细胞培养基本技术(3)
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细胞培养试验技术细胞培养环境1.实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。
细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。
细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。
2.常用设施及设备(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类。
(2)无菌操作间:一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。
操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。
缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等。
(3)操作间:普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物(4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。
(5)分析间:显微镜、计算机及打印机等。
3.培养器皿常用细胞培养器皿有培养瓶、培养板、培养皿等。
常准备量是使用量的三倍。
器皿应选择透明度好、无毒、利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。
常用的器皿有下面几种。
(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培养液、血清等液体,常用规格有500ml、250ml、100ml 等几种。
(2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等几种。
(3)培养皿:用于开放式培养及其它用途。
分直径30mm、60mm、120mm 等几种。
(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管。
其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体。
常用1ml 和10ml 两种。
短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种。
(5)离心管:离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。
医学实验中细胞培养的基本操作教程细胞培养是医学实验中常用的技术手段,可以通过培养细胞体外研究细胞结构、功能、代谢以及疾病的发病机制。
本文将介绍医学实验中细胞培养的基本操作教程,包括无菌操作、细胞传代和细胞培养基的制备。
一、无菌操作1. 器具准备:将工作区域和培养器具用70%乙醇喷雾消毒,将所需器具放入无菌工作台,待干燥后再进行后续操作。
2. 细胞培养基准备:将所需的细胞培养基放入无菌环境中,根据实验需求添加适量的血清、抗生素等。
3. 细胞取样:取出培养物中所需的细胞,使用吸管或移液器将细胞转移到无菌的培养基中。
4. 细胞传播:将细胞和培养基混合均匀后,转移到培养皿或培养瓶中,注意避免皿壁的污染。
5. 无菌操作结束:将使用过的培养器具进行无菌处理,清理工作区域并进行必要的消毒。
二、细胞传代1. 始代细胞收获:当细胞在培养器中达到一定密度后,使用细胞解离液将细胞从底物上解离下来。
2. 离心:将解离的细胞转移到离心管中,以适当的转速离心沉淀细胞。
3. 上清液去除:倒掉离心管中上清液,注意尽量不要干扰到细胞沉淀。
4. 细胞悬浮液制备:使用无菌PBS洗涤离心沉淀的细胞,再添加适量的细胞培养基将其悬浮均匀。
5. 细胞传代操作:将悬浮细胞转移到新的培养器具中,注意避免气泡的产生,并将培养基置于CO2孵化箱中培养。
三、细胞培养基的制备1. 培养基组成:根据实验需求,制备含有特定成分的培养基,如DMEM、RPMI 1640等。
2. 液体消毒:将容器进行高温高压灭菌,确保培养基的无菌。
3. 配方调整:按照实验需求向培养基中添加适量的血清、抗生素、谷氨酸等。
4. 混合均匀:使用无菌器具将添加好成分的培养基搅拌均匀,确保各成分充分溶解。
5. 培养基保存:将制备好的培养基用无菌器具装入培养瓶中,标明日期和成分,存放于4℃的冰箱中,避免阳光直射。
以上就是医学实验中细胞培养的基本操作教程,从无菌操作、细胞传代到培养基的制备,这些基本技术对于医学实验中的细胞研究至关重要。
医学中的细胞培养技术细胞培养技术是医学研究和应用中的重要工具之一。
通过使用细胞培养技术,医学研究人员可以研究细胞的生长、发展和分化过程,以及探究疾病的发生、发展机制,为临床治疗提供有力的支持。
本文将从细胞培养的基本概念、细胞培养技术的种类、细胞培养在医学研究中的应用等方面进行探讨。
一、细胞培养的基本概念细胞是生命的基本单位,它在生命活动中扮演着重要的角色。
细胞培养是指将细胞从生物体中剥离出来,经过适当的培养条件,使其在体外继续生长和繁殖的过程。
细胞培养的目的是为了使细胞获得更好的生长环境,以便从中提取有用的物质,研究细胞生长发育和疾病发生的机制。
二、细胞培养技术的种类目前,细胞培养技术主要可以分为三种:原代细胞培养、细胞系培养和三维培养。
1.原代细胞培养原代细胞培养是从新鲜的组织或器官中分离出来的细胞,通过适当的培养条件和培养基使其继续生长和繁殖。
原代细胞培养的细胞数量有限,而且存在样本来源的限制。
但是,由于原代细胞具有生物分化程度低、细胞表型稳定等优点,因此在肿瘤细胞的研究中广泛使用。
2.细胞系培养细胞系培养是指从原代细胞中选出体外生长能力强、生长速度快、可以无限制繁殖的细胞,经过多代传代后形成的一种细胞系。
细胞系培养技术可以大量生产某种特定细胞,从而在医学研究和制药领域得到广泛应用。
3.三维培养三维培养是指将细胞以高密度、三维空间排列,进而调控其生长和分化过程。
与二维培养相比,三维培养细胞上分化程度更高,细胞表型更稳定,更接近于组织器官的天然状态。
因此,三维培养在生物工程、再生医学等领域中得到了广泛的应用。
三、细胞培养在医学研究中的应用1.疾病模型建立通过建立疾病模型,可以模拟人体疾病的发生和发展过程,研究疾病的发病机制,寻找治疗方法。
利用培养的细胞,可以在体外建立各种疾病模型,如癌症、糖尿病、神经退行性疾病等。
2.药物筛选和药效评估细胞培养技术可以用于药物筛选和药效评估。
通过培养细胞,可以在体外模拟药物作用的过程,并进一步快速筛选药物的特异性、毒性和剂量。
一、实验目的1. 了解细胞的基本结构和功能;2. 掌握显微镜观察细胞的基本方法;3. 学习细胞培养的基本技术;4. 探究细胞在不同条件下的生长和分化情况。
二、实验原理细胞是生物体的基本单位,具有自我复制、生长、分化和代谢等生命活动。
细胞的基本结构包括细胞膜、细胞质、细胞核等。
通过显微镜观察细胞,可以了解细胞的结构和功能。
细胞培养技术可以使细胞在体外生长、繁殖,从而研究细胞的生长、分化和代谢规律。
三、实验材料1. 显微镜;2. 细胞培养箱;3. 细胞培养皿;4. 细胞培养基;5. 胶头滴管;6. 镊子;7. 纱布;8. 洗耳球;9. 洗洁精;10. 消毒剂;11. 实验记录本。
四、实验步骤1. 细胞培养(1)将细胞培养皿清洗干净,用消毒剂进行消毒;(2)在培养皿中加入适量的细胞培养基,置于细胞培养箱中预热;(3)将细胞悬液用无菌移液枪吸取,均匀接种于培养皿中;(4)将培养皿放入细胞培养箱中,培养一定时间。
2. 显微镜观察(1)将培养好的细胞取出,用无菌水清洗;(2)用镊子将细胞轻轻转移到载玻片上,用盖玻片封片;(3)将载玻片置于显微镜载物台上,调整显微镜的焦距,观察细胞形态和结构。
3. 细胞分化实验(1)在细胞培养基中添加分化诱导剂,如生长因子、激素等;(2)将诱导剂处理的细胞接种于新的培养皿中,培养一定时间;(3)观察细胞形态和结构的变化,记录实验结果。
五、实验结果与分析1. 细胞培养结果在细胞培养过程中,细胞逐渐生长、繁殖,形成单层或多层细胞。
细胞形态规则,细胞核清晰可见。
2. 显微镜观察结果通过显微镜观察,可以看到细胞的形态、结构、细胞核、细胞质等。
细胞膜完整,细胞质均匀,细胞核呈圆形或椭圆形。
3. 细胞分化实验结果在分化诱导剂的作用下,细胞形态和结构发生明显变化。
部分细胞发生形态变化,出现分化特征,如细胞突起、细胞间隙等。
六、实验结论1. 细胞具有自我复制、生长、分化和代谢等生命活动;2. 显微镜观察可以了解细胞的结构和功能;3. 细胞培养技术可以使细胞在体外生长、繁殖,从而研究细胞的生长、分化和代谢规律;4. 细胞分化实验可以观察细胞在诱导剂作用下的形态和结构变化。
细胞一细胞培养(一)原代培养○1胰蛋白酶消化法1.将组织块用PBS清洗3遍,去除表面血污,移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3(糊状)后用PBS清洗三遍(洗至PBS澄清透明)2.吸去PBS液,将组织块移入15ml离心管中,加入组织块两倍体积预热至37℃的0.25%含EDTA的胰蛋白酶,在37℃水浴中作用20分钟,每隔五分钟摇晃一下3.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化,将消化后的组织块用细胞筛过滤,取过滤液于离心管中,1000r/min离心5分钟4.离心后吸去上清液,加入5ml含10%胎牛血清和1%双抗的培养基,轻轻吹打混匀,细胞计数,调至约5×105个/ml,每个培养皿(6㎝培养皿)加入5ml含细胞的培养基,上下左右移动混匀5.放入37℃,5%CO2的培养箱中培养6.24h后,观察细胞贴壁情况,更换培养基,继续培养,2-3天更换一次培养基7.代细胞融合率达80%-90%时进行传代培养○2组织块法1. 将组织块用PBS清洗3遍,去除表面血污,移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3(糊状)后用PBS清洗三遍(洗至PBS澄清透明)2.将组织块转移至培养皿中,每个组织块保持一定间距3.向培养皿中缓慢加入培养基至刚好没过组织块,小心放入37℃,5%CO2的培养箱中培养4.24h后,观察贴壁情况,并补加新培养基仪器:6㎝培养皿、弯头剪、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂:PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM (高糖)培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液(双抗)(二)传代培养○1贴壁细胞1.先将含10%血清和1%双抗的培养基、0.25%EDTA-胰蛋白酶在37℃水浴锅中预热20min2.观察细胞融合率是否达到80%-90%3.将所需用品放入紫外照射30min的超净工作台中,物品放入前需用75%酒精擦拭或放入后立即用酒精擦拭4.吸去培养基,加入PBS冲洗两遍,洗去残留培养基,加入胰蛋白酶至刚好覆盖培养皿底 (6㎝培养皿约1ml),放入培养箱中消化0.5-2分钟5.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化,轻轻吹打混匀,吸入离心管中,1000r/min离心5min6.离心后,小心吸去上清夜,加入5ml培养基轻轻吹打混匀,血细胞计数,调至5×105个/ml7.每个6㎝培养皿加入5ml含细胞的培养基,放入37℃,5%CO2培养箱中继续培养○2悬浮细胞1.将培养皿中的培养基吸至离心管中,1000r/min离心5分钟2.离心后吸去上清液,加入5ml培养基,轻轻吹打混匀,血细胞计数,调至5×105个/ml3.每个6㎝培养皿加入5ml含细胞的培养基,放入37℃,5%CO2培养箱中继续培养仪器:6㎝培养皿、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂:PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM (高糖)培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液(双抗)(三)细胞冻存○1贴壁细胞冻存1.配置细胞冻存液2.吸去培养基,加入0.25%EDTA-胰蛋白酶刚好覆盖培养皿底,放入培养箱中消化0.5-2min3.消化后的细胞,转移至离心管中,1000r/min离心5min4.离心后,加入细胞冻存液与细胞混匀,细胞计数,调至5×106个/ml5.每个冻存管加入1.5ml,将冻存管放入程序性降温盒,-80℃过夜,转移至液氮中;若无程序性降温盒,则将冻存细胞依次放置4℃1h,-20℃2h,-80℃过夜,再转移至液氮中○2悬浮细胞冻存1.配置细胞冻存液2.将细胞转移至离心管中,1000r/min离心5min3.离心后,加入细胞冻存液与细胞混匀,细胞计数,调至5×106个/ml4.每个冻存管加入1.5ml,将冻存管放入程序性降温盒,-80℃过夜,转移至液氮中;若无程序性降温盒,则将冻存细胞依次放置4℃1h,-20℃2h,-80℃过夜,再转移至液氮中仪器:15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、倒置显微镜、程序性降温盒、液氮罐试剂:PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM(高糖)培养基、胎牛血清、二甲基亚砜(四)细胞复苏1.将冻存的细胞从液氮中小心取出,快速在37℃水浴锅中摇晃解冻,一般在1min内完成,若离水浴锅较远可将细胞放置在干冰上2.将冻存管内液体转移至离心管中,1000r/min离心5min3.去除上清液,加入培养基,轻轻吹打混匀,细胞计数,调至5×105个/ml4.每个6㎝培养皿加入5ml复苏后的细胞,放入37℃,5%CO2培养箱中培养仪器:6㎝培养皿、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂:PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM (高糖)培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液(双抗)。
细胞培养技术在烧伤皮肤修复上的应用烧伤是人体皮肤遭受高温热损伤所引起的一种外科急症,长期以来一直是困扰人类健康问题之一。
烧伤严重时,皮肤会出现明显的溃烂、淤血、疼痛等症状,严重的甚至还有可能导致生命危险。
众所周知,皮肤是人体最大的器官,也是最外层的屏障,是维护我们健康的第一道防线。
因此,对于严重的烧伤来说,及时的皮肤修复尤为重要。
在医学发展的历程中,人们发现了细胞培养技术,这种技术可以让我们更好地进行皮肤修复。
那么,让我们一起来了解一下细胞培养技术在烧伤皮肤修复上的应用吧。
1. 细胞培养技术的基本原理细胞培养技术是一种生物医学技术,它通过体外培养的方法,将动物或人体内的细胞放置在含有营养物质和生长激素的培养基中,使它们在良好的环境下生长、分裂、扩增,形成一个听从体内指令的细胞库。
当需要进行皮肤修复时,医生会从受损的皮肤组织中提取一部分健康的组织,再从这些组织中分离出细胞,将其进行培养、扩增。
最后,医生再将扩增好的细胞种植回到患者的受损区域,使伤口迅速愈合,以达到皮肤修复的效果。
2. 细胞培养技术在烧伤皮肤修复上的应用细胞培养技术在烧伤皮肤修复上的应用十分广泛。
具体而言,主要有以下几个方面:(1)替代传统的皮片移植过去,医生们采用的主要方法是将患者的健康皮肤组织移植到烧伤的部位,但这种方法存在着术后疤痕容易留下的缺点。
而通过细胞培养技术,我们可以快速制备出与损伤部位完全一致的皮肤细胞,实现精准移植,减少疤痕留存。
(2)治疗面积大、烧伤程度深的伤口在面积大、烧伤程度深的烧伤伤口中,传统的皮片移植会变得相对昂贵且手术难度大。
这时,利用细胞培养技术制备出的皮肤细胞就显得尤为重要。
通过这种方法,医生们能够选择对患者损伤更小的细胞类型,同时快速创制出更多的移植物,可以缩短治疗周期,达到更好的修复效果。
(3)修复烧伤后遗症在完成烧伤伤口修复后,还有一部分患者会出现或多或少的烧伤后遗症,比如色素沉积、色素减退、疤痕增生等。