培养基的配制 PPT

为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求， 还必须控制培养基合适的pH。
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牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最 普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和 NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷 酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素， 而NaCL提供无机盐。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，在40℃时凝 固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼 脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不 同。
1、装入待灭菌物品
2、升温 接通电源，加热升温至160-170℃。
3、恒温 保持160-170℃ 2小时。
4、降温 切断电源，自然降温。
5、开箱取物 待烤箱温度降到70℃以下以后， 方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于70℃， 切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养； 高氏一号培养基用于培养放线菌； 马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为 1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。
实验分组安排
4-5人一组 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基 400 mL
马铃薯糖琼脂培养基 200 mL 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）200 mL 平皿30个
称量与溶化：
操作步骤 (continued)
注意：
2）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅 速。另外，称药品时严防药品混杂，一把 牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后， 洗净，擦干，再称取另一药品．瓶盖也不 要盖错。
调pH值：
操作步骤 (continued)
在未调pH值前，先用精密pH试纸测量培养 基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基 中逐滴加入1 mol/L NaOH边加边搅拌，并 随时用pH试纸测其pH，直至pH达要求。反 之，用1mol/L HCl进行调节。
◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两 层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。
◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。
◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实 验组。
灭菌时包牛皮纸
灭菌：
操作步骤 (continued)
◇ 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌
◇ 通常灭菌条件为1.05kg/cm2, 121℃灭菌20 分钟；含糖量高的培养基，则为 0.56kg/cm2,115℃灭菌30分钟。
火焰烧灼 热空气灭菌
加 热
压力蒸汽灭菌
法
间歇灭菌
湿热法
煮沸灭菌 巴斯德消毒
滤膜过滤器的滤膜是一 种多孔纤维素，孔径一般为 0.45um，过滤时，液体和 小分子物质通过，细菌被截 流在滤膜上。
过滤除菌——
许多材料，如血 清、糖溶液等，用 一般加热消毒灭菌 方法，均会被热破 坏，应采用过滤除 菌。
应用最广的过滤 器有蔡氏(Seitz)过 滤器和膜过滤器。
操作步骤
1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面
称量与溶化：
操作步骤 (continued)
注意：
1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛 肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时， 再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连 同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从 称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。
实验原理 (continued)
紫外线灭菌—— 紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用，
其中以265-266 nm杀菌力最强。 无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射
灭菌。
实验内容及实验步骤 1、干热灭菌
2、压力蒸汽灭菌 干热灭菌
电烤箱
干热灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
加琼脂、溶化、定容、（过滤）
操作步骤 (continued)
琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入 不会影响培养基的pH。
琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化， 否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过 软，另外部分则琼脂过多。
加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积 减小，应补充水分至所需量。
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
1000ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
分装：
操作步骤 (continued)
1）装量： 液体——试管高度的1/4左右
固体——试管高度的1/5 ，灭菌后摆斜面
半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂 直放置
棉塞制作方法：
加塞： 棉塞 或 硅胶塞 作用：防止外界微生物进入培养基内造成 污染，并保证有良好的通气性能。
包扎：
操作步骤 (continued)
培养基的配制
实验目的
1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基 的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的方法步骤。
实验原理
培养基(culture medium)是指人工配制的、适合 微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之 实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不 同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳 源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养 要素，且各成分比例应合适。