最新大肠杆菌

大肠杆菌O157: H7传染源和传播途经
• 大肠杆菌O157: H7基本上是一种食源性病原菌， 可通过食用大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、 牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等 感染,也可通过人与人、人与动物密切接触传播。 • 在实验室，大肠杆菌O157: H7可以感染小鼠、鸡、 兔、猪、牛等动物。 • 大肠杆菌O157: H7的感染已成为世界性的问题 • 我国情况也不容乐观
2．免疫磁珠分离法
• 免疫磁珠分离法是将特异性抗体吸附于一种能 被吸附的磁性珠子上,然后利用抗原抗体反应特 性将样品中的大肠杆菌O157: H7富集起来。 • 方法:1.增菌;2.取样品1ml加大肠杆菌O157: H7免 疫磁珠20ul;3.轻轻混合10分钟;4.将试管插入磁 架上;5.吸取上清;6.加PBS,重复3-5过程;7.取管 壁沉淀物,划线接种于CT-山梨醇麦康凯琼脂(C头孢克肟,T-亚碲酸钾)等选择性培养基。37℃ 培养6-24小时，挑取可疑菌落进行鉴定。
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• 增菌液： • 含10mg/L 新生霉素的EB肉汤或肠道增菌液 • 含10mg/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白
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一、细菌培养与鉴定
• 1．分离培养
• 早期培养对确定病原有重要意义。 • 培养的对象首先是急性血性腹泻患者，其次是HUS 、TTP等住院 病人，再其次是高危接触者。 • 培养基： • 山梨醇麦康凯琼脂、胰胨大豆琼脂 • 改良的伊红美兰 、改良的SD-39（MSD）琼脂 • 添加了头孢克肟 和 亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC） • 添加了头孢克肟和鼠李糖（0.5%)的山梨醇麦康凯琼脂（CR-SMAC） • “科玛嘉”大肠杆菌O157: H7显色培养基 • 四溴荧光亚甲基兰琼脂 • H7抗血清—山梨醇发酵培养基 •
3．生化反应
• • • 目前许多国家ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ用的O157和 H7特异性抗体与极少数细菌具有不同程度交 叉反应。因此用生化试验确定为大肠杆菌是必须的。 典型大肠杆菌的主要生化反应结果如下： 动力试验（+） 葡萄糖（+） 麦芽糖（+）甘露醇（+） 蔗糖（－/+） 硫化氢（－） 尿素（－） 靛基质（+） 甲基红（+） V-P试验（－） 枸橼酸盐（－）苯丙氨酸脱羧酶（－）赖氨酸脱羧酶（+/－）鸟氨酸脱 羧酶（ +/ －）氧化酶（－）氰化钾（－） 与O157有鉴别意义的生化反应见表1。 MUG即4-甲基伞形化内酯-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌具有葡萄糖 醛酸酶,可水解MUG产生荧光, 但O157: H7中大多数菌株则不水解MUG。 Thompson等建立了一种快速MUG试验,取 MUG试剂0.5ml置试管中,以无 菌棉签挑取待检菌纯培养物混匀于其中,44.5℃置 20min, 暗室内高强度光 源下观察结果,产生蓝色荧光者为阳性。
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Chapman等 共检测大便标本690份, 免疫磁珠分离法检出25 。用免疫磁珠分离 法分离的l2株大肠杆菌O157: H7中,直接培养阳性仅5株。
• Wright等将接种大肠杆菌O157: H7的碎牛肉标本置加有万古霉素和头孢 克肟的缓冲蛋白胨水培养 ,然后直接或用大肠杆菌O157抗体包被的磁珠 分离细菌后 , 接种于 CT-SMAC, 结果直接次培养检出量为 200cfu/g, 而免 疫磁珠分离法仅需 2cfu/g 。 • Chapman等先用EC肉汤增菌,然后用免疫磁珠分离法富集牛粪便大肠杆 菌O157: H7菌株,再用选择性培养基分离，并与CR-SMAC和CT-MAC直 接培养作比较。用前者检测接种12株不同大肠杆菌O157: H7菌株的牛粪 便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。 • Cubbon等用免疫磁分离法（IMS）检测牛粪便和食品标本的大肠杆菌 O157: H7。在一起经牛奶传播的大肠杆菌O157: H7爆发中,用IMS、粪便培 养和多聚酶链反应 (PCR)检测Vero毒素基因的携带 , 用三种方法对粪便 大肠杆菌O157: H7的分离率作比较结果,在受检的142份粪便标本中,直接 培养和IMS均阳性20 份,另13份仅IMS阳性。因此,IMS提高了大肠杆菌 O157: H7感染病例的检出率,与PCR符合率高。
• 目前，污染的肉、家畜，甚至饮用水均面临大肠杆菌O157: H7的卫生威胁。检测食品和水源中肠道病原体使用传统的 培养法,结果不理想。IMS和其它检测的研究表明,对快速检 测食品和环境标本似乎前景良好,Yu检等以IMS结合电化学 发光检测法(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果 显示,在原缓冲液检出大肠肠菌的范固为100－1000 cfu/lm, 在食品检出的范围为1000－2000cfu/lm ，检测时间十分快, 一般不到1小时。菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比 在两种培养基上直接培养高100倍。在监测牛群的4个月间, 从牛采集1024份直肠标本,其中检出大肠杆菌O157: H784份 （8.2%）84份中有23份（27.4%）由直接培养和IMS分离。 23份中15份由两种培养基、5份仅由CT-SMAC、3份仅由 CR－SMAC分离,其余61份(72.6%)仅IMS分离。用含吐温－ 20 的PBS洗涤磁珠可减少其它微生物与磁珠的非特异性结 合。用无关的抗体包被磁,则大肠杆菌O157: H7不结合。IMS 具有快速、操作简单、特异性高,在流行病学调查中有价值。
大肠杆菌O157: H7实验 诊断研究进展
大肠杆菌O157: H7感染临床表现
• 出血性肠炎：鲜血样便，腹部痉挛性疼痛，低热或不 发热。 • 溶血性尿毒综合征（HUS）：主要发生在儿童，常出 现在腹泻后数天或1-2周。病死率一般在10%，各别可 高达50%。 • 血栓性血小板减少性紫癜（TTP）：主要发生在成年 人，尤其老年人。病人主要表现为发热、血小板减少、 溶血性贫血、肾功能异常等症状，病情发展迅速，病 死率高，有时可出现70%的病人死亡。