石蜡切片制作标准程序

石蜡切片制作流程

以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。

2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。

3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。

4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡

中。首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。

5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：

1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片的具体步骤与做法？

石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。

石蜡切片的制作过程

（一）材料与用具

1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。

2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。

（二）实验内容与步骤

1．取材及固定

取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。

材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

2．冲洗

固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。AFA固定液则不需要水洗。

怎样制作石蜡切片

制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：

1.准备材料和设备：

-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。

-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。

-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。

-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。

2.制备石蜡块：

-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。

-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。

-等待石蜡冷却和凝固。你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。

3.切割石蜡块：

-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。

-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。

4.制备石蜡切片：

-准备一张玻璃载玻片。

-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。

5.烘干石蜡切片：

-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。

-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。

6.染色和封片：

-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。

- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。

-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。

制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。

⽯蜡切⽚步骤

⽯蜡切⽚基本步骤

（⼀）取材和固定

根据实验⽬的选择材料。将整个⾍体或⾍体的内部器官（如肠道、马⽒管、唾液腺等）取出后，⽴即投⼊固定液。

取材⼤⼩：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。

固定液：2.5%的戊⼆醛固定液，Bouin⽒液，10%甲醛等。

固定时间：4oC固定24⼩时。

注意事项：

取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所⽤⼑、剪要锋利，切割时不可来回切割。夹取组织时，镊⼦要轻，切勿挤压，以免损伤组织。取材时，组织块可稍⼤⼀点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。

2.选好组织块的切⾯应熟悉器官组织的组成，并根据观察⽬的来确定纵切或横切。

3．保持材料的清洁组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物等，先⽤⽣理盐⽔冲洗⼲净，再⼊固定液。

4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。

固定：1．材料新鲜取出组织后须⽴即固定。否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发⽣⾃溶现象。

2．抽⽓⽣物组织常有⽓体的存在，使材料不能沉⼊固定液中，抽⽓使得固定液有效渗⼊。真空泵抽⽓或者⽤空针管抽⽓。昆⾍整体固定，固定前⽤解剖针刺数个⼩孔，以利⽤固定液渗透。

3．固定剂⽤量⼀般为组织体积的10~20倍。勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗⼊。

4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作⽤。

5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗⼊，对长期固定的标本可经常更换固定液。

（⼆）洗涤

2.5%戊⼆醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10min

石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备组织切片，以便进行显微镜观察和研究。以下是石蜡切片的基本操作流程：

1. 组织固定：首先，将待切片的组织标本进行固定，以保持组织结构的完整性和稳定性。常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。固定时间的长短取决于组织的大小和类型，一般为数小时至数天。

2. 组织去水化：固定后的组织需要去除固定剂并脱水，以防止切片过程中的破损和变形。通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤，常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。

3. 组织浸渍：脱水后，组织需要进一步浸渍到石蜡中，以增加组织的硬度和支持性。首先将组织放入浸渍剂中，如甲醛或乙醇中的苯麻油，然后逐渐增加石蜡浓度，常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。

4. 组织包埋：在组织浸渍后，将组织放入包埋模具中，然后倒入熔化的石蜡，使其完全包裹住组织。包埋完成后，将模具放入冷却台或冷冻器中，使石蜡迅速固化。

5. 石蜡切片：将冷却固化的石蜡块从模具中取出，使用切片机将其切割成薄片。切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具，切片时需要注意切片的方向和角度，以获取最佳的切片效果。

6. 切片染色：切片完成后，可以对切片进行染色，以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。

7. 切片封片：染色后，将切片放置在载玻片上，并使用透明的封片剂将其覆盖。封片剂可以保护切片，防止切片脱落和变形，并提高显微镜观察的清晰度。

8. 切片观察：最后，将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构，同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。

石蜡切片

1.仪器

石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。

2. 试剂

FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。

3.取材

幼嫩的油菜植株叶片和茎

4.方法与步骤(参照)

1．固定：

FAA固定液固定48小时以上。

2．脱水：

50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2h。100%酒精中1.5h。其中70%酒精处可长期保存。

3．透明：

1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h)

4．浸蜡：

将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。

5．包埋：

先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。

6．切片

对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。

7．粘片

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程表

一. 取材

1，样品要求：长，宽各1cm左右，厚不超过5mm

2，固定液：10%福尔马林固定液或4%多聚甲醛：组织块=20:1为宜

3，固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如24h或更长，应密封瓶口，封前换液

4, 修块

二.脱水

1，水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2，脱水

1）75%酒精1h

2) 80%酒精1h

3）95%酒精Ⅰ1h

4) 95%酒精Ⅱ1h

5) 100%酒精Ⅰ1h

6) 100%酒精Ⅱ1h

组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精（Ⅱ）中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分进入。

三．透明

1)酒精（100%）：二甲苯=1：1 10min

2)二甲苯Ⅰ透明10min

3二甲苯Ⅱ10min

四．浸蜡

1）二甲苯：石蜡=1：1 30min 温箱56—58℃

2）石蜡Ⅰ1h 温箱56—58℃

3) 石蜡Ⅱ1h 温箱56—58℃

4) 石蜡Ⅲ1h 温箱56—58℃

温度保持在56—58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

五．包埋

首先在金属框架上涂抹凡士林，以保证石蜡到入后不会外溢。将包埋用石蜡及浸蜡组织块放在有石棉网的电炉上保温。在框架中先倒入少许包埋用石蜡，再用镊子将组织块迅速移入框架，再倒入石蜡，待完全凝固后取出待用。

六．切片和烘片（烘片温度38℃）

七．附贴（45℃）；烤片

（一）附贴（45℃）

附贴液的配制：新鲜蛋白20ml,麝香草酚少许，用玻璃棒混匀，再加入甘油20ml,继续混匀。若有多聚懒氨酸处理的切片则直接用之。

石蜡切片的制作程序

1、病料的采集：

采集病料要及时，以防组织变质发生自溶。病理组织材料要采取病变典型突出的部分，最好选病变与健康组织的交界处，以识别和探讨病变的发生和发展。组织块一般不宜过大，以3～5mm×3～5mm×10～15mm为宜。过大过厚的组织块容易影响固定和浸蜡的质量，不易切出较好的切片。采取病料时应保持器官组织的原来形状，用锋利的刀剪切取，切勿挤压，损伤或扭折，以免造成人为的损伤。

2、固定：

固定的目的是使组织和细胞的较粗大的结构尽量保持正常状态，避免发生形态学结构变化，使细胞保持一定的硬度，以利于切片。采取的病料组织块应及时投入固定液内进行固定，以防腐败。并做好标记，便于识别。固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。

固定剂的种类很多，一般能凝固或沉淀蛋白质及脂肪等成分的药品都可以做固定剂。如：酒精、甲醛、冰醋酸、苦味酸、升汞等等。可以按照不同的目的来选择使用固定剂，常用的固定剂主要是福尔马林(formalin 37～40%的甲醛)，最适合固定的浓度为10%福尔马林(3.7%～4%甲醛)，固定和保存时所用的溶液是指福尔马林的百分比，而不是甲醛，例10%福尔马林溶液是10毫升的福尔马林加上90毫升的水配成。所以10%的福尔马林，实际上仅含3.7～4%的甲醛。

福尔马林易被氧化为甲酸，故常带酸性，为得到中性福尔马林可加吡啶、碳酸钙或碳酸镁的方法使之中和。例如在100毫升的25%福尔林中加5毫升的吡啶；可使它的pH 上升到7.0；10%的福尔马林可被过量的碳酸钙中和为pH6.4；如果用碳酸镁则为pH7.6。冲淡的福尔马林(10%)更易氧化，为了保持它的中性，可于其中放入几小块大理石。

石蜡切片的制作

1、取材固定：将取的组织立即投入固定液中（10%的福尔马林溶液）固定24h。

2、脱水：修块后流水冲洗12～24h，70%的酒精过夜，梯度酒精脱水

80%酒精1h→85%酒精1h→90%酒精1h(开始熔蜡)→95%酒精45min→无水乙醇Ⅰ45min →无水乙醇Ⅱ45min→酒精二甲苯5min。

3、透明：二甲苯溶液。

4、浸蜡：透明组织块浸入石蜡内1.5h。

5、包埋：石蜡包埋柱内灌满石蜡，将组织放入柱内，蜡块冷却后，适当修整后装入真空袋。

6、切片：切片机

7、展片和贴片：切下的蜡片放在载玻片上，滴一滴70%的酒精放入40～45℃的水中，待其

展平后，用载玻片取出，并置温箱中烘干（60℃2h）。

8、脱蜡、浸水、染色、封藏。

切片→二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ（10min）→无水酒精2min→90%酒精2min→80%酒精2min→70%酒精2min→蒸馏水3min→苏木素染液15min→常水冲至不褪色为止→1%盐酸酸化迅速→自来水蓝化30min→85%乙醇迅速→1%伊红染液染色40s→

95%酒精Ⅰ迅速→95%酒精Ⅱ2min→无水酒精Ⅰ2min→无水酒精Ⅱ2min→

二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ5min；

9、盖片：滴加中性树胶，盖上盖玻片，镜检。

石蜡切片流程

一、引言

石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术，用于制备样品的薄片，以便进行显微观察和分析。本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备

1. 石蜡：选择适合的石蜡材料，常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品：根据需要选择合适的样品，可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀：选择切割尖锐且锋利的切片刀，常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机：使用专业的切片机设备，保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程

1. 固定样品：将样品进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分：将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分，一般采用浓度逐渐降低的醇溶液，如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡：将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。首先将样品置于较低融点的石蜡中，然后逐渐转移到较高融点的石蜡中，这样可

以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋：将渗透后的样品放入石蜡模具中，待石蜡凝固后，取出石蜡块。

5. 切片：使用切片机将石蜡块切割成薄片，切片的厚度根据需要进行调整，一般为4-10微米。

6. 切片处理：将切好的薄片浸泡在温水中，使其展平，并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片：将载玻片放入烘箱中，以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项

1. 操作环境：保持实验室的清洁和安静，避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理：在使用切片刀前，先将其清洗干净并消毒，以防止样品污染。

3. 温度控制：石蜡切片的各个步骤中，温度的控制非常重要，可以根据不同的样品选择适当的温度。

石蜡切片具体过程及操作步骤

固定：

组织块大小：1.5 X 1.5 X 0.2 CM

固定液>4 倍组织体积

福尔马林固定

市售为40% 甲醛水溶液，应放入小量碳酸钠放置一段时间福尔马林固定液：40% 甲醛溶液 1 份，水9 份固定数小时后用水洗24 小时优点：克服了乙醇固定的缺点

脱水（组织块）

70% 乙醇片刻

80% 乙醇2-4 小时

95% 乙醇2-4 小时

95% 乙醇2-4 小时

100% 乙醇2-4 小时

100% 乙醇2-4 小时

注：为保证100% 乙醇无水，可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分，变蓝后更换。

最好能将100% 乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明（组织块）

100% 乙醇：二甲苯（1 ：1 ）15 分钟

二甲苯15 分钟

二甲苯15 分钟

注意：时间太长变脆

浸蜡（组织块）

石蜡熔点52 —56 C

温箱：56 C

二甲苯：石蜡（ 1 ： 1 ）1-2 小时

石蜡1-2 小时

石蜡1-2 小时

包埋将熔化了的石蜡倾入包埋框内，随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内，平置底面。注意组织切面，放入冷水，冷固后将蜡块修齐，固定于木块上。

石蜡切片

切片机：调整好。

刀：磨刀时一个方向，液体石蜡。

切下的片子，右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片，左手用干燥毛笔将切片取下，放入盛温水（约

30 C）的玻璃皿内，将切片摊于温水面上，光亮的切面向下，用弯镊子细心张开皱纹。然后将水温加到40 C,使切片更平均地展开于水面上，再用弯镊子细心分开各蜡片，将涂过少许蛋白甘油的载玻片

沉至切片下面，然后将切片从水面取出。最后将切片置于56 C保温

石蜡切片制备基本步骤

一、准备工作（一）

（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）

1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷

2、将器皿在自来水下冲洗干净

3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干

注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制

清洁液（洗液）的配制：

成分强酸液次强酸液弱酸液

浓硫酸（ml）1000 200 100

重铬酸钾（mg）63 120 100

蒸馏水（ml）200 200 1000

重铬酸钾1200g

蒸馏水2000ml

将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌

（三）载玻片与盖玻片的处理

1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时

2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍

3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用

注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、准备工作（二）常用液体的配制

（一）缓冲溶液：

1．磷酸盐缓冲液

A液：0.1mol/L磷酸二氢钠

B液：0.1mol/L磷酸氢二钠

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）

2．枸椽酸缓冲溶液

A液：0.1mol/L枸椽酸

B液：0.1mol/L枸椽酸钠

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）

（二）固定剂：

1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml

蒸馏水900ml

注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

石蜡切片制作流程表及相关注意事项

一、取财

1．样品要求：长宽1cm左右，厚度不超过5mm。

2．固定液：10％福尔马林固定液︰组织块=20︰1为宜。

3．固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如果24h或更长，应密封瓶口，封前换液。4．修理组织块：将切面修平。

5．每个组织块都应编号，并做好记录。

6．用纱布包好组织块，并包上小纸条，注明编号、组织块数量等信息。

注：（1）对于肺部组织，在取材后必须用玻璃注射器抽掉肺泡腔中的气体，否则会影响脱水，透明和浸蜡等效果。

抽气具体方法：

A．将组织块置入空玻璃注射器内，塞上推助器。

B．.向注射器内吸入约1/2的自来水，就会发现肺组织漂浮在水面。

C．排掉注射器内的空气。

D．将注射器倒置(头部向上)，用左手拇指赌上注射器头部,用右手用力拉推肋器。

E．反复C、D两步骤，直到肺组织沉到注射器底部即可。

（2）对于气管、支气管等含钙量较高的组织，必须有脱水前用5％和硝酸溶液软化，直到可用大头针扎透为止（一般需一天一夜）。

二、脱水过程

1．水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下洗水，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2．脱水

（1）75％2h

（2）80％酒精1h

（3）95％酒精Ⅰ 1 h

（4）95％酒精Ⅱ 1 h

（5）95％酒精Ⅲ过一夜

（6）100％酒精Ⅰ 1 h

（7）100％酒精Ⅱ 1 h

组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其从95％洒精（Ⅲ）进入100％酒精（Ⅰ）时，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分子进入。（其他注意项见下文）

快速石蜡切片操作规程

快速石蜡切片操作步骤：

1、接到标本后快速取材固定；

2、快速脱水、透明、浸蜡、包埋；

3、迅速切片、染色；

4、封片时不得有气泡，不得有树胶外溢；

5、标签必须贴于玻片左侧，编号字迹必须清楚；

6、制片后剩余组织应做常规石蜡包埋切片染色，进一步诊断。

快速石蜡切片相关要求：

1、制片工作一般应在10—20分钟内完成，诊断报告应在30分钟内出具。

2、为了尽量缩短制片时间，必须预先做好有关准备工作。

3、用于组织固定、脱水、透明的试剂和浸蜡用的石蜡应及时过滤、更换。

*注：丙酮、乙醇、二甲苯等为易燃物，进行上述各项流程时，2米距离内不得存在明火；加温脱水和浸蜡过程必须应用隔水温箱，不得使用干烤箱操作。

在六月期间我们学习了石蜡切片的制作，以下是制作的过程：

一、切片前的准备：

1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。

2、蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上，全部切除；否则切片容易皱褶。组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平；石蜡不须留得过多，应尽量少留，以保持组织间距的最小限度。这样切下的切片既呈带状，也不弯曲。片距小，在贴片时就可相应多贴片，有利于检查诊断。修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，要是大片修切易使蜡块断裂露出组织；遇此情况应返入新蜡再次包埋。

3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象，应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗，再烤干备用。根据切片需要张数，每片涂上一层极薄的蛋白甘油，插于载片板（或载片架）上备用。

蛋白甘油的配制：取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。此法主要是防止脱片，实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。

4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。

5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。

二、切片的步骤：

1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。

2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。

3、根据需要调整切片厚度。

4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。