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乌骨藤多糖脱蛋白工艺的研究孙晨辰;沃原青;张慧【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2013(3)23【摘要】Objective To optimize deproteinization technology of polysaccharides from Caulis Marsdeniae Tenacissimae. Methods With retention rate of polysaccharide and deproteinization rate as comprehensive evaluation index to investigate deproteinized effect of Enzyme-Sevage. Results Polysaccharide retention rate of Enzyme-Sevage is 75.09%, deproteinization rate is 89.83%. Conclusion The Enzyme-Sevage method is the workable method of the polysaccharides extraction from Caulis Marsdeniae Tenacissimae.%目的：优选乌骨藤多糖脱蛋白工艺。
方法以蛋白脱除率和多糖保留率为评价指标，考察酶-Sevage法对乌骨藤多糖脱蛋白的效果。
结果酶-Sevage法的蛋白脱除率分别为75.09%，多糖保留率分别为89.83%。
结论酶-Sevage法脱蛋白的方法可行。
【总页数】3页(P55-56,61)【作者】孙晨辰;沃原青;张慧【作者单位】辽宁中医药大学，辽宁大连 116600;东宇生物制品有限公司，辽宁沈阳 110015;辽宁中医药大学，辽宁大连 116600【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.乌骨藤多糖抗肿瘤作用的实验研究 [J], 樊丹怡;常宏;蒋绍艳;邓少洁;何珊2.正交试验法优选乌骨藤的提取工艺研究 [J], 张腾;张爱华;戴根来3.乌骨藤多糖的提取及含量测定 [J], 聂丽华;沈婷;余波;刘金旗4.贵州野生甜藤多糖的提取与脱蛋白方法研究 [J], 常飞;王绍云;陈飞5.响应面法优化乌骨藤通光藤苷G提取工艺 [J], 王泽锋;石玲;张薇;许春;张丽;闵勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
正交试验法优选乌骨藤的提取工艺研究张腾，张爱华，戴根来(合肥久诺医药科技有限公司，安徽合肥230088)摘要：目的优选乌骨藤的提取工艺。
方法采用正交试验，对加水量、提取时间、提取次数进行考察，以乌骨藤中绿原酸含量作为评价指标，优化乌骨藤的最佳提取工艺。
结果通过正交试验考察，乌骨藤提取的最佳工艺为：加8倍量水提取3次，每次提取1h。
结论优选的乌骨藤提取工艺重现性良好，稳定可行。
关键词：乌骨藤；绿原酸；正交设计；高效液相色谱法Orthogonal test method to optimize the extractionprocess of Caulis marsdeniae tenacissimaeZHANG Teng，ZHANG Ai-hua，DAI Geng-lai（Hefei Jiunuo Medical Technology Co．，Ltd．Hefei，Anhui230088，China）Abstract：Objective To optimize the extraction process of Caulis marsdeniae tenacissimae．Methods The quantity of water，the times and the extraction time，the optimum extraction were investigated on basis of chlorogenic acid content as evaluation index by orthogonal design．Results With orthogonal design，the best decocting condition was presented as follows：adding8-fold of water，extracting for1 hour and for3times in all．Conclusion This method is stable and reliable．Key words：caulis marsdeniae tenacissimae；chlorogenic acid；orthogonal design；HPLC乌骨藤又名通关藤Marsdenia tenacissima（Roxb）Wight et Arn，是萝藦科（Asclepiadaceae）牛奶菜属（Marsdenia R．Br．）植物，始载于《滇南本草》。
脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究刘小琴，陈 涛，巩仔鹏*，唐金毅（三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002）摘要：目的 优化珠子参粗多糖的纯化工艺。
方法 主要对珠子参多糖提取中脱蛋白和脱色方法进行优化，从而得到最佳纯化工艺。
结果 在30 ℃加入链酶蛋白酶和三氯乙酸于冰箱放置过夜，再采用Sevage 法共同除蛋白的方法效果最好；脱色则在30 ℃用7.5%~8%H 2O 2溶液最好。
结论 本方法用于脱色及去除珠子参粗多糖中蛋白质成分切实可行，可作为纯化珠子参粗多糖的纯化手段之一。
关键词：珠子参粗多糖；脱蛋白；纯化中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)05-0050-04Studies on the Puri fi cation Technology of Rhizoma Panzcis Majoris Polysaccharide by Deproteinization and Decolorization MethodsLIU Xiao-qin, CHEN Tao, GONG Zi-peng, TANG Jin-yi( Medical College, Three Gorges University, Yichang 443002, China )Abstract: Objective To optimize the purification technology of Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide. Methods The main purpose is to optimize the way of deproteinization and decolorization.Chiefly, we compares two methods which are Sevage and TCA, in order to find out the best way to optimize removing proteins. Secondly, we control one variable to get the best usage amount. Then, in order to fi nd the best technology of decolorization we compare three decolored approachs as follows resin, hydrogen peroxide and absorbite. Conclusion Using Sevage and TCA together with pronase to remove proteins and using 7.5%~8% hydrogen peroxide to decolor is the best way to optimize puri fi cation technology of Rhizoma Panzcis Majoris polysaccharide. Results The method can be used effectively to decolor and remove proteins from Rhizoma Panacis Majoris crude polysaccharide as well as an effective puri fi cation method.Key words: Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide; deproteinization; puri fi cation收稿日期：2008-12-31基金项目：湖北省自然科学基金资助项目，（NO. 2006ABA200）作者简介：刘小琴（1956-）女，副教授，主要从事天然产物的研究。
乌骨藤多糖脱蛋白工艺的研究作者：孙晨辰沃原青张慧来源：《中国医药科学》2013年第23期[摘要] 目的优选乌骨藤多糖脱蛋白工艺。
方法以蛋白脱除率和多糖保留率为评价指标，考察酶-Sevage法对乌骨藤多糖脱蛋白的效果。
结果酶-Sevage法的蛋白脱除率分别为75.09%，多糖保留率分别为89.83%。
结论酶-Sevage法脱蛋白的方法可行。
[关键词] 乌骨藤；多糖；脱蛋白[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）23-55-03乌骨藤为萝藦科牛奶菜属植物通关藤Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wight et Arn.的干燥藤茎，主产于云南、贵州，始载于《滇南本草》[1]。
乌骨藤味苦，性微寒，具有清热解毒、止咳平喘、抗癌等功效，用于咽喉肿痛、肺热咳喘和疮痈癌肿，以乌骨藤制成的片剂和注射剂广泛用于治疗肝癌、胃癌、直肠癌等恶性肿瘤[2]，其抗肿瘤效果显著。
前期实验证实，乌骨藤多糖具有抗肿瘤活性[3]，但有关其多糖的研究报道较少。
为了对乌骨藤多糖的结构、空间螺旋构型及抗肿瘤活性进一步研究，本文对水提醇沉法制得多糖中含有的蛋白进行了分离，对其脱蛋白工艺进行了研究，选用酶-Sevage法脱蛋白，兼顾考虑蛋白脱除率和多糖保留率，优化乌骨藤粗多糖脱蛋白方法，有关乌骨藤多糖脱蛋白的研究尚未见文献报道。
1 材料乌骨藤购于安国杏林药材公司，经本校药学院中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wight et Arn.的藤茎，保存于辽宁中医药大学标本馆中。
紫外分光光度计（UV-1800型）；离心机（TDL-5-A）；电子天平（上海天平仪器厂）；pH计；牛血清白蛋白（北京奥博星生物技术责任有限公司130225）；考马斯亮蓝G-250（国药集团化学试剂有限公司）；木瓜蛋白酶（国药集团化学试剂有限公司，6×106U/g）；葡萄糖；重精馏苯酚、浓硫酸、三氯甲烷、正丁醇均为分析纯。
正交试验法优选首乌藤多糖酶法提取工艺
董晶晶;李晓坤;张寒娟;杨云
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2011(033)007
【摘要】目的优选并确立首乌藤多糖的最佳提取工艺.方法利用酶解法提取首乌藤多糖,采用正交试验法进行优选,以首乌藤多糖得率和多糖量为考察指标,对首乌藤多糖的酶法提取工艺的影响因素进行研究.结果确定首乌藤多糖的最佳提取工艺为pH 5.0,纤维素酶用量3％,酶解时间4.0 h,温度55℃的条件下酶解,酶解后进行水提的最佳条件为料液比1:10,提取温度100℃,提取时间2.0 h,多糖得率和多糖量可达6.27％和31.02％.结论酶解后进行水提可显著提高首乌藤多糖的提取率.
【总页数】3页(P1265-1267)
【作者】董晶晶;李晓坤;张寒娟;杨云
【作者单位】河南中医学院药学院，河南郑州450008
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.正交设计优选酶法提取甘草多糖的工艺研究 [J], 李彩君;张洁冬;赵健安;容穗华
2.正交试验法优选胡萝卜多糖的超声波辅助提取工艺研究 [J], 李利华
3.正交试验法优选浙江金线兰多糖提取工艺研究 [J], 江颖倩;彭梦超;吴岩斌;吴锦忠
4.正交试验法优选一种抗病毒方药中多糖类物质的最佳提取工艺 [J], 刘富菁;王思
琪;陶然;王娅玲;于慧心;王集会
5.正交试验法优选羊栖菜多糖酶法提取工艺 [J], 张华芳;金京顺;谈荣梅;沈澄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乌骨藤多糖抗肿瘤作用的实验研究目的：研究乌骨藤多糖的抗肿瘤活性及可能机制。
方法：腹腔注射给予S180荷瘤小鼠模型低（100mg/kg）、中（200mg/kg）、高（400mg/kg）剂量的乌骨藤多糖，考察其对荷瘤小鼠抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数、IL-2及TNF-α水平的影响。
结果：与模型组比较，各给药组均可显著抑制肿瘤生长（P＜0.01），同时，可以明显增加脾脏指数、胸腺指数、IL-2及TNF-α水平（P＜0.05或P＜0.01）。
结论：乌骨藤多糖具有一定的抗肿瘤作用，其作用机制可能与免疫调节作用有关。
标签：乌骨藤多糖；抗肿瘤；免疫功能恶性肿瘤的发病率和死亡率在许多地区和国家均高居首位，严重威胁人类健康和生命，而现有的放疗、化疗等治疗手段均不能令人满意，其中化疗药物具有耐药性、毒副作用大等缺点，严重影响临床效果[1]。
因此，寻找低毒、高效的抗肿瘤药物就显得极为迫切。
乌骨藤为萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima （Roxb.）Wightet Am.的藤茎，始载于《滇南本草》，主产于贵州、云南等地[2]。
乌骨藤复方制剂及其单味药材制成的片剂、注射剂等已经应用在直肠癌、胃癌、肺癌、食道癌等恶性肿瘤的治疗中，取得较好效果[3-4]。
但迄今为止，乌骨藤的抗肿瘤活性成分尚不明确，其研究主要集中在三萜类、甾体苷类等成分，关于乌骨藤多糖活性研究方面的报道较少[5]。
本研究拟通过提取、分离制得乌骨藤多糖，然后通过给予S180荷瘤小鼠乌骨藤多糖30 d后，探讨其是否具有抗肿瘤作用及可能的抗肿瘤机制，为研究和开发以乌骨藤多糖为主要成分的抗肿瘤药物奠定基础。
1 材料1.1 实验动物及瘤株昆明种小鼠，健康清洁级，雌雄各半，体重为（20±2）g，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司；S180肉瘤购自美国ATCC细胞库，并定期腹腔接种传代保存。
1.2 药品与试剂乌骨藤购自本地药材市场，经鉴定为萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima （Roxb.）Wightet Am.的藤茎；环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司提供；白细胞介素-2（IL-2）检测试剂盒和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）检测试剂盒购自南京建成生物。
香菇多糖树脂法脱蛋白质工艺研究
香菇多糖树脂法脱蛋白质工艺研究是指利用香菇多糖树脂来从蛋白质中脱去蛋白质的研究。
香菇多糖是一种天然多糖，主要由含糖量较高的葡萄糖和半乳糖等单糖组成。
它具有较高的水溶性、可溶性、热稳定性和抗腐蚀性，还能保护有机体免受外界环境的影响。
此外，香菇多糖具有良好的生物活性，可以抑制微生物的生长，并具有抗肿瘤作用。
香菇多糖树脂法脱蛋白质工艺指的是将蛋白质与香菇多糖树脂在恒温25℃下搅拌，利用香菇多糖树脂的吸附性质，使蛋白质与多糖结合，从而将蛋白质从溶液中分离出来的工艺。
该工艺可以有效地把蛋白质从溶液中分离提取出来，而不会造成蛋白质的失活或破坏。
香菇多糖树脂法脱蛋白质工艺研究主要包括以下几个部分：
1. 对香菇多糖树脂的研究。
香菇多糖树脂具有良好的抗腐蚀性和生物活性，可以有效抑制微生物的生长，因此，对香菇多糖树脂的研究非常重要。
2. 对蛋白质脱蛋白质技术的研究。
在香菇多糖树脂的基础上，研究蛋白质脱蛋白质的技术，以便更有效地从蛋白质中提取有用的物质。
3. 其他工艺研究。
除了以上两点，还应对其他工艺，如蛋白质液体流变学研究、蛋白质活性研究、蛋白质稳定性研究等进行研究，以便在实际操作中取得更好的效果。
总之，香菇多糖树脂法脱蛋白质工艺研究包括对香菇多糖树脂和蛋白质脱蛋白质技术的研究，以及其他工艺的研究，旨在通过这种方式有效地从蛋白质中提取有用的物质，提高蛋白质脱蛋白质的效率。
乌骨藤的化学成分研究张慧,裴志东＊,李春雪,康廷国＊(辽宁中医药大学药学院,辽宁大连116600)[摘要] 目的:研究乌骨藤的化学成分。
方法:利用硅胶柱色谱法、S e p h a d e x L H -20凝胶柱色谱法及半制备高效液相色谱法,对乌骨藤的70%乙醇提取物进行分离纯化,利用核磁共振谱、质谱、红外光谱等光谱数据鉴定结构。
结果:从乌骨藤中共分离鉴定了7个化合物,分别为β-谷甾醇(1),牛奶菜醇(2),二氢牛奶菜醇(3),白桦酯酸(4),羽扇豆醇(5),胡萝卜苷(6),11α-O -(2-甲基丁酰基)-12β-O -乙酰基通关藤苷元B (7)。
结论:化合物4,5为首次从该属植物中分离得到。
[关键词] 乌骨藤;分离;结构鉴定[稿件编号] 20100913009[基金项目] 中国博士后科学基金特别项目(200902550);辽宁省教育厅基金项目(2009T 006);大连市科技局青年基金项目(2009J 22D W 040)[通信作者] ＊康廷国,T e l :(0411)87586003,E -m a i l :s y y y c s 2000@s i n a .c o m ;＊裴志东,T e l :(0411)87586078,E -m a i l :p p z z d d @163.c o m[作者简介] 张慧,副教授,主要从事中药鉴定研究工作,E -m a i l :s y y y c s @163.c o m 中药乌骨藤为萝藦科牛奶菜属植物通关藤M a r s d e n i a e t e n o c i s s i m a e (R o x b )W i g h t e t A r n 的干燥藤茎,始载于《颠南本草》,具有消炎、清热解毒,散结止痛等功效,主产于云南、贵州和广西南部地区,现代药理临床证实本品具有调节免疫功能,抗肿瘤等作用,目前其单味药材制成的注射液作为治疗消化道癌的一线药物广泛应用于临床[1-2],是临床必用的抗肿瘤药物之一。
乌骨藤制剂诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡的实验研究
乌骨藤是一种中草药，近年来被证实具有抗肿瘤活性。
本研究旨在探讨乌骨藤制剂是否能诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡。
实验采用MTT法测量Bel-7402细胞的生长抑制情况，流式细胞仪法检测凋亡细胞数目，Western blot法检测相关蛋白表达量。
结果显示，与对照组相比，加入乌骨藤制剂后，Bel-7402细胞增殖明显受到抑制（P<0.05）。
流式细胞仪检测发现，乌骨藤制剂处理组中凋亡细胞数目显著增加（P<0.05）。
此外，Western blot结果进一步表明，乌骨藤制剂处理组中Bax、Caspase-3及PARP的表达量均明显上调（P<0.05），而Bcl-2的表达量明显下调（P<0.05），说明乌骨藤制剂诱导Bel-7402细胞凋亡的机制可能涉及Bcl-2/Bax通路。
综上，本研究结果表明，乌骨藤制剂可显著抑制Bel-7402细胞的生长并诱导其凋亡，且可能通过Bcl-2/Bax通路参与凋亡的流程。
以上实验结果为乌骨藤开发抗肿瘤药物提供了一定的理论和实验基础。
![一种首乌藤多糖的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/75a7e21904a1b0717ed5dd36.png)
专利名称：一种首乌藤多糖的制备方法专利类型：发明专利
发明人：杨云,冯卫生,张寒娟
申请号：CN201010159778.9
申请日：20100429
公开号：CN101824096A
公开日：
20100908
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及首乌藤多糖的制备方法，有效解决首乌藤多糖的制备问题，其方法是，将首乌藤干燥、粉碎，得首乌藤粉末，首乌藤粉末与碱溶液混合，然后水浴回流提取，过滤，合并滤液，调pH，浓缩，再加入乙醇，静置，离心去除上清液，得第一次多糖沉淀物，第一次多糖沉淀物加蒸馏水溶解，得多糖溶解液，上树脂柱，直到流出液在473nm处的吸收度与树脂柱上层溶液的吸收度相同，即大孔吸附树脂吸附达到饱和，用蒸馏水洗脱树脂柱至molish反应无紫色环时停止收集，将洗脱液浓缩，加入乙醇，静置，离心去除上清液，得第二次多糖沉淀物，再依次加入无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得首乌藤多糖；本发明工艺简单，多糖得率高，含量亦较高，提取的多糖有明显的抗氧化活性。
申请人：河南中医学院
地址：450008 河南省郑州市金水区金水路1号
国籍：CN
代理机构：郑州天阳专利事务所(普通合伙)
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乌骨藤多糖脱蛋白工艺的研究
目的优选乌骨藤多糖脱蛋白工艺。
方法以蛋白脱除率和多糖保留率为评价指标，考察酶-Sevage法对乌骨藤多糖脱蛋白的效果。
结果酶-Sevage法的蛋白脱除率分别为75.09%，多糖保留率分别为89.83%。
结论酶-Sevage法脱蛋白的方法可行。
标签：乌骨藤；多糖；脱蛋白
乌骨藤为萝藦科牛奶菜属植物通关藤Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wight et Arn.的干燥藤茎，主产于云南、贵州，始载于《滇南本草》[1]。
乌骨藤味苦，性微寒，具有清热解毒、止咳平喘、抗癌等功效，用于咽喉肿痛、肺热咳喘和疮痈癌肿，以乌骨藤制成的片剂和注射剂广泛用于治疗肝癌、胃癌、直肠癌等恶性肿瘤[2]，其抗肿瘤效果显著。
前期实验证实，乌骨藤多糖具有抗肿瘤活性[3]，但有关其多糖的研究报道较少。
为了对乌骨藤多糖的结构、空间螺旋构型及抗肿瘤活性进一步研究，本文对水提醇沉法制得多糖中含有的蛋白进行了分离，对其脱蛋白工艺进行了研究，选用酶-Sevage法脱蛋白，兼顾考虑蛋白脱除率和多糖保留率，优化乌骨藤粗多糖脱蛋白方法，有关乌骨藤多糖脱蛋白的研究尚未见文献报道。
1 材料
乌骨藤购于安国杏林药材公司，经本校药学院中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为萝藦科植物通关藤Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wight et Arn.的藤茎，保存于辽宁中医药大学标本馆中。
紫外分光光度计（UV-1800型）；离心机（TDL-5-A）；
电子天平（上海天平仪器厂）；pH计；牛血清白蛋白（北京奥博星生物技术责任有限公司130225）；考马斯亮蓝G-250（国药集团化学试剂有限公司）；木瓜蛋白酶（国药集团化学试剂有限公司，6×106U/g）；葡萄糖；重精馏苯酚、浓硫酸、三氯甲烷、正丁醇均为分析纯。
2 方法
2.1 乌骨藤多糖的提取[4]
取乌骨藤药材250g，加6倍量95%乙醇回流提取2次，每次1h，过滤，药渣挥干乙醇后加8倍量水100℃提取3次，每次2h，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至适当体积，加入95%乙醇使乙醇体积分数达到80%，静置过夜，抽滤，沉淀用有机溶剂洗涤，干燥得乌骨藤粗多糖。
2.2 乌骨藤多糖的含量测定[5]
2.2.1 葡萄糖标准溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10.12mg，置于100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得到葡萄糖标准溶液。
2.2.2 标准曲线的制备精密量取葡萄糖标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL置于10mL具塞试管中，加蒸馏水补足至2mL，分别加入5%苯酚液1.0mL，充分摇匀，再加入浓硫酸5.0mL，摇匀，置于40℃水浴中反应15min，冷却至室温，490nm处测吸光度（A），另取蒸馏水2mL按上述显色方法作为空白，以吸光度（A）为纵坐标，葡萄糖浓度（C）为横坐标，得回归方程：A=0.0608C-0.1281，r=0.9996。
2.2.3 样品中多糖的含量测定精密吸取样品溶液2.0mL，按“2.2.2”项下显色方法进行操作，分别测定吸光度，计算样品中多糖含量和多糖保留率，多糖保留率=脱蛋白后的多糖含量/脱蛋白前的多糖含量×100%。
2.3 乌骨藤多糖中蛋白质的含量测定[6]
2.3.1 蛋白质标准溶液的制备精密称取牛血清蛋白10.04mg，置于100mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得到蛋白质标准溶液。
2.3.2 标准曲线的制备精密吸取蛋白标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 置于10mL的具塞试管中，分别加入考马斯亮蓝染液5mL，加蒸馏水补足至6mL，摇匀，放置30min，另取蒸馏水1mL按上述方法做空白，595nm处测定吸光度（A），以吸光度（A）为纵坐标，牛血清蛋白浓度（C）为横坐标，得回归方程：A=0.0347C+0.02，r=0.9992。
2.3.3 样品中蛋白质的含量测定精密吸取样品溶液1.0mL，按“2.3.2”项下显色方法进行操作，分别测定吸光度，计算样品中蛋白质的含量和蛋白质脱除率，蛋白脱除率=（脱蛋白前蛋白质含量- 脱蛋白后蛋白质含量）/脱蛋白前蛋白质含量×100%。
2.4 酶-Sevage法脱蛋白方法考察[7]
精确配制0.02g/mL的乌骨藤多糖溶液100mL，加入木瓜蛋白酶2g，摇匀，调节多糖溶液的pH值使pH=7，恒温水浴40℃酶解1h，酶解结束后沸水浴10min 灭活木瓜蛋白酶，离心除去变性蛋白沉淀，取上清液进行Sevage法脱蛋白，重复10次，测定蛋白脱除率和多糖保留率。
3 结果
3.1 结果分析
采用酶法脱蛋白后联合Sevage法脱蛋白，分析所得蛋白脱除率和多糖保留率，以Sevage法脱蛋白次数为横坐标，分别以蛋白脱除率和多糖保留率为纵坐
标绘图，结果见图1。
由图1分析可知，酶法脱蛋白后采用Sevage法脱蛋白5次蛋白脱除率为77.65%，脱蛋白10次的蛋白脱除率为78.85%，表明脱蛋白5次后蛋白脱除率的变化不明显，但多糖保留率逐渐下降，由图分析选择脱蛋白3次为最佳工艺，蛋白脱除率为75.09%，多糖保留率为89.83%。
3.2 方法验证
精确配制0.02g/mL的乌骨藤多糖溶液3份，每份100mL，分别加入木瓜蛋白酶2g，摇匀，调节多糖溶液的pH值使pH=7，恒温水浴40℃酶解1h，酶解结束后沸水浴10min灭活木瓜蛋白酶，离心除去变性蛋白沉淀，取上清液进行Sevage法脱蛋白3次，测定脱蛋白后多糖溶液中的蛋白脱除率和多糖保留率，结果见表1。
4 讨论
乌骨藤多糖脱蛋白的目的在于为乌骨藤多糖的分离纯化及相关后续研究提供实验依据，故脱蛋白过程要兼顾考虑在多糖损失较少的条件下尽可能多的脱除蛋白质。
目前脱蛋白可采用酶法、Sevage法、三氯乙酸法和联合脱蛋白[8]。
酶法脱蛋白条件最温和，因为酶的专属性和特异性较强，只针对蛋白质进行酶促水解，低温水浴使多糖的损失较少，但需要调低参与酶法脱蛋白的溶液浓度，使酶解反应完全，反应成本较高；Sevage法脱蛋白反应较温和，利用蛋白质遇有机试剂变性的原理，操作多次才能脱除大部分蛋白质，脱蛋白次数越多多糖损失也越大；三氯乙酸法可在较少次数中脱除较多蛋白质，操作步骤简化，但其反应过于剧烈会导致多糖结构发生变化影响结构研究。
本实验采用酶法和Sevage法联合脱蛋白，本人曾对酶法脱蛋白工艺进行研究，通过四因素三水平正交试验对加酶量（1.5%、2.0%、2.5%）、pH值（5、6、7）、酶解温度（40℃、50℃、60℃）及时间（1h、2h、3h）因素进行考察，采用综合加权评分法分析结果显示加酶量与酶解时间对酶法脱蛋白有显著性影响，确定酶法脱蛋白工艺为酶用量2%，pH 7，40℃酶解1h，温度太高会导致酶活性降低，同时温度过高会使多糖水解降低多糖保留率，酶解时间过长也会增加多糖的损失。
酶法和Sevage法联合脱蛋白的优点在于，酶法脱蛋白会使多糖溶液中的游离蛋白和糖蛋白分解成分子量较小的多肽或氨基酸，经过醇沉，多糖会变成沉淀，而分子量小的部分则被保留在溶液中，再经过数次Sevage法可大大提高蛋白脱除率。
本人曾对单独采用Sevage法脱蛋白工艺进行考察[9]，其最佳方法蛋白脱除率为58.75%，多糖保留率为77.16%；单独采用酶法脱蛋白[10]，最佳方法蛋白脱除率为62.82%，多糖保留率为97.65%；酶法与Sevage法联合使用蛋白脱除率为75.09%，多糖保留率为89.83%。
实验结果表明酶-Sevage法脱蛋白既能脱除大部分蛋白质，且多糖保留率也较高，经验证该方法较稳定，是可行性较强的乌骨藤多糖脱蛋白方法。
[参考文献]
[1] 邢旺兴，陈斌，宓鹤鸣，等.乌骨藤辨考[J].中药材，2003，26（7）：524-526.
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