山梨酸苯甲酸实验报告

分析检测高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量字琴江1，杨　冲1，王　瑾2，左李美3，赵　芳1，罗桂槐1（1.洱源县检验检测院，云南洱源 671200；2.云南农业职业技术学院，云南昆明650031；3.昆明市城市排水监测站，云南昆明 650118）摘　要：本文采用高效液相色谱法对橙汁中的防腐剂山梨酸、苯甲酸含量进行测定，对方法的线性、加标回收率、精密度进行验证。

结果显示，山梨酸和苯甲酸浓度与峰面积在0.5～20.0 mg/L呈良好的线性关系，相关系数为0.999 6，样品的加标回收率为93.60%～95.90%，RSD为0.97%~1.96%。

该方法能准确测定橙汁中的防腐剂山梨酸和苯甲酸，且操作简单、准确度高，适用于大多数检测机构。

关键词：山梨酸；苯甲酸；高效液相色谱Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid by HPLC ZI Qinjiang1, YANG Chong1, WANG Jin2, ZUO Limei3, ZHAO Fang1, LUO Guihuai1(1.Eryuan County Inspection and Testing Institute, Eryuan 671200, China; 2.Yunnan V ocational and Techical College of Agriculture, Kunming 650031, China; 3.Kunming City Drainage Monitoring Station, Kunming650118, China)Abstract: In this paper, determination sorbic acid and benzoic acid in orange juice by high performance liquid chromatography (HPLC), and the linearity, recovery rate and precision of the method were verified. The results show that there is a good linear relationship between the concentration of 0.5～20.0 mg/L, and the correlation coefficient is 0.999 6, the recovery rate of the samples is between 93.60%～95.90%, and the relative standard deviation (RSD) ranged from 0.97%～1.96%. This method is suitable for accuracition of determination of the content of benzoic acid and sorbic acid in orange juice, which showed great prospect most institutions.Keywords: sorbic acid; benzoic acid; high performance liquid chromatography近年来，随着食品工业的快速发展，食品添加剂已被广泛应用于食品加工、储存中，防腐剂能抑制微生物繁殖，延长食品的保质期，防止食物变质、腐败，防腐剂的出现给人们生活带来极大便利[1]。

实验十七、酱油中山梨酸、苯甲酸的测定1、目的与要求掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。

2、原理样品中的苯甲酸在酸性条件下蒸馏，馏出液剧烈氧化除去杂质，再次蒸馏后，所得苯甲酸在220nm处有最大吸收，它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律，因此可以据此定量测定。

同时山梨酸在酸性条件下也能随水蒸汽一起蒸馏出来，可在酸性溶液中，用蒸汽蒸馏的方法将样品中的山梨酸蒸馏出来，并除去非挥发性的干扰物质。

山梨酸在弱氧化条件下氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸反应，生成红色的化合物。

其颜色的深浅与山梨酸含量成正比，可以比色测定之。

3、仪器与试剂3.1 仪器3.1.1 蒸馏设备。

3.1.2 紫外可见分光光度计。

3.2 试剂3.2.1 无水硫酸钠。

3.2.2 85%正磷酸。

3.2.3 0.034mol/L重铬酸钾溶液：溶解4.9g重铬酸钾于水中，稀释到500mL。

3.2.4 2mol/L硫酸溶液：稀释66.5mL浓硫酸至500mL。

3.2.5 氢氧化钠溶液：1mol/L、0.1mol/L、0.01mol/L。

3.2.6 0.5%重铬酸钾溶液。

3.2.7 0.5%硫代巴比妥酸溶液：称取硫代巴比妥酸0.5g，加入20mL水，再加1mol/L 氢氧化钠溶液10mL，用玻璃棒搅拌使之溶解，然后加入1mol/L盐酸11mL，用水稀释至100mL，摇匀。

3.2.8 0.15mol/L硫酸：取浓硫酸1mL加入到100mL水中，并用用水稀释至120mL。

3.2.9 山梨酸标准溶液：精密称取在105℃干燥至恒量的山梨酸0.0500g用0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解后，移入500mL容量瓶中，加0.1mol/L 氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，每毫升含山梨酸100μg。

临用时取1mL置于50mL容量瓶中，加入0.01mol/L氢氧化钠溶液到刻度，摇匀，每毫升含山梨酸2μg。

3.2.10 苯甲酸标准溶液：准确称量经过干燥的苯钾酸0.1000g，溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，以水定容至1000mL，每毫升溶液相当于苯甲酸0.1mg。

防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析一、实验目的1、了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能。

2、掌握高效液相色谱保留值定性方法和外标定量方法。

二、实验原理高效液相色谱法是重要的液相色谱法。

它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。

根据使用的固定相及分离机制的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排阻色谱等。

在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K ；组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度K显然，K 越大，组分在固定相上停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越大，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。

目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。

若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。

据此，采用反相液相色谱法可分离防腐剂苯甲酸和山梨酸。

本实验采用外标法测定样品中苯甲酸和山梨酸的浓度。

外标法又称定量进样-标准曲线法，指用欲测组分纯物质配制成不同浓度的标准溶液，取固定量标准溶液进行分析，从所得色谱图上测出响应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐标）对浓度（横坐标）的标准曲线。

分析样品时，取和制作标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该样品的响应信号，由标准曲线即可查出其浓度。

三、仪器DIONEX UltiMate3000（USA ） 高效液相色谱仪（配有自动进样器，紫外检测器）。

四、试剂和溶液苯甲酸（分析纯）、山梨酸（分析纯）、甲醇（色谱纯)、高纯水、0. 02 mol/ L 乙酸铵溶液、标准储备液、标准使用液、标准混合使用液、未知溶液。

食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。

食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。

目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。

食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。

苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。

如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。

特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。

另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。

在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。

苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。

日本的进口食品中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。

但因价值低廉，在中国仍作为主要防腐剂使用。

山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。

但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。

由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。

1防腐剂的检测在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。

因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。

目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M．Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测，实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法，但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。

食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定【摘要】目的：同时对食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸进行测定，缩短检测时间，提高检测效率。

方法：使用高效色谱仪，紫外检测器，同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量。

结果：精密度在1%-8%之间，回收率在91%-110%之间。

结论:该方法前处理简单，检测结果稳定性好，准确度高，能同时检测食品中的4种添加剂，提高检测效率。

【关键词】高效液相色谱仪; 安赛蜜; 苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 脱氢乙酸在食品加工中，为了提高食品的风味，延长保持期等原因，食品中会加入各种的添加剂，而比较常用的包括山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸等。

在国标中，山梨酸、苯甲酸、糖精钠是使用国家标准GB 5009.28-2016进行检测，脱氢乙酸是使用国家标准GB 5009.121-2016进行检测，但在市场的抽检中，有很多的食品均需要检测这4种添加剂，在大量的检测工作中，如果能把这4种添加剂同时进行检测，可以大大缩短检测时间，提高检测效率。

本实验通过对流动相、检测波长的调整探索了一种能同时检测山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的方法。

1 实验部分1 试剂与仪器岛津液相色谱仪，配紫外检测器，C18色谱柱苯甲酸钠标准品（CAS号:532 32-1)，山梨酸钾标准品（CAS号:590-00-1)，糖精钠标准品（CAS号:128-11-9)氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、无水乙醇、正已烷、甲醇: 色谱纯1.2 试样提取准确称取约2 g试样于50 ml具塞离心管中,加水约25 m，涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液（92g/L)2 ml和乙酸锌溶液(183g/L)2 mL，用氢氧化钠溶液(20g/L)调pH至7.5，混匀于8 000r/ min离心5 min,将水相转移至50 ml容量瓶中，于残渣中加水20 mL，涡旋混匀后超声5 min，于8 000 r/min离心5 min将水相转移到同一50 ml容量瓶中并用水定容至刻度，混匀。

实验二食品添加剂苯甲酸、山梨酸同时测定一、目的要求1.理解反相色谱的原理和应用。

2.掌握标准曲线定量法。

3.学习HPLC法测定多种食品添加剂方法。

4.学习ageilent1100HPLC分析仪器的操作使用。

二、原理糖精钠是易溶于水的盐类，样品中的苯甲酸、山梨酸经氢氧化钠溶液(O.50 mol·L )浸泡后，转化为易溶于水的苯甲酸钠、山梨酸钠，经沉淀蛋白质、过滤等处理后，四种被测组分滞留于水相中与杂质分离。

若样品含有二氧化碳和乙醇，则应加温除去。

调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，以紫外检测器进行检测，以标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做工作曲线，再根据样品中的对应物峰面积，由工作曲线算出其浓度。

三、试剂与样品方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。

1甲醇：经滤膜(0.5μm)过滤。

2稀氨水(1＋1)：氨水加水等体积混合。

3乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。

4碳酸氢钠溶液(20g/L)：称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。

5苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL 容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

6山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL 容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

7 苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各1.0mL，放入10mL容量瓶中，加水至刻度。

此溶液含苯甲酸、山梨酸、糖精钠各0.1mg/mL。

经滤膜(0.45μm)过滤。

9 乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。

实验八、高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量【目的与要求】1．掌握高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2．了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3．熟悉碳酸饮料样品的处理方法【方法原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。

因此国家严格限制其使用量。

在本实验中，样品首先经过超声和加热处理，以除去二氧化碳和乙醇。

然后经滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，通过反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230nm波长处检测。

以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。

【仪器和材料】1．仪器与器皿高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100ml烧杯（3个）；1.00ml 和100µL移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22µm）。

2．试剂（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02mol/L，色谱纯）；流动相使用前均超声脱气处理10min。

（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g山梨酸，加超纯水定容至250ml。

（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g苯甲酸，加超纯水定容至250ml。

【操作步骤】1．样品处理碳酸饮料（雪碧）：移取10ml碳酸饮料于烧杯中，超声处理5min。

然后用微孔滤膜（0.22 µm）过滤于另一烧杯中，滤液备用。

吸取100 µL滤液于离心管中，并加入900 µL超纯水，混合均匀标记为样品。

2．标准溶液配制（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。

吸取50 µL 滤液于另一离心管并加入950µL 超纯水，得到50 µg/ml 的苯甲酸标准品，混合均匀后标记为苯甲酸标准品。

紫外分光光度法测定山梨酸及苯甲酸2009-11-10 15:16:32| 分类:| 标签:|字号大中小订阅为了防止食品在储存、运输过程中发生变质、腐败,常在食品中添加少量防腐剂。

防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格规定。

苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的两种防腐剂。

苯甲酸具有芳烃结构。

在波长 228nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带;山梨酸具有α、β不饱和羰基结构。

又称花椒酸,其化学结构为:为了防止食品在储存、运输过程中发生变质、腐败,常在食品中添加少量防腐剂。

防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格规定。

苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的两种防腐剂。

苯甲酸具有芳烃结构。

在波长 228nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带;山梨酸具有α、β不饱和羰基结构。

又称花椒酸,其化学结构为:CH3CH=CHCH=CHCOOH在波长 250nm 处有π→π*跃迁 K 吸收带,因此,根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性和定量测定。

由于食品中防腐剂用量很少,一般在 1/1000左右,同时食品中其它成分也可能产生干扰,因此,需要预先将防腐剂与其它成分分离,并经提纯浓缩后进行测定。

常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。

本实验采用溶剂萃取法,用乙醚将防腐剂从样品中提取出来,再经碱性水溶液处理及乙醚萃取以达到分离、提纯的目的。

采用最小二乘法处理标准溶液的浓度和吸光度数据,以求得浓度与吸光度之间的回归直线方程,并根据直线方程计算样品中防腐剂的含量。

在波长 250nm 处有π→π*跃迁 K 吸收带,因此,根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性和定量测定。

由于食品中防腐剂用量很少,一般在 1/1000左右,同时食品中其它成分也可能产生干扰,因此,需要预先将防腐剂与其它成分分离,并经提纯浓缩后进行测定。

实验四气相色谱法检测山梨酸和苯甲酸含量一、实验原理与目的1、目的要求：掌握采用气相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸的含量，学会样品的制备和处理方法，学会使用气相色谱仪。

2、测定原理：试样酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

二、试剂与材料（食品中山梨酸、苯甲酸的测定（依据GB/T 5009.29-2003）2.1 乙醚：不含过氧化物。

2.2 石油醚：沸程30℃~60℃。

2.3 盐酸。

2.4 无水硫酸钠。

2.5 盐酸（1+1）：取100mＬ盐酸，加水稀释至２００ｍL。

2.6 氯化钠酸性溶液（40g/L）：于氯化钠溶液（40g/L）中加少量盐酸（1+1）酸化。

2.7 山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。

2.8 山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、250μg山梨酸或苯甲酸。

三、仪器与设备1 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。

2 。

3 天平：感量为1 mg。

4 干燥恒温箱。

5 瓷坩埚。

6 压力消解器、压力消解罐或压力溶弹。

7 可调式电热板、可调式电炉。

四、分析检测过程或操作方法4.1 试样提取称取2.50g事先混合均匀的试样，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸（1+1）酸化，用15、10mＬ乙醚提取两次，每次振摇１min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙醚提取液。

用3mL氯化钠酸性溶液（40g/L）洗涤两次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。

加乙醚至刻度，混匀。

准确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解残渣，备用。

实验毛细管电泳法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的含量一、实验目的1、掌握毛细管电泳法的基本原理2、熟悉Beckman P/ACE™ MDQ 毛细管电泳仪以及其32Karat工作站的使用方法。

3、掌握毛细管电泳法测定苯甲酸和山梨酸含量的方法。

二、实验原理苯甲酸和山梨酸是广泛使用在饮料、调味品中的防腐剂，由于此类防腐剂带有一定的负效应，甚至还有微量毒素，使用不当会给人体带来危害，应严格限制其在食品中的添加量，所以其检测工作也变得极其重要。

毛细管电泳（CE）技术是以高电场为驱动力，在细内径毛细管内荷电粒子按其淌度或（和）分配系数的不同而进行分离的一种新技术。

毛细管电泳具有高效快速、进样体积小、溶剂消耗少和样品预处理简单等优点，现已广泛地用于分离分析领域。

传统的食品添加剂的测定一般采用气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）方法，当采用GC与HPLC分析时一般都必须对样品进行复杂的前处理。

而CE与之相比，实验成本低，分析时间短，适用范围宽，可同时分离和检测多个组分。

本实验使用的毛细管区带电泳法（CZE），在毛细管中仅填充缓冲液，基于溶质组分的迁移时间或淌度的不同而分离，除了溶质组分本身的结构特点和缓冲溶液组成，不存在其他因素如聚合物网络、pH梯度的影响。

实验采用硼砂为缓冲液，待测饮料只需用缓冲液稀释，在特定的条件下，以峰高为定量依据，测定3种待测饮料中苯甲酸的含量。

三、仪器和试剂仪器：Beckman P/ACE™ MDQ 毛细管电泳仪试剂：硼砂缓冲溶液（45mmol/L）、NaOH溶液（0.1mol/L）、苯甲酸钠和山梨酸钠的混标1mg/ml。

市售3种果汁饮料四、实验步骤1、制作标准曲线分别吸取上述苯甲酸钠储备液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml于50ml容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，配置成折合苯甲酸、山梨酸浓度为10、20、40、60、80μg/ml的标准液，在上述实验条件下，测各苯甲酸的峰值，和山梨酸的峰值，绘制各标准曲线。

酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定摘要：目的：采用碱溶液反相萃取—高效液相色谱法（HPLC）测定酱油中苯甲酸和山梨酸。

方法：以国标萃取法为基础，再对其用碱溶液进行反萃取的方法，对酱油样品进行前处理，通过加内标物的方法提高实验的精确度。

结果：苯甲酸和山梨酸的线性回归相关指数都大于0.99、最小检出限（LOD）都低于0.1ppm，加标回收率皆大于84%，相对偏差皆小于16%。

结论：该方法灵敏、可靠，可用于酱油中苯甲酸和山梨酸的快速定量检测。

关键词：反相萃取；高效液相色谱法；酱油；苯甲酸；山梨酸酱油是我国传统的、富有特色的、使用最广的、味道鲜美的调味品，它赋予食品以适当的色、香、味，具有杀菌治病、调味之功用。

由于酱油营养丰富，适于微生物生长繁殖，而微生物又是到处不在无孔不入，所以细菌、霉菌和酵母之类微生物的侵袭通常是导致酱油败坏的主要因素。

为了保藏酱油，防止酱油腐败变质，保持酱油的鲜度和良好的品质，达到其对保质期的要求，酱油中一般都使用食品常用防腐剂—苯甲酸和山梨酸，但过多防腐剂会严重损害人体健康，国家对防腐剂的使用有严格限量规定，因而检测酱油中防腐剂的含量具有重要意义。

目前酱油中苯甲酸和山梨酸的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法，其中高效液相色谱法因其仪器精确度高，在苯甲酸和山梨酸的检测中最常用。

对于酱油的前处理国标是对其先进行酸化，再通过乙醚进行萃取，除此之外还有其他诸多方法，如对粘度比较大的进行固相萃取、通过加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀蛋白质、脂肪并过滤后进行测定、还有就是本文所用的对国标处理后的样品进行碱溶液反相萃取。

这样可以大大的减少样品中的杂质，从而减少了杂质峰对高效液相色谱检测的影响。

另外本文所采用的内标法的处理方法是一个创新之举，避免了外标法测定时前处理萃取不完全以及其他处理过程带来的损失从而大大的提高了检测的准确度。

1 实验部分1.1 溶液配制乙酸铵溶液( 0. 02 mol /L) : 准确称取乙酸铵1. 542 g, 用水溶解, 定容至1 000 mL, 经0. 45Lm 膜过滤。

卫生化学实验七高效液相色谱法（HPLC）测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法2、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。

因此国家严格限制其使用量。

在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。

以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。

3、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯（1个）； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22 μm）。

2、试剂：（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min）（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加超纯水定容至250 ml。

（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加超纯水定容至250 ml。

4、实验步骤1、样品处理碳酸饮料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min，然后用微孔滤膜（0.22 μm）过滤，滤液备用。

吸取100 μl滤液于离心管中，并加入900 μl超纯水，混合均匀标记为样品。

2、配制标准溶液（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。

吸取滤液50 μl 于另一离心管并加入950 μl超纯水，得到50 μg/ml的苯甲酸标准品，做好标记。

（2）同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品，做好标记。

（3）混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀，得到500 μg/ml的混合标准品。

酱油中山梨酸、苯甲酸含量的测定概述：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂。

目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。

第一部分、苯甲酸一、实验原理：苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。

通过查找资料，苯甲酸在230nm处具有最大吸收。

另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。

二、实验试剂及器材试剂：无水乙醚(回收后可重复使用)、苯甲酸标准液(1mg/ml)、5%NaHCO3溶液、5%NaCL 溶液、(1+2v)盐酸溶液器材：紫外分光光度计、125ml分液漏斗×2，铁架台一套，量筒100ml、容量瓶（100ml、50ml、）移液管（5ml×2、1ml×2）、胶头滴管、试剂瓶100ml×2、水浴锅、蒸馏回流装置一套。

三、实验步骤：1、试剂准备：标准液：125.0mg苯甲酸+250ml无水乙醚5%NaHCO3：5.0g NaHCO3+100mlH2O(1+2)HCl：20ml浓盐酸+40mlH2O2、样品的处理：取酱油5.00ml于125nl分液漏斗中加入（1+2）盐酸2ml酸化，再用无水乙醚萃取三次，每次用量30ml，每次振摇1min。

合并乙醚层于另一分液漏斗，用5%NaCl 溶液洗涤二次，每次5—10ml，然后蒸馏回收乙醚，用20ml、5%NaHCO3溶解、定容到100ml 容量瓶中。

备用。

3、标准曲线绘制：取苯甲酸标准使用液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml分别置于100ml 容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液2ml，加水至刻度，摇匀。

放置15min,尽量让CO2逸尽。