无病毒苗的培育
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植物组织培养第十章无病毒苗木培育
四 脱毒苗的鉴定
A、酶联免疫吸附法 (Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)
1997年Clark和Adams用微量血凝板建立了诊断植物病毒的ELISA技术。Casper首先用其测定了PLRV病毒。
原理：抗血清(antiserum)鉴定法：
抗血清即含有抗体的血清；血清反应即抗体与抗原的结合。由于血清反应的特异性，故可用于病毒的鉴定。
黄瓜花叶病毒（CMV） 郁金香 条斑病毒 （TuBV）
芋的花叶病 百合丛簇病（CTLV）
01
变色型：叶片的局部或全部颜色改变。如褪绿、变黄、变橙、变红、变紫、变蓝绿等。郁金香碎裂病毒感染郁金香，使其花色由单色发生斑驳或纵向条点。
02
坏死与变质：某些细胞组织死亡或组织质地变软或变硬或木栓化。
芋的枯萎病
方法：茎尖大小与脱毒率成反比，与成活率成正比。
01
02
3、生物学方法
3.1 茎尖组织培养脱毒法
食用百合的脱毒培养过程
3.2 愈伤组织培养脱毒法 愈伤组织中某些细胞不带病毒，可能是细胞的分裂速度快于病毒的复制速度，而似的少数细胞无病毒，这样通过这些细胞来再生植株，以获得无病毒苗。
01
02
3.3 珠心胚培养脱毒
TMV
TYMV
03
02
01
花叶型： 也称花叶病。是由于叶绿体结团或退化引起。造成叶片上形成暗绿(正常)、亮绿(结团)和黄色(退化)区域。
环斑型：在叶片、果实或茎的表面形成单线圆纹或同心纹的环、全环或半环，以用连续屈曲状的环。常常和花叶同时发生。
畸形生长型 ：各种反常的生长。
2.2 病毒对植物外观状态的影响
Hale Waihona Puke 作业与探究什么是植物无病毒培养？
A、酶联免疫吸附法 (Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)
1997年Clark和Adams用微量血凝板建立了诊断植物病毒的ELISA技术。Casper首先用其测定了PLRV病毒。
原理：抗血清(antiserum)鉴定法：
抗血清即含有抗体的血清；血清反应即抗体与抗原的结合。由于血清反应的特异性，故可用于病毒的鉴定。
黄瓜花叶病毒（CMV） 郁金香 条斑病毒 （TuBV）
芋的花叶病 百合丛簇病（CTLV）
01
变色型：叶片的局部或全部颜色改变。如褪绿、变黄、变橙、变红、变紫、变蓝绿等。郁金香碎裂病毒感染郁金香，使其花色由单色发生斑驳或纵向条点。
02
坏死与变质：某些细胞组织死亡或组织质地变软或变硬或木栓化。
芋的枯萎病
方法：茎尖大小与脱毒率成反比，与成活率成正比。
01
02
3、生物学方法
3.1 茎尖组织培养脱毒法
食用百合的脱毒培养过程
3.2 愈伤组织培养脱毒法 愈伤组织中某些细胞不带病毒，可能是细胞的分裂速度快于病毒的复制速度，而似的少数细胞无病毒，这样通过这些细胞来再生植株，以获得无病毒苗。
01
02
3.3 珠心胚培养脱毒
TMV
TYMV
03
02
01
花叶型： 也称花叶病。是由于叶绿体结团或退化引起。造成叶片上形成暗绿(正常)、亮绿(结团)和黄色(退化)区域。
环斑型：在叶片、果实或茎的表面形成单线圆纹或同心纹的环、全环或半环，以用连续屈曲状的环。常常和花叶同时发生。
畸形生长型 ：各种反常的生长。
2.2 病毒对植物外观状态的影响
Hale Waihona Puke 作业与探究什么是植物无病毒培养？
组织培养在农业生产中的应用
植物组织培养技术在农业生产中的应用植物组织培养成为生物科学的一个广阔领域，•除了在基础理论的研究上占有重要地位，•在农业生产也得到越来越广泛的应用。
一、快速繁殖优良种苗植物离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面。
很多作物都带有病毒，尤其是无性繁殖植物，如马铃薯、甘薯、草莓、大蒜等。
长期的病毒感染并在植物体内的积累，使植物的产量和品质不断下降。
比如我们看到合肥市场供应的草莓越来越小，就是病毒病感染的结果。
White早在1943年就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。
利用组织培养方法，取一定大小的茎尖进行培养，再生的植株有可能不带病毒，从而获得脱病毒苗，再用脱毒苗进行繁殖，种植的作物就不会或极少发生病毒。
目前利用茎尖脱毒技术组织培养在甘蔗、菠萝、香蕉、草莓、甘薯、马铃薯等主要经济作物上已成功应用。
二、无病毒苗(Virus free)的培养几乎所有植物都遭受到病毒病不同程度的危害，•有的种类甚至同时受到数种病毒病的危害，•尤其是很多园艺植物靠无性方法来增殖，若蒙受病毒病，代代相传，越染越重。
自从Morel(1952)发现采用微茎尖培养的方法可得到无病毒苗后，微茎尖培养就成为解决病毒病危害的重要途径之一。
•若再与热处理相结合，则可提高脱毒培养的效果。
•对于木本植物，茎尖培养得到的植株难以发根生长，则可采用茎尖微体嫁接的方法来培育无病毒苗。
组织培养无病毒苗的方法已在很多作物的常规生产上得到应用，•如马铃薯，甘薯，草莓，苹果香石竹，菊花等。
已有不少地区建立了无病毒苗的生产中心，这对于无病毒苗的培养、鉴定、繁殖、保存、•利用和研究，形成了一个规范的系统程序，从而达到了保持园艺植物的优良种性和经济性状的目的。
三、在育种上的应用1、通过花药或花粉培养为单倍体育种，由于单倍体植株往往不能结实，在花药或花粉培养中用秋水仙素处理，可使染色体加倍，成为纯合二倍体植株，它已成为一种崭新的育种手段，具有高速、高效率、基因型一次纯合等优点，目前我国科学家育成烟草、小麦、水稻新品种已大面积种植。
沙田柚无病毒苗的栽培试验小结
快。 叶色浓 度厚 实 。 ２３ 枝梢 管理 ． ２４ 病 虫害防治 ．
术。
关键 词 ： 田柚 ； 沙 无病毒 苗 ； 栽培技 术
梅州 市农 科 所 从 ２ ０ ０ ４年 开展 了 “ 田柚 无 病毒 ０５ 的定植 穴 ， 人 稻秆 、 沙 ．ｍ 填 杂草 等 ， 穴施 入 ３５ ｇ鸡 每 ．ｋ
苗 木繁 育技 术 研究 ” 题 研 究 ， 分发 挥该 所 柚 类专 屎 、ｋ 课 充 ｌ ｇ生 物有 机 肥 、．ｋ ０５ ｇ过 磷 酸 钙 、．ｋ ０２ ｇ复 合 肥 ， 业科 研机 构 的作 用 （ ９ ７年 经农 业 部柑 桔 苗木 质量 将肥 料 与 土壤 充 分拌 匀 ， 土 成墩 ， 立 墩 面高 出 地 １９ 覆 建 检测 中心验 收 为合 格 的沙 田柚育 苗 基地 ） 取得 了一 面 ３ ｅ 的树 盘 。种植 时不 宜 过深 ， 无 病毒 沙 田柚 ， ０ｍ 将
苗 长势 良好 、 叶色浓 绿 ． 并抽 发有 ４次 梢 。
覆 上一 层薄 土 ，ｋ 鸡 粪 、ｋ ５ｇ ２ ｇ生物 有机 肥 、．ｋ 磷 肥 ０５ ｇ 与土充 分拌 匀后 埋施 。 根 外 追肥 能 直接 、 面地 供应 树 体所 需 养 分 ， 全 新
２ 栽 培 管 理 技 术
２ １ 种 植 ．
株行 距 按 ５ ｘ ｍ 种植 ， 植 前开 挖 ０８ Ｏ５ ｘ 梢 根 系 吸收 能 力不 强 ．根 外 喷施 肥 料 能补 充树 体 养 ｍ ４ 定 ．ｍｘ ． ｅ ｒ 分 。 快 生长 。在新 梢 抽 发期 间 可采 用 尿素 、 合 肥 加 复 作 者 简 介 ： 小 珍 （ ９ ３年 一 ， ， 级 农 艺 师 ， 要 从 事 果 树 杜 １７ ）女 高 主
系列 的技 术 成 果 ， 并建 立 良种 沙 田柚 母 本 园采 穗 圃 ， 的 营养 袋撕 开 解 袋 ， 意不 要将 营养 袋 的泥 土松 开 ， 注 把 淋 同 建设 无 病毒 工 厂化 育 苗基 地 ，进 行 沙 田柚 无病 毒 苗 避 免 伤 根 ． 根 部 的 泥 土轻 轻 压 实 ． 足 定 根 水 ， 减 的繁 育研 究 ，从 选 评母 树一 检测 脱 毒一 增 殖扩 繁 等 时采 用稻 草覆 盖树 盘周 围 ， 少水 分 蒸发 。以后 视实 在 每 形 成 了一 整 套 较成 熟 的无 病 毒 网室 育苗 理 论 和操 作 际情 况 保 持 土壤 湿 润 ． 试 验 区设 立 了滴 灌 ， 隔 ５
术。
关键 词 ： 田柚 ； 沙 无病毒 苗 ； 栽培技 术
梅州 市农 科 所 从 ２ ０ ０ ４年 开展 了 “ 田柚 无 病毒 ０５ 的定植 穴 ， 人 稻秆 、 沙 ．ｍ 填 杂草 等 ， 穴施 入 ３５ ｇ鸡 每 ．ｋ
苗 木繁 育技 术 研究 ” 题 研 究 ， 分发 挥该 所 柚 类专 屎 、ｋ 课 充 ｌ ｇ生 物有 机 肥 、．ｋ ０５ ｇ过 磷 酸 钙 、．ｋ ０２ ｇ复 合 肥 ， 业科 研机 构 的作 用 （ ９ ７年 经农 业 部柑 桔 苗木 质量 将肥 料 与 土壤 充 分拌 匀 ， 土 成墩 ， 立 墩 面高 出 地 １９ 覆 建 检测 中心验 收 为合 格 的沙 田柚育 苗 基地 ） 取得 了一 面 ３ ｅ 的树 盘 。种植 时不 宜 过深 ， 无 病毒 沙 田柚 ， ０ｍ 将
苗 长势 良好 、 叶色浓 绿 ． 并抽 发有 ４次 梢 。
覆 上一 层薄 土 ，ｋ 鸡 粪 、ｋ ５ｇ ２ ｇ生物 有机 肥 、．ｋ 磷 肥 ０５ ｇ 与土充 分拌 匀后 埋施 。 根 外 追肥 能 直接 、 面地 供应 树 体所 需 养 分 ， 全 新
２ 栽 培 管 理 技 术
２ １ 种 植 ．
株行 距 按 ５ ｘ ｍ 种植 ， 植 前开 挖 ０８ Ｏ５ ｘ 梢 根 系 吸收 能 力不 强 ．根 外 喷施 肥 料 能补 充树 体 养 ｍ ４ 定 ．ｍｘ ． ｅ ｒ 分 。 快 生长 。在新 梢 抽 发期 间 可采 用 尿素 、 合 肥 加 复 作 者 简 介 ： 小 珍 （ ９ ３年 一 ， ， 级 农 艺 师 ， 要 从 事 果 树 杜 １７ ）女 高 主
系列 的技 术 成 果 ， 并建 立 良种 沙 田柚 母 本 园采 穗 圃 ， 的 营养 袋撕 开 解 袋 ， 意不 要将 营养 袋 的泥 土松 开 ， 注 把 淋 同 建设 无 病毒 工 厂化 育 苗基 地 ，进 行 沙 田柚 无病 毒 苗 避 免 伤 根 ． 根 部 的 泥 土轻 轻 压 实 ． 足 定 根 水 ， 减 的繁 育研 究 ，从 选 评母 树一 检测 脱 毒一 增 殖扩 繁 等 时采 用稻 草覆 盖树 盘周 围 ， 少水 分 蒸发 。以后 视实 在 每 形 成 了一 整 套 较成 熟 的无 病 毒 网室 育苗 理 论 和操 作 际情 况 保 持 土壤 湿 润 ． 试 验 区设 立 了滴 灌 ， 隔 ５
冀东地区草莓无病毒生产苗繁育技术
并耙 平做成平畦或高畦。一 般畦面长 ２ ０～３ ０ ｍ，
宽 １ ． ０～ １ ． ２ ｒ ｎ 。
鲜质量 ３ ０ ｇ 以上， 中心芽饱满， 叶柄粗壮， 叶色黄绿，
不 徒 长 ，有 较 多的 新根 ，无 明显 病 虫害。 冀东 地 区
一
３ 定 植
春 季 日均气温稳定 在 １ Ｏ～ ｌ ２℃时，即可定植草 莓 种 苗。 冀东 地 区于 ４ 月下旬 定植 。 定植 过早 ， 因
气温较 低 不利 于种 苗成活 ； 定植过 晚 ，则又 会缩 短
般是 从 辽宁省东 港市草 莓 研究 所购 买一 代 脱毒 种
苗进行 自 繁， 主栽 的品种为童 子一号 、 甜查 理、红颜 、
幸香 等。 匍 匐茎 的 抽生 能 力与种苗 所 经过 的低 温 时数 有
整 个繁苗 期 ，减少繁 苗数量 。
在春 季 定植 初期 ，地 温较 低 ，气候干旱 ，而 且 浇水 次数 越 多地温 提 升越 慢，不利 于促 发新 根和 植 株的迅 速生长 。因此 ，种苗定植 后要立即覆盖 地膜 ， 以利于提 高地温 、 保持水分并 防除 杂草 。 覆 盖地膜 后， 要立 即破膜 提 苗，然 后 向膜 下浇 一次 透 水。 以后 视
在冀东地区，草莓一般在 ６ 月中下旬开始抽生
匍 匐 茎 ，在 ７ 月中下 旬 至 ８ 月上 旬为 发 生 高 峰 期 。
根茎部与地面平齐为原则。若定植过深，则会引起
苗心腐烂 ； 定植 过 浅 ，则因根 系外露 ，会导 致 种 苗
干枯死亡 。
此时应加 强肥水管理。施 肥要 掌握薄肥勤施的原
７ 授粉 杂 交
杂 交 授 粉 时 间一 般 在 ５ 月下 旬到 ６ 月上 旬。 杂 交 前应 对 父母 本进行 一 次严 格 的去 杂、去 劣 ，并 注
植物无病毒苗的培育
无病毒苗可以提高花卉的抗病性和抗逆性，减少病虫害的 发生和危害，延长花卉观赏期。
05
植物无病毒苗培育的注意事项
注意病毒的变异性
病毒变异性的存在
植物病毒在自然界中常常会发生变异，这给无病毒苗的培育带来 挑战。
监测和预防变异
在无病毒苗的培育过程中，需要密切关注病毒的变异情况，采取 有效的措施预防和应对。
生抗病毒免疫。
应用
主要用于番茄、辣椒等蔬菜作 物。
生物工程法
原理
通过基因工程等技术手段，将植 物抗病毒基因导入植物体内，使 植物具有抗病毒的能力。
方法
根据病毒基因序列和植物基因组 信息，设计并合成抗病毒基因， 通过基因工程手段导入植物细胞 ，并通过筛选和鉴定获得抗病毒 植株。
应用
适用于多种果树、蔬菜和观赏植 物，具有广泛的应用前景。
01
水果是人们日常饮食中的重要组成部分，无病毒苗的培育对于提高水果产量和 品质具有重要作用。
02
无病毒苗可以提高水果的抗病性和抗逆性，减少病虫害的发生和危害，降低农 药使用量和环境污染。
03
通过无病毒苗的培育，可以提高水果的产量和品质，满足人们对高品质水果的 需求。
在花卉生产上的应用
花卉是人们日常生活中不可或缺的一部分，无病毒苗的培 育对于提高花卉品质和观赏价值具有重要作用。
培养出无病毒植株。
方法
将植物的茎尖剥离出来，在无菌 条件下进行组织培养，诱导出愈 伤组织和丛生芽，进而分化成完 整植株。
应用
适用于多种果树和园林植物。
微克芜菁法
原理
利用芜菁种子携带的病毒抗原 性，接种特定病毒并使其在芜 菁种子上建立稳定寄主关系。
方法
将感染病毒的芜菁种子进行处 理，使其表面抗原性消失，再 作为疫苗接种植物，使植物产
05
植物无病毒苗培育的注意事项
注意病毒的变异性
病毒变异性的存在
植物病毒在自然界中常常会发生变异，这给无病毒苗的培育带来 挑战。
监测和预防变异
在无病毒苗的培育过程中，需要密切关注病毒的变异情况，采取 有效的措施预防和应对。
生抗病毒免疫。
应用
主要用于番茄、辣椒等蔬菜作 物。
生物工程法
原理
通过基因工程等技术手段，将植 物抗病毒基因导入植物体内，使 植物具有抗病毒的能力。
方法
根据病毒基因序列和植物基因组 信息，设计并合成抗病毒基因， 通过基因工程手段导入植物细胞 ，并通过筛选和鉴定获得抗病毒 植株。
应用
适用于多种果树、蔬菜和观赏植 物，具有广泛的应用前景。
01
水果是人们日常饮食中的重要组成部分，无病毒苗的培育对于提高水果产量和 品质具有重要作用。
02
无病毒苗可以提高水果的抗病性和抗逆性，减少病虫害的发生和危害，降低农 药使用量和环境污染。
03
通过无病毒苗的培育，可以提高水果的产量和品质，满足人们对高品质水果的 需求。
在花卉生产上的应用
花卉是人们日常生活中不可或缺的一部分，无病毒苗的培 育对于提高花卉品质和观赏价值具有重要作用。
培养出无病毒植株。
方法
将植物的茎尖剥离出来，在无菌 条件下进行组织培养，诱导出愈 伤组织和丛生芽，进而分化成完 整植株。
应用
适用于多种果树和园林植物。
微克芜菁法
原理
利用芜菁种子携带的病毒抗原 性，接种特定病毒并使其在芜 菁种子上建立稳定寄主关系。
方法
将感染病毒的芜菁种子进行处 理，使其表面抗原性消失，再 作为疫苗接种植物，使植物产
植物脱毒方法
植物脱毒方法
1、茎尖培养脱毒:病毒在植物体内的分布并不均匀,越靠近茎端的病毒的感染深度越低,生长点则几乎不含或含病毒很少。
2、愈伤组织培养脱毒法:通过植物的器官和组织的培养,脱分化诱导产生愈伤组织,然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植株,可以得到无病毒苗。
3、珠心胚培养脱毒:病毒一般不通过种子传播,由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的,并具有与母本相同的遗传特性。
4、茎尖微体嫁接:将实生苗砧木在人工培养基上种植培育,再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖,在砧木上进行试管微体嫁接,以获得无病毒幼苗。
5、花药培养脱毒。
6、热处理脱毒:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40°C),即钝化失活。
7、化学处理:抑制或杀死病毒。
蕉柑无病毒容器苗快速繁育技术
系统及遮光设备 ，同 时 引进 了 鉴 定 裂 皮病 、
碎叶病 、衰退病、黄龙病等的指示植物 ，￣Ｅｒ ｇ Ｐ ｔｏ 香橼 Ａｒｚｎ ８ １ Ｓ 选系 、Ｒｕ ｋ ｉｏ ａ ６ － －ｌ ｓ 枳橙 、厚皮柠檬 、实生 桠柑等 ，随时可以对 果园蕉 柑选种单株进行病毒病鉴 定和茎尖苗及其母树检查 ，确保 了 良种母树不带有病 毒类病 害。 ２ 建立无病毒种质资源 一和采奠■
叶尖和叶缘 ，斑上有小黑点，呈不规则形状 。防治方法
主要有：一是优质栽培 ，多施有机肥 ；二是注意经常清 园，精心采收；三是药剂 防治，可选用５ ％的甲基托布 ０ 津可湿性粉剂５ ０ ｏ 倍液 ，７ ％的代森锰锌可湿性粉剂８ ０ ０ ０ 倍液或５ ％的施保功可湿性粉剂２ ０ 倍液等。 ０ ００
快速繁育技术研究并取得了显著成效 ，可在一年内快速 繁育大量无病毒接穗 ，使育苗周期从传统的两年缩短至
一
年半 ，实现了无病毒苗木的快繁推广 。现将取得的经
验 总结如下 ： １ 建立蕉柑 无病毒容量苗繁育体系基础设施 基础设施 建设是繁育推广无病毒容器苗 的基础 。
２ １ 无病毒种质资源圃建立 ．
４２１ 红 蜘 蛛 ．．
用４ ％的杀扑磷８ ０ ０ ０ 倍液 ，２ ５ ．％蛛八蚧乳油８ ０ ０ ０ ０ －１０
倍液等 。 ④
维普资讯
成 后按 蕉柑 标准 化生 产 技术 规程 管理 ，做 好观 察记 录 ，及 时发现、淘汰劣变 株系 （ 相思叶 、异形厚叶 、 叶片无气 孔）。 ２２ 无病毒采穗圃的建立和无病毒穗条的快速繁育 ． 首先做好总体规划 ，场地平整 ，然后按１ ｍ宽，２ ～ ５ ３ｃ ０ｍ高起畦，畦面铺上１０ ４ × ｃ ０ × ０ ５ｍ的水泥预制板 ，防 止地下害虫危害 ，畦四角预埋６ ｃ ０ ｍ长角铁 ，露出畦面 ２ｃ ５ｍ，角铁上面焊上螺母 ，用于拉铁线固定容器。水泥 板上采用１ ×１ × ５ｍ的大容器繁育取穗母树。２ ０年 ４ ４ ３ｃ ０４ 初，采穗 圃嫁接１ ７ ４ ８ ０ 株取穗母树 ，穗条来源于无病毒 种质资源圃。２ ０ 年初获得 优 良接穗 １２ ２ 条 ，相对 ０５ ２４ １ 传统地 栽株行距１ ．ｍ密植 ，８ ０ 增加１９ ０ 条接 ×１５ ０ ｍ２ ０ １４ 穗 ，大大提高 了扩繁能力 。取穗母树连续取穗２ 年后一 次性淘 汰更新 。采穗 最佳时间是上午 ，采后及时 除去
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
二、脱毒方法
(一) 热处理脱毒
（一）发现： 1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证
明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保持30min，甘蔗就可 去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病 毒病。
热处理又称温治疗法。
• 1、热处理脱毒原理：
①病毒是DNA大分子，病毒进入植 物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒 的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或 增殖停止，而失去病毒的侵染能力。
把抗原-抗体的免疫反应于酶的催化反应相结合而发展 起来的一种综合性技术，灵敏度高，特异性强，发展最快 应用最广的方法。
原理：采用酶标记的特异抗体指示抗原-抗体的结合， 从而检测样品中的抗原定量测定法。
操作程序：将待检植物汁液注入酶联板（聚苯乙烯多 孔微量反应板）中，使抗原吸附在它的孔壁，加入酶(
过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记的特异抗体，抗原 -抗体充分反应后，清洗，固相载体酶联板表面只留 下以酶标记的抗原-抗体复合物。加入酶嘚无色底物
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物脱毒技术3---无病毒苗的保存、繁殖、利用电子教案
植物脱毒技术一、授课章节植物脱毒技术3---无病毒苗的保存、繁殖、利用。
二、学时安排2学时。
三、教学目标1．了解无病毒植物保存、繁殖、利用的方法与效果。
四、教学重点、难点分析重点：无。
难点：无。
五、教具电化教学设备, 试管苗。
六、教学方法讲授法，演示法。
七、教学过程Ⅰ导入植物脱毒的病毒病仅次于真菌类病害，对农业生产造成了巨大的损失，如何通过一些技术手段来达到去除植物体内病毒，恢复种性或进行生产，这就是植物脱毒技术。
II新课四、无病毒苗的保存与繁殖无病毒植株经过多项技术处理才能得到，因此一旦得到无病毒植株，就需严格隔离保存。
这些原原种或原种材料，保存的质量好的可以利用5～10年，在生产上充分实现其经济价值；保存的质量一般，就会很快再度感染病毒。
（一）隔离保存植物病毒的传播媒介主要是昆虫如蚜虫、叶蝉或土壤线虫等，因此应将无病毒原原种苗种植于防虫网室中，以300目的网纱为好，可防止介体昆虫进入。
栽培床的土壤应及时消毒，周围环境要整洁，无污染源及虫害的诱发地，并定期喷药杀菌防虫，保证无病毒植株在严密隔离的条件下栽培。
凡接触无病毒原原种苗的工具均应消毒并单独保管专用，操作人员也应穿消毒的工作服。
有条件的地方可以找适宜的高寒冷山地，气候凉爽、虫害少，有利于无病毒材料的繁殖。
对隔离保存的无病毒原种应定期检测有无病毒感染，及时将再感植株淘汰。
（二）试管保存将无病毒原原种的器官或幼小植株接种于培养基上，在试管内进行繁殖或置于1～9℃低温下离体保存。
五、无病毒苗的利用与效果生产中应用无病毒苗，需尽量防止病毒的再感染。
生产场所应根据病毒侵染途径做好土壤消毒或防蚜虫工作。
在应用无病毒苗时，建立无毒原原种、原种繁育圃，经常抽查病毒的感染情况，随时脱毒复壮，及时向生产基地供应无毒种苗。
无病毒苗表现出明显的效果，如草毒可增产20～50％，植株结果多，单果重增加，上等果比例提高。
菊花切花品种的去病毒株，表现出植株高度增加，切花花朵大，茎变粗，叶色绿，切花产量高，大大提高观赏效果和商品价值。
山区无病毒柑桔容器苗繁育技术
用 发酵 的猪粪 、 沙 和谷壳 配 制营 ０１ 河 ． ％高 锰 酸 钾 溶 液 浸 泡 １ ０分 钟 ４３ 移 栽 ．
细 泥沙 ） ，苗 木生 长与 原配 方 苗木 液浸 泡 １ 时即可播 种 。 小
砧 木苗 长 到 １～ ５ｃ ０ １ ｍ
养 土 （ 沙 主要采 用水 库边 沉 淀 的 后 ， 河 清水 冲洗 干净 ． 再用 ５ ％尿 素溶 进 行 移栽 ， 苗时选 择 生 长健壮 的 起
泥炭 、／ 珠 岩 、／ １ ３珍 １ ３谷壳 （ 体积 ３１ 播 种 时 间 枳 砧种 子 成 熟 采 装 实 。 了嫁 接 、 按 ． 为 管理方 便 ， 每厢 横
计算） 配制 。 由于泥 炭 和珍珠 岩原 后 即可 播种 ．一 般 在 ｌ 中旬 至 排 码 放 ８个 ， 放 整 齐 ， ０月 摆 尽量 减 少
苗 ， 量保 护好 根 系 ， 尽 淘汰小 苗 、 弱
生 长一样 ， 营养 土成本 降低 ２ ％左 ３ ０ ． 播 种 播 种 前 先 对 温 室 、 ３ 播 苗 、变 异 苗 和 根 颈 或 主 根 弯 曲 的 右 。发酵 猪粪工 艺 ： 利用 养猪 场 的 种床及 工具用 １ ％漂 白粉 液消毒， 再 苗 ， 系 留 １ 其 余 剪掉 。用 黄 根 ０ｃ ｍ， 猪粪 进行 生物 发酵 ，生 产有 机肥 把 消 毒好 的培 育 砧 木 苗 的营 养 土 泥 浆蘸 根 ，黄 泥浆要 黏 稠适 宜 ， 切 以 重 量 计 ，０ ７ ％猪 粪 ＋１％谷 壳 ＋ 放到温 室播 种床 上 ， 度 １ Ｉ， ５ 厚 ５ＣＩ床 记 不能 太稀 。浆 根后 的根 系要 直 ， Ｔ １ ％牛栏粪 ，每 吨用 ＨＭ生 物发酵 面整平 ，播完 后覆 营养 土 １ ２ｃ 不 能 弯 曲 。准 备 一 根 木 棍 做扦 插 ５ ～ ｍ。
第五章 脱毒苗的培育
第五章脱毒苗的培育目前病毒病已成为世界作物生产中仅次于真菌病害的主要病害，是造成大田作物和园艺作物的生活力、产量和品质下降，甚至造成植株大面积死亡的重要原因之一，给农业生产造成巨大的危害和损失。
由于病毒复制与植物代谢密切相关，而且有些病毒的抗逆性很强，至今仍没有一种特效药物能够实现既能有效防治病毒病害，又不伤害植物。
因此，通过组织培养来培育脱毒苗，无疑满足了农作物和园艺植物生产发展的迫切需要。
所谓“脱毒苗”，又称“无病毒苗”，是指不含有该种植物的主要危害病毒，即经过检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。
因此，准确地说，“脱毒苗”是“特定无病毒”，应称为“检定苗”。
通过组织培养技术培育的脱毒苗具有以下特点：①提高产量。
如草莓脱毒可提高产量20%～30%，单株结果多，单果重增加；马铃薯脱毒可提高产量40%以上；观赏花卉平均增产50%～80%。
②提高品质。
如苹果着色好，糖度高；菊花切花生长健壮，植株增高，优质切花数增多，花朵增大，花色艳丽，商品价值高。
③抗病性增强。
植物脱毒后自身抗逆性提高，对病虫的抗性增强，如甘薯脱毒后可增强抗茎线虫病。
目前，通过组织培养手段培育脱毒苗已成为农作物、园艺植物、经济作物优良品种繁育、生产中的重要环节。
世界不少国家十分重视这项工作，把脱除病毒纳入常规良种繁殖的一个重要程序，建立了大规模的无病毒生产基地，为生产提供无病毒优良种苗，已在生产上发挥了重要作用，取得了显著的经济效益。
第一节脱毒方法目前，组织培养应用的脱毒方法有热处理、微茎尖培养、茎尖培养结合热处理、茎尖微体嫁接、愈伤组织培养、花药培养等脱毒方法。
其中，前三种脱毒方法最常用，也最容易掌握。
实践证明，根据植物种类和待检病毒的种类、特性不同，采取不同脱毒方法的组合处理，其脱毒效果会更好。
本节重点介绍热处理脱毒法和茎尖培养脱毒法。
一、热处理脱毒(一)热处理方法1.温汤浸渍处理将材料放在50℃～55℃的温水中浸渍10min至数小时，可使一些热敏感的病毒失活。
植物无病毒苗的培育
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04
植物无病毒苗的鉴定与检测技 术
分子生物学鉴定技术
DNA分子标记技术
01
利用DNA分子标记技术，如RAPD、SSR等，对植物无病毒苗进
行分子水平的鉴定。
基因序列分析
02
通过比较病毒基因序列与植物无病毒苗基因序列的差异，确定
植物无病毒苗中是否存在病毒。
转录组学和蛋白质组学技术
03
利用转录组学和蛋白质组学技术，分析植物无病毒苗中基因表
植物无病毒苗的培育
汇报人： 2023-12-16
目录
• 引言 • 植物病毒的危害及传播途径 • 植物无病毒苗的培育方法 • 植物无病毒苗的鉴定与检测技
术
目录
• 植物无病毒苗的栽培与管理技 术
• 植物无病毒苗的应用前景与展 望
01
引言
植物无病毒苗培育的意义
01
02
03
保障农业生产安全
无病毒苗能够提高植物的 抗病性和产量，减少农药 使用，降低农业生产的成 本和风险。
适用范围
适用于某些对热处理敏感的病毒，如 烟草花叶病毒等。
方法
将感染病毒的植物置于高温条件下处 理一段时间，然后进行种植和观察， 确认无病毒后繁殖。
茎尖分生组织培养法
原理
利用植物茎尖分生组织分裂旺盛 、病毒易受抑制的特点，通过离
体培养获得无病毒苗。
方法
切取感染病毒的植物茎尖分生组织 ，进行离体培养，繁殖出无病毒苗 。
水肥管理及病虫害防治措施
水肥管理
根据植物生长需求，合理安排浇水时间和浇水量，同时结合施肥，提供充足的营 养元素。
病虫害防治
定期检查植物生长情况，及时发现并处理病虫害，采用生物防治、物理防治等方 法，减少化学农药的使用。
百合无病毒苗快速繁殖技术
维普资讯
第２ ４卷 第 ４ 期 ２０ ０ ６年 ８月
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第２ ４卷 第 ４ 期 ２０ ０ ６年 ８月
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植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
鉴定方法：
抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→ 把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小 试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。
植物无病毒苗的培育
3. 特点：
特异性高（这种抗血清是高度专一 性的试剂），测定速度快，一般几小时甚 至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为 植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
活，并加快分裂和生长。
A
B
C
低 温 生长区
热处理区 高 温
寄主无损伤
病原微生物被消除 寄主被杀死
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的
材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min
至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
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二、无病毒苗培育的意义 采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微 ，甚至毫无成效。自从50年代发现通过组织培养的方 法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、 质量后（如草莓可增产20～50％，植株结果多，单果 重增加，上等果比例提高。菊花切花品种的脱毒株， 表现出株高增加，切花数增多，花朵大，切花较重） 。因此到60至70年代组织培养的技术在花卉、蔬菜和 果树等得到广泛的应用。
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二、培养基 一般以White、• Morel和MS培养基作为基本 培养基，尤其是提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖 的生长。• MS培养基对某些植物的茎尖培养时， 其中有些离子浓度过高应予以稀释。•
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茎尖培养中，• 由于操作方便，一般都使 用琼脂培养基。不过，在琼脂培养基能诱导 外植体愈伤组织化的情况下，最好还是用液 体培养基。在进行液体培养时，须制作一个 滤纸桥，把桥的两臂浸入试管内的培养基中 ，桥面悬于培养基上，外植体放在桥面上。
三、茎尖培养方法 进行脱毒培养时，• 由于微小的茎尖组织很难靠肉 眼操作，因而需要一台带有适当光源的简单的解剖镜 (8～40X)。除了在进行植物组织无菌培养一般工具外 ，• 还需要一套解剖刀。剥离茎尖时，应尽快接种，茎 尖暴露的时间应当越短越好，• 以防茎尖变干。可在一 个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止 茎尖变干。
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一般来说，茎尖分生组织由和其它器官的培养 一样，• 在进行茎尖培养时，首要一步是获得表面不 带病原菌的外植体。• 一般来说，茎尖分生组织由于 有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖， 无须表面消毒就应当能得到无菌的外植体。• 有时消 毒处理仅会增加培养物的污染率。选取茎尖前，可 把供试植株种在无菌的盆土中，• 放在温室中进行栽 培。浇水时要直接浇在土壤中而不要浇在叶片上。• 另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂，可用 多菌灵(0.1%)和 • 抗生素（如0.1%链霉素）。对于某 些田间种植的材料，可以切取插条插入Knop溶液 中令其长大，• 由这些插条的腋芽长成的枝条，要比 由田间植株上直接取来的枝条污染小得多。
为了保险起见，在切取外植体之前一般仍须对茎芽进行表 面消毒。叶片包被严紧的芽，如菊花，兰花，只须在75%酒精 中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹，蒜和马铃薯等 ，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10分钟。对于这些消毒方法 ，在工作中应灵活运用，如在大蒜茎尖培养时，可将小鳞茎在 75%酒精中浸蘸一下，再用灯火烧掉酒精，然后解剖出无菌茎 芽。
以种子进行繁殖的种类，除豆类外，• 可随着世代的交替而去 除病毒，即病毒只能危害一个世代；而行无性繁殖的种类，• 由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，• 危害日 趋严重。一些园艺植物以小规模集约栽培，造成连作危害问 题，并加重土壤传染性病毒的危害。
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为了提高作物的产量和质量，根除病毒和其它病 原菌是非常必要的。 但现在还没有什么药物可治愈受病毒侵染的植物。 若一个无性系的整个群体都已受到侵染，• 获得无病毒 植株的唯一方法就是消除营养体的病原菌，• 并由这些 组织中再生出完整的植株。一旦获得了一个不带病原 菌的植株，• 就可在不致受到重新侵染的条件下，对它 进行营养繁殖。用组织培养法消除病毒是唯一行之有 效的方法。
四、影响微茎尖培养的因素 １．外植体大小 在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存活率，外 植体越大，产生再生植株的机会也就越多，而外植体越小脱毒 效果越好。除了外植体的大小之外，叶原基的存在与否也影响 分生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生组织提 供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。在含有必要的生 长调节物质的培养基中，离体顶端分生组织能在组织重建过程 中迅速形成双极性两端。
病毒的危害给作物生产带来重大的损失。• 如草莓病毒的危 害，使草莓产量严重降低， • 品 质大大退化。葡萄扇叶病毒使 葡萄减产 10～18% ，为害马铃薯有几十种病毒， • 给马铃薯生 产带来严重障碍。花卉上病毒的危害大大影响其观赏价值， 表现花少而小，产生畸形、变色等。
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无Байду номын сангаас毒苗的培育
掌握植物微茎尖培养的脱毒方法 一般掌握无毒苗木的鉴定方法 掌握组织培养脱毒苗在生产上的重要意义 一般掌握脱毒苗木的保存和利用方法
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一、病毒在植物上的危害
危害植物的病毒有几百种，• 且随着生产栽培时间的延长， 危害越来越甚，• 种类越来越多。
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于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细 解剖，无须表面消毒就应当能得到无菌的外植体。• 有时消毒处理仅会增加培养物的污染率。选取茎尖 前，可把供试植株种在无菌的盆土中，• 放在温室中 进行栽培。浇水时要直接浇在土壤中而不要浇在叶 片上。• 另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂 ，可用多菌灵(0.1%)• 和抗生素（如0.1%链霉素）。 对于某些田间种植的材料，可以切取插条插入 Knop溶液中令其长大，• 由这些插条的腋芽长成的 枝条，要比由田间植株上直接取来的枝条污染小得 多。
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在剖取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下，一手用细镊子将 其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常 常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。但要注意解剖 针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。当一个闪亮半圆球的顶 端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下 来，为了提高成活率，可带1～2枚幼叶，然后将其接到培养 基上。• 接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接 种即可。 将接处好的茎尖置于22℃左右的温度。每天16小时2000～ 3000Lx的光照条件下培养。由于在低温和短日照下，茎尖 有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保 证。微茎尖需数月培养才能成功。
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茎尖培养脱毒
一、茎尖培养脱毒 感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，• 病毒的 数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病 毒的感染深度越低，生长点（约0.1～1.0mm区域） 则几乎不含或含病毒很少。这是因为分生区域内无维 管束，病毒只能通过胞间连丝传递，• 赶不上细胞不断 分裂和活跃的生长速度。在切取茎尖时越小越好，• 但 太小则不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。 茎尖培养脱毒，• 由于其脱毒效果好，后代稳定，所 以是目前培育无病毒苗的最广泛最重要的一个途径。
植物激素的种类与浓度对茎尖生长和发育具有 重要的作用。在双子叶植物植物激素大概是在第2 对最年幼的叶原基中合成，• 所以茎尖的圆锥组织生 长激素不能自给，必须提高适当浓度的生长素(0.1 ～0.5mg/L)与细胞分裂素，在生长素中应避免使用 易促进愈伤组织化的2,4－D，宜换用稳定性较好的 NAA或IBA，细胞分裂素可用KT或BA。GA3对某 些植物茎尖培养是有用的。有时茎尖培养添加活性 炭。
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２．培养条件 在茎尖培养中，照光培养的效果通常比暗培养好，如马铃 薯茎尖培养时，当茎已长到1厘米高时光照强度增加到4000Lx 。 ３．外植体的生理状态 茎尖最好要由活跃生长的芽上切取，在香石竹和菊花中， 培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。但在草莓中，二者没什 么差别。 取芽的时间也很重要，一般选作萌动期较好。否则采用某 种适当的处理、打破休眠才能进行。