胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒使用说明
- 格式:pdf
- 大小:89.40 KB
- 文档页数:3
胃蛋白酶(pepsin )是脊椎动物胃液中最主要的蛋白酶。
一、性质
1、药用胃蛋白酶为粗酶制剂,外观为淡黄色粉末,有肉类特殊气味及微酸味,易溶于水,吸湿性强,水溶液呈酸性。
难溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂中。
2、胃蛋白酶结晶呈针状或板状,经电泳可分出四个组分。
其组成元素除N、C、H、O、S外还有P、Cl。
分子量为34500,等电点为1.0,最适PH1.8左右。
3、结晶胃蛋白酶溶于70%乙醇和PH4.0的20%乙醇中,但在PH1.8-2.0时则不溶解。
在冷的磺基水杨酸中不沉淀,加热后可产生沉淀。
4、干燥胃蛋白酶较稳定,100℃加热10mim无明显失活。
在水中,于70℃以上或PH6.2以上开始失活,PH8.0以上则呈不可逆性失活。
在酸性溶液中较稳定,但在2mol/L以上的盐酸中也会慢慢失活。
5、胃蛋白酶对多数天然蛋白质底物都能水解,对肽键的专一性相当广,尤其容易水解芳香族氨基酸残基或具有大侧链的疏水性氨基酸残基形成的肽键,对羧基末端或氨基末端的肽键也容易水解。
胃蛋白酶对蛋白质的水解不彻底,其产物有胨、肽和氨基酸。
6、胃蛋白酶的最适温度为37~40℃。
生产上用作催化剂时常选用45℃,我国药典规定在37±0.1℃测定其活力。
二、质量标准 CP2005 活力:10000-15000u/g
按CP2010方法检测,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶的活力单位。
胃蛋白酶原Ι/II校准品适用范围:本产品与本公司胃蛋白酶原I测定试剂盒和胃蛋白酶原II测定试剂盒配套使用,用于临床检验实验室胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II项目定量检测的系统校准。
1.1规格2mL×6(6个浓度)1.2主要组成成分本产品由以0.02mol/L,pH7.0的PBS缓冲液为基质,并添加了胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II。
校准品定值范围:胃蛋白酶原I:浓度①:0ng/mL;浓度②:10ng/mL~30ng/mL;浓度③:40ng/mL~100ng/mL;浓度④:110ng/mL~160ng/mL;浓度⑤:170ng/mL~220ng/mL;浓度⑥:230ng/mL~300ng/mL。
(每批定值,详见值单)胃蛋白酶原II:浓度①:0ng/mL;浓度②:2ng/mL~10ng/mL;浓度③:10ng/mL~25ng/mL;浓度④:25ng/mL~40ng/mL;浓度⑤:55ng/mL~75ng/mL;浓度⑥:80ng/mL~150ng/mL。
(每批定值,详见值单)2.1外观本校准品应为无色或浅黄色溶液,无混浊,无未溶解物。
2.2准确度中生试剂(中生校准品定标)和已上市同类试剂(已上市同类试剂校准品定标),分别测定40个在测定范围内不同浓度的样本,计算两组数据的相关系数(r)及测值的偏差,要求r≥0.975;PGΙ样本:在(30.0,250.0]ng/mL范围内,相对偏差应不超过±15%;在[2.5,30.0]ng/mL范围内,绝对偏差应不超过±4.5ng/mL。
PGII样本:在(15.0,100.0]ng/mL范围内,相对偏差应不超过±15%;在[2.0,15.0]ng/mL范围内,绝对偏差应不超过±2.25ng/mL。
2.3重复性重复测定各浓度校准品(除0浓度点)结果的变异系数(CV)应≤5%。
2.4稳定性2.4.1效期稳定性原包装校准品在2℃~8℃条件下贮存,有效期为12个月。
胃蛋白酶原试剂盒说明书一、产品简介胃蛋白酶原试剂盒是一种用于检测胃蛋白酶原水平的试剂盒。
胃蛋白酶原是一种消化酶,在胃中起到分解蛋白质的重要作用。
该试剂盒通过测量样品中胃蛋白酶原的含量,可以帮助医生评估胃黏膜功能和炎症程度,辅助诊断和监测相关疾病。
二、试剂盒组成本试剂盒包含以下组分: 1. 胃蛋白酶原检测试剂:用于检测样品中的胃蛋白酶原。
2. 样品稀释液:用于稀释样品,以确保浓度在检测范围之内。
3. 阳性对照液:含有已知浓度的胃蛋白酶原,用于验证试剂盒的准确性。
4. 阴性对照液:不含胃蛋白酶原,用于验证试剂盒的特异性。
三、使用方法1. 样品准备•收集患者的胃液样品,并将其转移至干净的离心管中。
•如样品浑浊或含有颗粒物,可先进行离心分离。
•如样品量不足,可使用样品稀释液进行适当稀释。
2. 试剂配置•打开胃蛋白酶原检测试剂瓶盖,取出所需量的试剂。
•按照试剂瓶上标示的比例,将试剂与样品混合均匀。
3. 反应孵育•将混合好的样品和试剂放置于恒温水浴中孵育一定时间。
•孵育时间和温度应根据试剂盒说明书中的要求进行设定。
4. 测量结果•在设定的反应时间后,取出孵育好的样品。
•使用本试剂盒所提供的分析仪器或读板器,按照仪器操作说明进行测量。
•记录测量结果,并根据说明书中提供的参考范围判断胃蛋白酶原水平是否正常。
四、注意事项1.本试剂盒仅供专业医务人员使用,请遵循相关操作规范。
2.所有试剂和样品均需避免直接接触皮肤和黏膜,如不慎接触,请立即用大量清水冲洗。
3.试剂盒的保存温度应符合说明书中的要求,避免高温或低温存放。
4.使用过程中,请勿混用不同批次的试剂盒,以免影响检测结果的准确性。
5.未使用完的试剂盒应密封保存,避免受到污染或湿气。
五、质量控制1.每次进行检测时,应同时使用阳性对照液和阴性对照液进行质量控制。
2.根据说明书中提供的质量控制范围,判断检测结果是否符合要求。
3.若阳性对照液和阴性对照液的检测结果超出质量控制范围,则表示本次检测结果可能不准确,需重新进行检测。
胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)二合一测定试剂盒(荧光免疫层析法)
1.性能指标
2.1 外观
2.1.1试剂盒外观应整洁,文字符号标识清晰,封装无破损,内容物齐全。
2.1.2检测卡的外观应符合下列要求:外观平整、色泽均匀、边缘无毛刺,不能有色斑或污渍。
2.2物理检测
试纸条宽度均为4.0±0.5mm。
2.3液体移行速度
应不小于10.0mm/min。
2.4 空白限
PGⅠ空白限应不高于2ng/mL;
PGⅡ空白限应不高于2ng/mL。
2.5准确度
在试剂盒线性区间内,检测两个不同浓度的工作校准品,测定值与标示值的相对偏差应不超过±15%。
2.6线性
PGⅠ:在线性范围(2~150)ng/mL内,试剂盒的线性相关系数r≥0.990,在(2~10)ng/mL区间内测定的线性绝对偏差不超过±1ng/mL,在(10~150)ng/mL区间内测定的线性相对偏差应不超过±15%。
PGⅡ:在线性范围(2~80)ng/mL内,试剂盒的线性相关系数r≥0.990,在(2~10)ng/mL区间内测定的线性绝对偏差不超过±1 ng/mL,在(10~80)ng/mL区间内测定的线性相对偏差应不超过±15%。
2.7 重复性
用同一批号试剂盒测定两个不同浓度的内部参考品,要求变异系数CV≤15%。
2.8批间差
使用3个不同批号的试剂盒测定高、低两个浓度的参考品,要求批间变异系数CV≤15%。
人胃蛋白酶原A(PG—A)ELISA试剂盒使用步骤本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人胃蛋白酶原A(PGA)ELISA检测试剂盒检测原理试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被人胃蛋白酶原A(PGA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。
用底物TMB显色,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人胃蛋白酶原A(PGA)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保管方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避开任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞快速小心地分别。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保管:假如样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于20℃,避开反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保管在28℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中,密封(低温干燥)保管。
预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL 0.3mL 无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无停止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无注:标准品浓度依次为:160、80、40、20、10、0ng/mL.试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
Perfemiker9001-75-6胃蛋白酶Pepsin,产品说明书英文名称:Pepsin A英文别名:pepsin;IMMOBILIZED PEPSIN;e.c.3.4.1;elixerlactateofpepsin;lactat edpepsin;lactatedpepsinelixir;pepsinfortior;PEPSIN 1:10000 NF PO WDER;Pepsin from Porcine Stomach;PEPSIN 1:10000 NF, BP, US P;Pepsin 1:10000, from Porcine Stomach Mucosa;Pepsin 1:10,000; pepsin。
;1:3000;BR,1:10000;Pepsase;Pepsin, for biocheMistry, powder;Pepsin, powder, for biochemistry;PotassiuM ethyl xanthoge nate;Pepsini pulvis;Pepsin A;Pepsin(porcine stomach mucose)CAS号:9001-75-6详细描述创赛优选商城提供的[Sigma-Aldrich]Pepsin为创赛科技出品的其它生化试剂,产品稳定,定制速度快,极大地方便了广大科研客户的使用需求。
产品包装为1KG,安全运输。
属性:生物来源:Porcine gastric mucosa形式:powderspecific activity:≥250 units/mg solid分子量:35 kDaapplication(s):diagnostic assay manufacturing运输:wet ice储存温度:2-8°C应用:来自Sigma的该酶已用于模拟煮熟的鳕鱼的体外胃消化。
来自Sigm a的该酶已用于模拟可可块和补充膳食纤维的体外胃消化。
胃蛋白酶拼音名:Weidanbaimei英文名:Pepsin书页号:2005年版二部-389本品系自猪、羊或牛的胃黏膜中提取制得的胃蛋白酶。
每1g中含蛋白酶活力不得少于3800 单位。
【性状】本品为白色至淡黄色的粉末;无霉败臭;有引湿性;水溶液显酸性反应。
【鉴别】取本品的水溶液,加鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液,即生成沉淀。
【检查】干燥失重取本品,在100 ℃干燥4 小时,减失重量不得过5.0 %(附录ⅧL)。
【效价测定】对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液〔取1mol/L 盐酸溶液65ml,加水至1000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。
供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,用上述盐酸溶液制成每1ml 中约含0.2 ~0.4单位的溶液。
测定法取试管6 支,其中3 支各精密加入对照品溶液1ml ,另3 支各精密加入供试品溶液1ml ,置37℃±0.5℃水浴中,保温5 分钟,精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml ,摇匀,并准确计时,在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟。
立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml ,摇匀,滤过,取续滤液备用。
另取试管2 支,各精密加入血红蛋白试液5ml ,置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟,再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml ,其中1支加供试品溶液1ml ,另1 支加上述盐酸溶液1ml ,摇匀,滤过,取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA),在275nm 的波长处测定吸光度,算出平均值AS和A,按下式计算。
在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol 酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。
【类别】助消化药。
【贮藏】密封,在干燥处保存。
【制剂】(1)胃蛋白酶片(2)胃蛋白酶颗粒(3)含糖胃蛋白酶。
BCL-2ISH Detection KitBCL-2原位杂交检测试剂盒使用说明书产品编号:MK1050保存:置4℃。
工作量:100张切片。
有效期:一年。
BCL-2是主要的抗凋亡基因。
本试剂盒采用针对人、大鼠、小鼠的BCL-2特异性的寡核苷酸探针,经地高辛标记。
由于采用多相寡核苷酸探针和高敏感标记技术,并配合使用敏感性加强型的原位检测方法,具有敏感性特别高,背景清晰,结果准确可靠的优点。
可以检测出常规福尔马林固定,石蜡包埋标本的BCL-2mRNA序列。
针对大鼠、小鼠BCL-2靶基因的mRNA序列为:(1)5’——GATGA AGTAC ATCCA TTATA AGCTG TCACA——3’;(2)5’——GCGCT CAGCC CTGTG CCACC TGTGG TCCAC——3’;(3)5’——GGGAG ATGTC ACCCC TGGTG GACAA CATCG——3’;大鼠、小鼠和人的序列仅3bp/90bp不同。
兔和人序列基本相同。
适用种属:人、大鼠、兔、小鼠组织。
试剂盒中内容1.胃蛋白酶(×10;Pepsin)2ml;2.预杂交液2ml;3.B cl-2寡核苷酸探针杂交液2ml;4.封闭液5ml;5.生物素化鼠抗地高辛5ml;6.SABC-POD5ml;7.生物素化过氧化物酶5ml。
`用户自备试剂:原位杂交专用盖玻片(博士德有售);POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用PBS)一.培养细胞和冰冻切片准备工作:固定液:4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7·H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3·2H2O,分子量294)8.8g。
配制胃蛋白酶合剂注意事项胃蛋白酶合剂是一种含有胃蛋白酶的口服制剂,用于促进胰脏分泌消化酶的合成和分泌,增加胃肠蠕动,促进消化和吸收,提高食物的消化效率。
以下是使用胃蛋白酶合剂时需要注意的事项:1. 使用前请咨询医生:在使用胃蛋白酶合剂之前,最好先咨询医生,了解你的具体情况和用药需要,并遵循医生的建议。
2. 注意剂量和用法:按照医生的指示使用药物,并遵循药物的说明书。
不要自行增加或减少剂量,也不要改变用药的频率和时间。
如果有任何问题或不适,及时向医生报告。
3. 避免过敏风险:一些人可能对胃蛋白酶合剂中的成分过敏,因此在使用之前应仔细阅读药品的说明书,并注意是否有过敏反应的警告。
4. 妊娠和哺乳期妇女:孕妇、哺乳期妇女以及计划怀孕的女性在使用胃蛋白酶合剂之前应咨询医生,了解有关安全性和潜在风险的信息。
5. 注意与其他药物的相互作用:在使用胃蛋白酶合剂之前,告诉医生或药师你正在使用的其他药物,包括处方药、非处方药和补充剂。
可能会存在一些药物相互作用,导致药物效果的改变。
6. 存储条件:请按照药品说明书上的存储条件储存胃蛋白酶合剂,通常要放置在干燥、避光和低温的地方。
7. 注意不良反应:使用胃蛋白酶合剂可能引起一些不良反应,如过敏反应、胃肠道不适、头痛、腹胀等。
如果出现严重的不适或持续不适,请及时告诉医生。
8. 身体状况变化:如果你的症状没有改善或恶化,或者出现新的症状,请及时向医生报告。
9. 严禁超量使用:不要超过医生建议的剂量和用药时间。
过量使用胃蛋白酶合剂可能导致胃肠道反应的加重。
10. 合理饮食和生活习惯:胃蛋白酶合剂是辅助消化的药物,但并不能替代健康的饮食和生活习惯。
合理的饮食结构、均衡的营养和良好的消化习惯都对消化系统的健康至关重要。
总之,合理使用胃蛋白酶合剂可以帮助提高消化效率和促进消化吸收,但在使用之前请咨询医生、严格遵循剂量和用法、注意可能的不良反应和相互作用,并配合良好的饮食和生活习惯,以获得最佳的效果。
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的免疫学实验方法,用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势,被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南,包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书:在使用试剂盒前,仔细阅读说明书,了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备:根据实验要求,准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平,可以采集血液样本,离心分离血清;如果需要检测细胞培养上清中的分子,将上清收集,并使其清晰,避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理:根据实验需求,对样本进行必要的预处理。
例如,可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本,以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品:制备阳性和阴性控制样品,用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备:准备所需实验器材,如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整,并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备:根据说明书要求,将试剂从冰箱中取出,并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭,并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作:按照说明书的要求,将试剂加入到酶标板中,并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量,并计算出浓度。
3.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤:使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液:在洗涤完成后,加入辣根过氧化物酶标况稀释液,促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止:根据试剂盒的要求,加入相应的停止液,停止酶反应。
胃蛋白酶
【用法用量】口服;一次10mg,一日3次,饭时或饭前服;儿童:2岁以上一次2.5-5ml,2岁以上一次5-l0ml,一日3次。
【注意事项】1.不宜与抗酸药同服,在碱性环境中其活性降低。
2.本品的药理作用与硫糖铝相拮抗,两者不宜合用。
3.本品遇热不稳定,在70℃以上将失效。
【不良反应】未见。
【禁忌】对本药过敏者禁用。
【适应症】常用于因食蛋白性食物过多所致消化不良、病后恢复期消化功能减退以及慢性萎缩性胃炎、胃癌、恶性贫血所致的胃蛋白酶缺乏。
【药物相互作用】1.不宜与抗酸药同服,在碱性环境中其活性降低。
2.本品的药理作用与硫糖铝相拮抗,两者不宜合用。
【药理毒理】本品水解蛋白能力强,使凝固的蛋白质分解成蛋白示和蛋白胨,亦能水解多肽。
体内胃蛋白酶原须经盐酸激活,形成胃蛋白酶才能生效。
【国家/地区】国产
【剂型】原料药
【药代动力学】未进行该项实验且无可靠参考文献。
【成份】胃蛋白酶。
说明:以上信息仅供参考,具体请以商品说明书为准。
胃蛋白原酶1标准全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:胃蛋白酶1(Pepsinogen 1,PG1)是一种胃蛋白酶的前体酶,在胃内的主要功能是被转化为成熟的胃蛋白酶1(胃蛋白酶,Pepsin)用于蛋白质的消化。
PG1的水平可以反映胃黏膜细胞的功能状态,对于诊断胃癌、慢性胃炎等胃部疾病有重要的临床意义。
对PG1进行检测,可以帮助医生及时了解患者的胃部状况,做出正确的治疗方案。
为了确保PG1检测结果的准确性和可比性,需要建立一套PG1的标准。
这里所说的PG1标准,是指在进行PG1检测时的参考值范围、标准操作流程、质控要求等一系列规定和方法,以确保不同实验室在进行PG1检测时能够取得一致的结果。
在建立PG1标准时,首先需要确定PG1的正常范围。
一般来说,PG1的水平受到多种因素的影响,包括年龄、性别、患病情况等。
在建立PG1标准时需要考虑这些因素,并根据最新的临床研究结果确定正常参考值范围。
需要确立PG1检测的标准操作流程。
这包括采集样本的方法、实验室仪器设备的选择和校准、实验操作步骤的规范等。
只有在标准操作流程下进行PG1检测,才能得到准确可靠的结果。
建立PG1标准还需要制定质控要求。
质控是保证实验室检测结果准确性和可靠性的重要环节,包括内部质控和外部质控。
内部质控是指实验室在日常操作中对PG1检测过程的质量控制,包括标准品的使用、样本处理的规范等;外部质控是指通过参加质控组织组织的质控方案,检测实验室的PG1检测结果与其他实验室结果的一致性。
建立PG1标准的过程是一个持续不断的过程,需要密切关注最新的临床研究成果和技术进展,及时更新标准操作流程和质控要求,以确保PG1检测的准确性和可比性。
只有建立了科学合理的PG1标准,并且严格按照标准操作流程进行PG1检测,才能在临床实践中为患者的诊断和治疗提供可靠的依据。
胃蛋白酶1标准的制定对于PG1检测的准确性、可靠性和可比性具有重要意义,可以帮助医生更好地了解患者的胃部状况,为患者的治疗提供科学依据。
胃蛋白酶原试剂盒说明书1. 产品介绍胃蛋白酶原试剂盒是一种用于检测胃蛋白酶原水平的试剂盒。
胃蛋白酶原是一种在胃部产生的酶原,经过转化成活性胃蛋白酶,在消化过程中起到重要作用。
本试剂盒可以通过测量样品中的胃蛋白酶原水平,提供对胃功能的评估。
2. 试剂盒组成•胃蛋白酶原检测试剂:用于检测样品中的胃蛋白酶原水平。
•标准品:已知浓度的标准品,用于校准仪器和验证试剂盒性能。
•试剂盒说明书:详细介绍了试剂盒的使用方法、注意事项和解读结果的步骤。
3. 使用方法3.1 样品处理•收集待测样品(血清或血浆)并离心去除悬浮物。
•将样品转移到干净的离心管中,并保持冷藏状态,避免冻结。
•如有需要,可以根据实验要求进行稀释。
3.2 校准仪器•取出标准品,并按照说明书中的浓度要求进行适当稀释。
•使用校准仪器,根据仪器厂家提供的操作指南进行校准。
3.3 准备试剂•将胃蛋白酶原检测试剂从冷藏中取出,并在室温下静置15分钟。
•轻轻摇动试剂瓶,确保试剂均匀混合。
3.4 检测步骤1.取出足够数量的微孔板,标记样品编号和对应的标准品编号。
2.加入待测样品、标准品和质控品至相应孔位中。
3.加入适量的胃蛋白酶原检测试剂至每个孔位中,并轻轻摇动混匀。
4.封闭微孔板,放置于恒温箱中,在37°C下孵育30分钟。
5.在孵育结束后,将微孔板取出并倒置于吸水纸上,轻轻拍干底部残留液体。
6.使用洗涤缓冲液洗涤每个孔位,重复3次,并用吸水纸吸干底部液体。
7.加入底物溶液至每个孔位中,轻轻摇动混匀。
8.放置于恒温箱中,在37°C下孵育15分钟。
9.加入停止液至每个孔位中,停止反应。
10.使用酶标仪测量各孔位的吸光度值。
4. 结果解读根据酶标仪测量得到的吸光度值,可以通过标准曲线计算出样品中的胃蛋白酶原浓度。
根据浓度的高低,可以评估胃功能的状态。
5. 注意事项•本试剂盒仅供科研使用,不能用于临床诊断。
•试剂盒应保存在2-8°C的冷藏条件下,避免阳光直射和高温。
胃蛋白酶试剂指标
(最新版)
目录
1.胃蛋白酶试剂的定义和作用
2.胃蛋白酶试剂的指标及其意义
3.胃蛋白酶试剂的应用场景
4.胃蛋白酶试剂的注意事项
正文
胃蛋白酶试剂是一种用于检测胃液中胃蛋白酶活性的生化试剂。
胃蛋白酶是胃液中的一种重要酶类,对蛋白质具有消化作用。
通过测量胃液中胃蛋白酶的活性,可以评估胃液的分泌功能和胃部疾病的病情。
胃蛋白酶试剂的指标主要是胃蛋白酶活性单位(U/ml),这个指标反映了胃液中胃蛋白酶的浓度。
正常情况下,胃液中胃蛋白酶活性应该在20-100 U/ml之间。
如果胃液中胃蛋白酶活性过低,可能是因为胃酸分泌不足,如萎缩性胃炎、胃窦炎等疾病;如果胃液中胃蛋白酶活性过高,可能是因为胃酸分泌过多,如胃溃疡、十二指肠溃疡等疾病。
胃蛋白酶试剂广泛应用于临床检验和科研工作中。
在临床检验中,胃蛋白酶试剂主要用于检测胃液中胃蛋白酶活性,辅助诊断胃部疾病;在科研工作中,胃蛋白酶试剂主要用于研究胃液的消化功能和胃部疾病的发病机制。
第1页共1页。
胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)是胃分泌的一种消化酶前体,是胃液中胃蛋白酶的无活性前体,为一由375个氨基酸组成的蛋白多肽链,平均相对分子质量为42,000,人胃粘膜中有7组胃蛋白同工酶原。
PG在核糖体上合成,由高尔基体分泌出细胞,被盐酸激活后变成胃蛋白酶。
根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布可分成PGⅠ、PGⅡ两个亚群,1~5组分免疫原性近似,称为PGⅠ(PGA),主要由胃腺的主细胞的粘液颈细胞分泌。
利用化学发光分析法得出结果。
【产品名称】胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)定量检测试剂盒(化学发光法)PepsinogenⅠ/Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)Chemiluminescent Quantitative Immunoassay Kit【包装规格】48人份/盒、96人份/盒【检验方法】实验前准备:1.将试剂盒从冷藏环境中取出,放置室温(18℃~25℃)平衡至少30分钟。
2.将恒温箱或水浴锅调到37℃,待温度稳定后使用。
3.取1包固体洗液用500ml纯化水溶解后备用。
【检测步骤】1.取出一定量的包被孔,每孔分别加入20μl校准品或血清样品。
2.每孔分别加入酶结合物50μl。
3.在微型振荡器上振荡30秒使孔内液体混合均匀,置37℃温育60分钟。
4.洗板5次(推荐使用洗板机),最后在吸水纸上拍干。
5.每孔分别加入发光底物A和B各50μl,室温(18℃~25℃)避光反应5分钟。
6.化学发光检测仪检测发光强度。
【结果计算】选择适当的曲线拟合方式,本试剂盒推荐使用线性回归拟和方程建立标准曲线,但也可根据不同情况采用其他拟和方式。
以系列校准品浓度的对数值为横坐标(X轴),以系列校准品发光强度值的对数值为纵坐标(Y轴)建立标准曲线(log-log),进行计算。
【参考值(参考范围)】用本试剂盒测定1000份正常人空腹血清样本,得到正常人空腹状态参考范围为大于65μg/l。
与PGⅡ联合检测,正常人样本PGⅠ与PGⅡ比值的参考值大于7.5。
胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒说明书胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒说明书微量法100T/48S注意:正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。
一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
测定原理:胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
自备仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。
临用前加入10mL试剂二充分溶解。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加入15mL蒸馏水充分溶解。
试剂六:液体3.3mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1.27mL×1支,0.5μmol/mL酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。
粗酶液提取:组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
测定步骤:1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到580 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。
3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μL标准品,40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580 nm测光吸收,记为A标准管。
4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μL蒸馏水,40μL试剂二,120μL试剂五,20μL试剂六,混匀后室温静置20min,于 580 nm测光吸收,记为A标准空白管。
胃蛋白酶稀释的方法
胃蛋白酶的稀释方法可以通过以下步骤进行:
1. 准备稀释液:选择合适的缓冲液(如Tris缓冲液)和辅助成分(如酒精或甘油),按照所需的稀释倍数计算浓度。
2. 将一定量的胃蛋白酶加入稀释液中,注意使用合适的量级。
3. 充分混合溶液,可以使用梗棒或轻轻摇晃容器来达到均匀混合。
4. 根据需要,可以进行进一步的稀释,重复步骤2和步骤3,直到达到所需的最终浓度。
需要注意的是,具体的稀释倍数和浓度根据实验需求和样品特性来确定,可以根据实验室常规操作和文献参考进行调整。
在每一步操作中,保持实验环境的洁净和卫生,以避免污染和误差的产生。
胃蛋白酶(Pepsin)试剂盒使用说明
分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2320
规格:50/24S
产品内容:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。
临用前加入25mL试剂二充分溶解。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加入25mL蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加入30mL蒸馏水充分溶解。
试剂六:液体×1瓶,4℃保存。
标准品:液体×1支,0.5μmol/mL酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。
产品说明:
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。
一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
自备仪器和用品:
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
二、测定步骤:
1.分光光度计预热30min,调节波长到580nm,蒸馏水调零。
2.试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。
3.标准管:取EP管,加入100μL标准品,200μL试剂二,600μL试剂五,100
μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580nm测光吸收,记为A标准管。
4.空白管:取EP管,加入100μL蒸馏水,200μL试剂二,600μL试剂五,100
μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580nm测光吸收,记为A空白管。
5.对照管:取EP管,加入500μL试剂三,置于37℃水浴保温10min;加入500
μL试剂四,盖紧后摇匀1min;加入100μL粗酶液,混匀后8000g4℃离心10分钟;
取上清液100μL,加入新EP管,再加入200μL试剂二,600μL试剂五,100μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580nm测光吸收,记为A对照管。
6.测定管:取EP管,加入100μL粗酶液,500μL试剂三,置于37℃水浴保温
10min;加入500μL试剂四,盖紧后摇匀1min;8000g4℃离心10分钟;取上清液100μL,加入新EP管,再加入200μL试剂二,600μL试剂五,100μL试剂六,混匀后室温静置20min,于580nm测光吸收,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。
三、计算公式:
1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管
-A空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T=5500×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A 空白管)÷Cpr
C标准品:标准品浓度,0.5μmol/mL酪氨酸;稀释倍数:(100+500+500)÷100=11;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),100μL=0.1mL;T:催化反应时间(min),10min。
2)按照样本质量计算
活性单位定义:37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/g)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T=5500×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准品:标准品浓度,0.5μmol/mL酪氨酸;稀释倍数:(100+500+500)÷100=11;W:组织质量(g);V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),100μL=0.1mL;V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。
注意事项:
试剂三、试剂四、试剂五临用前配制,配制好用不完的试剂4℃可保存一周。