i n a c t i v a-t e d d u e t o p r o m o t e r m e t h y l a t i o n a n d f u n c t i o n s i n c o l o r e c-t a l c a n c e r a s a t u m o u r s u p p r e s s o r[J].C a n c e r M a n a g R e s, 2019,11:2517-2529.[20]S A T R I Y O P B,B AMO D U O A,C H E N J H,e t a l.C a d-h e r i n11i n h i b i t i o n d o w n r e g u l a t e sβ-c a t e n i n,d e a c t i v a t e s t h e c a n o n i c a l w n t s i g n a l l i n g p a t h w a y a n d s u p p r e s s e s t h e c a n c e r s t e m c e l l-l i k e p h e n o t y p e o f t r i p l e n e g a t i v e b r e a s tc a n c e r[J].J C l i n M e d,2019,8(2):148.[21]WA N G Q,J I A Y,P E N G X,e t a l.C l i n i c a l a n d p r o g n o s t i ca s s o c i a t i o n o f o n c o g e n e c a d h e r i n11i n g a s t r i c c a n c e r[J].O n c o l L e t t,2020,19(6):4011-4023.[22]田峰,方瑞忠,徐建.基质金属蛋白酶-2和E-钙黏蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义[J].中国现代医学杂志,2016,26(9):34-38.[23]沈禹辰,刘苗苗,李建豪,等.钙粘蛋白11在头颈部鳞癌中相关作用的研究[J].口腔颌面外科杂志,2020,30(4): 211-215.[24]秦雯,陈泰文,郑海平,等.胰腺癌组织中S O X4和E-c a d-h e r i n的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志, 2021,37(10):1160-1165.[25]B I R T O L O C,P H A M H,M O R V A R I D I S,e t a l.C a d h e r i n-11i s a c e l l s u r f a c e m a r k e r u p-r e g u l a t e d i n a c t i v a t e d p a n c r e a t i c s t e l l a t e c e l l s a n d i s i n v o l v e d i n p a n c r e a t i c c a n c e r c e l l m i g r a-t i o n[J].A m J P a t h o l,2017,187(1):146-155.(收稿日期:2023-03-26修回日期:2023-11-15)㊃632㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第2期 L a b M e d C l i n,J a n u a r y2024,V o l.21,N o.2。

浙江省宁波市慈溪市三山高级中学等六校2025届生物高二第二学期期末达标测试试题注意事项:1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚，将条形码准确粘贴在条形码区域内。

2．答题时请按要求用笔。

3．请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试卷上答题无效。

4．作图可先使用铅笔画出，确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。

5．保持卡面清洁，不要折暴、不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。

一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。

)1．孟德尔对遗传规律的探索经过了（）A．实验→分析→假设→结论B．实验→假设→验证→结论C．假设→实验→结论→验证D．分析→假说→实验→验证2．将乳清蛋白、淀粉、胃蛋白酶、唾液淀粉酶和适量的水混合装入一容器中，调整pH至2. 0，置于37℃的水浴锅内。

过一段时间后容器内剩余的物质是A．唾液淀粉酶、淀粉、胃蛋白酶、水B．唾液淀粉酶、麦芽糖、胃蛋白酶、多肽C．唾液淀粉酶、胃蛋白酶、多肽、水D．淀粉、胃蛋白酶、多肽、水3．要将土壤的自生固氮菌与其它杂菌分离开来，应将它们接种在A．加入氮源，加入杀菌剂的培养基上B．加入氮源，不含杀菌剂的培养基上C．不含氮源，不含杀菌剂的培养基上D．不含氮源，加入杀菌剂的培养基上4．下列有关核酸的叙述正确的是（）A．核酸的分类是依据所含的含氮碱基是T还是UB．核酸的基本单位是脱氧核苷酸C．组成DNA、ATP和磷脂分子的元素种类相同D．除病毒外，一切生物都具有核酸5．下列有关动物激素的描述，正确的是A．机体中激素的分泌量是不变的B．激素是具有高效性的生物活性物质C．性激素的化学本质是由氨基酸组成的蛋白质D．促甲状腺激素的受体分布在体内各种细胞上6．核酸和蛋白质结合在一起可称为”“核酸一蛋白质”复合物。

真核生物核基因在表达过程中如有异常mRNA会被细胞分解，如图是核基因S的表达过程，下列有关叙述错误的是A．图中①和②过程均存在着“核酸一蛋白质”复合物B．S基因中存在不能翻译成多肽链的片段C．图中所示的①为转录过程，②为翻译过程D．过程①和过程②中的酶均能作用于磷酸二酯键7．人参皂苷与促性腺激素的作用相似，当人参皂苷进入人体后A．能作用于下丘脑的性激素受体B．引起促性腺激素的分泌量增加C．会抑制性腺的分泌活动D．引起性激素的分泌量增加8．（10分）如图中的a、b、c、d分别代表人体内的四种大分子化合物，下列有关说法不正确的是()A．分子c的种类61种，只含三个碱基，分子量比b小得多B．b、c、d的合成离不开化合物a，这四种大分子化合物的主要合成场所相同C．b、c、d三种化合物能同时存在于同一个细胞器中D．a、b彻底水解后可得到四种不同的化合物，四种相同的化合物二、非选择题9．（10分）由腊梅凝集素基因控制合成的某种蛋白质能与蚜虫肠道粘膜上的受体结合，从而抑制蚜虫吸收营养物质。

发酵工程复习题一、选择题：1.厂用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸，结果代谢产物没有谷氨酸而产生乙酰谷氨酰胺，其原因是（）A．温度控制不适 B．通气量过多 C. pH呈酸性 D.溶氧不足2.青霉素生产的叙述,正确的是（ B）B．用紫外线、激光、化学诱变剂处理青霉菌再经筛选的方法可以选育高产菌种3.有关谷氨酸棒状杆菌的生长和谷氨酸发酵的叙述．错误的是（ B）B．菌体能合成各种生长因子，不需要从外界补充4.属于生长因子的是（ D ）D 维生素5.菌培养液中常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而会抑制微生物的生长，原因是（A ）A．碳源供应太充足6.作为生产菌种和科研材料的细菌群体，应该是代谢旺盛、个体形态和生理特性比较稳定的。

所以应选择在它的（B ）B 对数期7.与调整期缩短有关的因素中，最全面的一组是(C )①用与菌种相同的培养基②营养丰富的培养基③稳定期获得的菌种④对数期获得的菌种⑤接种时间提前⑥接种量加大⑦接种量减少⑧接种种类增多C．①④⑥8.谷氨酸发酵过程中，如果环境条件控制不当，则可能使代谢产物成为乳酸，那么乳酸是下列哪种条件下的产物（ D ）D．溶氧不足9. 能影响发酵过程中温度变化的因素是（ D）A．微生物分解有机物释放的能量B．机械搅拌C．发酵罐散热及水分蒸发D．A、B、C都对10.应用发酵工程生产的产品不包括（ D）D．目的基因二、名词解释：1.发酵工程(fermentation engineering):研究发酵工业生产过程中，各个单元操作的工艺和设备的一门科学。

发酵工程具体包括菌种选育、菌体生产、代谢产物的发酵以及微生物机能的利用等2.培养基 : 原料其化学成分明确、稳定适合于研究菌种基本代谢和过程的物质变化规律培养基营养单一，价格较高，不适合用于大规模工业生产3.培养基: 80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分，是发酵工业大规模使用的培养基。

4.生理性酸性物质；生理性碱性物质经微生物生理作用（代谢）后能形成酸性物质的营养物叫生理酸性物质，若菌体代谢后能产生碱性物质的营养物称为生理碱性物质5.连续培养指在向反应器中添加培养基的同时，从容器中放出等体积的培养液，就可以形成一个生产细胞的连续过程，即在培养器中所形成的新细胞数量与从容器中流失的细胞数目相等，反应体系达到稳态；菌的积累速率=生长速率-流出速率,6.抗生素：是生物在其生产活动过程中所产生，并能在低微浓度下有选择性地抑制或杀灭其他微生物或肿瘤细胞的有机物。

lacz的α互补筛选机制
α互补筛选机制是一种常用于基因工程领域的技术，特别是在研究基因表达和蛋白质相互作用方面起着重要作用。

这种技术的原理是利用细菌的β-半乳糖苷酶（lacz）基因的α互补特性，来筛选出具有特定基因表达水平的细胞或蛋白质相互作用。

在α互补筛选机制中，通常会构建含有lacz基因的质粒，该质粒中的lacz基因会被分成两个部分：α片段和Ω片段。

这两个片段分别与目标基因的启动子和编码区相连，当目标基因被表达时，α片段和Ω片段会相互结合，从而恢复完整的lacz基因。

接着，将这个质粒导入大肠杆菌等细菌中，利用β-半乳糖苷酶的活性来检测目标基因的表达水平或蛋白质相互作用。

通过α互补筛选机制，研究人员可以快速高效地筛选出目标基因在细胞中的表达情况或蛋白质之间的相互作用。

这种技术不仅可以帮助科研人员了解基因的功能和调控机制，还可以在药物研发和疾病治疗方面发挥重要作用。

除了用于基因表达和蛋白质相互作用研究外，α互补筛选机制还可以在其他领域得到应用。

例如，在农业领域，可以利用这种技术筛选出转基因作物中特定基因的表达水平，从而改良作物的性状；在环境监测领域，可以利用这种技术检测环境中特定微生物的存在和活性水平。

总的来说，α互补筛选机制是一种简单而有效的技术，可以帮助科研人员快速筛选出目标基因的表达情况或蛋白质相互作用，为基因工程和生物学研究提供了重要的工具。

随着技术的不断发展和完善，相信这种技术将在更多领域展现出其潜力和应用前景。

半乳糖凝集素点测定法是一种用于检测半乳糖凝集素（Galectin）的方法，半乳糖凝集素是一类具有半乳糖结合活性、能够与β-半乳糖苷结合的蛋白质。

该方法通常包括以下几个步骤：
样本制备：采集待测样本，如血液、组织或细胞培养液等，并进行适当的预处理，如离心、过滤等，以去除杂质和不必要的成分。

抗体包被：将特异性抗体包被在固相载体上，以便与待测样本中的半乳糖凝集素结合。

常用的固相载体包括微孔板、磁珠等。

抗原抗体反应：将制备好的样本与包被了抗体的固相载体进行孵育，使半乳糖凝集素与抗体结合。

信号检测：根据所使用的检测方法，可以采用不同的信号检测手段来检测抗体与半乳糖凝集素的结合情况。

常见的信号检测方法包括荧光标记、化学发光、放射性同位素标记等。

结果解读：根据检测到的信号强度或阳性/阴性结果，对样本中的半乳糖凝集素进行定量或定性分析。

需要注意的是，半乳糖凝集素点测定法的准确性在很大程度上取决于抗体的特异性，因此选择高质量的特异性抗体对于获得准确结果至关重要。

此外，样本的预处理、孵育时间和温度、洗涤等步骤也会影响检测结果的可靠性。