柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度

安捷伦1260丙戊酸钠母液配制：精密量取丙戊酸钠10 mg，加5 ml 甲醇溶解制得2mg/ml的丙戊酸钠储备溶液。

内标溶液：精密称取环己烷羧酸10mg至10ml溶量瓶中，用0.5mol/L氨水溶液稀释至刻度即得。

(10mg 环己烷羧酸+ 10ml 0.2mol/L氨水，去5ml用0.2mol/L氨水稀释至25ml，至0.2mg/ml。

)衍生化试剂：50mg 2溴苯乙酮+5ml乙腈溶解，得10mg/ml衍生化试剂。

血浆样品处理：取血浆1 ml，置具塞试管中，加1mg/ml入内标环己烷羧酸100μl，3mol/L硫酸0.5ml，混匀后，再加入正己烷6ml，涡旋混合5min，离心5min(4000r/min)。

精密吸取上层有机相5ml，加2-溴苯乙酮100μl，三乙胺100μl ，置55-60℃水浴中衍生化反应15min，氮气吹干有机相。

用1ml甲醇溶解残余物，取20μl进样。

岛津：丙戊酸钠标准溶液：准确称取丙戊酸钠对照品37.6mg，置于50 mL容量瓶中，用0.2 mol·L－1氨水稀释至刻度，摇匀，作为丙戊酸钠标准溶液（含丙戊酸钠0.752 mg·mL-1）。

内标溶液：准确称取环己烷羧酸50.0 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.2 mol·L-1氨水溶解并稀释至刻度，再精密量取该溶液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加0.2 mol·-1氨水稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液（含环己烷羧酸0.2 mg·mL-1）。

衍生化试液：准确称取2-溴苯乙酮125.0 mg，置于25mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为衍生化试液（含2-溴苯乙酮5.0 mg·mL-1），放置于冰箱中保存。

血样的制备：取血浆200 μL，置空白采血管中，加入内标溶液30 μL 和丙戊酸钠标准溶液20 μL，再加入1 mol·L-1硫酸溶液200 μL，振摇混匀，然后加入正己烷4 mL振摇萃取3 min，静置5 min使之充分分层，分离出上清液2 mL于另一试管中，加入衍生化试液40 μL 和三乙胺20 μL，涡旋混匀，于61～65 ℃水浴衍生化适当时间，然后在空气/氮气流下蒸发至干，立即取出，用甲醇0.3 mL涡旋溶解，作为血清样品溶液。

柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁【摘要】目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定血清样品中丙戊酸钠的含量.方法以Diamonsil C18(4.6×250mm 5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-水(87:13,V/V),检测波长为245nm;流速为1.0mL/min;柱温25℃.样品酸化提取后经α-溴代苯乙酮衍生化后分析,环己烷羧酸为内标.结果标准曲线线性相关系数R为0.999 3,线性范围15.0～180.0μg/mL,平均回收率为103.2%,日内、日间相对标准差均小于10%,最低检出浓度为0.3μg/mL.结论该方法简便、准确,适合于临床血药浓度监测.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P1422-1425)【关键词】丙戊酸;色谱法;高压液相;血药浓度【作者】周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁【作者单位】河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000【正文语种】中文【中图分类】R969.11丙戊酸钠（sodium valproate，VPA）是临床上常用的抗癫痫药物［1］，当其血药浓度＞100μg/mL时，其不良反应增加而疗效无明显增加，是血药浓度监测的常检药物，有效血药浓度为50～100μg/mL，血药浓度与疗效及毒性反应密切相关，是需进行常规监测的药物之一［2-4］。

由于VPA在紫外区无特征吸收，不易直接检测，临床上常用气相色谱测定，但存在萃取过程药物挥发的问题。

近年来，采用柱前衍生-高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法衍生化测定VPA血药浓度的报道［5-6］也较多，但多采用的衍生化试剂、条件及方法各不相同。

HPLC法测定丙戊酸的血药浓度目的：建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸（VPA）血药浓度的方法。

方法：选择ω-溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，Hypersil ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为分析柱；流动相为甲醇-水（75∶25，V/V)，检测波长为248 nm，流速为1.0 ml/min。

血样经酸化后以二氯甲烷提取。

结果：内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为8.0 min和12.8 min，线性范围为25～200 μg/ml，平均回收率为100.61%，日内、日间RSD均小于4.19%。

结论：本法快速、简便、准确，适合临床常规监测需要。

[Abstract] Objective: To establish a rapid pre-column derivatization-high-performance liquid chromatography determination of valproic acid (VPA) plasma method. Methods: ω-bromoacetophenone as a derivative reagent, cyclohexane carboxylic acid as the internal standard, Hypersil ODS-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5μm) for the analytical column; mobile phase was methanol-water(75:25, V/V), detection wave length was 248 nm, flow rate was 1.0 ml/min. Blood extracted by dichloromethane after acidification. Results: The internal standard cyclohexane carboxylic acid and VPA respectively, the retention time of 8.0 min and 12.8 min, the linear range of 25-200 μg/ml, the average recovery was 100.61%, days, day RSD were less than 4.19%. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and suitable for routine monitoring of clinical need.[Key words] Pre-column derivatization; High-performance liquid chromatography; Sodium valproate; Blood drug concentration丙戊酸作為癫痫小发作、大发作和肌阵挛的首选药物之一，一直是临床医生常用的抗癫痫药物。

柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【摘要】Aim To determine sodium valproate in patients ' serum by high performance liquid chromatography( HPLC) . Methods Serum sample was extracted with n-Hexane. Cyclohexanecarboxylic acid and 2-Bromoacetophenone were selected as an internal standard and derivative reagent respectively. The analytical column was Symmetry C18 (4. 6 mm × 250 mm ,5 μm) with the temperature at 30℃ . The detection wavelength was 248 nm and the flow rate was 1. 0 ml · min -1. Column temperature 30 ℃ . The mobile phase consisted of methanol-water (82 ∶ 18). Results The linear range of sodium valproate was 12. 5 ～150 mg · L-1 ,The mean recovery was 98. 74％ . The relative standard deviation( RSD) of inter-day for sodium valproate was less than 5％ . Conclusion The method is rapid , accurate.sensitive and suitable for clinical routine monitoring for sodium valproate.%目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度.方法血清用环己烷提取,以环已烷羧酸为内标,2-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度.采用Symmetr y C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(82:18);检测波长为248 nm;流速为1.0 ml·min-1;柱温:30℃.结果血清中丙戊酸钠线性范围为12.5～150 mg·L-1,平均回收率98.74%,日内RSD<5%.结论该法快速、灵敏、准确,适用于临床常规监测需要.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)011【总页数】3页(P1352-1354)【关键词】丙戊酸钠;柱前衍生化;高效液相色谱法;血药浓度【作者】杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【作者单位】安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院神经内科,安徽,合肥,230022【正文语种】中文丙戊酸钠(sodium valproate，VPA)又名二丙基乙酸钠，是治疗癫痫病全身性强直、阵挛性发作的首选药物，对失神发作和肌阵挛性发作效果较好，也可用于治疗部分性发作［1］。

安捷伦1260丙戊酸钠母液配制：精密量取丙戊酸钠10 mg，加5 ml 甲醇溶解制得2mg/ml的丙戊酸钠储备溶液。

内标溶液：精密称取环己烷羧酸10mg至10ml溶量瓶中，用0.5mol/L氨水溶液稀释至刻度即得。

(10mg 环己烷羧酸+ 10ml 0.2mol/L氨水，去5ml用0.2mol/L氨水稀释至25ml，至0.2mg/ml。

)衍生化试剂：50mg 2溴苯乙酮+5ml乙腈溶解，得10mg/ml衍生化试剂。

血浆样品处理：取血浆1 ml，置具塞试管中，加1mg/ml入内标环己烷羧酸100μl，3mol/L硫酸0.5ml，混匀后，再加入正己烷6ml，涡旋混合5min，离心5min(4000r/min)。

精密吸取上层有机相5ml，加2-溴苯乙酮100μl，三乙胺100μl ，置55-60℃水浴中衍生化反应15min，氮气吹干有机相。

用1ml甲醇溶解残余物，取20μl进样。

岛津：丙戊酸钠标准溶液：准确称取丙戊酸钠对照品37.6mg，置于50 mL容量瓶中，用0.2 mol·L－1氨水稀释至刻度，摇匀，作为丙戊酸钠标准溶液（含丙戊酸钠0.752 mg·mL-1）。

内标溶液：准确称取环己烷羧酸50.0 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.2 mol·L-1氨水溶解并稀释至刻度，再精密量取该溶液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加0.2 mol·-1氨水稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液（含环己烷羧酸0.2 mg·mL-1）。

衍生化试液：准确称取2-溴苯乙酮125.0 mg，置于25mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为衍生化试液（含2-溴苯乙酮5.0 mg·mL-1），放置于冰箱中保存。

血样的制备：取血浆200 μL，置空白采血管中，加入内标溶液30 μL 和丙戊酸钠标准溶液20 μL，再加入1 mol·L-1硫酸溶液200 μL，振摇混匀，然后加入正己烷4 mL振摇萃取3 min，静置5 min使之充分分层，分离出上清液2 mL于另一试管中，加入衍生化试液40 μL 和三乙胺20 μL，涡旋混匀，于61～65 ℃水浴衍生化适当时间，然后在空气/氮气流下蒸发至干，立即取出，用甲醇0.3 mL涡旋溶解，作为血清样品溶液。

柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【摘要】@@ 丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等.目前应用较多的是"柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量",为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2010(033)005【总页数】2页(P75-76)【关键词】丙戊酸钠;血药浓度;HPLC【作者】曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154003【正文语种】中文【中图分类】R927丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的 HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等。

目前应用较多的是“柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量”,为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用。

1 仪器及试剂P230Ⅱ高效液相色谱仪(大连伊利特分析仪器仪器有限公司);XW-80涡旋混合器(上海精科实业有限公司);岛津AUW220D十万分之一天平。

色谱纯甲醇：天津凯通化学试剂有限公司生产;丙戊酸钠对照品 (湖南省湘中制药有限公司提供,含量：99.8%,批号 090405)环己烷羧酸 (美国 Sigma公司 ,批号：08265PD,);ω-溴苯乙酮(国药集团化学试剂有限公司,批号：20090212);其它试剂均为分析纯。

2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2C18(4.6mm× 250mm,5μm);柱温：30℃;检测波长：248nm;流动相：甲醇：水 (75：25);流速：1.0mL˙min-1;进样量：15 μL。

HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【摘要】为了研究HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度衍生时的最佳衍生条件,探讨不同衍生条件对血药浓度的影响,本实验采用L9(34)正交实验设计,以衍生试剂浓度、催化剂浓度、衍生温度和衍生时间为考察因素,确定最佳衍生条件.结果显示,A2B2C3D1为最佳衍生条件,即衍生试剂为2.0 mg/mL,催化剂浓度为20%,衍生温度为60℃,衍生时间5 min为最佳衍生条件.不同的衍生条件对测定结果有显著影响(P<0.05),且衍生反应的主次因素为衍生试剂浓度>衍生温度>催化剂浓度>衍生时间.由此可知,优化后的衍生条件方法回收率高,节约时间和成本,简便可行.%In order to optimize the derivatization conditions when the HPLC method was adopted to monitoring the serum concentration of sodium valproate, and investigate the influence of different derivatization conditions on serum concentration of sodium valproate, L9 (34) orthogonal experimental design was used to determine the optimal derivatization conditions, the concentration of derivatization reagent, catalyst concentration, temperature and time was used as study factors. Results showed that A2B2C3D1 combination was the optimal derivation conditions, so the best derivation condition was that the concentration of derivatization reagent was 2.0 mg/mL, the catalyst concentration was 20%, the reaction temperature was 60℃, and time was 5 min. Different derivatization conditions had a significant effect on the determination results (P< 0.05). The primary and secondary factors for the derivatization reaction were derived reagent concentration > derived temperature >catalyst concentration >derivatization time. These findings in our research showed that the optimized derivation condition method had high recovery rate, saves time and cost, and simple and feasible.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)002【总页数】6页(P176-181)【关键词】衍生条件;丙戊酸钠;血药浓度;正交实验;优化【作者】胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【作者单位】石河子大学药学院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学药学院,新疆石河子 832002【正文语种】中文【中图分类】R927.2丙戊酸（valproic acid，VPA）钠是临床上常用的一线抗癫痫药，是癫痫综合征、大发作、失神性发作、肌阵挛性发作的首选。

反相高效液相色谱-柱前衍生法测定人血清中丙戊酸浓度陈碧;黄晓亮;李辉【摘要】Objective To establish a determination method for valprate in serum .Methods Serum sample was acidified by sulfuric acid and extracted with ethyl ether ,cyclohexanecarboxylic acid was selected as an internal standard ,α-bromoaceto-phenone as derivative reagent .Determination was performed with HPLC with methanol :water (70:30) as the mobile phase . The nalytical column was Eclipse Plus C18 (150 mm × 4 .6 mm ,5 μm) ,detected at 248 nm ,the flow rate was 1 .0 ml/min .Re-sults The linear rang of valproate was 8 .65~173 μg/ml .The mean relative recovery was bigger than 99 .27% .Both the rela-tive standard deviation (RSD) of inter-day and intra-day was less than 5% .Conclusions The method israpid ,accurate ,sensi-tive and suitable for clinical therapeutic drug monitoring .%目的建立人血清中丙戊酸浓度测定方法.方法将血清酸化,用乙醚提取,以环己烷羧酸为内标,α-溴苯乙酮为衍生化试剂,采用高效液相色谱法测定.色谱柱:Eclipse Plus C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水(70:30),检测波长:248 nm,流速:1.0 ml/min.结果血清中丙戊酸浓度线性范围为8.65~173μg/ml,平均回收率>99.27%,日内和日间RSD<5%.结论本法快速、简便、准确,适合于临床血药浓度监测.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2016(034)003【总页数】3页(P255-257)【关键词】丙戊酸;血药浓度;衍生化;高效液相色谱法【作者】陈碧;黄晓亮;李辉【作者单位】湖南省郴州市第一医院药学部 ,湖南郴州423000;湖南省郴州市第一医院药学部 ,湖南郴州423000;湖南省郴州市第一医院药学部 ,湖南郴州423000【正文语种】中文【中图分类】R92·研究报告·[DOI] 10.3969/j.issn.1006-0111.2016.03.016丙戊酸(valproate，VPA)是临床常用的一线广谱抗癫痫药，有效血药浓度范围为50～100 μg/ml。

改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度沈陈军;陈新贵;王勇;胡秀萍【摘要】Objective:To improve the high performance liquid chromatography( HPLC) for determination of the sodium valproate concentration in human serum in order to supply evidence with rational use of this drug.Methods:Cyclohexanecarboxylic acid was used as the internal standard.The serum samples were extracted with n-hexane after acidification and precipitation by sulphuric acid ,and subjected to treatment with 2-bromoacetophenone as derivative rea-gent and triethylamine as catalytic agent.Then the samples were determined by HPLC as protocol:chromatographic column,ZORBAX SB-C18(150 mm × 4.6 mm,5 μm);mobile phase,methanol-water(72∶28) at flow rate of 1.0mL/min;detection wavelength set at 248nm;the column temperature at 25℃, and sample size in 10 μL.Results:The linear range of sodium valproate was 13.3-160.7 μg/mL(r=0.9979,n=6).The recovery rate for the sodium valproate in low,middle and high concentration and extraction recovery rate was 88.6%-107.2% and 82.1%-89.5%,respectively.The RSD of intra-day and inter-day were less than 6.4% and 8.2%,respectively.Conclusion:The modified HPLC technique can satisfy the needs of clinically monitoring the valproate concentration in patients,for it has higher specificity and accuracy as well as better linear dependence and reduced laboratory cost.%目的：建立改进HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度，为临床合理使用丙戊酸钠提供依据。